Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide Từ Nấm Cordyceps militaris

Khóa luận nghiên cứu hàm lượng polysaccharide từ nấm cordyceps militaris nuôi trên môi trường lỏng tĩnh, góp phần vào công nghệ sinh học.

• Tác giả: Lê Văn Lâm Huân
• Người hướng dẫn: TS. Lê Thị Diệu Trang
• Trường học: Trường Đại Học Nông Lâm
• Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học
• Đề tài: Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide Từ Nấm Cordyceps militaris Nuôi Trên Môi Trường Lỏng Tĩnh
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2019 - 2023
• Địa điểm: Thủ Đức

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• XÁC NHẬN VÀ CAM ĐOAN
• TÓM TẮT
• 2. CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Tổng quan về Đông trùng hạ thảo Cordyceps sp.
• 2.2. Giới thiệu về Cordyceps militaris
• 2.3. Đặc điểm sinh học Cordyceps militaris
• 2.4. Thành phần hóa học của Cordyceps militaris
• 2.5. Các hợp chất chính có hoạt tính sinh học ở Cordyceps militaris
• 2.6. Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi trồng Cordyceps militaris
• 2.7. Nuôi cấy nhân tạo nấm Cordyceps militaris
• 2.8. Tổng quan về polysaccharide
• 2.9. Hoạt tính sinh học của polysaccharide từ Cordyceps militaris
• 2.10. Nghiên cứu làm tăng tổng hợp polysaccharide ở nấm
• 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
• 3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
• 3.2. Vật liệu nghiên cứu và thiết bị
• 3.3. Môi trường nuôi cấy
• 3.4. Nội dung nghiên cứu
• 3.4.1. Đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nấm Cordyceps militaris
• 3.4.2. Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nấm Cordyceps militaris
• 3.5. Mô tả thí nghiệm
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Tăng sinh nấm Cordyceps militaris
• 4.2. Đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nấm Cordyceps militaris
• 4.3. Đặc điểm hình thái của nấm Cordyceps militaris trên các môi trường khác nhau
• 4.4. Đặc điểm sinh trưởng của nấm Cordyceps militaris trên các môi trường
• 4.5. Chỉ tiêu chất lượng của nấm Cordyceps militaris trên các môi trường khác nhau
• 4.6. Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide
• 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• DANH SÁCH CÁC BẢNG
• DANH SÁCH CÁC HÌNH
• DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide Từ Nấm Cordyceps militaris

Nấm Cordyceps militaris là một trong những loài nấm dược liệu quý giá, nổi bật với khả năng sản xuất polysaccharide có tác dụng sinh học cao. Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định hàm lượng polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris nuôi trên môi trường lỏng tĩnh. Mục tiêu chính là tìm ra môi trường tối ưu để thu nhận polysaccharide từ sinh khối và dịch nuôi cấy.

1.1. Đặc Điểm Sinh Học Của Nấm Cordyceps militaris

Nấm Cordyceps militaris có nhiều hoạt chất sinh học như cordycepin và polysaccharide. Những hợp chất này có vai trò quan trọng trong việc tăng cường hệ miễn dịch và chống lão hóa.

1.2. Tầm Quan Trọng Của Polysaccharide Trong Y Học

Polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris có khả năng điều hòa miễn dịch, chống oxy hóa và hỗ trợ điều trị ung thư. Nghiên cứu này sẽ làm rõ hơn về giá trị dược liệu của polysaccharide.

II. Vấn Đề Trong Việc Nuôi Trồng Nấm Cordyceps militaris

Việc nuôi trồng nấm Cordyceps militaris gặp nhiều thách thức, đặc biệt là trong việc tối ưu hóa môi trường nuôi cấy. Các yếu tố như pH, nhiệt độ và thành phần dinh dưỡng ảnh hưởng lớn đến sự phát triển và hàm lượng polysaccharide.

2.1. Các Yếu Tố Ảnh Hưởng Đến Sự Phát Triển Của Nấm

Nhiệt độ và độ ẩm là hai yếu tố quan trọng quyết định sự phát triển của nấm. Nghiên cứu cho thấy rằng môi trường lỏng tĩnh có thể tối ưu hóa sự phát triển của nấm.

2.2. Thách Thức Trong Việc Chiết Xuất Polysaccharide

Chiết xuất polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris gặp khó khăn do sự biến đổi trong thành phần hóa học của nấm trong các điều kiện nuôi cấy khác nhau.

III. Phương Pháp Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide Từ Nấm

Nghiên cứu sử dụng phương pháp nuôi cấy lỏng tĩnh để thu nhận polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris. Các môi trường khác nhau sẽ được thử nghiệm để xác định môi trường tối ưu nhất.

3.1. Thiết Kế Thí Nghiệm Để Đánh Giá Môi Trường Nuôi Cấy

Thí nghiệm sẽ được thiết kế với nhiều nghiệm thức khác nhau, bao gồm các thành phần dinh dưỡng khác nhau để đánh giá ảnh hưởng đến hàm lượng polysaccharide.

3.2. Phân Tích Kết Quả Chiết Xuất Polysaccharide

Kết quả chiết xuất sẽ được phân tích bằng các phương pháp hóa học hiện đại để xác định hàm lượng và chất lượng của polysaccharide.

IV. Ứng Dụng Thực Tiễn Của Polysaccharide Từ Nấm Cordyceps

Polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris có nhiều ứng dụng trong y học và thực phẩm. Nghiên cứu này sẽ làm rõ hơn về tiềm năng ứng dụng của polysaccharide trong các sản phẩm sức khỏe.

4.1. Ứng Dụng Trong Ngành Dược Phẩm

Polysaccharide có thể được sử dụng để phát triển các loại thuốc mới, hỗ trợ điều trị nhiều bệnh lý khác nhau, đặc biệt là bệnh ung thư.

4.2. Ứng Dụng Trong Ngành Thực Phẩm

Nấm Cordyceps militaris có thể được sử dụng như một thành phần bổ sung trong thực phẩm chức năng, giúp tăng cường sức khỏe và miễn dịch.

V. Kết Luận Về Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide

Nghiên cứu hàm lượng polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris nuôi trên môi trường lỏng tĩnh đã chỉ ra rằng môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng lớn đến sự phát triển và hàm lượng polysaccharide. Kết quả nghiên cứu sẽ mở ra hướng đi mới cho việc ứng dụng nấm trong y học.

