Đánh Giá Tác Động Của Corticosteroid Đến Biểu Hiện IL17A Và IL23 Trong Mô Hình Chuột Bệnh Psoriasis

Khóa luận tốt nghiệp công nghệ sinh học đánh giá tác động của corticosteroids lên biểu hiện IL-17A và IL-23 trong mô hình chuột bệnh vẩy nến.

• Tác giả: Le Tan Loc
• Người hướng dẫn: Assoc. Vu Bich Ngoc
• Trường học: Nong Lam University - Ho Chi Minh City
• Chuyên ngành: Biotechnology
• Đề tài: Đánh Giá Tác Động Của Corticosteroid Đến Biểu Hiện IL17A Và IL23 Trong Mô Hình Chuột Bệnh Psoriasis
• Loại tài liệu: undergraduate thesis
• Năm xuất bản: 2023
• Địa điểm: Thu Duc City

Mục lục chi tiết

• CONFIRMATION AND AGREEMENT
• ACKNOWLEDGEMENT
• ABSTRACT
• TABLE OF CONTENTS
• LIST OF ABBREVIATIONS
• LIST OF TABLES
• LIST OF FIGURES
• 1. CHƯƠNG 1: PROBLEM ESTABLISHMENT
• 1.1. Purpose of this thesis
• 1.2. Implementation content
• 2. CHƯƠNG 2: STRUCTURE OF THE SKIN
• 2.1. Introduction
• 2.2. Epidermis — outer layer of the skin
• 2.3. Dermis - middle layer of the skin
• 2.4. Hypodermis — bottom layer of the skin
• 3. CHƯƠNG 3: MATERIALS AND METHODS
• 3.1. Time and place of experiment
• 3.2. Research analysis
• 3.3. IMQ-induced psoriasis mouse modeling and treatment
• 3.4. Indirect immunofluorescence staining of IL23 and IL17A antigen
• 3.5. qRT-PCR assay
• 4. CHƯƠNG 4: RESULTS AND DISCUSSION
• 4.1. Results of the PASI assessment
• 4.2. Results of histological evaluation
• 4.3. Results of IL23 and IL17A expression by qRT-PCR
• 4.4. Protein expression of IL17A and IL23 gene in skin structure
• 4.5. Treatment effects of corticosteroids on model results
• 4.6. Evaluation of treatment effects based on clinical manifestations
• 4.7. Discussion in model creating results
• 4.8. Discussion on effects of corticosteroids on model results
• CONCLUSION AND RECOMMENDATION

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Tác Động Của Corticosteroid Đến IL17A Và IL23

Corticosteroid là một trong những phương pháp điều trị chính cho bệnh psoriasis, một bệnh lý da liễu phổ biến ảnh hưởng đến khoảng 2-3% dân số toàn cầu. Nghiên cứu này tập trung vào việc đánh giá tác động của corticosteroid đến biểu hiện của IL17A và IL23 trong mô hình chuột bệnh psoriasis. IL17A và IL23 được biết đến là những cytokine quan trọng trong cơ chế bệnh sinh của psoriasis. Việc hiểu rõ tác động của corticosteroid đến các cytokine này có thể giúp cải thiện hiệu quả điều trị cho bệnh nhân.

1.1. Corticosteroid Là Gì Và Vai Trò Trong Điều Trị Psoriasis

Corticosteroid là nhóm thuốc có tác dụng chống viêm mạnh mẽ, thường được sử dụng trong điều trị các bệnh tự miễn như psoriasis. Chúng giúp giảm viêm và cải thiện triệu chứng da. Tuy nhiên, việc sử dụng corticosteroid cần được theo dõi cẩn thận để tránh tác dụng phụ.

1.2. IL17A Và IL23 Những Cytokine Quan Trọng Trong Psoriasis

IL17A và IL23 đóng vai trò trung tâm trong cơ chế bệnh sinh của psoriasis. Chúng kích thích sự phát triển và hoạt động của các tế bào miễn dịch, dẫn đến tình trạng viêm và tăng sinh tế bào da. Việc điều chỉnh biểu hiện của hai cytokine này có thể giúp kiểm soát bệnh hiệu quả hơn.

