Nghiên Cứu Nâng Cao Khả Năng Sống Của Vi Khuẩn Lactobacillus Acidophilus Trong Môi Trường Hệ ...

Nghiên cứu nâng cao khả năng sống của vi khuẩn lactobacillus acidophilus trong môi trường tiêu hóa bằng phương pháp cố định trong tế bào nấm men.

• Tác giả: Lê Nguyên Hản
• Người hướng dẫn: GS. Đống Thị Anh Đào
• Trường học: Đại học Bách Khoa
• Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm
• Đề tài: Nâng Cao Khả Năng Sống Của Vi Khuẩn Lactobacillus Acidophilus Trong Hệ Tiêu Hóa
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2015
• Địa điểm: TP.HCM

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. HỆ VI SINH VẬT TRONG ĐƯỜNG DẠ DÀY VÀ RUỘT NGƯỜI
• 1.2. SỰ SỐNG SÓT CỦA VI SINH VẬT ĐƯỜNG RUỘT TRONG SUỐT QUÁ TRÌNH TIÊU HÓA
• 1.3. TỔNG QUAN VỀ PROBIOTIC
• 1.3.1. Định nghĩa probiotic
• 1.3.2. Cơ chế hoạt động và vai trò của probiotic
• 1.3.3. Vai trò của probiotic
• 1.3.4. KHẢ NĂNG KHÁNG ACID VÀ KHÁNG MẬT CỦA PROBIOTIC
• 1.3.5. KHẢ NĂNG BÁM DÍNH CỦA PROBIOTIC LÊN TẾ BÀO RUỘT
• 1.4. VI KHUẨN LACTIC VÀ LOÀI LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS
• 1.4.1. Vi khuẩn Lactobacillus acidophilus
• 1.5. CÁC PHƯƠNG PHÁP NÂNG CAO KHẢ NĂNG SỐNG CỦA PROBIOTIC TRONG ĐƯỜNG RUỘT
• 1.6. TỔNG QUAN VỀ TẾ BÀO NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE
• 1.6.1. Phân loại khoa học
• 1.6.2. Thành phần dinh dưỡng tế bào nấm men
• 1.6.3. Cấu trúc thành tế bào nấm men
• 1.7. MỐI LIÊN HỆ GIỮA TẾ BÀO NẤM MEN VÀ PROBIOTIC – SỰ KẾT TỤ
• 1.8. SỰ XUẤT HIỆN CỦA TẾ BÀO NẤM MEN TRONG CÁC CHẾ PHẨM PROBIOTIC
• 1.8.1. Dạng chưa bất hoạt
• 1.8.2. Dạng đã bất hoạt
• 1.9. CÁC PHƯƠNG PHÁP SẢN XUẤT CHẾ PHẨM VI SINH VẬT Ở DẠNG ĐÔNG KHÔ
• 1.9.1. Phương pháp sấy thăng hoa
• 1.9.2. Phương pháp sấy phun
• 1.10. KẾT QUẢ CỦA NGHIÊN CỨU TRƯỚC
• 2. CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU & PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. VẬT LIỆU VÀ HÓA CHẤT
• 2.1.1. Giống vi sinh vật
• 2.1.2. Tế bào nấm men
• 2.1.3. Môi trường nuôi cấy
• 2.1.5. Thiết bị và dụng cụ
• 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.2.1. Thuyết minh sơ đồ nghiên cứu
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ & BÀN LUẬN
• 3.1. KHẢO SÁT ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA L.
• 3.1.1. Hình dạng khuẩn lạc
• 3.1.2. Quan sát tế bào
• 3.2. KHẢO SÁT ĐƯỜNG CONG SINH TRƯỞNG CỦA L.
• 3.3. KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH KẾT TỤ GIỮA NẤM MEN - L.
• 3.3.1. Khảo sát ảnh hưởng của mật độ tế bào nấm men đến khả năng sống của L.
• 3.3.2. Ảnh hưởng của các giá trị pH khác nhau đến hiệu quả của nấm men trong việc cải thiện khả năng sống của L.
• 3.3.3. Ảnh hưởng của sự sống/chết của tế bào nấm men đến khả năng sống của L.
• 3.3.4. Ảnh hưởng của thành phần tế bào đến khả năng kết tụ giữa nấm men và L.
• 3.4. KHẢO SÁT LẠI QUÁ TRÌNH SỬ DỤNG THÀNH TẾ BÀO NẤM MEN LÀM GIÁ THỂ CỐ ĐỊNH L.
• 3.4.1. Ảnh hưởng của tỉ lệ khối lượng nấm men/khối lượng L.acidophilus đến quá trình sử dụng thành tế bào nấm men làm giá thể cố định
• 3.4.2. Ảnh hưởng của thời gian lắc đến quá trình sử dụng thành tế bào nấm men làm giá thể cố định
• 3.4.3. Ảnh hưởng của tốc độ lắc đến quá trình sử dụng thành tế bào nấm men làm giá thể cố định
• 3.4.4. So sánh với kết quả nghiên cứu trước
• 3.5. KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SỐNG VÀ TĂNG SINH CỦA L.ACIDOPHILUS CỐ ĐỊNH TRONG MÔI TRƯỜNG HỆ TIÊU HOÁ
• 3.5.1. Khảo sát khả năng sống sót của L.acidophilus trong môi trường dạ dày
• 3.5.2. Khảo sát khả năng sống sót của L.acidophilus trong môi trường hệ tiêu hóa
• 3.6. KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SỐNG CỦA L.ACIDOPHILUS SAU KHI SẤY THĂNG HOA
• 3.7. KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SỐNG CỦA L.ACIDOPHILUS SAU SẤY PHUN
• 3.8. KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SỐNG VÀ TĂNG SINH CỦA CHẾ PHẨM L.ACIDOPHILUS TRONG MÔI TRƯỜNG HỆ TIÊU HOÁ
• 3.9. KIỂM TRA KHẢ NĂNG SỐNG SÓT CỦA L.ACIDOPHILUS TRONG CHẾ PHẨM TRONG QUÁ TRÌNH BẢO QUẢN
• 3.10. ĐÁNH GIÁ CHỌN LỰA PHƯƠNG PHÁP SẤY TẠO SẢN PHẨM
• 3.11. KHẢO SÁT ĐẶC TÍNH PROBIOTIC CỦA CHẾ PHẨM SAU SẤY PHUN
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN & KIẾN NGHỊ
• DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH
• DANH MỤC BẢNG BIỂU
• DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Lactobacillus Acidophilus và Hệ Tiêu Hóa