5.1. Tương Lai Của Nghiên Cứu Polysaccharide

Nghiên cứu sẽ tiếp tục được mở rộng để tìm ra các phương pháp tối ưu hơn trong việc chiết xuất và ứng dụng polysaccharide từ nấm Cordyceps.

5.2. Khuyến Nghị Cho Các Nghiên Cứu Tiếp Theo

Cần có thêm nhiều nghiên cứu về ảnh hưởng của các yếu tố môi trường khác nhau đến hàm lượng polysaccharide để tối ưu hóa quy trình sản xuất.

Nội dung chính

Bối cảnh và vấn đề nghiên cứu

Nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) là loại nấm dược liệu quý thuộc chi Cordyceps, ngành nấm túi (Ascomycota). Trong tự nhiên, nấm ký sinh trên ấu trùng sâu bướm và đã được ứng dụng lâu đời trong y học cổ truyền. Do nguồn Cordyceps sinensis tự nhiên ngày càng cạn kiệt, khó nhân tạo và có giá thành đắt đỏ, Cordyceps militaris trở thành đối tượng thay thế chiến lược nhờ hàm lượng các hoạt chất sinh học tương đương hoặc cao hơn, đồng thời có khả năng nuôi cấy nhân tạo thuận lợi hơn.

Trong số các hợp chất sinh học có giá trị trị liệu cao của C. militaris (như cordycepin, adenosine, acid béo, nguyên tố vi lượng), nhóm hợp chất polysaccharide đóng vai trò quan trọng nhờ các hoạt tính điều hòa miễn dịch, chống oxy hóa, kháng khối u, hạ lipid máu và chống lão hóa. Polysaccharide ở nấm tồn tại ở hai dạng chính: polysaccharide nội bào (trong quả thể, sợi nấm) và polysaccharide ngoại bào (exopolysaccharide - EPS) được nấm tổng hợp và tiết trực tiếp ra môi trường nuôi cấy.

Tại Việt Nam, các đơn vị sản xuất chủ yếu nuôi trồng nấm trên giá thể bán rắn (như gạo lứt, nhộng tằm) để thu nhận quả thể hoặc sợi nấm khô, thường tốn thời gian nuôi cấy kéo dài (60–65 ngày) và khó kiểm soát chất lượng đồng đều. Đặc biệt, nguồn dịch môi trường sau nuôi cấy lỏng tĩnh chứa lượng lớn exopolysaccharide có hoạt tính sinh học cao hầu như chưa được khai thác và tận dụng.

Đề tài khóa luận "Nghiên cứu hàm lượng polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris nuôi trên môi trường lỏng tĩnh" được thực hiện nhằm giải quyết bài toán tối ưu hóa dinh dưỡng và bổ sung cơ chất để thu nhận đồng thời cả sinh khối nấm và lượng EPS dồi dào từ dịch nuôi cấy.

Mục tiêu nghiên cứu cụ thể:

• Xác định môi trường dinh dưỡng thích hợp trong việc thu nhận polysaccharide từ sinh khối và exopolysaccharide từ dịch nuôi cấy của nấm Cordyceps militaris trong môi trường lỏng tĩnh.

Nhiệm vụ nghiên cứu (gồm 2 nội dung chính):

1. Nội dung 1: Đánh giá ảnh hưởng của 4 môi trường dinh dưỡng khác nhau đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nấm Cordyceps militaris.
2. Nội dung 2: Đánh giá ảnh hưởng của các loại dầu thực vật (dầu dừa, dầu olive) ở các nồng độ khác nhau đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nấm Cordyceps militaris.

Đối tượng và phạm vi nghiên cứu:

• Đối tượng nghiên cứu: Chủng nấm Cordyceps militaris do Phòng Nghiên cứu và Phát triển Cordyceps – Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học và Môi trường (Trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh) cung cấp.
• Phạm vi không gian: Phòng Nghiên cứu và Phát triển Cordyceps, Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học và Môi trường, Trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh.
• Phạm vi thời gian: Nghiên cứu thực nghiệm được tiến hành từ ngày 01/03/2023 đến ngày 30/06/2023.

---

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết và mô hình nghiên cứu

Khóa luận vận dụng cơ sở sinh lý học và chuyển hóa nấm học:

• Đặc điểm phân loại và sinh học: Cordyceps militaris thuộc giới Fungi, ngành Ascomycota, phân ngành Ascomycotina, lớp Ascomycetes, bộ Hypocreales, họ Cordycipitaceae. Chu trình phát triển gồm giai đoạn sinh dưỡng vô tính tạo chồi bào tử (blastospores) trong môi trường lỏng và giai đoạn hình thành quả thể hữu tính (perithecia) chứa nang bào tử.
• Vai trò của dinh dưỡng: Tỷ lệ Carbon/Nitrogen (C/N), nguồn nitrogen vô cơ ($KNO_3$) và nguồn nitrogen hữu cơ (peptone, cao men yeast extract) ảnh hưởng quyết định đến quá trình hình thành hệ sợi và tích lũy chất chuyển hóa bậc hai.
• Tác động kích thích sinh tổng hợp của lipid/acid béo: Acid béo không no (đặc biệt là acid oleic chiếm 55–83% trong dầu olive) làm thay đổi tính thấm màng tế bào, hoạt hóa các enzyme liên quan đến biến dưỡng carbohydrate và thúc đẩy tế bào nấm tăng tiết exopolysaccharide ra môi trường ngoài.

Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm

[Giống nấm C. militaris] 

1. Bố trí thí nghiệm:
   • Cả 2 nội dung đều được bố trí theo mô hình thí nghiệm một yếu tố hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD). Mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần, mỗi lần lặp lại gồm 15 lọ nuôi cấy thủy tinh chứa 150 mL môi trường.
   • Thí nghiệm 1 khảo sát 4 công thức môi trường nuôi cấy lỏng.
   • Thí nghiệm 2 khảo sát 7 nghiệm thức gồm đối chứng (ĐC) không bổ sung dầu, 3 mức nồng độ dầu dừa (2%, 4%, 6%) và 3 mức nồng độ dầu olive (2,5%, 5%, 7,5%) trên nền môi trường tối ưu đã chọn ở thí nghiệm 1.