II. Vấn Đề Trong Việc Điều Trị Psoriasis Bằng Corticosteroid

Mặc dù corticosteroid là phương pháp điều trị phổ biến, nhưng vẫn tồn tại nhiều thách thức trong việc sử dụng chúng cho bệnh psoriasis. Một trong những vấn đề chính là nguy cơ tái phát bệnh sau khi ngừng điều trị. Ngoài ra, việc sử dụng corticosteroid kéo dài có thể dẫn đến các tác dụng phụ nghiêm trọng như teo da và tăng nguy cơ nhiễm trùng.

2.1. Tác Dụng Phụ Của Corticosteroid Trong Điều Trị

Sử dụng corticosteroid kéo dài có thể gây ra nhiều tác dụng phụ, bao gồm teo da, giãn mạch, và tăng nguy cơ nhiễm trùng. Điều này làm cho việc quản lý điều trị trở nên phức tạp hơn.

2.2. Nguy Cơ Tái Phát Bệnh Sau Khi Ngừng Điều Trị

Nhiều bệnh nhân gặp phải tình trạng tái phát bệnh ngay sau khi ngừng sử dụng corticosteroid. Điều này đặt ra thách thức lớn trong việc duy trì sự ổn định của bệnh và cải thiện chất lượng cuộc sống cho bệnh nhân.

III. Phương Pháp Nghiên Cứu Tác Động Của Corticosteroid Đến IL17A Và IL23

Nghiên cứu này sử dụng mô hình chuột bệnh psoriasis được kích thích bằng imiquimod để đánh giá tác động của corticosteroid. Các phương pháp như đánh giá PASI, nhuộm Hematoxylin và Eosin, và qRT-PCR được áp dụng để phân tích biểu hiện của IL17A và IL23 trong mô hình này.

3.1. Mô Hình Chuột Bệnh Psoriasis Được Kích Thích Bằng Imiquimod

Mô hình chuột bệnh psoriasis được tạo ra bằng cách sử dụng imiquimod, một chất kích thích gây viêm da. Mô hình này cho phép nghiên cứu các cơ chế bệnh sinh và tác động của các phương pháp điều trị.

3.2. Các Phương Pháp Đánh Giá Biểu Hiện IL17A Và IL23

Các phương pháp như PASI, nhuộm Hematoxylin và Eosin, và qRT-PCR được sử dụng để đánh giá biểu hiện của IL17A và IL23. Những phương pháp này giúp cung cấp cái nhìn sâu sắc về tác động của corticosteroid đến các cytokine này.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Về Tác Động Của Corticosteroid

Kết quả nghiên cứu cho thấy rằng corticosteroid có tác dụng làm giảm biểu hiện của IL17A và IL23 trong mô hình chuột bệnh psoriasis. Sự giảm này được ghi nhận thông qua các phương pháp phân tích khác nhau, cho thấy hiệu quả điều trị của corticosteroid trong việc kiểm soát bệnh.

4.1. Biểu Hiện IL17A Và IL23 Sau Khi Sử Dụng Corticosteroid

Sau khi điều trị bằng corticosteroid, biểu hiện của IL17A và IL23 giảm đáng kể. Điều này cho thấy corticosteroid có khả năng điều chỉnh các cytokine này, góp phần vào việc kiểm soát bệnh.

4.2. Đánh Giá Tác Động Điều Trị Qua PASI

Điểm PASI cho thấy sự cải thiện rõ rệt ở nhóm chuột được điều trị bằng corticosteroid so với nhóm không điều trị. Điều này chứng tỏ hiệu quả của corticosteroid trong việc giảm triệu chứng của bệnh psoriasis.

V. Kết Luận Về Tác Động Của Corticosteroid Đến IL17A Và IL23

Nghiên cứu đã chỉ ra rằng corticosteroid có tác dụng tích cực trong việc giảm biểu hiện của IL17A và IL23 trong mô hình chuột bệnh psoriasis. Điều này mở ra hướng đi mới cho việc điều trị bệnh psoriasis, giúp cải thiện chất lượng cuộc sống cho bệnh nhân.

5.1. Tương Lai Của Nghiên Cứu Về Corticosteroid

Nghiên cứu tiếp theo cần tập trung vào việc tối ưu hóa liều lượng và thời gian điều trị corticosteroid để đạt được hiệu quả tốt nhất mà không gây ra tác dụng phụ nghiêm trọng.

