Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide Từ Nấm Cordyceps militaris

Khóa luận nghiên cứu hàm lượng polysaccharide từ nấm cordyceps militaris nuôi trên môi trường lỏng tĩnh, góp phần vào công nghệ sinh học.

• Tác giả: Lê Văn Lâm Huân
• Người hướng dẫn: TS. Lê Thị Diệu Trang
• Trường học: Trường Đại Học Nông Lâm
• Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học
• Đề tài: Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide Từ Nấm Cordyceps militaris Nuôi Trên Môi Trường Lỏng Tĩnh
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2019 - 2023
• Địa điểm: Thủ Đức

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• XÁC NHẬN VÀ CAM ĐOAN
• TÓM TẮT
• 2. CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Tổng quan về Đông trùng hạ thảo Cordyceps sp.
• 2.2. Giới thiệu về Cordyceps militaris
• 2.3. Đặc điểm sinh học Cordyceps militaris
• 2.4. Thành phần hóa học của Cordyceps militaris
• 2.5. Các hợp chất chính có hoạt tính sinh học ở Cordyceps militaris
• 2.6. Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi trồng Cordyceps militaris
• 2.7. Nuôi cấy nhân tạo nấm Cordyceps militaris
• 2.8. Tổng quan về polysaccharide
• 2.9. Hoạt tính sinh học của polysaccharide từ Cordyceps militaris
• 2.10. Nghiên cứu làm tăng tổng hợp polysaccharide ở nấm
• 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
• 3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
• 3.2. Vật liệu nghiên cứu và thiết bị
• 3.3. Môi trường nuôi cấy
• 3.4. Nội dung nghiên cứu
• 3.4.1. Đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nấm Cordyceps militaris
• 3.4.2. Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nấm Cordyceps militaris
• 3.5. Mô tả thí nghiệm
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Tăng sinh nấm Cordyceps militaris
• 4.2. Đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nấm Cordyceps militaris
• 4.3. Đặc điểm hình thái của nấm Cordyceps militaris trên các môi trường khác nhau
• 4.4. Đặc điểm sinh trưởng của nấm Cordyceps militaris trên các môi trường
• 4.5. Chỉ tiêu chất lượng của nấm Cordyceps militaris trên các môi trường khác nhau
• 4.6. Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide
• 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• DANH SÁCH CÁC BẢNG
• DANH SÁCH CÁC HÌNH
• DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide Từ Nấm Cordyceps militaris

Nấm Cordyceps militaris là một trong những loài nấm dược liệu quý giá, nổi bật với khả năng sản xuất polysaccharide có tác dụng sinh học cao. Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định hàm lượng polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris nuôi trên môi trường lỏng tĩnh. Mục tiêu chính là tìm ra môi trường tối ưu để thu nhận polysaccharide từ sinh khối và dịch nuôi cấy.

1.1. Đặc Điểm Sinh Học Của Nấm Cordyceps militaris

Nấm Cordyceps militaris có nhiều hoạt chất sinh học như cordycepin và polysaccharide. Những hợp chất này có vai trò quan trọng trong việc tăng cường hệ miễn dịch và chống lão hóa.

1.2. Tầm Quan Trọng Của Polysaccharide Trong Y Học

Polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris có khả năng điều hòa miễn dịch, chống oxy hóa và hỗ trợ điều trị ung thư. Nghiên cứu này sẽ làm rõ hơn về giá trị dược liệu của polysaccharide.

II. Vấn Đề Trong Việc Nuôi Trồng Nấm Cordyceps militaris

Việc nuôi trồng nấm Cordyceps militaris gặp nhiều thách thức, đặc biệt là trong việc tối ưu hóa môi trường nuôi cấy. Các yếu tố như pH, nhiệt độ và thành phần dinh dưỡng ảnh hưởng lớn đến sự phát triển và hàm lượng polysaccharide.

2.1. Các Yếu Tố Ảnh Hưởng Đến Sự Phát Triển Của Nấm

Nhiệt độ và độ ẩm là hai yếu tố quan trọng quyết định sự phát triển của nấm. Nghiên cứu cho thấy rằng môi trường lỏng tĩnh có thể tối ưu hóa sự phát triển của nấm.

2.2. Thách Thức Trong Việc Chiết Xuất Polysaccharide

Chiết xuất polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris gặp khó khăn do sự biến đổi trong thành phần hóa học của nấm trong các điều kiện nuôi cấy khác nhau.