Thành phần hóa chất	Môi trường 1 (MT1)	Môi trường 2 (MT2)	Môi trường 3 (MT3)	Môi trường 4 (MT4)
Tác giả tham khảo	Phan (2018)	Cui & Jia (2010)	Li và ctv (2007)	Yang và ctv (2014)
Glucose (g/L)	35	48,67	—	—
Saccarose (g/L)	—	—	60	27,24
Yeast extract (g/L)	25	10	20	10,33
Peptone (g/L)	5	12,56	—	5
$KNO_3$ (g/L)	—	—	2	—
$KH_2PO_4$ (g/L)	1	1	0,4	5,6
$MgSO_4$ (g/L)	0,5	0,5	0,2	0,1
$FeSO_4$ (g/L)	—	—	0,02	—
$(NH_4)_2SO_4$ (g/L)	—	—	—	21
$ZnCl_2$ (g/L)	—	—	—	0,01
Vitamin $B_1$ (g/L)	—	—	—	0,05

2. Quy trình nuôi cấy và thu nhận sinh khối:

   • Nuôi trong điều kiện phòng tối ở 18–22°C, độ ẩm 80–90% đến khi hệ sợi phủ kín bề mặt dung dịch; sau đó chuyển sang phòng sáng với cường độ 700–1000 lux, chu kỳ chiếu sáng 16 giờ sáng : 8 giờ tối cho đến đủ 60 ngày.
   • Sau 60 ngày, thu nhận sinh khối tươi, xác định khối lượng tươi ($FW_t$), sấy thăng hoa để thu nhận sinh khối khô ($DW_t$) và tính hiệu suất sinh học tươi ($BE_t$) và khô ($BE_k$).

3. Phương pháp hóa sinh định lượng polysaccharide sinh khối:

   • Xay mịn mẫu khô, loại bỏ chất tan bằng dung môi cồn:nước (1:4) có hỗ trợ siêu âm, sấy ở 105°C đến khối lượng không đổi.
   • Thủy phân mẫu bằng $H_2SO_4$ 72% trong 60 phút ở nhiệt độ phòng, sau đó pha loãng về nồng độ $H_2SO_4$ 4% bằng nước cất và tiếp tục thủy phân bằng hơi nước bão hòa trong 60 phút để cắt liên kết glycoside giải phóng đường khử.
   • Định lượng đường khử bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ phân tử qua phản ứng màu với thuốc thử DNS (3,5-Dinitrosalicylic acid) ở bước sóng 505 nm. Xây dựng đường chuẩn dựa trên dung dịch chuẩn D-glucose tinh khiết.

4. Phương pháp thu hồi exopolysaccharide (EPS) từ dịch nuôi cấy:

   • Dịch sau nuôi cấy được lọc qua vải lọc, hấp khử trùng 121°C trong 15 phút, ly tâm 4000 vòng/phút trong 15 phút lấy dịch nổi.
   • Đối với dịch có dầu thực vật: bổ sung Petroleum ether theo tỷ lệ 1:1, lắc đều, để lắng 40 phút và tách lấy pha dịch bên dưới (lặp lại 4 lần để loại triệt để lipid thừa).
   • Tiến hành tủa polysaccharide ngoại bào bằng ethanol $96^\circ$ tỷ lệ 1 dịch : 4 ethanol ở nhiệt độ 4°C trong 24 giờ.
   • Ly tâm 6000 vòng/phút trong 20 phút, thu tủa, rửa 3–4 lần bằng ethanol $96^\circ$ và sấy khô ở 50°C trong 5 giờ.

5. Phương pháp xử lý số liệu:

   • Dữ liệu thô được tính toán bằng Microsoft Excel.
   • Phân tích phương sai một nhân tố (One-way ANOVA) bằng phần mềm Minitab 21, so sánh sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa các giá trị trung bình ở mức xác suất $P < 0,01$. Các số liệu biểu diễn dưới dạng $\text{Trung bình} \pm \text{Độ lệch chuẩn (SD)}$.

---

Nội dung chính theo từng chương

Chương 1. Mở đầu

Chương này nêu bật vị trí của nấm Cordyceps militaris như một nguồn dược liệu thay thế cho C. sinensis. Tác giả phân tích tính cấp thiết của việc nghiên cứu phương pháp nuôi cấy lỏng tĩnh để khắc phục nhược điểm về thời gian của phương pháp nuôi trên môi trường bán rắn, đồng thời khai thác giá trị của dịch môi trường chứa exopolysaccharide nhằm phục vụ ngành dược liệu và thực phẩm chức năng. Mục tiêu tổng quát và 2 nội dung nghiên cứu thực nghiệm được xác lập cụ thể.

Chương 2. Tổng quan tài liệu

Chương 2 tổng hợp toàn diện các công trình nghiên cứu trong và ngoài nước:

• Phân loại và đặc điểm sinh học: Lịch sử định danh từ Carl Linnaeus (1753), hình thái cơ quan sinh sản, các dạng bào tử vô tính (blastospores, conidia) và bào tử hữu tính (ascospores).
• Thành phần hóa học và hoạt tính sinh học: Quả thể chứa 40,69% protein, các acid amin thiết yếu (lysine 15,06 mg/g, glutamic acid 8,79 mg/g), acid béo không bão hòa (acid linoleic chiếm 61,3% trong quả thể), vitamin ($A, B_1, B_2, B_3, B_6, B_{12}, C, E$) và khoáng chất ($K, Ca, Mg, Zn, Se$). Các hoạt chất chủ đạo gồm cordycepin, adenosine và polysaccharide.
• Hoạt tính dược lý của polysaccharide: Điều hòa miễn dịch, giảm lipid máu (giảm cholesterol toàn phần 20,05%, triglyceride 45,45%), hạ đường huyết, chống ung thư và điều biến hệ vi sinh vật đường ruột.
• Các yếu tố kích thích sinh tổng hợp: Cơ chế tác động của nguồn carbon, nguồn nitrogen, tỷ lệ C/N, nhiệt độ (25°C cho hệ sợi, 18–22°C cho quả thể), ánh sáng (700–1000 lux) và việc bổ sung acid béo/dầu thực vật (dầu olive, dầu đậu nành, acid palmitic, acid oleic) lên sự tăng sinh EPS ở các chủng nấm dược liệu.

Chương 3. Vật liệu và phương pháp

Tác giả mô tả chi tiết quy trình chuẩn bị vật liệu giống, công thức môi trường tăng sinh lỏng và môi trường thạch PGA. Chi tiết hóa thiết kế thí nghiệm cho Nội dung 1 (4 môi trường MT1–MT4) và Nội dung 2 (bổ sung dầu dừa 2–6% và dầu olive 2,5–7,5%). Thiết lập hoàn chỉnh quy trình chiết xuất mẫu, xây dựng phương trình đường chuẩn glucose, quy trình loại lipid bằng petroleum ether và quy trình tủa ethanol để thu hồi exopolysaccharide tinh sạch.