5.2. Ứng Dụng Thực Tiễn Trong Điều Trị Psoriasis

Kết quả nghiên cứu có thể được áp dụng trong lâm sàng để cải thiện phương pháp điều trị cho bệnh nhân psoriasis, từ đó nâng cao chất lượng cuộc sống cho họ.

Trích đoạn nội dung tài liệu

MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY- HO CHI MINH CITY FACULTY OF BIOLOGICAL SCIENCES UNDERGRADUATE THESIS EVALUATION OF THE EFFECTS OF CORTICOSTEROIDS ON IL17A AND IL23 EXPRESSIONS IN THE IMIQUIMOD-INDUCED PSORIASIS MOUSE MODEL Major : BIOTECHNOLOGY Student : LE TAN LOC Student ID : 18126084 Academic year : 2018 — 2022 Thu Duc City, M arch, 2023 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY- HO CHI MINH CITY FACULTY OF BIOLOGICAL SCIENCES UNDERGRADUATE THESIS EVALUATION OF THE EFFECTS OF CORTICOSTEROIDS ON IL17A AND IL23 EXPRESSIONS IN THE IMIQUIMOD-INDUCED PSORIASIS MOUSE MODEL Advisor Student Assoc. VU BICH NGOC LE TAN LOC MSc. TRAN THI THUY PHUONG Thu Duc City, March, 2023 ACKNOWLEDGEMENT My first and big appreciation goes to my first supervisor, Assoc. Vu Bich Ngoc because of her marvelous supervision, guidance and encouragement.

Sincere gratitude 1s extended to her generous participation in guiding, constructive feedback, kind support, and advice during my thesis progress. Also, I greatly appreciate my second supervisors, MSc. Tran Thi Thuy Phuong for her great feedback, excellent encouragement and guidance. Thanks a lot to you! Many thanks to all of the members of staffs in Stem Cell Institute and Natural Science University, for their kind support during my undergraduate study.

Also, I extend my thanks to all my colleagues, my friends at Stem Cell Institute for their continuous encouragement and support. Last, but not least, my warm and heartfelt thanks go to my family for their tremendous support and hope they had given to me. Without that hope, this thesis would not have been possible. Thank you all for the strength you gave me.

I love you all! CONFIRMATION AND AGREEMENT My name is Le Tan Loc, student ID: 18126084, class: DH18SHA (Phone: [phone], email: [e-mail]), of Biological Sciences Department, Nong Lam University - Ho Chi Minh city. This is my graduation thesis, directly carried out by myself, as part of a project of Stem Cell Institution University of Science, VNU-HCM. Stem Cell Institute is the owner and has the alright to use and exploit the intellectual property in this thesis. The data and information in the research are sincere and objective.

I take full responsibility for these commitments to the committee. Thu Duc City, 7 February, 2023 Student’s signature ABSTRACT Psoriasis is one of the most common dermatological diseases which occurs in 2-3% of the global population. While the complete mechanism has been mysterious but the role of the IL23/IL17A axis has excluded playing a vital role in psoriasis development. Besides that, topical corticosteroid is the first-line treatment for psoriasis, but how it effects on IL23/ILI7A axis is still well unknown.

In order to evaluate topical corticosteroids on IL23/IL17A, this study was conducted by creating imiquimod-induced mouse model of psoriasis and then applying topical corticosteroids. After the experiment, mouse back skin samples were analyzed by PASI scale, hematoxylin and eosin staining, indirect immunofluorescence staining, and qRT-PCR assay. The results showed that in mouse model building, the PASI score peaked at day 6 with the change in skin structure that was characterized by psoriasis including hyperkeratosis, elongated rete ridges, parakeratosis, and dilated and tortuous vasculature. The mRNA expression of IL23 increased 38-fold and IL17A increased 39-fold, and interesting, the protein expression of IL23 and IL17A was also much higher than normal.

In an experiment to investigate the effects of corticosteroids on the model, this study examined two conditions: the use of corticosteroids in the presence of continuous action of imiquimod (preventive effect) and the absence of imiquimod (therapeutic effect), found a decrease in PASI scores in the corticosteroids-treated groups compared with the non-corticosteroids-treated groups. In addition, the skin structures decreased the expression of psoriasis symptoms or returned to normal in the groups using corticosteroids. The mRNA expression of IL23 and ILI7A decreased in the corticosteroid-treated group, and although there was no statistically significant difference, the protein expression showed a marked decrease in the corticosteroid-treated group. In conclusion, topical corticosteroids have the effect of reducing gene expression of [L23 and IL17A in psoriasis and exerting anti-inflammatory and immunosuppressive effects in psoriasis.