Hệ tiêu hóa của con người là một hệ sinh thái phức tạp, nơi trú ngụ của vô số vi sinh vật, đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì sức khỏe. Trong số đó, Lactobacillus Acidophilus là một vi khuẩn có lợi, thuộc nhóm Probiotics, có khả năng cân bằng hệ vi sinh vật đường ruột, hỗ trợ hệ miễn dịch và cải thiện quá trình hấp thụ dinh dưỡng. Tuy nhiên, Lactobacillus Acidophilus phải đối mặt với nhiều thách thức trong quá trình di chuyển qua hệ tiêu hóa, đặc biệt là môi trường acid khắc nghiệt của dạ dày và sự cạnh tranh từ các vi khuẩn khác. Do đó, việc nâng cao khả năng sống của Lactobacillus Acidophilus là yếu tố then chốt để phát huy tối đa lợi ích sức khỏe mà chúng mang lại. Nghiên cứu của Lê Nguyên Hản (2015) đã tập trung vào việc cố định Lactobacillus Acidophilus trong tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae nhằm bảo vệ chúng khỏi các yếu tố bất lợi trong hệ tiêu hóa.

1.1. Vai Trò Của Vi Khuẩn Lactobacillus Acidophilus

Vi khuẩn Lactobacillus Acidophilus đóng vai trò thiết yếu trong việc duy trì sức khỏe đường ruột. Chúng sản xuất acid lactic, giúp giảm pH đường ruột, ức chế sự phát triển của các vi khuẩn có hại, đồng thời hỗ trợ quá trình tiêu hóa và hấp thụ dinh dưỡng. Lactobacillus Acidophilus còn có khả năng kích thích hệ miễn dịch, giúp cơ thể chống lại các bệnh nhiễm trùng. Một hệ tiêu hóa khỏe mạnh với sự cân bằng hệ vi sinh vật đường ruột là nền tảng cho một cơ thể khỏe mạnh.

1.2. Thách Thức Đối Với Sự Sống Sót Của Probiotics

Probiotics, bao gồm Lactobacillus Acidophilus, phải đối mặt với nhiều thách thức trong quá trình di chuyển qua hệ tiêu hóa. Môi trường acid của dạ dày, dịch mật, và sự cạnh tranh từ các vi khuẩn khác có thể làm giảm đáng kể số lượng vi khuẩn sống sót. Do đó, việc bảo vệ Probiotics khỏi các yếu tố bất lợi này là rất quan trọng để đảm bảo chúng có thể phát huy tác dụng có lợi cho sức khỏe. Theo nghiên cứu, nhiều sản phẩm Probiotics có hiệu quả kém do vi khuẩn không được bảo vệ.

II. Các Yếu Tố Ảnh Hưởng Lactobacillus Acidophilus Sống Sót

Khả năng sống sót của Vi khuẩn Lactobacillus Acidophilus trong hệ tiêu hóa phụ thuộc vào nhiều yếu tố, bao gồm: pH đường ruột, nồng độ dịch mật, sự hiện diện của Enzyme tiêu hóa, và sự cạnh tranh từ các vi khuẩn khác. Khả năng chịu acid và khả năng chịu mật là hai yếu tố quan trọng quyết định khả năng sống sót của Lactobacillus Acidophilus trong dạ dày và ruột non. Ngoài ra, khả năng bám dính (adhesion) vào tế bào niêm mạc ruột cũng giúp Lactobacillus Acidophilus cư trú và phát triển trong hệ tiêu hóa, tăng cường hiệu quả cân bằng hệ vi sinh vật đường ruột. Chế độ ăn uống và sử dụng kháng sinh cũng có tác động đáng kể đến sức khỏe đường ruột và sự sống sót của Probiotics.

2.1. Ảnh Hưởng Của pH Đường Ruột và Dịch Mật

pH đường ruột và nồng độ dịch mật là hai yếu tố môi trường quan trọng ảnh hưởng đến khả năng sống sót của Lactobacillus Acidophilus. Dạ dày có pH rất thấp (khoảng 2-3), có thể tiêu diệt nhiều vi khuẩn. Dịch mật, được tiết ra từ gan, có tính kiềm và có thể gây độc cho một số vi khuẩn. Do đó, Lactobacillus Acidophilus cần có khả năng chịu acid và chịu mật để tồn tại và phát triển trong hệ tiêu hóa.

2.2. Tác Động Của Kháng Sinh Đến Hệ Vi Sinh Vật Đường Ruột

Việc sử dụng kháng sinh có thể gây ra những tác động tiêu cực đến hệ vi sinh vật đường ruột. Kháng sinh tiêu diệt cả vi khuẩn có hại và vi khuẩn có lợi, làm mất cân bằng hệ vi sinh vật đường ruột và tạo điều kiện cho các vi khuẩn gây bệnh phát triển. Sau khi sử dụng kháng sinh, việc bổ sung Probiotics có thể giúp khôi phục lại sự cân bằng hệ vi sinh vật đường ruột và cải thiện sức khỏe đường ruột. Nghiên cứu của Lê Nguyên Hản (2015) đã chỉ ra rằng việc cố định Lactobacillus Acidophilus giúp bảo vệ chúng khỏi tác động của môi trường hệ tiêu hóa, tăng khả năng sống sót.