Chương 4. Kết quả và thảo luận

Chương 4 trình bày và thảo luận các phát hiện thực nghiệm qua 3 giai đoạn:

1. Quá trình tăng sinh và nhân giống:

   • Trên môi trường lỏng tăng sinh: sau 3 ngày nấm bung tơ trắng, ngày thứ 14 phủ kín bề mặt, ngày thứ 20 tạo mảng sợi xốp dày 3–4 cm.
   • Trên môi trường thạch PGA: sau 4 ngày tơ nấm phát triển, ngày thứ 22 tơ lan 80% đĩa petri, ngày thứ 26 tơ phủ kín đĩa thạch và đạt chuẩn cấy giống.

2. Kết quả Nội dung 1 (Đánh giá 4 môi trường nuôi cấy lỏng):

   • Hình thái: Thân quả thể ở cả 4 môi trường đều có màu cam đậm, thân thấp, hình trụ và ốm. Môi trường 3 cho mảng sinh khối dày nhất, MT4 mỏng nhất.
   • Sinh trưởng: Thời gian lan kín bề mặt ở MT2, MT3, MT4 nhanh (16,33–16,68 ngày), trong khi MT1 kéo dài nhất (20,33 ngày) do hàm lượng nitrogen cao gây ức chế hệ sợi. Thời gian xuất hiện quả thể ở MT3 ngắn nhất (21,67 ngày), MT1 muộn nhất (26,00 ngày).
   • Đường chuẩn Glucose: Thiết lập phương trình $y = 0,0042x + 0,0432$ với $R^2 = 0,992$, chứng minh độ tin cậy tuyến tính cao cho phép định lượng chính xác đường khử.
   • Năng suất và hoạt chất: Môi trường 3 vượt trội về sinh khối tươi (25,58 g/lọ), sinh khối khô (3,88 g/lọ), hiệu suất sinh học khô (2,52%) và hàm lượng polysaccharide trong sinh khối (22,66%). Mặc dù MT1 cho lượng EPS cao nhất (3,29 g/L), nhưng lượng sinh khối khô và polysaccharide tích lũy trong sinh khối lại thấp nhất (9,76%).

Chỉ tiêu theo dõi	MT1	MT2	MT3	MT4	Mức ý nghĩa ($P$)
Thời gian phủ kín mặt (ngày)	$20,33 \pm 0,58^a$	$16,67 \pm 0,58^b$	$16,68 \pm 1,16^b$	$16,33 \pm 1,53^b$	0,004
Thời gian xuất hiện quả thể (ngày)	$26,00 \pm 0,00^a$	$22,67 \pm 0,58^b$	$21,67 \pm 0,58^c$	$23,33 \pm 1,16^b$	0,000
Khối lượng sinh khối tươi (g/lọ)	$22,22 \pm 0,68^b$	$22,42 \pm 0,20^b$	$25,58 \pm 0,53^a$	$11,52 \pm 0,38^c$	0,000
Khối lượng sinh khối khô (g/lọ)	$2,77 \pm 0,13^c$	$3,08 \pm 0,05^b$	$3,88 \pm 0,05^a$	$2,11 \pm 0,07^d$	0,000
Hiệu suất sinh khối khô (%)	$1,80 \pm 0,08^c$	$2,00 \pm 0,03^b$	$2,52 \pm 0,03^a$	$1,36 \pm 0,05^d$	0,000
Polysaccharide sinh khối (%)	$9,76 \pm 0,36^d$	$15,91 \pm 0,45^c$	$22,66 \pm 0,49^a$	$17,74 \pm 0,49^b$	0,000
Exopolysaccharide dịch (g/L)	$3,29 \pm 0,29^a$	$3,15 \pm 0,14^a$	$2,45 \pm 0,12^b$	$1,94 \pm 0,16^c$	0,000

(Ghi chú: Các chữ cái khác nhau trong cùng một hàng thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa thống kê ở mức $P < 0,01$)

3. Kết quả Nội dung 2 (Ảnh hưởng của bổ sung dầu dừa và dầu olive):
   • Hình thái: Bổ sung dầu olive ở mức 2,5% và 5% cùng các mức dầu dừa (2%, 4%, 6%) cho quả thể màu cam đậm, thân thấp hình trụ. Riêng nghiệm thức bổ sung dầu olive 7,5% (NT6), nấm phát triển mảng sinh khối dày nhưng quả thể không vươn dài thành sợi mà chỉ tạo thành các cụm li ti dày đặc.
   • Thời gian sinh trưởng: Dầu olive giúp rút ngắn thời gian phủ kín bề mặt (14,00–15,33 ngày so với ĐC là 16,67 ngày) và đẩy sớm thời gian xuất hiện quả thể (20,00–21,67 ngày so với ĐC là 21,67 ngày). Bổ sung dầu dừa kéo dài thời gian lan tơ (18,00–18,67 ngày).
   • Tăng trưởng sinh khối và hàm lượng polysaccharide: Dầu olive 7,5% (NT6) mang lại hiệu quả vượt trội nhất trên toàn bộ các chỉ tiêu sinh khối và exopolysaccharide ngoại bào.

Nghiệm thức	Khối lượng tươi (g/lọ)	Khối lượng khô (g/lọ)	Hiệu suất khô (%)	Polysaccharide sinh khối (%)	Exopolysaccharide dịch (g/L)
ĐC (0% dầu)	$25,58 \pm 0,53^c$	$3,88 \pm 0,05^f$	$2,52 \pm 0,03^f$	$22,66 \pm 0,49^c$	$2,45 \pm 0,12^e$
NT1 (Dầu dừa 2%)	$31,69 \pm 1,54^b$	$4,79 \pm 0,09^d$	$3,10 \pm 0,06^d$	$20,85 \pm 0,73^c$	$2,66 \pm 0,14^e$
NT2 (Dầu dừa 4%)	$34,97 \pm 0,56^a$	$4,48 \pm 0,05^e$	$2,90 \pm 0,03^e$	$24,00 \pm 0,90^a$	$3,02 \pm 0,07^d$
NT3 (Dầu dừa 6%)	$35,20 \pm 0,37^a$	$5,00 \pm 0,11^c$	$3,22 \pm 0,08^c$	$24,10 \pm 0,76^a$	$3,35 \pm 0,10^c$
NT4 (Dầu olive 2,5%)	$35,53 \pm 0,56^a$	$5,12 \pm 0,13^c$	$3,31 \pm 0,09^c$	$23,66 \pm 0,67^{ab}$	$3,29 \pm 0,11^c$
NT5 (Dầu olive 5,0%)	$35,18 \pm 0,67^a$	$5,40 \pm 0,10^b$	$3,48 \pm 0,06^b$	$23,17 \pm 0,56^{ab}$	$4,03 \pm 0,07^b$
NT6 (Dầu olive 7,5%)	$35,84 \pm 0,26^a$	$6,07 \pm 0,04^a$	$3,91 \pm 0,03^a$	$24,67 \pm 0,49^a$	$5,06 \pm 0,07^a$
Mức ý nghĩa ($P$)	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000

Chương 5. Kết luận và đề nghị

Tổng hợp các chỉ số tối ưu từ thực nghiệm và kiến nghị các bước nghiên cứu tiếp theo để hoàn thiện quy trình.