Keywords: Psoriasis, topical corticosteroids, IL23/ILI7A axis, imiquimod, mouse model ofpsoriasis. TABLE OF CONTENTS Page CONFIRMATION AND AGREEMENT cung gun g2 áán1G1462108g68616803610444358385E:86A2đ538 1 BOTS TRE cscs se cS Se 1 IV. ll LIST OF ABBRE VIA TIONS se sxeesobseusiosieesaigoeiegdidroekdtrtriliuiea001400 043004010. 460214430100282/040X100000122740000i29- 046 vi 1u Su, RE SLES nanngnghotoepaotkidtdpoidtitdiMiioogt00180210/001000103841E0:4010037086000300L0880)G0G3/00464G0G39G46860701360000k6/0gã600010G vil LIS DOP FIGURES sonncuscnscnemaema aR ee Vill CHAP TBR.

LTV TROUT sssccucessiceasmuimaunsusrnineasenairusainanssceusnanmies anna aceansaaumaanamnasnanasess | 1. Purpose of this thesis 6 .4HRVÍIDHNGIifiniUONR: en cso cece bce aie cc 2 CHAPTER 2. REN LE W ssunncunmmannnennmnanamriianan qummammacanciis 2 NR | FEGauennngobintotingrtoRiosGENGHIANGISEASGESDGEEGGSIOGGEDGIEOGIGGIGIEG.SEGESESSNHGEDINGEIGUNGIESD/O4GGG1E 3 "Ngon. Epidermis — outer layer Of the skii.

EHE440E8000 0000744 2 Sc cote. Leama wetting BANS REÍÍNG. euxeoeseiedohonntiidiodtiGgiugglioini0g-800EgI0EEN/S01002800080010091880465/000g6802 4 2. Hypodermis — bottom layer of the SKHI:.-¡:¿scs:s2i6s221151065163 1 65 81661118 604 1 S83 1E 01,8 LR gấu 4 sông ,k OP) en ee 4 "Nhuon.

Plaque-like oại. 5 decd, RIỜ Đã OS Tel FALLS 1816), BI BLBNÍS susssienediakgiiidk die.0 6 224 Psonasis Aréa Severity Index (PAS) seeeesoisosnseinioiGeG0B88503853886152303652E18815/ rune 7 2. Imiquimod-induced psoriasis mouse 1modđ€ÌÏ. MREE ORIOL OLE, nsnsnonesonen annie nis senses er etna i soe rue 06 9 2A.

lopieal corticosteroids 1ñ treatment Of PSOTIASIS .1, Mechanism Of HE LH sccscscassscncasccessennmescenveassamaneenanem anon meamumemamarenes 10 2. Cinpous ndueree CIC scncecuiercenceeensannecmmmenvacemnanenuseataemnmreeenent II 2. Hematoxylin and eosin staining .- - + + - 2+2 +32 32233 *#ES+EE+vEerrEerkerreererrrerrkrrree 12 2.-- --- -- + + +++ + + x++x*+x + vn ng vn ng ng Iz 2. \Juantitative Reverse Transenption PCR.

(TU PGR) sincccosssinsnsinssnsanarnsinnernscuniomasnaies 13 2: tole PEHeIDle OF g SP CR. su eeeeeeeindinnnrboDtooigioUO081101000803000000100004601301GG000200. Quantification methods of qRT-PCT.-- - - 55-22 +22 **++2£++zEE+zEEszeerseeeezrerrrerre 14 CHAPTER 3. MATERIALS AND METHOIDS.

Time and place of €XP€TIT€IE. --- 5 2 222332 ***E+*E*#E£vE#vEveEerErrerrerrererereeree 15 ee | a aeaera 15 eS ĐÔI HS sussosnuannenrnnidihtrrgtnttriugt2EtGg70000600000010E00010109017440146100200800/502.1; Reseatch ania) RUDIEDOĂE saussssseiendasoiddbestboektgioikissbpidieskifskgtliosrtplG05S60186000400016000088948H0 15 3. 18 0 tebula ADN RETO REN cristina te itd 18 3.2 IMQ-induced psoriasis mouse modeling and treatment.-- - ------s=+5s=>+s 18 Diddy kee LH Ki MOS). HE sennggnnarnraruittgrttniGfiEIGHDINDHDSSOOSIOIDXGIR0/0HGĐKIEONS//NEBDSSSES 20 3.

