Luận văn thạc sĩ vnua xác định một số đặc tính sinh học của parvovirus gây tiêu chảy ở chó nuôi tại thủ đô viêng chăn chdcnd lào

Luận văn thạc sĩ phân tích vnua xác định một số đặc tính sinh học của parvovirus gây tiêu chảy ở chó nuôi tại thủ đô viêng, đánh giá thực trạng, chỉ ra hạn chế, đề xuất giải pháp

• Tác giả: Souksavanh Sisamouth
• Người hướng dẫn: Pgs. Lê Văn Phan
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Xác định một số đặc tính sinh học của Parvovirus gây tiêu chảy ở chó nuôi tại Thủ đô Viêng Chăn - CHDCND Lào
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 1.1. Danh mục bảng
• 1.2. Danh mục hình ảnh
• 1.3. Danh mục chữ viết tắt
• 1.4. Trích yếu luận văn
• 1.5. Thesis abstract
• 1.6. Tính cấp thiết của đề tài
• 1.7. Mục tiêu của đề tài
• 1.8. Tổng quan tài liệu
• 1.8.1. Tình hình nghiên cứu bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus
• 1.8.1.1. Tổng quan về bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus
• 1.8.1.2. Tình hình nghiên cứu bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus gây ra trên thế giới
• 1.8.1.3. Tình hình dịch bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus gây ra tại Lào
• 1.8.2. Đặc điểm sinh học của parvovirus
• 1.8.2.1. Đặc điểm hình thái, cấu trúc hệ gen của Parvovirus
• 1.8.2.2. Phân loại và phân bố các type Parvovirus
• 1.8.2.3. Sức đề kháng của Parvovirus
• 1.8.2.4. Đặc tính nuôi cấy. Đặc tính kháng nguyên
• 1.8.2.5. Khả năng miễn dịch
• 1.8.2.6. Đường xâm nhập và cách truyền bệnh
• 1.8.2.7. Các phương pháp chẩn đoán
• 1.8.2.8. Phòng bệnh
• 1.8.3. Tổng quan tế bào
• 1.8.3.1. Một số đặc điểm của tế bào động vật
• 1.8.3.2. Thành phần dinh dưỡng của môi trường nuôi cấy tế bào
• 1.8.3.3. Điều kiện nuôi cấy
• 1.8.3.4. Sự tạp nhiễm và cách hạn chế
• 1.8.4. Phân lập VIRUS
• 1.8.4.1. Khái quát về phân lập virus
• 1.8.4.2. Phân lập Parvovirus phục vụ nghiên cứu sản xuất Vaccine vô hoạt
• 1.9. Giải trình tự gen. Cây phát sinh chủng loại (Phylogenetic Tree).
• 1.10. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
• 1.10.1. Đối tượng nghiên cứu
• 1.10.2. Địa điểm nghiên cứu
• 1.10.3. Nội dung nghiên cứu
• 1.10.4. Nghiên vật liệu
• 1.10.5. Trang thiết bị máy móc
• 1.10.6. Phương pháp nghiên cứu
• 1.10.6.1. Phương pháp lấy mẫu
• 1.10.6.2. Phương pháp tách DNA tổng số
• 1.10.6.3. Phương pháp PCR
• 1.10.6.4. Phương pháp điện di kiểm tra sản phẩm
• 1.10.6.5. Phương pháp giải trình tự gen
• 1.10.6.6. Phương pháp mở giống tế bào CRFK
• 1.10.6.7. Phương pháp cấy chuyển tế bào CRFK
• 1.10.6.8. Phương pháp phân lập Parvovirus trên tế bào CRFK
• 1.10.6.9. Phương pháp thu virus
• 1.10.6.10. Phương pháp đếm số lượng tế bào
• 1.10.6.11. Phương pháp xác định hiệu giá virus
• 1.10.6.12. Phương pháp phân tích phả hệ
• 1.11. Kết quả và thảo luận
• 1.11.1. Kết quả chẩn đoán canine parvovirus bằng phương pháp PCR
• 1.11.2. Kết quả xây dựng cây phả hệ (Phylogenetic Tree)
• 1.11.3. Kết quả phân tích sự tương đồng của Nuclotide của các chủng Parvovirus đã nghiên cứu
• 1.11.4. Kết quả phân tích sự tương đồng của Amino acid của các chủng Parvovirus đã nghiên cứu
• 1.11.5. Kết quả xây dựng cây phả hệ
• 1.11.6. Kết quả phân lập chủng Parvovirus trên môi trường nuôi cấy tế bào CRFK
• 1.11.7. Kết quả nuôi cấy tế bào CRFK
• 1.11.8. Kết quả phân lập Parvovirus
• 1.11.9. Kết quả xác định hiệu giá của Parvovirus trên môi trường tế bào
• 1.11.10. Kết quả xác định đường cong sinh trưởng
• 1.11.11. Kết quả bệnh tích tế bào tại các thời điểm thu virus
• 1.11.12. Kết quả chuẩn độ hiệu giá virus ở từng thời điểm thu hoạch khác nhau
• 1.11.13. Đường cong sinh trưởng của virus
• 1.12. Kết luận và kiến nghị
• Tài liệu tham khảo