---

Kết quả và đóng góp

Kết quả định lượng cốt lõi

1. Lựa chọn môi trường nuôi cấy: Môi trường 3 (thành phần: Saccarose 60 g/L; Cao men Yeast extract 20 g/L; $KNO_3$ 2 g/L; $KH_2PO_4$ 0,4 g/L; $MgSO_4$ 0,2 g/L; $FeSO_4$ 0,02 g/L) là môi trường dinh dưỡng thích hợp nhất cho nấm Cordyceps militaris sinh trưởng trong điều kiện lỏng tĩnh, đạt sinh khối khô 3,88 g/lọ, hiệu suất sinh khối khô 2,52%, polysaccharide trong sinh khối 22,66% và EPS trong dịch nuôi cấy đạt 2,45 g/L.
2. Hiệu ứng bổ sung dầu thực vật:
   • Bổ sung dầu olive 7,5% vào môi trường 3 (NT6) mang lại hiệu quả cao nhất: sinh khối khô đạt 6,07 g/lọ (tăng 56,04% so với đối chứng), hiệu suất sinh học khô đạt 3,91%, hàm lượng polysaccharide trong sinh khối đạt 24,67%.
   • Lượng exopolysaccharide (EPS) trong dịch nuôi cấy ở nghiệm thức dầu olive 7,5% đạt 5,06 g/L (tăng gấp 2,07 lần so với đối chứng không bổ sung dầu là 2,45 g/L).
   • Dầu dừa ở các nồng độ 2–6% cũng có tác dụng kích thích sinh khối (tăng 28,53% ở mức cao nhất) và tăng lượng EPS (đạt 3,35 g/L ở mức 6%), tuy nhiên mức độ kích thích thấp hơn rõ rệt so với dầu olive do hàm lượng acid oleic trong dầu dừa thấp hơn.

Đóng góp so với các nghiên cứu trước

• Khóa luận làm sáng tỏ vai trò chuyển hóa của acid oleic dồi dào trong dầu olive đối với việc gia tăng tính thấm màng tế bào, kích thích cả sự tích lũy sinh khối lẫn quá trình bài tiết exopolysaccharide ngoại bào ở nấm Cordyceps militaris nuôi cấy lỏng tĩnh.
• Thiết lập thành công quy trình xử lý dịch lên men có bổ sung chất béo thông qua việc sử dụng Petroleum ether (tỷ lệ 1:1, lặp lại 4 lần) để loại bỏ hoàn toàn lipid tự do, khắc phục triệt để hiện tượng tạp nhiễm lipid gây sai lệch kết quả tủa exopolysaccharide bằng cồn $96^\circ$.
• Cung cấp dẫn liệu khoa học về việc tận dụng toàn diện cả sinh khối sợi nấm lẫn dịch môi trường nuôi cấy lỏng tĩnh, mở ra hướng sản xuất nguyên liệu polysaccharide tiêu chuẩn cho ngành dược phẩm và thực phẩm chức năng.

---

Hạn chế và hướng nghiên cứu tiếp

Hạn chế của nghiên cứu

• Đặc điểm hình thái quả thể: Phương pháp nuôi cấy bề mặt trên môi trường lỏng tĩnh cho thấy sợi quả thể phát triển kém hơn so với phương pháp nuôi trên môi trường bán rắn truyền thống. Ở nghiệm thức nồng độ dầu olive cao (7,5%), nấm chỉ phát triển mảng sinh khối và các cụm mầm quả thể li ti chứ không phân hóa thành thân quả thể dạng sợi dài.
• Quy mô thực nghiệm: Nghiên cứu mới dừng lại ở quy mô phòng thí nghiệm (bình nuôi cấy tĩnh thể tích 150 mL dịch/lọ), chưa khảo sát các hệ thống nuôi cấy lỏng động (lắc hoặc sục khí liên tục trong bioreactor) để đánh giá năng suất tạo EPS ở quy mô bán công nghiệp.

Hạn chế và hướng mở do văn bản đề cập

• Cần tiếp tục khảo sát ảnh hưởng của các điều kiện vật lý khác (như chế độ đảo trộn, pH ban đầu, tốc độ thông khí) kết hợp với các tỷ lệ dầu thực vật để tối ưu hóa đồng thời cả hình thái sợi quả thể và sản lượng EPS.
• Cần mở rộng phân tích tinh sạch sâu, xác định thành phần cấu trúc đơn phân (monosaccharide composition), khối lượng phân tử và đánh giá chi tiết các hoạt tính sinh học (in vitro và in vivo) của nguồn exopolysaccharide thu được từ dịch nuôi cấy lỏng tĩnh.

---

Giá trị tham khảo

Tài liệu khóa luận này mang lại giá trị học thuật và thực tiễn chuyên sâu cho:

1. Sinh viên, học viên và nghiên cứu viên: Thuộc các chuyên ngành Công nghệ Sinh học, Sinh học Ứng dụng, Hóa sinh thực vật, Dược liệu học và Công nghệ Thực phẩm quan tâm đến nấm dược liệu và công nghệ lên men.
2. Kỹ thuật viên phòng R&D và cơ sở sản xuất Đông trùng hạ thảo: Đang tìm kiếm giải pháp kỹ thuật nhằm rút ngắn chu kỳ sinh trưởng, giảm chi phí nhân công và tận thu tối đa hoạt chất sinh học ngoại bào từ dịch thải lên men.
3. Các nội dung kỹ thuật đáng tham khảo trực tiếp:
   • Công thức môi trường dinh dưỡng MT3 (saccarose 60 g/L kết hợp $KNO_3$ 2 g/L và cao men).
   • Quy trình kỹ thuật tách loại dầu bằng dung môi Petroleum ether trước khi tủa cồn thu hồi polysaccharide.
   • Quy trình hóa sinh định lượng polysaccharide tổng số thông qua thủy phân mẫu 2 giai đoạn bằng $H_2SO_4$ và phản ứng so màu DNS đo quang phổ hấp thụ ở bước sóng 505 nm.