III. Phương Pháp Cố Định Lactobacillus Acidophilus Tối Ưu

Để nâng cao khả năng sống của Lactobacillus Acidophilus, một phương pháp hiệu quả là cố định chúng trong các vật liệu bảo vệ. Phương pháp này giúp bảo vệ vi khuẩn khỏi môi trường acid của dạ dày và các yếu tố bất lợi khác trong hệ tiêu hóa. Một trong những vật liệu được sử dụng để cố định Lactobacillus Acidophilus là tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae. Tế bào nấm men có cấu trúc thành tế bào vững chắc, có thể bảo vệ vi khuẩn khỏi các tác động bên ngoài. Nghiên cứu của Lê Nguyên Hản (2015) đã chứng minh rằng việc cố định Lactobacillus Acidophilus trong tế bào nấm men giúp tăng đáng kể khả năng sống sót của chúng trong hệ tiêu hóa.

3.1. Sử Dụng Tế Bào Nấm Men Saccharomyces cerevisiae

Tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae là một vật liệu lý tưởng để cố định Lactobacillus Acidophilus do chúng có cấu trúc thành tế bào vững chắc, khả năng bám dính tốt và an toàn cho sức khỏe. Tế bào nấm men có thể được sử dụng ở dạng nguyên vẹn hoặc đã qua xử lý để tạo ra các khe nứt trên thành tế bào, giúp tăng hiệu quả cố định vi khuẩn. Theo nghiên cứu, sự kết tụ tự nhiên giữa nấm men và Lactobacillus Acidophilus giúp bảo vệ vi khuẩn.

3.2. Quy Trình Cố Định Vi Khuẩn Trong Nấm Men

Quy trình cố định Lactobacillus Acidophilus trong tế bào nấm men bao gồm các bước chính: chuẩn bị tế bào nấm men, trộn vi khuẩn với tế bào nấm men, và xử lý để tăng cường khả năng bám dính. Các yếu tố như tỉ lệ vi khuẩn/nấm men, thời gian và tốc độ lắc có thể ảnh hưởng đến hiệu quả cố định. Nghiên cứu của Lê Nguyên Hản (2015) đã tìm ra tỉ lệ tối ưu giữa số lượng tế bào nấm men và Probiotics là 1:10.

IV. Ứng Dụng Kết Quả Nghiên Cứu Về Probiotics

Nghiên cứu về nâng cao khả năng sống của Lactobacillus Acidophilus có nhiều ứng dụng thực tiễn trong việc sản xuất các sản phẩm Probiotics chất lượng cao. Các sản phẩm này có thể giúp cải thiện sức khỏe đường ruột, tăng cường hệ miễn dịch, và hỗ trợ điều trị các bệnh rối loạn tiêu hóa. Kết quả nghiên cứu của Lê Nguyên Hản (2015) cho thấy rằng việc cố định Lactobacillus Acidophilus trong tế bào nấm men giúp tăng đáng kể khả năng sống sót của chúng trong hệ tiêu hóa, mở ra tiềm năng lớn cho việc phát triển các sản phẩm Probiotics hiệu quả hơn.

4.1. Sản Xuất Chế Phẩm Probiotics Chất Lượng Cao

Việc áp dụng phương pháp cố định Lactobacillus Acidophilus trong tế bào nấm men có thể giúp sản xuất các chế phẩm Probiotics chất lượng cao với khả năng sống sót cao và hiệu quả điều trị tốt hơn. Các chế phẩm này có thể được sử dụng để bổ sung Probiotics cho người lớn và trẻ em, đặc biệt là những người có vấn đề về tiêu hóa, suy giảm hệ miễn dịch, hoặc sau khi sử dụng kháng sinh.

4.2. Nghiên Cứu Về Quá Trình Sấy Tạo Chế Phẩm Probiotics

Nghiên cứu về quá trình sấy tạo chế phẩm Probiotics đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì khả năng sống sót của vi khuẩn trong quá trình bảo quản và vận chuyển. Các phương pháp sấy như sấy thăng hoa và sấy phun có thể ảnh hưởng đến khả năng sống sót của Lactobacillus Acidophilus. Việc cố định vi khuẩn trong tế bào nấm men giúp bảo vệ chúng khỏi các tác động của quá trình sấy, tăng cường khả năng sống sót và kéo dài thời gian bảo quản.

V. Đánh Giá và Lựa Chọn Phương Pháp Sấy Tạo Sản Phẩm Tối Ưu

Việc lựa chọn phương pháp sấy tạo sản phẩm phù hợp là yếu tố then chốt để đảm bảo chất lượng và hiệu quả của chế phẩm Probiotics. Các phương pháp sấy khác nhau có những ưu và nhược điểm riêng, ảnh hưởng đến khả năng sống sót của Lactobacillus Acidophilus và các đặc tính Probiotics khác. Nghiên cứu của Lê Nguyên Hản (2015) đã so sánh hiệu quả của hai phương pháp sấy phổ biến là sấy thăng hoa và sấy phun, và đưa ra đánh giá về ưu nhược điểm của từng phương pháp.

5.1 So Sánh Sấy Thăng Hoa và Sấy Phun Ưu và Nhược Điểm

Sấy thăng hoa là phương pháp sấy giúp bảo toàn tốt nhất các đặc tính của vi khuẩn, nhưng có chi phí cao và thời gian sấy kéo dài. Sấy phun là phương pháp sấy nhanh chóng và hiệu quả về chi phí, nhưng có thể gây ra sự mất mát vi khuẩn do nhiệt độ cao. Việc lựa chọn phương pháp sấy phù hợp phụ thuộc vào mục tiêu sản xuất, yêu cầu về chất lượng và chi phí sản xuất.