Indirect immunofluorescence staining of IL23 and IL17A antigen.5 qRT-PCR ot 028 am IL) TAsà ha dan ng do n2 2001201080486 30N89)869090310868850600843 21 53.1081 ITA SAS ca sa E gia hy asi dneizae ah vi Susan ie slants geal dvoh acco doókSuiRsbgbsbelsfiEolsekiSgbbsigsiex 23 CHAPTERS. RESULTS AND DISCUSSION seaosssesssdsssebasedhaktieghoklguG88.1 Results IMQO-imnduced. psoriasis MOUSE MODE) os crccisencassensarsnncearacucenanersmmneenenenaensnnnane 24 4. Results of the PAST assesstiiettcc.

Results of histologies! ựớilHHl[EHsoesessessesssoedioiaiggtiosgbiallcgisgisgois6Egticl8igiSi080014444043. Results of IL23 and IL17A expression by qRT-PCR:. Protein expression of IL17A and IL23 gene in skin structure. Treatment effects of corticosteroids on model resuÌts.

Evaluation of treatment effects based on clinical manifestations. Results of histological evaliatiotlisccccnsnmcmmmnnmarmnracniemianmmunmamanmersie 33 4. Changes in gene expression of IL23 and IL17A during and after treatment. Protein expression of IL17A and IL23 gene in skin structure.

Discussion in model creating results. Discussion on effects of corticosteroids on model resuÏtS. CONCLUSION AND RECOMMENDATIƠN.----------s-52 42 Dds COTE TẾ TỐT coc cscanssuanansan ssasenmnasesinseanznon cameuanaanin sans 283858059555 30. 42 TT ng seeeeeetsreeseoeeeeepeserrisi9099090)9160107960000009 n0np9gPgrrisgsgprrtgtegl 43 POPPE INI, seannesgnessessioiosgtkostsitik4GSISGG3:0408301081301310/0À8HG8.02HL8D1Gn901310013440030:g3-818001/0420G0G112/G73G5:/2038 51 LIST OF ABBREVIATIONS Cort : Corticosteroid DC : Dendritic Cells IMQ : Imiquimod H23 : Interleukin 23 IL17 : Interleukin 17 IF : Immunofluorescence H&E : Hematoxylin and Eosin NF-«B : Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B TNF : Tumor necrosis factor PASI : Psoriasis area severity index qRT-PCR : Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction 6IMQ : Apply 6 days of imquimod 12IMQ : Apply 12 days of imquimod 6IMQ/Cort : Apply 6 days of IMQ with corticosteroids from day 7 12IMQ/Cort: Apply 12 days of IMQ with corticosteroids from day 7 LIST OF TABLES Page Table 3.

15 WS Be TORE BEINTITfWETHooseessseninsdebdtteioogotgiottoditoil3s2i80000i80136G5/00.3: Experiment struments ssisissssbisiiiiiiii4183315331018S0G85BS853R18888933938S858385038843380038383ã 17 able:3.4: PA SĨ scoring OnTmOđBÌ--ssssessecsgseissni x06) 164 06 ee nee IS 19 Table 3. Steps in deparafÍin1zafionn. -- --- 5< << x HH HH HH kg 20 Table 3. Sequence of primers participating in RT-qPCR for IL23 and IL17A.

Components participating in RT-qPCR.0 -gPCR temperature eye les cassscossesegseceskbdiitsassksodsGiebgili01855g)645443838534680065534:8 22. vi LIST OF FIGURES Page Higuf6:2. Structure:of the SKĂH-sseeeeiiisenixiirkareiigkeiiig12agi0LEatEpkrVEEinu5134. Chronic plaque psoriasis located.

at typical SIS. Structure Of tiqQuiiiod, si: csss<sisc162155 ees cxsansancse saxascasenecassuensavesnaueanaaneseabansssaesanuaes 08 Figure 2. Indirect ImmunofÏuoreSC€TC€. Clinical manifestations of IMQ — induced psoriasis mouse model.