---

Câu hỏi thường gặp

1. Thành phần cụ thể của môi trường dinh dưỡng MT3 tối ưu là gì?

Môi trường 3 (MT3) được xây dựng dựa trên nghiên cứu của Li và ctv (2007), gồm các thành phần: Saccarose 60 g/L; Cao men (Yeast extract) 20 g/L; $KNO_3$ 2 g/L; $KH_2PO_4$ 0,4 g/L; $MgSO_4$ 0,2 g/L; $FeSO_4$ 0,02 g/L. Môi trường này cung cấp nguồn nitơ vô cơ ($KNO_3$) giúp hệ sợi nấm khỏe, phân bố đều và tối ưu hóa năng suất sinh khối khô.

2. Bổ sung loại dầu thực vật và nồng độ nào cho hiệu quả thu nhận sinh khối và EPS cao nhất?

Bổ sung dầu olive ở nồng độ 7,5% (nghiệm thức NT6) trên nền môi trường MT3 mang lại hiệu quả cao nhất: khối lượng sinh khối khô đạt 6,07 g/lọ (tăng 56,04% so với đối chứng), hàm lượng polysaccharide trong sinh khối đạt 24,67% và hàm lượng exopolysaccharide (EPS) trong dịch nuôi cấy đạt 5,06 g/L (tăng gấp 2,07 lần so với đối chứng).

3. Quy trình thu nhận exopolysaccharide (EPS) từ dịch nuôi cấy có bổ sung dầu thực vật gồm những bước nào?

Quy trình gồm 6 bước: (1) Lọc dịch nuôi cấy qua vải lọc và hấp tiệt trùng ở 121°C trong 15 phút; (2) Ly tâm ở 4000 vòng/phút trong 15 phút thu dịch nổi; (3) Chiết loại dầu bằng Petroleum ether theo tỷ lệ 1:1 trong 40 phút, lặp lại 4 lần lấy pha dịch phía dưới; (4) Tủa polysaccharide bằng ethanol $96^\circ$ tỷ lệ 1 dịch : 4 cồn, ủ ở 4°C trong 24 giờ; (5) Ly tâm 6000 vòng/phút trong 20 phút lấy tủa, rửa tủa 3–4 lần bằng ethanol $96^\circ$; (6) Sấy tủa ở 50°C trong 5 giờ.

4. Tại sao hàm lượng polysaccharide trong sinh khối ở môi trường lỏng tĩnh trong nghiên cứu này (22,66%) lại thấp hơn so với một số công bố nuôi cấy bán rắn trước đây?

Sự chênh lệch này được giải thích bởi đặc thù của môi trường nuôi cấy lỏng tĩnh: trong quá trình sinh trưởng và trao đổi chất, tế bào nấm đã tiết một phần đáng kể polysaccharide nội bào qua màng tế bào ra dung dịch môi trường xung quanh dưới dạng exopolysaccharide (EPS), thay vì giữ lại toàn bộ bên trong sinh khối như khi phát triển trên giá thể bán rắn.

5. Sự phát triển hình thái của nấm thay đổi như thế nào khi bổ sung dầu olive ở nồng độ cao 7,5%?

Ở nồng độ dầu olive 7,5%, hệ sợi nấm lan kín bề mặt môi trường rất nhanh (14,33 ngày) và kích thích tạo mảng sinh khối dày xốp. Tuy nhiên, nồng độ dầu cao đã ức chế sự kéo dài của thân quả thể thành dạng sợi, khiến quả thể chỉ xuất hiện dưới dạng các cụm mầm li ti phân bố trên bề mặt sinh khối.

---

Kết luận

Khóa luận đã chứng minh thành công tính khả thi và hiệu quả của phương pháp nuôi cấy nấm Cordyceps militaris trên môi trường lỏng tĩnh để thu nhận đồng thời sinh khối và exopolysaccharide. Môi trường tối ưu MT3 (chứa saccarose 60 g/L, cao men 20 g/L và $KNO_3$ 2 g/L) kết hợp bổ sung 7,5% dầu olive đã giúp rút ngắn thời gian sinh trưởng, tối đa hóa sinh khối khô lên 6,07 g/lọ và nâng cao sản lượng EPS dịch nuôi cấy đạt 5,06 g/L (gấp 2,07 lần so với đối chứng). Kết quả thực nghiệm cung cấp quy trình kỹ thuật hoàn chỉnh và cơ sở dữ liệu định lượng tin cậy cho việc chuẩn hóa nguồn nguyên liệu polysaccharide nấm phục vụ lĩnh vực dược phẩm và thực phẩm bảo vệ sức khỏe.

Trích đoạn nội dung tài liệu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ; TRUONG ĐẠI HỌC NONG LAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC NGHIÊN CỨU HÀM LƯỢNG POLYSACCHARIDE TỪ NAM Cordyceps militaris NUOI TREN MOI TRUONG LONG TINH Nganh hoc : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện : LÊ VĂN LÂM HUÂN Mã số sinh viên — : 19126056 Niên khóa : 2019 — 2023 TP. Thú Đức, 08/2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP NGHIÊN CỨU HÀM LƯỢNG POLYSACCHARIDE TU NAM Cordyceps militaris NUOI TREN MOI TRUONG LONG TINH Hướng dẫn khoa hoc Sinh viên thực hiện TS. LÊ THỊ DIEU TRANG LÊ VAN LAM HUAN TP. Thú Đức, 08/2023 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu, khoa Khoa học Sinh học trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh đã tạo điều kiện cho em học tập tại đây.

Em xin cảm ơn Viện nghiên cứu Công nghệ Sinh hoc và Môi trường, Phòng nghiên cứu và Phát triển Cordyceps đã tạo điều kiện thuận lợi về cơ sở vật chat, trang thiết bị cho em trong suốt thời gian thực hiện khoá luận tốt nghiệp. Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS. Lê Thị Diệu Trang đã đưa ra định hướng, tận tình hỗ trợ kiến thức chuyên môn, tạo điều kiện giúp em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Em xin cảm ơn anh Lê Hữu Minh Sang, các bạn và các em phòng Nghiên cứu và Phát triển Cordyceps, chị Nguyễn Thị Vân Anh, anh Lê Nguyễn Thanh Đông luôn bên cạnh giúp đỡ, động viên em trong suốt thời gian thực hiện đề tài tốt nghiệp.

