HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VŨ THỊ PHƯƠNG MAI ĐÁNH GIÁ AN TOÀN CHẾ PHẨM PROBIOTIC CHỨA VI KHUẨN DẠNG BÀO TỬ TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG SWISS ALBINO Ngành: Thú y Mã ngành: 60.01 Người hướng dẫn khoa học: TS. Nguyễn Bá Tiếp NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các nội dung nghiên cứu, số liệu tính, kết quả được thể hiện trong luận văn là trung thực và chưa từng được công bố cho việc bảo vệ một học vị nào trong và ngoài nước. Tôi cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ để thực hiện luận văn này đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc.
Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Vũ Thị Phương Mai i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Trước hết tôi xin gửi lời cảm ơn tới các Thầy cô giáo công tác tại Học viện Nông nghiệp Việt Nam nói chung và các Thầy cô trong Khoa Thú Y nói riêng đã giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn này. Đặc biệt, tôi xin cảm ơn TS. Nguyễn Bá Tiếp - Bộ môn Giải phẫu - Tổ chức - Phôi thai, khoa Thú Y người đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài.
Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới gia đình, anh em, bạn bè và đồng nghiệp đã động viên, giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhất cho tôi hoàn thành luận văn này. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Vũ Thị Phương Mai ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.v Danh mục bảng.
vi Danh mục hình. vii Trích yếu luận văn. viii Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài.
Mục tiêu nghiên cứu. Tổng quan tài liệu. Lịch sử và định nghĩa probiotic. Lịch sử probiotic.
Khái niệm probiotic. Vai trò của probiotic. Cơ chế hoạt động của probiotic .1 Tác dụng trên biểu mô ruột. Tác dụng đến hệ vi sinh vật đường ruột.
Chế phẩm probiotic. Lựa chọn các chủng vi sinh vật probiotic. Thành phần của chế phẩm probiotic .3 Tác dụng của probiotic. Sản phẩm và ứng dụng.
Tác động của hệ vi sinh vật đường ruột. Cấu tạo vi thể của ruột non. Đối tượng, nội dung và phương pháp nghiên cứu. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu.
Nội dung nghiên cứu. Phương pháp nghiên cứu. Bố trí thí nghiệm. 20 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.
Phương pháp đánh giá các chỉ tiêu sinh trưởng. Lượng thức ăn thu nhận gam/con/ngày (ADFI):. Phương pháp làm tiêu bản vi thể và đánh giá cấu trúc vi thể. Phân tích số liệu.
Kết quả nghiên cứu và thảo luận. Đánh giá ảnh hưởng của Neoavi SupaMax đến tỷ lệ nuôi sống và sinh trưởng của chuột Swiss albino. Ảnh hưởng của chế phẩm đến tỷ lệ nuôi sống. Ảnh hưởng của liều lượng đến khả năng sinh trưởng.
Ảnh hưởng của bổ sung Neoavi SupaMax đến chuyển hóa thức ăn. Ảnh hưởng đến lượng thức ăn thu nhận. Ảnh hưởng của liều lượng chế phẩm đến tỷ lệ chuyển hóa thức ăn. Ảnh hưởng của Neoavi SupaMax đến biểu mô niêm mạc ruột chuột Swiss albino.
Ảnh hưởng của chế phẩm đến cấu trúc biểu mô. Ảnh hưởng của chế phẩm Neoavi SupaMax đến kích thước lông. Kết luận và kiến nghị. 46 Tài liệu tham khảo.
49 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt Average Daily Feed Intake ADFI (Lượng thức ăn thu nhận hàng ngày) Avarage Daily Gain ADG (Sinh trưởng tuyệt đối) Cs Cộng sự ĐC Đối chứng European Commission EC (Ủy ban Khoa học Châu Âu) European Union EU (Khối liên minh Châu Âu) Feed Conversion Rate FCR (Hệ số chuyển hóa thức ăn) LTATN Lượng thức ăn thu nhận NIZO Trung tâm nghiên cứu Hà lan PNAS Proceedings of the National Academy of Sciences Top Institute Food and Nutrition TIFN (Viện Dinh dưỡng và thực phẩm) TN Thí nghiệm VSV Vi sinh vật World Health Organization WHO (Tổ chức Y tế thế giới) v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 2. Các chủng vi sinh vật dùng phổ biến trong probiotics. Tóm tắt cơ chế tác động chủ yếu của các chủng probiotic lên vật chủ. Bố trí thì nghiệm.
Khối lượng của chuột nhắt trắng thí nghiệm qua các tuần tuổi. Sinh trưởng tuyệt đối của chuột qua các giai đoạn. Sinh trưởng tương đối của chuột qua các tuần tuổi. Lượng thức ăn thu nhận của chuột qua các tuần tuổi.
Tỷ lệ chuyển hóa thức ăn của chuột qua các tuần tuổi .36 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 2. Minh họa cơ chế tác động của probiotic. Cơ chế kháng vi sinh vật của Bacteriocin. Cơ chế tác động đến miễn dịch của Lactobacillus plantarum.
Vi khuẩn Lactobacillus casei. Vi khuẩn Lactobacillus bulgaricus. Vi khuẩn Enterococcus faecium. Vi khuẩn Bacillus subtilis.
Nha bào của vi khuẩn Bacillus subtilis. Sự phân bố của vi sinh vật có lợi trong ống tiêu hóa. Cấu tạo ruột non. Chuột thí nghiệm khỏe mạnh, nhanh nhẹn, phân khô.