Tóm tắt

I. Tổng quan về Nghiên cứu đặc tính sinh học của parvovirus gây tiêu chảy ở chó

Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định các đặc tính sinh học của parvovirus gây bệnh tiêu chảy ở chó tại Viêng Chăn, Lào. Bệnh do parvovirus gây ra có thể dẫn đến tỷ lệ tử vong cao, đặc biệt là ở chó con. Việc hiểu rõ về virus này là rất cần thiết để phát triển các phương pháp điều trị và phòng ngừa hiệu quả.

1.1. Đặc điểm của parvovirus và ảnh hưởng đến chó

Parvovirus là một loại virus nhỏ, không có vỏ bọc, gây ra bệnh viêm ruột tiêu chảy ở chó. Virus này có khả năng lây lan nhanh chóng và gây ra các triệu chứng nghiêm trọng như nôn mửa và tiêu chảy. Chó con dưới 1 năm tuổi là đối tượng dễ bị tổn thương nhất.

1.2. Tình hình dịch bệnh parvovirus tại Lào

Tại Lào, bệnh do parvovirus gây ra đã được ghi nhận với tỷ lệ nhiễm cao. Các chủng virus như CPV-2a và CPV-2c đang lưu hành và gây ra nhiều ca bệnh nghiêm trọng. Việc nghiên cứu và theo dõi tình hình dịch bệnh là rất quan trọng để có biện pháp phòng ngừa kịp thời.

II. Vấn đề và thách thức trong nghiên cứu parvovirus ở chó

Mặc dù đã có nhiều nghiên cứu về parvovirus, nhưng vẫn còn nhiều thách thức trong việc xác định các đặc tính sinh học của virus này. Các vấn đề như sự biến đổi gen của virus và khả năng kháng thuốc đang đặt ra nhiều khó khăn cho các nhà nghiên cứu.

2.1. Khó khăn trong việc chẩn đoán parvovirus

Việc chẩn đoán chính xác parvovirus thường gặp khó khăn do các triệu chứng của bệnh có thể giống với nhiều bệnh khác. Sử dụng các phương pháp chẩn đoán hiện đại như PCR là cần thiết để xác định nhanh chóng và chính xác virus.

2.2. Tình trạng kháng thuốc của parvovirus

Một trong những thách thức lớn là sự xuất hiện của các chủng parvovirus kháng thuốc. Điều này làm cho việc điều trị trở nên khó khăn hơn và yêu cầu các nghiên cứu sâu hơn để phát triển các phương pháp điều trị hiệu quả.

III. Phương pháp nghiên cứu đặc tính sinh học của parvovirus

Nghiên cứu này sử dụng nhiều phương pháp khác nhau để xác định các đặc tính sinh học của parvovirus. Các phương pháp này bao gồm lấy mẫu, tách DNA, và phân lập virus trên môi trường nuôi cấy tế bào.

3.1. Phương pháp lấy mẫu và tách DNA

Quá trình lấy mẫu được thực hiện từ các chó nghi ngờ mắc bệnh. Sau đó, DNA của virus được tách ra để phục vụ cho các phân tích tiếp theo. Phương pháp này giúp xác định sự hiện diện của parvovirus trong mẫu bệnh phẩm.