5.2 Tiềm Năng Ứng Dụng Sấy Phun Trong Thực Tế Sản Xuất

Dù có thể gây mất mát một phần vi khuẩn, sấy phun vẫn là một lựa chọn khả quan trong thực tế sản xuất do tính kinh tế và hiệu quả về thời gian. Theo nghiên cứu, sản phẩm sấy phun sau 3 tháng lưu trữ vẫn giữ được 7.036 log CFU/g chế phẩm, đáp ứng được yêu cầu đặt ra với sản phẩm Probiotics. Việc tối ưu hóa quy trình sấy phun, kết hợp với các biện pháp bảo vệ vi khuẩn, có thể giúp giảm thiểu sự mất mát vi khuẩn và đảm bảo chất lượng sản phẩm.

VI. Kết Luận Triển Vọng Của Nghiên Cứu Probiotics

Nghiên cứu về nâng cao khả năng sống của Lactobacillus Acidophilus bằng phương pháp cố định trong tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae đã đạt được những kết quả khả quan. Phương pháp này giúp bảo vệ vi khuẩn khỏi các yếu tố bất lợi trong hệ tiêu hóa, tăng cường khả năng sống sót và phát huy tác dụng có lợi cho sức khỏe. Trong tương lai, cần có thêm nhiều nghiên cứu để tối ưu hóa quy trình cố định và đánh giá hiệu quả của các sản phẩm Probiotics được sản xuất theo phương pháp này trên các đối tượng khác nhau.

6.1. Tiềm Năng Phát Triển Chế Phẩm Probiotics Mới

Việc cố định Lactobacillus Acidophilus trong tế bào nấm men mở ra tiềm năng phát triển các chế phẩm Probiotics mới với khả năng sống sót cao hơn, hiệu quả điều trị tốt hơn và thời gian bảo quản dài hơn. Các chế phẩm này có thể được sử dụng để phòng ngừa và điều trị các bệnh liên quan đến rối loạn tiêu hóa, suy giảm hệ miễn dịch, và các bệnh mãn tính khác.

6.2. Hướng Nghiên Cứu Phát Triển Sản Phẩm Probiotics

Các hướng nghiên cứu trong tương lai có thể tập trung vào việc: (1) Tối ưu hóa quy trình cố định để tăng hiệu quả bảo vệ vi khuẩn; (2) Nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố môi trường (như nhiệt độ, độ ẩm) đến khả năng sống sót của vi khuẩn trong chế phẩm Probiotics; (3) Đánh giá hiệu quả của các sản phẩm Probiotics được sản xuất theo phương pháp cố định trên các đối tượng khác nhau (trẻ em, người lớn, người cao tuổi); và (4) Nghiên cứu cơ chế tác động của Probiotics lên hệ vi sinh vật đường ruột và hệ miễn dịch.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Hệ vi sinh vật trong đường tiêu hóa người là một hệ sinh thái phức tạp với khoảng 10¹³ - 10¹⁴ tế bào vi khuẩn, đóng vai trò quan trọng trong quá trình tiêu hóa và duy trì sức khỏe. Trong đó, Lactobacillus acidophilus là một chủng probiotic nổi bật, có khả năng cải thiện hệ miễn dịch và cân bằng hệ vi sinh đường ruột. Tuy nhiên, probiotic thường bị bất hoạt khi tiếp xúc với môi trường acid dạ dày (pH ~2.5) và các yếu tố khắc nghiệt trong hệ tiêu hóa, dẫn đến hiệu quả sử dụng thấp. Nhiều sản phẩm probiotic hiện nay không đảm bảo tỉ lệ tế bào sống đủ để phát huy tác dụng, do đó việc nâng cao khả năng sống sót của probiotic trong hệ tiêu hóa là một thách thức lớn.

Luận văn tập trung nghiên cứu phương pháp cố định vi khuẩn Lactobacillus acidophilus trong tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae nhằm tăng cường khả năng sống sót của probiotic trong môi trường hệ tiêu hóa. Nghiên cứu khai thác nguồn tế bào nấm men từ công nghiệp sản xuất rượu bia, tận dụng đặc tính kết tụ tự nhiên giữa polysaccharides trên thành tế bào nấm men và protein trên bề mặt probiotic để cố định vi khuẩn. Phương pháp xử lý sóng siêu âm được áp dụng để tạo khe nứt trên thành tế bào nấm men, giúp cố định probiotic bên trong tế bào nấm men vỡ.

Mục tiêu chính của nghiên cứu là đánh giá hiệu quả của phương pháp cố định này trong việc nâng cao tỉ lệ sống của Lactobacillus acidophilus khi tiếp xúc với môi trường dạ dày giả lập và hệ tiêu hóa, đồng thời khảo sát ảnh hưởng của các phương pháp sấy phun và sấy thăng hoa trong quá trình tạo chế phẩm probiotic. Nghiên cứu được thực hiện trong khoảng thời gian từ tháng 1 đến tháng 11 năm 2015 tại Trường Đại học Bách Khoa, Đại học Quốc gia TP. HCM. Kết quả nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng trong việc phát triển các sản phẩm probiotic có hiệu quả cao, đáp ứng yêu cầu về sức khỏe cộng đồng và ứng dụng trong công nghiệp thực phẩm.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên các lý thuyết và mô hình sau:

• Lý thuyết về probiotic và vai trò trong hệ tiêu hóa: Probiotic là vi sinh vật sống có lợi, giúp cân bằng hệ vi sinh đường ruột, tăng cường miễn dịch và ức chế vi khuẩn gây bệnh. Lactobacillus acidophilus là một trong những chủng probiotic phổ biến với khả năng kháng acid, kháng mật và bám dính tốt trên tế bào ruột.

• Mô hình kết tụ vi sinh vật (co-aggregation): Sự kết tụ giữa tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae và vi khuẩn probiotic dựa trên tương tác giữa polysaccharides trên thành tế bào nấm men và protein trên bề mặt vi khuẩn, tạo thành màng sinh học hỗn hợp giúp bảo vệ probiotic khỏi các điều kiện khắc nghiệt.