III. Phương Pháp Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide Từ Nấm

Nghiên cứu sử dụng phương pháp nuôi cấy lỏng tĩnh để thu nhận polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris. Các môi trường khác nhau sẽ được thử nghiệm để xác định môi trường tối ưu nhất.

3.1. Thiết Kế Thí Nghiệm Để Đánh Giá Môi Trường Nuôi Cấy

Thí nghiệm sẽ được thiết kế với nhiều nghiệm thức khác nhau, bao gồm các thành phần dinh dưỡng khác nhau để đánh giá ảnh hưởng đến hàm lượng polysaccharide.

3.2. Phân Tích Kết Quả Chiết Xuất Polysaccharide

Kết quả chiết xuất sẽ được phân tích bằng các phương pháp hóa học hiện đại để xác định hàm lượng và chất lượng của polysaccharide.

IV. Ứng Dụng Thực Tiễn Của Polysaccharide Từ Nấm Cordyceps

Polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris có nhiều ứng dụng trong y học và thực phẩm. Nghiên cứu này sẽ làm rõ hơn về tiềm năng ứng dụng của polysaccharide trong các sản phẩm sức khỏe.

4.1. Ứng Dụng Trong Ngành Dược Phẩm

Polysaccharide có thể được sử dụng để phát triển các loại thuốc mới, hỗ trợ điều trị nhiều bệnh lý khác nhau, đặc biệt là bệnh ung thư.

4.2. Ứng Dụng Trong Ngành Thực Phẩm

Nấm Cordyceps militaris có thể được sử dụng như một thành phần bổ sung trong thực phẩm chức năng, giúp tăng cường sức khỏe và miễn dịch.

V. Kết Luận Về Nghiên Cứu Hàm Lượng Polysaccharide

Nghiên cứu hàm lượng polysaccharide từ nấm Cordyceps militaris nuôi trên môi trường lỏng tĩnh đã chỉ ra rằng môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng lớn đến sự phát triển và hàm lượng polysaccharide. Kết quả nghiên cứu sẽ mở ra hướng đi mới cho việc ứng dụng nấm trong y học.

5.1. Tương Lai Của Nghiên Cứu Polysaccharide

Nghiên cứu sẽ tiếp tục được mở rộng để tìm ra các phương pháp tối ưu hơn trong việc chiết xuất và ứng dụng polysaccharide từ nấm Cordyceps.

5.2. Khuyến Nghị Cho Các Nghiên Cứu Tiếp Theo

Cần có thêm nhiều nghiên cứu về ảnh hưởng của các yếu tố môi trường khác nhau đến hàm lượng polysaccharide để tối ưu hóa quy trình sản xuất.

Trích đoạn nội dung tài liệu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ; TRUONG ĐẠI HỌC NONG LAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC NGHIÊN CỨU HÀM LƯỢNG POLYSACCHARIDE TỪ NAM Cordyceps militaris NUOI TREN MOI TRUONG LONG TINH Nganh hoc : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện : LÊ VĂN LÂM HUÂN Mã số sinh viên — : 19126056 Niên khóa : 2019 — 2023 TP. Thú Đức, 08/2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP NGHIÊN CỨU HÀM LƯỢNG POLYSACCHARIDE TU NAM Cordyceps militaris NUOI TREN MOI TRUONG LONG TINH Hướng dẫn khoa hoc Sinh viên thực hiện TS. LÊ THỊ DIEU TRANG LÊ VAN LAM HUAN TP. Thú Đức, 08/2023 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu, khoa Khoa học Sinh học trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh đã tạo điều kiện cho em học tập tại đây.

Em xin cảm ơn Viện nghiên cứu Công nghệ Sinh hoc và Môi trường, Phòng nghiên cứu và Phát triển Cordyceps đã tạo điều kiện thuận lợi về cơ sở vật chat, trang thiết bị cho em trong suốt thời gian thực hiện khoá luận tốt nghiệp. Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS. Lê Thị Diệu Trang đã đưa ra định hướng, tận tình hỗ trợ kiến thức chuyên môn, tạo điều kiện giúp em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Em xin cảm ơn anh Lê Hữu Minh Sang, các bạn và các em phòng Nghiên cứu và Phát triển Cordyceps, chị Nguyễn Thị Vân Anh, anh Lê Nguyễn Thanh Đông luôn bên cạnh giúp đỡ, động viên em trong suốt thời gian thực hiện đề tài tốt nghiệp.