Con xin cảm gia đình luôn bên cạnh động viên, khuyên kích và tạo điêu kiện tot nhât dé con được học tập va rèn luyện. Em xin chân thành cảm ơn. XÁC NHẬN VÀ CAM ĐOAN Tôi tên Lê Văn Lâm Huân, MSSV: 19126056, Lớp: DHI9SHB (Số di động: [phone], Email: 19126056(st.vn), sinh viên ngành Công nghệ Sinh học, khoa Khoa học Sinh học, Trường Dai học Nông Lâm TP. H6 Chí Minh, xin cam đoan: Đây là khóa luận tốt nghiệp do bản thân tôi thực hiện, các số liệu và thông tin trong nghiên cứu là hoàn toàn trung thực và khách quan.

Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước hội đồng về những cam kết này. Hô Chi Minh, ngày. năm 2023 Người viết cam đoan (Ký và ghi rõ họ tên) l TÓM TẮT Đông trùng ha thao Cordyceps militaris là loài nam dược liệu đã được sử dụng lâu đời trong nền y học vì chứa nhiều hoạt chất sinh học có giá trị dược liệu cao. Điển hình trong số đó là polysaccharide có thé giúp điều hòa miễn dịch, chống oxy hóa, chống khối u và chống lão hóa.

Vì lẽ đó đề tài “Nghiên cứu hàm lượng polysaccharide từ nắm Cordyceps militaris nuôi trên môi trường lỏng tĩnh” được thực hiện nhằm tập trung nghiên cứu môi trường thích hợp trong việc thu nhận polysaccharide từ sinh khối và exopolysaccharide (EPS) từ dich nuôi cay. Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nam Cordyceps militaris từ 4 môi trường khác nhau. Kết quả cho thấy về hình thái sinh khối, quả thể không có sự khác biệt giữa các môi trường khác nhau. Nhưng môi trường 3 có thành phần gồm (Saccarose: 60 g/L; Yeast: 20 g/L; KNO:: 2 g/L; KH¿PO¿: 0,4 g/L; MgSO: 0,2 g/L; FeSOx: 0,02 g/L) là môi trường thích hợp trong việc thu nhận sinh khối khô; polysaccharide từ sinh khối và exopolysaccharide từ dịch nuôi cấy với hàm lượng lần lượt là 3,88 g/lo; 22,66% và 2,56 g/L, ngoài ra thời gian nam lan kín bề mặt môi trường là khoảng 17 ngày và thời gian xuất hiện quả thể khoảng 21 ngày.

Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nam Cordyceps militaris được thực hiện trên môi trường 3. Về đặc điểm hình thái, ở các nghiệm thức không có sự quá biệt quá nhiều về hình thái quả thể, nhưng thời gian nam lan kín bề mặt môi trường và thời gian xuất hiện qua thé thì ở nghiệm thức bé sung dau olive có thời gian ngắn hơn dầu đừa và đối chứng (không bồ sung dầu thực vật). Kết quả còn cho thấy cả dau dừa và dau olive đều giúp nấm kích thích tăng khối lượng sinh khối khô và exopolysaccharide so với đối chứng, trong đó khi bé sung dau olive ở nồng độ 7,5% đạt hiệu quả cao nhất với khối lượng sinh khối khô: 6,07 g/lọ, polysaccharide từ sinh khối: 24,27% và exopolysaccharide trong dịch là: 5,06 g/L. Từ khóa: Cordyceps militaris, polysaccharide, exopolysaccharide.

ill ABSTRACT Cordyceps militaris is a medicinal mushroom that has long been used in medicine because it contains many biologically active substances with high medicinal value. Among them are polysaccharide, which can help with immunoregulatory, antioxidant, anti-tumor, and anti-aging properties. Therefore, the topic "Study on polysaccharide content from Cordyceps militaris mushroom grown on static liquid medium" aims to focus on studying the appropriate environment for obtaining polysaccharides from biomass and exopolysaccharide (EPS) from culture fluid. A study was conducted to evaluate the influence of four different media on the growth and polysaccharide content of Cordyceps militaris mushroom from 4 different media.

The results showed that fruiting bodies did not differ between different environments in terms of biomass morphology. But medium 3 with the composition (Saccarose: 60 g/L; Yeast: 20 g/L; KNO:: 2 g/L; KH2POq: 0.02 g/L) 1s the suitable medium in obtaining dry biomass; polysaccharide from biomass and exopolysaccharide from culture fluid with the content of 3.56 g/L, in addition, the time for the fungus to spread to the surface of the medium was approximately 17 days, and the time to the appearance of fruiting bodies was about 21 days. The effects of vegetable oil on the growth and polysaccharide content of Cordyceps militaris were evaluated on medium 3. In terms of morphological characteristics, in the treatments, there was not much difference in fruiting body morphology, but the time the fungus spread to the surface of the medium and the time to appearance of fruiting bodies was shorter in the treatment with olive oil than in coconut oil and the control (without adding vegetable oil).

The results also showed that both coconut oil and olive oil helped the fungus to increase dry biomass and exopolysaccharide compared to the control, in which, when adding olive oil at a concentration of 7.5%, the highest efficiency was achieved with dry biomass: 6.07 g/jar, polysaccharide from biomass: 24.27% and exopolysaccharide in solution: 5. Keywords: Cordyceps militaris, polysaccharide, exopolysaccharide. IV MỤC LỤC Trang LOI CẢM ƠN. i XÁC NHAN VA CAM ĐOAN.,ÔỎ iii ABS TRACT ccenesererssenasounavitowca: tblffsgsdsaliesysosg9lSklSSiEogÐnSSS-.7S012821giSEs4ySg363ikgoestsaggbrowzttöetrissSte iv ¡1860000160555 .,ÔỎ V TRANH EễD Bói GHẾ Vie Al naunngnnutgtpbtdnigNGEYGEANDHSI-ESPIGGEIBSN-SGEĐigiSS0E." viii DANH SÁCH CAC BẢNG.

re ix BEA Sees 8421, |: en x Ne ee) | er | OE tt lồ bong sung totioi A1290 000000100030010QGG0901G0.3 NGi dunesthue THIỆN su congtttgrg ho öN G4 GD thỆt HDIGESEDERSEIGSGHDNHGEIGSNSGNSGSlSIENGERtiMgsntscnslt 2 CHƯƠNG 2. TONG QUAN TÀI LIỆỆU.---2-©2222222EE22EE22EE22EE22EE22EE222E22zxzzze. Tổng quan về Đông trùng hạ thảo Cordyceps sp. Tông quan về C.