• Cấu trúc và thành phần tế bào nấm men: Thành tế bào nấm men gồm β-1,3-glucan, β-1,6-glucan, mannoprotein và chitin, có khả năng bảo vệ và cố định tế bào probiotic. Sóng siêu âm được sử dụng để tạo khe nứt trên thành tế bào, tăng hiệu quả cố định.

• Phương pháp sấy tạo chế phẩm probiotic: Sấy phun và sấy thăng hoa là hai phương pháp phổ biến để tạo chế phẩm probiotic dạng bột, ảnh hưởng đến khả năng sống sót của vi khuẩn. Việc bổ sung chất bảo vệ và cố định probiotic trong tế bào nấm men giúp tăng tỉ lệ sống sót trong quá trình sấy.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Lactobacillus acidophilus ATCC 43121 được sử dụng làm chủng probiotic đại diện. Tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae thu nhận từ bã thải công nghiệp sản xuất rượu bia, được làm sạch và xử lý sóng siêu âm để tạo khe nứt trên thành tế bào.

• Phương pháp cố định probiotic: Huyền phù tế bào nấm men sau xử lý sóng siêu âm được trộn với vi khuẩn L. acidophilus theo tỉ lệ khối lượng 1:10 (nấm men: probiotic), sau đó lắc trên máy lắc ngang với điều kiện tối ưu (thời gian 40 phút, tốc độ 300 vòng/phút) để tăng tần suất tiếp xúc và cố định probiotic.

• Phương pháp xác định hiệu suất cố định: Sử dụng màng lọc để tách tế bào nấm men cố định probiotic và tế bào probiotic tự do, từ đó tính toán hiệu suất cố định dựa trên khối lượng tế bào thu được.

• Khảo sát khả năng sống sót: Thí nghiệm trong môi trường dạ dày giả lập (pH=2, có pepsin) và hệ tiêu hóa giả lập (bao gồm dịch dạ dày, ruột non và ruột già) để đánh giá tỉ lệ sống sót và sinh trưởng của probiotic cố định và tự do.

• Khảo sát ảnh hưởng của phương pháp sấy: So sánh khả năng sống sót của probiotic sau khi sấy phun và sấy thăng hoa, đồng thời đánh giá sự ổn định của chế phẩm trong quá trình bảo quản 3 tháng.

• Timeline nghiên cứu: Nghiên cứu được thực hiện từ tháng 1 đến tháng 11 năm 2015, bao gồm các giai đoạn chuẩn bị vật liệu, xử lý tế bào nấm men, cố định probiotic, khảo sát khả năng sống sót và phân tích dữ liệu.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Hiệu suất cố định probiotic trong tế bào nấm men: Ở tỉ lệ khối lượng tế bào nấm men và probiotic là 1:10, hiệu suất cố định đạt khoảng 82.123%. Phương pháp xử lý sóng siêu âm giúp tăng hiệu quả cố định so với tế bào nấm men chưa xử lý, nhờ tạo khe nứt trên thành tế bào.

2. Khả năng sống sót trong môi trường dạ dày giả lập: Sau 150 phút trong môi trường SGJ pH=2, tỉ lệ sống của probiotic cố định là 11.127%, trong khi probiotic tự do không phát hiện tế bào sống (0%). Khi sử dụng tế bào nấm men xử lý sóng siêu âm, tỉ lệ sống của probiotic tăng lên đến 19%, cao hơn đáng kể so với chỉ kết tụ tự nhiên.

3. Khả năng sinh trưởng trong hệ tiêu hóa giả lập: Probiotic cố định bắt đầu với số lượng 10⁶.¹¹⁷ CFU/mL và sinh trưởng tốt hơn so với probiotic tự do bắt đầu từ 10⁶ CFU/mL, cho thấy khả năng thoát ra đúng chỗ và phát triển trong hệ tiêu hóa.

4. Ảnh hưởng của phương pháp sấy: Cả sấy phun và sấy thăng hoa đều giữ được khả năng sống sót của probiotic tương đương nhau. Sản phẩm sấy phun sau 3 tháng bảo quản vẫn giữ được 7.036 log CFU/g, đáp ứng yêu cầu chất lượng sản phẩm probiotic.

Thảo luận kết quả

Kết quả cho thấy việc cố định Lactobacillus acidophilus trong tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae là phương pháp hiệu quả để bảo vệ probiotic khỏi các điều kiện khắc nghiệt của hệ tiêu hóa, đặc biệt là môi trường acid dạ dày. Sự kết tụ tự nhiên giữa polysaccharides trên thành tế bào nấm men và protein trên bề mặt probiotic tạo thành màng sinh học hỗn hợp, giúp giảm thiểu tổn thương tế bào probiotic.

Phương pháp xử lý sóng siêu âm làm tăng hiệu quả cố định bằng cách tạo ra các khe nứt trên thành tế bào nấm men, cho phép probiotic được bao bọc bên trong, tăng khả năng bảo vệ. So với các nghiên cứu trước đây chỉ sử dụng màng bao alginate hoặc các chất bảo vệ hóa học, phương pháp này tận dụng nguồn nguyên liệu tự nhiên, thân thiện và có tiềm năng ứng dụng cao trong công nghiệp.

Khả năng sống sót và sinh trưởng tốt của probiotic cố định trong hệ tiêu hóa giả lập chứng minh rằng probiotic không chỉ được bảo vệ mà còn có thể phát huy tác dụng sinh học. Việc lựa chọn sấy phun làm phương pháp ưu tiên trong sản xuất do tính kinh tế và công nghệ thuận lợi, đồng thời giữ được tỉ lệ sống cao của probiotic trong sản phẩm cuối cùng.