3.2. Phân lập virus và nuôi cấy tế bào

Virus được phân lập trên môi trường nuôi cấy tế bào CRFK, cho phép nghiên cứu sâu hơn về đặc tính sinh học của virus. Việc nuôi cấy này giúp xác định khả năng sinh sản và độc lực của parvovirus.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn

Kết quả nghiên cứu cho thấy tỷ lệ dương tính với parvovirus trong các mẫu bệnh phẩm là rất cao. Điều này cho thấy sự phổ biến của virus trong cộng đồng chó tại Viêng Chăn. Các kết quả này có thể được ứng dụng trong việc phát triển vaccine và các phương pháp điều trị hiệu quả.

4.1. Tỷ lệ nhiễm parvovirus trong chó

Kết quả cho thấy 92% mẫu bệnh phẩm dương tính với parvovirus, cho thấy mức độ lây lan của virus trong cộng đồng chó. Điều này nhấn mạnh sự cần thiết phải có các biện pháp phòng ngừa hiệu quả.

4.2. Ứng dụng trong phát triển vaccine

Các nghiên cứu về đặc tính sinh học của parvovirus sẽ hỗ trợ trong việc phát triển vaccine hiệu quả hơn. Vaccine có thể giúp giảm thiểu tỷ lệ mắc bệnh và tử vong ở chó, đặc biệt là chó con.

V. Kết luận và tương lai của nghiên cứu parvovirus

Nghiên cứu về parvovirus gây tiêu chảy ở chó tại Viêng Chăn đã chỉ ra nhiều thông tin quan trọng về virus này. Tương lai của nghiên cứu cần tập trung vào việc phát triển các phương pháp điều trị và vaccine hiệu quả hơn để bảo vệ sức khỏe cho chó.

5.1. Tầm quan trọng của nghiên cứu tiếp theo

Cần tiếp tục nghiên cứu để hiểu rõ hơn về các đặc tính sinh học của parvovirus và sự biến đổi gen của virus. Điều này sẽ giúp cải thiện các biện pháp phòng ngừa và điều trị.

5.2. Hướng phát triển vaccine trong tương lai

Phát triển vaccine từ các chủng virus thực địa sẽ là một hướng đi quan trọng trong việc kiểm soát dịch bệnh. Vaccine hiệu quả sẽ giúp bảo vệ chó khỏi bệnh do parvovirus gây ra.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM SOUKSAVANH SISAMOUTH XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA PARVOVIRUS GÂY TIÊU CHẢY Ở CHÓ NUÔI TẠI THỦ ĐÔ VIÊNG CHĂN - CHDCND LÀO Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Lê Văn Phan NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu riêng của bản thân. Các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng bảo vệ để lấy bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được chỉ rõ nguồn gốc.

Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn SoukSaVanh Sisamouth i LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tác giả đã nhận được sự giúp đỡ và tạo điều kiện của rất nhiều người, sau đây là lời cảm ơn chân thành của tác giả: Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS. Lê Văn Phan người đã trực tiếp hướng dẫn tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Nhờ có sự hướng dẫn nhiệt tình và những ý kiến đóng góp quý báu của thầy mà luận văn của tôi đã được hoàn thành Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám đốc Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Ban Quản lý đào tạo, Chủ nhiệm khoa Thú y, Bộ môn Vi sinh vật truyền- nhiễm, Phòng Thí nghiệm trọng điểm công nghệ sinh học Thú y, cùng toàn thể các thầy, cô giáo và cán bộ của Khoa Thú y – Học viện Nông nghiệp Việt Nam, đã trang bị cho tôi những kiến thức quý báu và giúp đỡ tôi hoàn thành công trình nghiên cứu luận văn. Cuối cùng, tôi xin chân thành cảm ơn tới bạn bè, đồng nghiệp, người thân trong gia đình và cơ quan đang công tác đã tạo điều kiện về thời gian, động viên, chia sẻ tinh thần, giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn.

Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn SoukSaVanh Sisamouth ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] MỤC LỤC Lời cam đoan. Error! Bookmark not defined. Error! Bookmark not defined. iii Danh mục bảng.

vi Danh mục hình ảnh. vii Danh mục chữ viết tắt. viii Trích yếu luận văn. ix Thesis abstract.

Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu của đề tài. Tổng quan tài liệu. Tình hình nghiên cứu bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus.

Tổng quan về bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus. Tình hình nghiên cứu bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus gây ra trên thế giới. Tình hình dịch bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus gây ra tại Lào. Đặc điểm sinh học của parvovirus.

Đặc điểm hình thái, cấu trúc hệ gen của Parvovirus. Phân loại và phân bố các type Parvovirus. Sức đề kháng của Parvovirus. Đặc tính nuôi cấy.