Con xin cảm gia đình luôn bên cạnh động viên, khuyên kích và tạo điêu kiện tot nhât dé con được học tập va rèn luyện. Em xin chân thành cảm ơn. XÁC NHẬN VÀ CAM ĐOAN Tôi tên Lê Văn Lâm Huân, MSSV: 19126056, Lớp: DHI9SHB (Số di động: [phone], Email: 19126056(st.vn), sinh viên ngành Công nghệ Sinh học, khoa Khoa học Sinh học, Trường Dai học Nông Lâm TP. H6 Chí Minh, xin cam đoan: Đây là khóa luận tốt nghiệp do bản thân tôi thực hiện, các số liệu và thông tin trong nghiên cứu là hoàn toàn trung thực và khách quan.

Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước hội đồng về những cam kết này. Hô Chi Minh, ngày. năm 2023 Người viết cam đoan (Ký và ghi rõ họ tên) l TÓM TẮT Đông trùng ha thao Cordyceps militaris là loài nam dược liệu đã được sử dụng lâu đời trong nền y học vì chứa nhiều hoạt chất sinh học có giá trị dược liệu cao. Điển hình trong số đó là polysaccharide có thé giúp điều hòa miễn dịch, chống oxy hóa, chống khối u và chống lão hóa.

Vì lẽ đó đề tài “Nghiên cứu hàm lượng polysaccharide từ nắm Cordyceps militaris nuôi trên môi trường lỏng tĩnh” được thực hiện nhằm tập trung nghiên cứu môi trường thích hợp trong việc thu nhận polysaccharide từ sinh khối và exopolysaccharide (EPS) từ dich nuôi cay. Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nam Cordyceps militaris từ 4 môi trường khác nhau. Kết quả cho thấy về hình thái sinh khối, quả thể không có sự khác biệt giữa các môi trường khác nhau. Nhưng môi trường 3 có thành phần gồm (Saccarose: 60 g/L; Yeast: 20 g/L; KNO:: 2 g/L; KH¿PO¿: 0,4 g/L; MgSO: 0,2 g/L; FeSOx: 0,02 g/L) là môi trường thích hợp trong việc thu nhận sinh khối khô; polysaccharide từ sinh khối và exopolysaccharide từ dịch nuôi cấy với hàm lượng lần lượt là 3,88 g/lo; 22,66% và 2,56 g/L, ngoài ra thời gian nam lan kín bề mặt môi trường là khoảng 17 ngày và thời gian xuất hiện quả thể khoảng 21 ngày.

Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nam Cordyceps militaris được thực hiện trên môi trường 3. Về đặc điểm hình thái, ở các nghiệm thức không có sự quá biệt quá nhiều về hình thái quả thể, nhưng thời gian nam lan kín bề mặt môi trường và thời gian xuất hiện qua thé thì ở nghiệm thức bé sung dau olive có thời gian ngắn hơn dầu đừa và đối chứng (không bồ sung dầu thực vật). Kết quả còn cho thấy cả dau dừa và dau olive đều giúp nấm kích thích tăng khối lượng sinh khối khô và exopolysaccharide so với đối chứng, trong đó khi bé sung dau olive ở nồng độ 7,5% đạt hiệu quả cao nhất với khối lượng sinh khối khô: 6,07 g/lọ, polysaccharide từ sinh khối: 24,27% và exopolysaccharide trong dịch là: 5,06 g/L. Từ khóa: Cordyceps militaris, polysaccharide, exopolysaccharide.

ill ABSTRACT Cordyceps militaris is a medicinal mushroom that has long been used in medicine because it contains many biologically active substances with high medicinal value. Among them are polysaccharide, which can help with immunoregulatory, antioxidant, anti-tumor, and anti-aging properties. Therefore, the topic "Study on polysaccharide content from Cordyceps militaris mushroom grown on static liquid medium" aims to focus on studying the appropriate environment for obtaining polysaccharides from biomass and exopolysaccharide (EPS) from culture fluid. A study was conducted to evaluate the influence of four different media on the growth and polysaccharide content of Cordyceps militaris mushroom from 4 different media.