Dữ liệu có thể được trình bày qua biểu đồ tỉ lệ sống sót của probiotic cố định và tự do trong môi trường dạ dày giả lập theo thời gian, cũng như bảng so sánh hiệu suất cố định và tỉ lệ sống sót sau sấy phun và sấy thăng hoa.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Ứng dụng phương pháp cố định probiotic trong tế bào nấm men: Khuyến khích các doanh nghiệp sản xuất chế phẩm probiotic áp dụng kỹ thuật cố định trong tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae để nâng cao tỉ lệ sống sót của probiotic, đặc biệt trong các sản phẩm dạng bột đông khô. Thời gian triển khai dự kiến trong 6-12 tháng.

2. Tối ưu hóa quy trình xử lý sóng siêu âm: Đề xuất nghiên cứu thêm để tối ưu công suất và thời gian xử lý sóng siêu âm nhằm đạt hiệu suất cố định cao nhất, đồng thời đảm bảo tính ổn định của tế bào nấm men. Chủ thể thực hiện là các phòng thí nghiệm công nghệ thực phẩm trong vòng 6 tháng.

3. Ưu tiên sử dụng phương pháp sấy phun trong sản xuất: Do tính kinh tế và hiệu quả bảo vệ probiotic, sấy phun nên được lựa chọn làm phương pháp chính trong quy trình sản xuất chế phẩm probiotic cố định. Các nhà sản xuất cần đầu tư thiết bị và đào tạo nhân sự trong vòng 12 tháng.

4. Bổ sung chất bảo vệ và dinh dưỡng trong chế phẩm: Khuyến nghị bổ sung các chất bảo vệ như đường glucose, trehalose hoặc protein để tăng cường khả năng sống sót của probiotic trong quá trình sấy và bảo quản. Thời gian nghiên cứu và ứng dụng khoảng 6 tháng.

5. Nghiên cứu mở rộng về các chủng probiotic khác: Đề xuất mở rộng nghiên cứu áp dụng phương pháp cố định này cho các chủng probiotic khác nhằm đa dạng hóa sản phẩm và tăng hiệu quả sinh học. Thời gian nghiên cứu dự kiến 1-2 năm.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Các nhà nghiên cứu và sinh viên ngành công nghệ thực phẩm: Luận văn cung cấp kiến thức chuyên sâu về kỹ thuật cố định probiotic, phương pháp xử lý tế bào nấm men và ứng dụng trong sản xuất chế phẩm probiotic, hỗ trợ phát triển đề tài nghiên cứu mới.

2. Doanh nghiệp sản xuất thực phẩm chức năng và probiotic: Thông tin về phương pháp nâng cao khả năng sống sót của probiotic giúp cải tiến quy trình sản xuất, nâng cao chất lượng sản phẩm và tăng tính cạnh tranh trên thị trường.

3. Chuyên gia dinh dưỡng và y tế: Hiểu rõ cơ chế bảo vệ probiotic và tác động của probiotic cố định trong hệ tiêu hóa giúp tư vấn và phát triển các sản phẩm hỗ trợ sức khỏe hiệu quả hơn.

4. Cơ quan quản lý và phát triển chính sách: Cung cấp cơ sở khoa học để xây dựng tiêu chuẩn chất lượng sản phẩm probiotic, đồng thời thúc đẩy ứng dụng công nghệ mới trong ngành công nghiệp thực phẩm.

Câu hỏi thường gặp

1. Phương pháp cố định probiotic trong tế bào nấm men có ưu điểm gì so với các phương pháp khác?
   Phương pháp này tận dụng nguồn nguyên liệu tự nhiên, tạo màng bảo vệ sinh học giúp probiotic sống sót tốt hơn trong môi trường acid dạ dày và hệ tiêu hóa, đồng thời tăng hiệu suất cố định lên đến 82%, cao hơn nhiều so với các phương pháp vi bao truyền thống.

2. Tại sao cần xử lý tế bào nấm men bằng sóng siêu âm?
   Sóng siêu âm tạo ra các khe nứt trên thành tế bào nấm men, giúp probiotic được cố định bên trong tế bào vỡ, tăng khả năng bảo vệ và nâng cao tỉ lệ sống sót so với chỉ dựa vào kết tụ tự nhiên.

3. Khả năng sống sót của probiotic cố định trong môi trường dạ dày giả lập như thế nào?
   Sau 150 phút trong môi trường pH=2, probiotic cố định có tỉ lệ sống 11.127% đến 19%, trong khi probiotic tự do không phát hiện tế bào sống, chứng tỏ hiệu quả bảo vệ vượt trội của phương pháp cố định.

4. Phương pháp sấy phun và sấy thăng hoa ảnh hưởng thế nào đến probiotic?
   Cả hai phương pháp đều giữ được khả năng sống sót của probiotic tương đương nhau, tuy nhiên sấy phun được ưu tiên do chi phí thấp, thời gian nhanh và dễ áp dụng trong sản xuất công nghiệp.

5. Sản phẩm probiotic cố định có thể bảo quản được trong bao lâu?
   Sản phẩm sấy phun sau 3 tháng bảo quản vẫn giữ được 7.036 log CFU/g probiotic, đáp ứng tiêu chuẩn chất lượng, cho thấy tính ổn định và khả năng ứng dụng thực tế cao.

Kết luận

• Phương pháp cố định Lactobacillus acidophilus trong tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae nâng cao đáng kể khả năng sống sót của probiotic trong môi trường hệ tiêu hóa giả lập.
• Xử lý sóng siêu âm tế bào nấm men tạo khe nứt giúp tăng hiệu suất cố định lên đến 82.123% và tỉ lệ sống của probiotic đạt 19%.
• Probiotic cố định sinh trưởng tốt trong hệ tiêu hóa giả lập, vượt trội so với probiotic tự do.
• Sấy phun là phương pháp ưu tiên trong sản xuất chế phẩm probiotic cố định do hiệu quả bảo vệ và tính kinh tế.
• Nghiên cứu mở ra hướng ứng dụng công nghệ mới trong sản xuất probiotic, góp phần nâng cao chất lượng sản phẩm và sức khỏe cộng đồng.