10G1HG HIS oc cccccccsessccscesveccnsssvecesssssvcsneceuscesssusecessesnecsasetcececsaseeceesust 4 2. Giới thiệu về C. Đặc điểm sinh học C. Thành phan hóa học của C.

Các hợp chất chính có hoạt tính sinh học ở C. Các yêu tố ảnh hưởng đến nuôi trồng C. Nuôi cấy nhân tao nấm C. Tổng quan về polysaccharide.

Giới thiệu chung về polysaccharide.- 22 2 s+22+22x+2E2EE2EE2EEzExrzxrsrxrrer 11 2. Hoạt tính sinh học của polysaccharide từ C. Nghiên cứu làm tăng tổng hợp polysaccharide ở nấm. VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP.

Thời gian và địa điểm nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu và thiết bị,. -- 2-22 2+222E+SE2E2E2EE2E22E2212212122122121221222 22-5 15 Bde les Wate LT CO BH hE usaoxtsspdstbbsinoiietolgGLHIHNHESSGANGNGHEESSSQSEESEHHEGGHIHGSEGIEHEG.3: MIối trường: Sử: dHHE sse-s«‹. Môi trường tăng sinh C.-- eects + 5c +es+x+ersrsererrererrrrerrrrrrrrrke 15 1.5, Mỗi trường PG ÁossssxeseesknnihbhotiEbiAGS0 0051006008600 0030001003060195001600080059053000010800 15 3.

Môi trường nuôi cấy. NGi dung rghiỂn:GỮUcaxsscseisossissica10323146E4Ê1219450853532104G30688ĐBESLEMEESGG43450335883. Nội dung 1: Đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nắm C. TS Nữ | Hi TT, HbuessssoradeuhiottdkiukuiaitiotibbodiuicobooitoBftotgxEfikeid337đi1108813u42081094553.

Mita THỊ ASD CH ic cccssscscessveave gồ gã x46 555148131336 SãNẵt snctveue G01SS3RG84GS. Nội dung 2: Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nắm C.1, BG trí Thi Nei S ttc cccamsavsncnasasamnemcevnnenscenasanenumeneaimaumancecenssein 21 3. Mô ta thí mghiGrn oo. cece cece ccescssseesssessssssessveseseessessneessessneessessessseeeeseesseessess 21 By ate ee D—ưsyesekeeegaeaaaretrtirsigtirdoeoaiBrastgafoseutieostttidicadogynneescnuoai 23 CHƯƠNG 4.

KET QUA VA THẢO LUAN. Kết quả va thao Tuan oo. Tăng sinh nắm C. Đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nắm C.

Đặc điểm hình thái của nam C. militaris trên các môi trường khác nhau. Đặc điểm sinh trưởng của nam C. militaris trên các môi trường.

Chỉ tiêu chất lượng của nam C. militaris trên các môi trường khác nhau. Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide pals mi oe TH unssuantooxgngngetr0 6 g000100010000 0 90000AG001G00B10S001000000G10NNEI0I 2B 32 4. Đặc điểm hình thái của nấm C.

Đặc điểm sinh trưởng của nấm C. Chỉ tiêu chất lượng của nam C. militaris trên các nghiệm thức khác nhau. KET LUẬN VA ĐỀ NGHỊ.

Kết 1 - 2-2 SS2212E2212212112122121121112111111112111111111112101211210112111 2e 39 25 TẾ trÏÍ sen seaensareebeieoebaetbinnboiSobiiogtodSurbeniib9Efrttc0tirag06fpr4lt259/009/6/004050900016 39 TẤT LỆ TT THÁNH KH. ceescesisekskeiueeedkifeorirkesleomiagkusbioautiudndhandaoEsiontdksiioleoiigfic 40 PVC ca la oh ci Sat A eS ic TI Na DI Maa Sar ih Se Rh lea Vil DANH SÁCH CAC CHỮ VIET TAT DTHT : Đông trùng ha thao Ctv : Cộng tác viên MT : Môi trường Exopolysaccharide : EPS NT : Nghiệm thức PGA : Potato Glucose Agar SD : Standard Deviation (Độ lệch chuẩn) Vill DANH SÁCH CÁC BANG Bảng 3. Môi trường nuôi cấy C.-2:©22-52252222+222c22zz2x2zszzscsrcee 16 Bảng 3. Đặc điểm hình thái nắm C.

militaris trên các môi trường. Thời gian phát triển hệ sợi nắm trên các môi trường. Chỉ tiêu khối lượng tươi/ khô, hiệu suất sinh khối tươi/ khô. Kết quả đường chuẩn Glueose.---2- 2+ s+Ss+EE+EE£EEEEE2EEEEEEEEEEEExerrrrkd 30 Bảng 4.

Hàm lượng polysaccharide trong sinh khối va EPS trong dich nuôi cay. Đặc điểm hình thái nắm C. militaris trên các nghiệm thức. Thời gian phát triển hệ sợi nam và xuất hiện quả thể ở các nghiệm thức.

Chỉ tiêu khối lượng tươi/ khô, hiệu suất sinh khối tươi/ khô. Polysaccharide tổng số trong sinh khối va EPS trong dịch nuôi cấy. 37 1X DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2. Quả thé Cordyceps imi]ifđr'iS.

2:22 5522722222222 2EE22E22+zEE2EEzrxrrrrsrxrres 4 Hình 2. Các dạng bào tử của G¡ Wi NT ¡oscsscsasstis Si 03 4k Há 133042851K55513816 514806348181 5 Hhnh 2. Võng đời (óc HT AHÍN ng trnniantiistiE1STGES0535104041531900353803350303880438900480980G1803/038G 6 Hình 2. Cấu trúc hóa học của Adenosine và Cordycepim.----2+sz+szzsz+zz+se2 7 Hình 3.

Quy trình thu nhận exopolysaccharide (EPS) từ dịch nuôi cay rniccrtnestnicecir 20 Hình 3. Quy trình thu nhận exopolysaccharide (EPS) từ dich nuôi cay có bổ sung dầu thực Vật. militaris được tăng sinh trên môi trường lỏng. militaris nhân giống trên môi trường PGA.

militaris xuất hiện quả thé trên các môi trường. Biéu đồ đường chuẩn Glucose. militaris xuất hiện quả thé trên các nghiệm thức. Đặt van đề Nam là loài có ý nghĩa quan trong trong đời sống, kinh tế, xã hội, trong nghiên cứu khoa học, và quan trọng hơn hết là chúng mang lại những lợi ích về sức khỏe.