The results showed that fruiting bodies did not differ between different environments in terms of biomass morphology. But medium 3 with the composition (Saccarose: 60 g/L; Yeast: 20 g/L; KNO:: 2 g/L; KH2POq: 0.02 g/L) 1s the suitable medium in obtaining dry biomass; polysaccharide from biomass and exopolysaccharide from culture fluid with the content of 3.56 g/L, in addition, the time for the fungus to spread to the surface of the medium was approximately 17 days, and the time to the appearance of fruiting bodies was about 21 days. The effects of vegetable oil on the growth and polysaccharide content of Cordyceps militaris were evaluated on medium 3. In terms of morphological characteristics, in the treatments, there was not much difference in fruiting body morphology, but the time the fungus spread to the surface of the medium and the time to appearance of fruiting bodies was shorter in the treatment with olive oil than in coconut oil and the control (without adding vegetable oil).

The results also showed that both coconut oil and olive oil helped the fungus to increase dry biomass and exopolysaccharide compared to the control, in which, when adding olive oil at a concentration of 7.5%, the highest efficiency was achieved with dry biomass: 6.07 g/jar, polysaccharide from biomass: 24.27% and exopolysaccharide in solution: 5. Keywords: Cordyceps militaris, polysaccharide, exopolysaccharide. IV MỤC LỤC Trang LOI CẢM ƠN. i XÁC NHAN VA CAM ĐOAN.,ÔỎ iii ABS TRACT ccenesererssenasounavitowca: tblffsgsdsaliesysosg9lSklSSiEogÐnSSS-.7S012821giSEs4ySg363ikgoestsaggbrowzttöetrissSte iv ¡1860000160555 .,ÔỎ V TRANH EễD Bói GHẾ Vie Al naunngnnutgtpbtdnigNGEYGEANDHSI-ESPIGGEIBSN-SGEĐigiSS0E." viii DANH SÁCH CAC BẢNG.

re ix BEA Sees 8421, |: en x Ne ee) | er | OE tt lồ bong sung totioi A1290 000000100030010QGG0901G0.3 NGi dunesthue THIỆN su congtttgrg ho öN G4 GD thỆt HDIGESEDERSEIGSGHDNHGEIGSNSGNSGSlSIENGERtiMgsntscnslt 2 CHƯƠNG 2. TONG QUAN TÀI LIỆỆU.---2-©2222222EE22EE22EE22EE22EE22EE222E22zxzzze. Tổng quan về Đông trùng hạ thảo Cordyceps sp. Tông quan về C.

10G1HG HIS oc cccccccsessccscesveccnsssvecesssssvcsneceuscesssusecessesnecsasetcececsaseeceesust 4 2. Giới thiệu về C. Đặc điểm sinh học C. Thành phan hóa học của C.

Các hợp chất chính có hoạt tính sinh học ở C. Các yêu tố ảnh hưởng đến nuôi trồng C. Nuôi cấy nhân tao nấm C. Tổng quan về polysaccharide.

Giới thiệu chung về polysaccharide.- 22 2 s+22+22x+2E2EE2EE2EEzExrzxrsrxrrer 11 2. Hoạt tính sinh học của polysaccharide từ C. Nghiên cứu làm tăng tổng hợp polysaccharide ở nấm. VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP.

Thời gian và địa điểm nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu và thiết bị,. -- 2-22 2+222E+SE2E2E2EE2E22E2212212122122121221222 22-5 15 Bde les Wate LT CO BH hE usaoxtsspdstbbsinoiietolgGLHIHNHESSGANGNGHEESSSQSEESEHHEGGHIHGSEGIEHEG.3: MIối trường: Sử: dHHE sse-s«‹. Môi trường tăng sinh C.-- eects + 5c +es+x+ersrsererrererrrrerrrrrrrrrke 15 1.5, Mỗi trường PG ÁossssxeseesknnihbhotiEbiAGS0 0051006008600 0030001003060195001600080059053000010800 15 3.

Môi trường nuôi cấy. NGi dung rghiỂn:GỮUcaxsscseisossissica10323146E4Ê1219450853532104G30688ĐBESLEMEESGG43450335883. Nội dung 1: Đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nắm C. TS Nữ | Hi TT, HbuessssoradeuhiottdkiukuiaitiotibbodiuicobooitoBftotgxEfikeid337đi1108813u42081094553.

Mita THỊ ASD CH ic cccssscscessveave gồ gã x46 555148131336 SãNẵt snctveue G01SS3RG84GS. Nội dung 2: Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nắm C.1, BG trí Thi Nei S ttc cccamsavsncnasasamnemcevnnenscenasanenumeneaimaumancecenssein 21 3. Mô ta thí mghiGrn oo. cece cece ccescssseesssessssssessveseseessessneessessneessessessseeeeseesseessess 21 By ate ee D—ưsyesekeeegaeaaaretrtirsigtirdoeoaiBrastgafoseutieostttidicadogynneescnuoai 23 CHƯƠNG 4.