Sinh trưởng tích lũy của chuột nhắt trắng qua các tuần tuổi. Sinh trưởng tuyệt đối của chuột nhắt trắng qua các tuần tuổi. Sinh trưởng tương đối của chuột nhắt trắng Swiss albino. Lông nhung biểu mô tá tràng chuột nhóm đối chứng.
Lông nhung biểu mô không tràng chuột nhóm được bổ sung Neoavi SupaMax nồng độ thấp. Lông nhung biểu mô hồi tràng chuột nhóm được bổ sung Neoavi SupaMax nồng độ trung bình. Lông nhung biểu mô không tràng chuột nhóm được bổ sung Neoavi SupaMax nồng độ cao. Chiều cao và chiều rộng lông nhung biểu mô tá tràng.
Chiều cao và chiều rộng lông nhung biểu mô không tràng. Chiều cao và chiều rộng lông nhung biểu mô hồi tràng.42 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Vũ Thị Phương Mai Tên Luận văn: Đánh giá an toàn chế phẩm probiotic chứa vi khuẩn dạng bào tử trên chuột nhắt trắng Swiss albino. Ngành: Thú Y Mã số: 60.01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam 1. Mục đích nghiên cứu Đánh giá an toàn và tác dụng phụ thuộc liều lượng probiotic Neoavi SupaMax chứa bào tử Bacillus đến một số chỉ tiêu sinh trưởng, chuyển hóa thức ăn và biểu mô ruột non chuột nhắt trắng Swiss albino, là cơ sở khuyến cáo sử dụng probiotic dạng bào tử trong chăn nuôi.
Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp bố trí thí nghiệm một nhân tố đánh giá tác dụng của Neoavi Supa Max đến các chỉ tiêu sinh trưởng, chuyển hóa thức ăn của chuột. - Phương pháp thường quy làm tiêu bản vi thể nhuộm HE. - Kích thước lông nhung được đo bằng phần mềm Infinity Analysis trên kính hiển vi Kniss MBL-2000T (Olympus, Japan). Kết quả nghiên cứu chính - Bổ sung chế phẩm Neoavi SupaMax ở các liều lượng 5x108CFU; 1,25x108CFU và 0,612x108CFU bào tử vi khuẩn Bacillus (tương ứng 1g; 0,25g và 0,0625g chế phẩm trong1 lít nước uống) không ảnh hưởng đến tỷ lệ nuôi sống chuột, 100% số chuột sống và khỏe mạnh.
- Nồng độ cao làm tăng sinh trưởng tích lũy; tăng lượng thức ăn thu nhận; giảm tỷ lệ chuyển hóa thức ăn. Tác dụng rõ nhất của chế phẩm ở tuần tuẩn 12 đến 13; ở chuột đực rõ hơn ở chuột cái. - Chế phẩm Neoavi SupaMax có tác dụng đến biểu mô ruột non, làm tăng chiều cao lông nhung, thay đổi chiểu rộng lông nhung biểu mô tá tràng và không tràng ở các mức độ khác nhau. Ở các nồng độ bổ sung chế phẩm không ảnh hưởng đến kích thước lông nhung biểu mô hồi tràng.
Kết luận Neoavi SupaMax chứa bào tử vi khuẩn Bacillus chịu nhiệt an toàn với chuột Swiss albino và cho thấy tác dụng tích cực đến tăng trưởng; tỷ lệ chuyển hóa thức ăn và viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com biểu mô niêm mạc ruột non. Các tác động này thay đổi theo nồng độ chế phẩm; tuổi và tính biệt của chuột cũng như các phần của ruột non. Những kết quả của nghiên cứu có thể là cơ sở cho việc sử dụng các chế phẩm chứa bào tử vi khuẩn trong thành phần bổ sung vào thức ăn trong chăn nuôi. ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com THESIS ABSTRACT Author name: Vu Thi Phuong Mai Thesis title: Safety evaluation of bacterial spores as a probiotic supplement in Swiss albino mice.
Major: Veterinary Medicine Code: 60.01 Institution: Vietnam National University of Agriculture 1. Research purposes Safety evaluation and dose-dependent effects of Neoavi SupaMax containing Bacillus spores on some growth parameters, feed conversion and small intestinal epithelium of Swiss albino mice as background for the usage the product as animal feed supplement. Research Methodology - One factor experimental design for assessing the effects of Neoavi SupaMax containing bacterial spores on nutritional and growth parameters. - Routine methods for microscopic examination with HE staining slides.
- Epithelial villum measurement was performed with Infinity Analysis software o using Kniss MBL-2000T microscope (Olympus, Japan). Key research findings - Supplement of probiotic product Neoavi SupaMax in drinking water at three different doses including high, medium and low (5x108CFU; 1,25x108CFU và 0,612x108 CFU Bacillus spores per litter) did not affect survival rates of Swiss albino mice. - High dose supplement of the product led to an increase in BW gain, ADG, feed intake and a decrease in FCR. The highest effect was shown at 12 to 13 weeks of age.
The effects were more obvious in male mice. - Neoavi SupaMax affected small intestine epithelia shown in increase of villus height and altered villus width of duodenum and jejunum but did not affect ileum villi. Conclusions Heat resistant Bacillus bacterial spore product Neoavi SupaMax was shown as a safe supplement for Swiss albino mice. The product led to possitive effects on some growth parameters, FCR and small intestinal epithelia.
The effects were dose-, mouse age- and gender-dependent. The study can be considered as additional evidence for using bacterial spore in Neoavi SupaMax as animal feed supplements. x LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Sử dụng kháng sinh với mục đích kích thích sinh trưởng, phòng bệnh và điều trị bệnh cho vật nuôi thiếu kiểm soát và là một trong những nguyên nhân dẫn đến tình trạng kháng thuốc của vi sinh vật.