Next steps: Triển khai ứng dụng quy trình cố định probiotic trong sản xuất công nghiệp, đồng thời mở rộng nghiên cứu với các chủng probiotic khác và tối ưu hóa quy trình xử lý sóng siêu âm.

Các nhà nghiên cứu và doanh nghiệp trong lĩnh vực công nghệ thực phẩm nên hợp tác để phát triển và ứng dụng công nghệ cố định probiotic nhằm nâng cao hiệu quả sản phẩm và đáp ứng nhu cầu thị trường ngày càng tăng.

Trích đoạn nội dung tài liệu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP. HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA LÊ NGUYÊN HẢN NGHIÊN CỨU NÂNG CAO KHẢ NĂNG SỐNG CỦA VI KHUẨN LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS TRONG MÔI TRƯỜNG HỆ TIÊU HOÁ BẰNG PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNH TRONG TẾ BÀO NẤM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm và đồ uống Mã số chuyên ngành: 60540101 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP.HCM, THÁNG 12 NĂM 2015 Công trình được hoàn thành tại: Trường Đại học Bách Khoa – ĐHQG Tp. HCM Cán bộ hướng dẫn khoa học: GS. ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO Cán bộ chấm nhận xét 1: TS. PHAN NGỌC HOÀ Cán bộ chấm nhận xét 2: TS. TRỊNH KHÁNH SƠN Luận văn thạc sĩ được bảo vệ tại Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp. Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: 1.TS VÕ THỊ BẠCH HUỆ 2. PHAN NGỌC HOÀ 3. TRỊNH KHÁNH SƠN 4.TS LÊ PHI NGA 5. TRẦN THỊ NGỌC YÊN Xác nhận của Chủ tịch Hội đồng đánh giá Luận văn và Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau khi luận văn đã được sửa chữa (nếu có). CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập - Tự do - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: LÊ NGUYÊN HẢN MSHV: 7140043 Ngày, tháng, năm sinh: 19/03/1991 Nơi sinh: Tiền Giang Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm Mã số : 60540101 I.  TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cứu nâng cao khả năng sống của vi khuẩn Lactobacillus acidophilus trong môi trường hệ tiêu hoá bằng phương pháp cố định trong tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae II.  NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: 1. Tổng quan tài liệu về vi sinh vật đường ruột, probiotic, các phương pháp sấy tạo chế phẩm probiotic. Khảo sát các đặc tính sinh học của L. Khảo sát sự kết tụ tự nhiên giữa nấm men và L. Sử dụng thành tế bào nấm men làm giá thể cố định L. Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình cố định. Khảo sát khả năng sống sót của probiotics tự do và cố định trong môi trường dạ dày và hệ tiêu hóa 6.   Khảo sát hiệu quả của việc cố định probiotics và chất bảo vệ trong quá trình sấy tạo sản phẩm.   NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 19/01/2015 IV.   NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 20/11/2015 V.   CÁN BỘ HƯỚNG DẪN : GS. ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO Tp. CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên và chữ ký) (Họ tên và chữ ký) TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HOÁ HỌC (Họ tên và chữ ký) LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của bản thân tôi và nhóm nghiên cứu gồm Lê Huỳnh Hồng Vân và Trần Văn Đức dưới sự hướng dẫn khoa học của GS.TS Đống Thị Anh Đào. Các kết quả nghiên cứu và kết luận trong luận án này là trung thực và không sao chép từ bất kì một nguồn nào và dưới bất kì hình thức nào. Việc tham khảo các nguồn tài liệu đã được thực hiện trích dẫn và ghi nguồn tài liệu tham khảo theo đúng yêu cầu. Tác giả LÊ NGUYÊN HẢN NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN . TPHCM, tháng 12 năm 2015 Chữ ký của giáo viên GS. Đống Thị Anh Đào i NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN PHẢN BIỆN . TPHCM, tháng 12 năm 2015 Chữ ký giáo viên phản biện ii TÓM TẮT LUẬN VĂN Probiotic đóng vai trò rất quan trọng trong việc duy trì và ổn định sức khoẻ của con người. Để có thể phát huy được tác dụng, probiotic phải tồn tại ở dạng tế bào sống với đủ số lượng tế bào hiện diện trong chế phẩm và khi sử dụng vẫn phải duy trì được tỉ lệ sống cao trong hệ tiêu hoá. Nhiều sản phẩm với probiotic có hiệu quả kém do tế bào probiotic tồn tại ở dạng tự do không được che chở bảo vệ, dẫn đến một lượng lớn tế bào probiotic bị bất hoạt bởi những rào cản tự nhiên khi đi vào cơ thể. Do đó, việc bảo vệ tế bào probiotic với lớp vỏ bảo vệ vững chắc chống lại những điều kiện khắc nghiệt của hệ tiêu hoá đang được nhiều nghiên cứu trên thế giới quan tâm. Ứng dụng các tế bào vi sinh vật như tế bào nấm men làm màng vi bao các hợp chất có hoạt tính sinh học đã được nghiên cứu rộng rãi từ những năm 1970. Nhiều hợp chất đã được bảo vệ thành công trong thành tế bào nấm men như các hợp chất có tác dụng y học, tinh dầu, vitamin, khoáng…, tuy nhiên hầu như chưa có nghiên cứu nào đề cập đến việc bao bọc tế bào sống như probiotic bằng tế bào nấm men. Do đó, nghiên cứu của chúng tôi là một trong những nghiên cứu đầu tiên khi nghiên cứu về vấn đề này. Mục tiêu của nghiên cứu là tìm ra vật liệu mới để nâng cao khả năng sống của probiotic, tận dụng nguồn tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae từ nền công nghiệp sản xuất rượu bia để làm giá thể cố định probiotic. Tế bào nấm men theo cơ chế tự nhiên đã có thể bảo vệ được tế bào probiotic dựa vào sự kết tụ được hình thành bởi sự liên kết giữa các polysaccharides trên bề mặt thành tế bào nấm men và các phân tử protein trên bề mặt tế bào probiotic. Nghiên cứu đã thành công trong việc kết hợp sự kết tụ tự nhiên và sử dụng những khe nứt trên thành tế bào nấm men vỡ, được tạo thành do quá trình xử lý sóng siêu âm, để cố định probiotic vào bên