KET QUA VA THẢO LUAN. Kết quả va thao Tuan oo. Tăng sinh nắm C. Đánh giá ảnh hưởng của các môi trường đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide của nắm C.

Đặc điểm hình thái của nam C. militaris trên các môi trường khác nhau. Đặc điểm sinh trưởng của nam C. militaris trên các môi trường.

Chỉ tiêu chất lượng của nam C. militaris trên các môi trường khác nhau. Ảnh hưởng của dầu thực vật đối với sự phát triển và hàm lượng polysaccharide pals mi oe TH unssuantooxgngngetr0 6 g000100010000 0 90000AG001G00B10S001000000G10NNEI0I 2B 32 4. Đặc điểm hình thái của nấm C.

Đặc điểm sinh trưởng của nấm C. Chỉ tiêu chất lượng của nam C. militaris trên các nghiệm thức khác nhau. KET LUẬN VA ĐỀ NGHỊ.

Kết 1 - 2-2 SS2212E2212212112122121121112111111112111111111112101211210112111 2e 39 25 TẾ trÏÍ sen seaensareebeieoebaetbinnboiSobiiogtodSurbeniib9Efrttc0tirag06fpr4lt259/009/6/004050900016 39 TẤT LỆ TT THÁNH KH. ceescesisekskeiueeedkifeorirkesleomiagkusbioautiudndhandaoEsiontdksiioleoiigfic 40 PVC ca la oh ci Sat A eS ic TI Na DI Maa Sar ih Se Rh lea Vil DANH SÁCH CAC CHỮ VIET TAT DTHT : Đông trùng ha thao Ctv : Cộng tác viên MT : Môi trường Exopolysaccharide : EPS NT : Nghiệm thức PGA : Potato Glucose Agar SD : Standard Deviation (Độ lệch chuẩn) Vill DANH SÁCH CÁC BANG Bảng 3. Môi trường nuôi cấy C.-2:©22-52252222+222c22zz2x2zszzscsrcee 16 Bảng 3. Đặc điểm hình thái nắm C.

militaris trên các môi trường. Thời gian phát triển hệ sợi nắm trên các môi trường. Chỉ tiêu khối lượng tươi/ khô, hiệu suất sinh khối tươi/ khô. Kết quả đường chuẩn Glueose.---2- 2+ s+Ss+EE+EE£EEEEE2EEEEEEEEEEEExerrrrkd 30 Bảng 4.

Hàm lượng polysaccharide trong sinh khối va EPS trong dich nuôi cay. Đặc điểm hình thái nắm C. militaris trên các nghiệm thức. Thời gian phát triển hệ sợi nam và xuất hiện quả thể ở các nghiệm thức.

Chỉ tiêu khối lượng tươi/ khô, hiệu suất sinh khối tươi/ khô. Polysaccharide tổng số trong sinh khối va EPS trong dịch nuôi cấy. 37 1X DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2. Quả thé Cordyceps imi]ifđr'iS.

2:22 5522722222222 2EE22E22+zEE2EEzrxrrrrsrxrres 4 Hình 2. Các dạng bào tử của G¡ Wi NT ¡oscsscsasstis Si 03 4k Há 133042851K55513816 514806348181 5 Hhnh 2. Võng đời (óc HT AHÍN ng trnniantiistiE1STGES0535104041531900353803350303880438900480980G1803/038G 6 Hình 2. Cấu trúc hóa học của Adenosine và Cordycepim.----2+sz+szzsz+zz+se2 7 Hình 3.

Quy trình thu nhận exopolysaccharide (EPS) từ dịch nuôi cay rniccrtnestnicecir 20 Hình 3. Quy trình thu nhận exopolysaccharide (EPS) từ dich nuôi cay có bổ sung dầu thực Vật. militaris được tăng sinh trên môi trường lỏng. militaris nhân giống trên môi trường PGA.

militaris xuất hiện quả thé trên các môi trường. Biéu đồ đường chuẩn Glucose. militaris xuất hiện quả thé trên các nghiệm thức. Đặt van đề Nam là loài có ý nghĩa quan trong trong đời sống, kinh tế, xã hội, trong nghiên cứu khoa học, và quan trọng hơn hết là chúng mang lại những lợi ích về sức khỏe.