Đặc tính kháng nguyên. Khả năng miễn dịch. Đường xâm nhập và cách truyền bệnh. Các phương pháp chẩn đoán.

Phòng bệnh. Tổng quan tế bào. Một số đặc điểm của tế bào động vật. 17 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.

Thành phần dinh dưỡng của môi trường nuôi cấy tế bào. Điều kiện nuôi cấy. Sự tạp nhiễm và cách hạn chế. Phân lập VIRUS.

Khái quát về phân lập virus. Phân lập Parvovirus phục vụ nghiên cứu sản xuất Vaccine vô hoạt. Giải trình tự gen. Cây phát sinh chửng loại (Phylogenetic Tree).

Nội dung và phƣơng pháp nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu.

Nghiên vật liệu. Trang thiết bị máy móc. Phương pháp nghiên cứu. Phường pháp lấy mẫu.

Phương pháp tách DNA tổng số. Phương pháp PCR. Phương pháp điện di kiểm tra sản phẩm. Phương pháp giải trình tự gen.

Phương pháp mở giống tế bào CRFK. Phương pháp cấy chuyển tế bào CRFK. Phương pháp phân lập Parvovirus trên tế bào CRFK. Phương pháp thu virus.

Phương pháp đếm số lượng tế bào. Phương pháp xác định hiệu giá virus. Phương pháp phân tích phả hệ. Kết quả và thảo luận.

Kết quả chẩn đoán canine parvovirus bằng phương pháp PCR. Kết quả xây dựng cây phả hệ (Phylogenetic Tree). Kết quả phân tích sự tương đồng của Nuclotide của các chủng Parvovirus đã nghiên cứu. 35 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.

Kết quả phân tích sự tương đồng của Amino acid của các chủng Parvovirus đã nghiên cứu. Kết quả xây dựng cây phả hệ. Kết quả phân lập chủng Parvovirus trên môi trường nuôi cấy tế bào CRFK. Kết quả nuôi cấy tế bào CRFK.

Kết quả phân lập Parvovirus. Kết của xác định hiệu giá của Parvovirus trên môi trường tế bào. Kết quả xác định đường cong sinh trưởng. Kết quả bệnh tích tế bào tại các thời điểm thu virus.

Kết quả chuẩn độ hiệu giá virus ở từng thời điểm thu hoạch khác nhau. Đường cong sinh trưởng của virus. Kết luận và kiến nghị. 50 Tài liệu tham khảo.

52 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3. Thông tin các mẫu phân nghi mắc bệnh parvovirus. Thành phần của phản ứng PCR. Thông tin cặp mồi sử dụng trong phản ứng PCR (Canio Buonavoglia et al.

Chu trình nhiệt độ của phản ứng PCR. Sơ đồ thí nghiệm xác định TCID50. Thông tin mẫu bệnh phẩm và kết quả chẩn đoán Parvovirus bằng phản ứng PCR. Kết quả chẩn đoán Parvovirus bằng phản ứng PCR.

Tỷ lệ (%) tương đồng về trình tự nt của các chủng Parvovirus trong nghiên cứu này với nhau và với các chủng Parvovirus tham chiếu khác. Tỷ lệ (%) tương đồng về trình tự aa của các chủng Parvovirus trong nghiên cứu này với nhau và với các chủng Parvovirus tham chiếu khác. Kết quả xác định hiệu giá Parvovirus trên đĩa nuôi cấy tế bào 96 giếng sau 96 giờ gây nhiễm. Bệnh tích tế bào tại các thời điểm thu virus.

Kết quả chuẩn độ TCID50 của các chai gây nhiễm thu hoạch ở các thời điểm khác nhau. 48 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2. Cấu tạo của Parvovirus. Sự phân bố của CPV-2a\2b\2c trên thế giới.

Tỷ lệ phần trăm và sự xuất hiện của các chủng CPV-2/CPV-2-like, CPV-2a, CPV-2b, và CPV2C. Cơ chế sinh bệnh của Parvovirus trên chó. Chó bị tiêu chảy cấp, nôn mửa do Parvovirus. Kit thử nhanh Canine Parvovirus (CPV) Ag.