trong nhằm nâng cao khả năng sống của probiotic. Huyền phù tế bào nấm men sau khi xử lý sóng âm, bao gồm cả thành tế bào vỡ lẫn các tế bào nguyên vẹn, được sử dụng làm giá thể cố định probiotic. Sau khi cố định, tế bào probiotic một số được che chắn bên trong thành tế bào nấm men vỡ, một số hình thành sự kết tụ với các tế bào nấm men và các tế bào probiotic khác. Sự kết tụ này cũng có thể được xem như là một tế bào probiotic được cố định giữa nhiều tế bào nấm men và probiotic xung quanh. iii Bên cạnh đó, quá trình sấy tạo chế phẩm probiotic cũng ảnh hưởng đến khả năng sống sót của các vi khuẩn probiotic. Việc cố định bằng thành tế bào nấm men và bổ sung một số chất mang giúp tăng tỉ lệ sống của probiotic trong điều kiện sấy phun hoặc sấy thăng hoa lên rõ rệt. Các số liệu thu thập được trình bày dưới đây có thể chứng minh rằng việc cố định probiotic bởi thành tế bào nấm men có thể cải thiện đáng kể khả năng sống của probiotic. Quá trình kết tụ đạt kết quả cao nhất khi tỉ lệ số lượng tế bào nấm men và probiotic là 1÷10. Ở tỉ lệ này, sau 150 phút khảo sát trong môi trường dạ dày giả lập (SGJ) pH=2, tỉ lệ sống của probiotic là 11.127%, trong khi probiotic tự do hoàn toàn không phát hiện được tế bào sống (tỉ lệ sống 0%). Tế bào nấm men sau khi xử lý sóng siêu âm thể hiện được hiệu quả cao hơn trong việc bảo vệ tế bào probiotic khi so sánh với hiệu quả của tế bào nấm men bình thường (chỉ có sự kết tụ). Với hiệu suất cố định là 82.123%, tỉ lệ sống của probiotic cao nhất có thể đạt được là 19. Probiotic cố định cũng được chứng minh thoát ra đúng chỗ và sinh trưởng tốt trong hệ tiêu hóa (số lượng vi khuẩn bắt đầu từ 106.117) cao hơn so với vi khuẩn chưa được cố định (số lượng vi khuẩn bắt đầu từ 106. Quá trình sấy phun và sấy thăng hoa để tạo ra chế phẩm probiotic cũng được nghiên cứu chúng tôi khảo sát. Kết quả thu được cho hiệu quả tương đương nhau về sức sống của probiotic trong chế phẩm. Tuy nhiên, chúng tôi ưu tiên chọn sấy phun khi áp dụng quy trình này vào thực tiễn do nhiều lợi ích về mặt công nghệ. Sản phẩm sấy phun sau 3 tháng lưu trữ vẫn giữ được 7.036 log CFU/g chế phẩm, đáp ứng được yêu cầu đặt ra với sản phẩm probiotic. Nghiên cứu này hoàn toàn khả quan khi ứng dụng vào thực tiễn, đặc biệt trong sản xuất chế phẩm probiotic dạng đông khô. iv ABSTRACT Probiotics play a crucial part in improving and maintaining human health. In order to trigger their advantages, probiotics however have to exist in living form to an appropriate extent in preparations and preserve high viability in gastro-intestinal tract. Products with probiotics in free form become little efficient in human body since probiotics mostly die and are unable to activate their effect. The idea of providing probiotics with a biological protective coat against extreme digestive conditions currently receives significant attention from many studies. The application of microorganism such as yeast cells as capsules for encapsulation of bioactive compounds has been in widespread investigation since the 1970s. Although encapsulation in yeast cell walls has been successfully made to several organic as well as inorganic materials such as medical compounds, oil, vitamins, minerals, etc., little has been mentioned so far regarding encapsulating living cells such as probiotics in yeast cell walls. Consequently, this article aims to report a preliminary study into this promising issue. The objectives of this study were to find out a new material for encapsulation of probiotics, utilizing capsules prepared from Saccharomyces cerevisiae to protect living probiotic cells. The yeast cells by nature have their capacity of protecting probiotics via co-aggregation between polysaccharides on the yeast cell walls and protein on probiotic surface. The encapsulation of cells was achieved, using the crack scars of the yeast cell walls created by the sonication method. Besides, some probiotic cells can be considered as being encapsulated by some surrounded yeast and probiotic cells through direct cell-cell contacts formed by co-aggregation between yeast and probiotic cells. Considering that the drying step to produce probiotic preparations contributes to the decline of probiotic survival, encapsulation of probiotics by yeast cell walls and adding nutrition supplements can improve probiotic’s viability in spray drying and vacuum drying conditions. The collected data that follow prove the significant effectiveness of probiotic encapsulation by yeast cell walls on improving probiotic viability. v The co-aggregation reached its optimal effect as the ratio between yeast cells and probiotics was 1÷10. Accordingly, after 150-min testing in simulated gastric juice (SGJ) pH=2, probiotic viability was 11.127% in comparison to that of free probiotic cells at 0%. Yeast cells after sonication treatment presented higher effectiveness on probiotic protection, compared to untreated yeast cells (resulting in only co-aggregation). With the co-aggregation yield at 82.123%, the highest probiotic viability was 19. It was also found that the encapsulated probiotics released at the suitable stage and well grew in digestion with probiotic cells increase from 106.117, higher than that of free probiotics (from 106. The study also examined the process of spray drying and freeze drying in the production of probiotic preparations. The results indicated a parallel effectiveness regarding probiotic survival. Spray drying however should be preferred in case findings from this study are applied due to its technical advantages. In fact, products made thorough spray dying still maintain 7.