PASI scale from day 0 to day 6. Comparison of histological alterations. Epidermal thickness at day 62. Fold change of the expression of IL23 and IL17A though day 3 and day 6.

Tissue staining by indirect immunofluorescence technique of day 6 skin tissue samples of control group and GIMQ ørOUps. Corresponding clinical manifestations of the 4 groups. PASI scale at day 8, day 12, day 18 and day 24 between 2 main groups: Acute treatment efficacy assessment group and chronic treatment effectiveness assessment BI) tạys4g154231451536021751813167901853351.9 Comparison of histological alterations following of 5 groups: 6IMQ, 6IMQ/Cort, 12IMQ, 12IMQ/Cort groups and Control ðTOUD .10 Epidermal thickness between control group and 4 groups: 6IMQ, 6IMQ/Cort, 12IMQ, 12IMQ/Cort groups at day 12 sscsssssssssscssesessvsesvssssexesess sasansvenavussedesevesesesscevesesosranseess 35 Figure 4. Fold change of the expression of IL23 and IL17A though day 8, day 12, day 18 and day 24 of 4 SOUPS 8.

Tissue staining by indirect immunofluorescence technique with IL23 assessment of day 12 skin tissue samples of control and experiment Groups .- --- ¿+55 s++x++s++ss+sxxsss 37 Figure 4. Tissue staining by indirect immunofluorescence technique with IL17A assessment of day 12 skin tissue samples of control and experiment ðTOUDS.-- -- ¿+55 ++++s+++<<++sss2 38 vii CHAPTER 1. Problem establishment Psoriasis is a prevalent autoimmune illness that is classified as a dermatological disease that affects around 2-3% of the global population. Although psoriasis does not cause death, it causes skin inflammation and epidermal hyperplasia in sufferers.

Furthermore, this illness raises the chance of painful and debilitating arthritis, as well as cardiovascular morbidity. Psoriasis has a detrimental impact on the quality of life, not only in terms of physiology but also in terms of psychology. The first article on psoriasis was published in 1920 by Marcus K. Since then, more than 100 years have passed, and while the disease mechanism remains many things to be elucidated, several therapeutic approaches to this ailment have been offered.

One of the most popular treatments still in use these days is corticosteroids, a broad term that comprises hormone steroids. They inhibit the production and activity of many inflammatory cells, as well as their redistribution to other body compartments, resulting in fewer circulating immune cells overall. Among the corticosteroids used to treat psoriasis, topical corticosteroids are the most common (Lebwohl and Ali, 2001). Besides that, IL23/IL17A plays a important role in psoriasis development.

Therefore, in my research, I used mouse model of psoriasis to test IL23/IL17A expression after corticosteroids treatment. Preclinical animal models are needed to determine a more acceptable frequency, and numerous mouse models of psoriasis have been produced to resemble human psoriasis as precisely as possible. The imiquimod-induced mouse model of psoriasis is one of the most extensively utilized models today, with proven advantages of features that are rapidly increasing convenience for rapid screening investigations. Realizing the significant importance for people with psoriasis outlined above, especially for better serving Vietnamese patients.

Project “EVALUATION OF THE EFFECTS OF CORTICOSTEROIDS ON ILI7A AND H23 EXPRESSIONS IN IMIQUIMOD-INDUCED PSORIASIS MOUSE MODEL" is conducted. Purpose of this thesis Purpose 1: Creating a standard psoriasis mouse model using imiquimod Purpose 2: Evaluating the effects of topical corticosteroids on IL17A and IL23 expression in imiquimod psoriasis mouse model. Implementation content Content 1: Creating imiquimod-induced mouse model of psoriasis. Content 2: Applying then evaluating the effect of corticosteroid on the imiquimod- induced psoriasis mouse model CHAPTER 2.

Structure of the skin 2. Introduction The skm 1s the largest organ of animal (Swamn, 2010) and accounts for nearly 16% total human body weight (Wickett and Visscher, 2006). The important role of skin is in protection, regulation and sensation. In structure, it is divided into 3 main layers: Epidermis, dermis and hypodermis (Garza, 2019).

Dermis —— Vein Artery Lymph Sensory nerve Sensory nerve vessels (lanceolate fiber endings) Figure 2. Structure of the skin (Garza, 2019).