Kết quả chạy PCR với cặp mồi định tính 555forc/555revc (Canio Buonavoglia et al. Sản phẩm có kích thước theo dự kiến là 583bp. Sự tương đồng về nucleotide giữa các chủng Parvovirus nghiên cứu với một số chủng virus Parvovirus trên thế giới. Sự tương đồng về amino acid giữa các chủng Parvovirus nghiên cứu với một số chủng virus Parvovirus trên thế giới.

Tế bào CRFK sau nuôi cấy 24h, 48h, 72h, 96h. Hình ảnh đối chứng tế bào CRFK không gây nhiễm virus sau khi nuôi cấy 24, 48, 72, 96 giờ. Hình ảnh tế bào CRFK sau khi gây nhiễm virus 24, 48, 72, 96 giờ. Hình ảnh bệnh tích tế bào và đối chứng âm của Parvovirus gây nhiễm trên tế bào CRFK các thời điểm 12, 24, 36, 48, 72, 96 giờ.

Biểu đồ đường cong sinh trưởng của Parvovirus trên tế bào CRFK. 49 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt PCR Polymerase chain reaction FPV Panleucopenie feline DICT Dose Infectieuse Culture de Tissu MDCK Madin Darby Canine kidney CRFK Crandell Rees Feline Kidney HI Haemagglutination Inhibition ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay cs cộng sự CPV2 Canine Parvovirus type 2 HA Haemagglutination IHC Immunohistochemistry Tm Melting temperature dNTP Deoxynucleotide Triphosphate PBS Phosphate Buffered Saline P: C: I Phenol-chlorofrom-isoamyl-alcohol MEGA Molecular Evolutionary Genetics Analysis version µl Microlit CPE Cyto Pathogenic Effect DNA Deoxyribonucleic acid RNA Ribonucleoic acid PBS Phosphate buffered saline TBE Tris/Borate/EDTA RT-PCR Reverse Transcriptase Polymerase Chain React nt Nucleotide aa Amino acid viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: SoukSaVanh SISAMOUTH Tên luận văn: ―Xác định một số đặc tính sinh học của Parvovirus gây tiêu chảy ở chó nuôi tại Thủ đô Viêng Chăn - CHDCND Lào‖ Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Tên cơ sở đào tạo: Học Viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu đặc tính sinh học của Parvovirus ở chó nuôi tại thủ đô Viêng Chăn- CHDCND Lào. Phƣơng pháp nghiên cứu đƣợc sử dụng - Phương pháp lấy mẫu - Phương pháp tách DNA tổng số - Phương pháp PCR. - Phương pháp điện di kiểm tra sản phẩm - Phương pháp giải trình tự gen - Phương pháp phân lập parvovirus trên môi trường tế bào CRFK - Phương pháp xác định hiệu giá virus (TCID50/ml); - Phương pháp xác định đường biểu biễn sự nhân lên của virus; - Phương pháp xử lý số liệu Kết quả chính và kết luận Kết quả chẩn đoán bằng phương pháp PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu (555forc/555revc) (Canio Buonavoglia et al.,2001) cho thấy trong 24 có 22 mẫu dương tính với Parvovirus chiếm tỷ lệ (92%).

Kết quả phân tích trình tự gen VP2 cho thấy 4 chủng virus trong nghiên cứu này có mức độ tương đồng về nt và aa với nhau là 99 - 99,6% nt và 97,1 - 98,8% aa. Trong đó 2 chủng L04 và chủng L12 có mức độ tương đồng cao về nt và aa với nhau tương ứng là 99,6% và 98,8%. Kết quả phân tích về trình tự nt và aa suy diễn của đoạn gen VP2 cho thấy chủng L04 có 7 aa sai khác với 3 chủng L05, L12, L14. Các vị trí aa sai khác gồm vị trí 318 (CH), 320 (GA), 322 (TA), 380 (FS), 414 (RW), 429 (VG) và 430 (LS). Kết quả phân tích cây phả hệ dựa trên trình tự nt gen VP2 của các chủng ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] Parvovirus cho thấy 4 chủng L04, L05, L12, L14 đều nằm trên cùng 1 nhánh phát sinh với các chủng Parvovirus gây bệnh trên chó có mối quan hệ gần gữi với các chủng nằm trên Genotype 2c của Trung Quốc (GenBank: MF347723, KT156832, MF347725) và chủng của Việt Nam (Genbank: LC214969).

Đã phân lập thành công parvovirus trên môi trường tế bào CRFK. Chủng virus phân lập được có hiệu giá 106. x LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.