Phân lập và xác định độc tố vi khuẩn Clostridium botulinum gây bệnh ngộ độc thịt

Chuyên khảo phân tích Phân lập và xác định độc tố vi khuẩn clostridium botulinum gây bệnh ngộ độc thịt, đánh giá các khía cạnh quan trọng, đề xuất hướng nghiên cứu tiếp theo.

• Tác giả: Lê Thị Trang
• Người hướng dẫn: TS. Nguyễn Thùy Trâm
• Trường học: Trường Đại học Mở Hà Nội
• Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
• Đề tài: Phân lập và xác định độc tố vi khuẩn Clostridium botulinum gây bệnh ngộ độc thịt
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2022
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1.1. Tổng quan về bệnh ngộ độc thịt
• 1.1.1. Nguồn gốc và đặc điểm bệnh ngộ thịt
• 1.1.2. Các dạng bệnh ngộ độc thịt
• 1.1.3. Các phương pháp chẩn đoán bệnh ngộ độc thịt
• 1.2. Tổng quan về vi khuẩn C. botulinum
• 1.2.1. Đặc điểm chung của vi khuẩn C. botulinum
• 1.2.2. Sự phân bố của vi khuẩn C. botulinum
• 1.2.3. Phương pháp nuôi cấy vi khuẩn C. botulinum
• 1.2.4. Tình hình nghiên cứu vi khuẩn C. botulinum trên thế giới
• 1.2.5. Tình hình nghiên cứu vi khuẩn C. botulinum ở Việt Nam
• 2. CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu
• 2.1.2. Địa điểm nghiên cứu
• 2.1.3. Thời gian nghiên cứu
• 2.2. Vật liệu- dụng cụ hóa chất dùng trong nghiên cứu
• 2.2.1. Trang thiết bị, dụng cụ
• 2.2.2. Vật tư tiêu hao
• 2.2.3. Hóa chất, sinh phẩm
• 2.2.3.1. Hóa chất sinh phẩm dùng cho nuôi cấy phân lập
• 2.3. Phương pháp nghiên cứu
• 2.3.1. Thiết kế nghiên cứu
• 2.3.1.1. Nghiên cứu mô tả thực nghiệm và mô tả cắt ngang
• 2.3.2. Các kỹ thuật nghiên cứu
• 3. CHƯƠNG III: KẾT QUẢ
• 3.1. Kết quả thu thập các loại mẫu
• 3.2. Kết quả xác định tính chất sinh vật hóa học C. botulinum bằng kit API 20A
• 3.3. Kết quả xác định gen độc tố bằng kỹ thuật PCR
• 3.4. Kết quả giải trình gen
• 4. CHƯƠNG IV: BÀN LUẬN
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan Clostridium botulinum và nguy cơ ngộ độc thịt

Vi khuẩn Clostridium botulinum là một trực khuẩn Gram dương, kỵ khí bắt buộc, có khả năng hình thành bào tử với sức đề kháng cao. Loài vi khuẩn này tồn tại phổ biến trong môi trường tự nhiên như đất, bùn và trầm tích dưới nước. Mối nguy hiểm chính không đến từ bản thân vi khuẩn mà từ độc tố botulinum do chúng sinh ra trong điều kiện môi trường yếm khí. Đây là một trong những thần kinh độc tố mạnh nhất từng được biết, gây ra bệnh ngộ độc thịt (Botulism), một tình trạng liệt cơ cấp tính và có khả năng gây tử vong cao. Bệnh ngộ độc botulism có thể biểu hiện dưới nhiều hình thức khác nhau, phổ biến nhất là ngộ độc qua thực phẩm, ngộ độc ở trẻ sơ sinh và ngộ độc qua vết thương. Triệu chứng lâm sàng điển hình bao gồm liệt mềm đối xứng từ trên xuống, bắt đầu từ các cơ ở vùng đầu mặt (sụp mí, song thị, khó nói, khó nuốt) và lan dần xuống cổ, tay chân, cuối cùng là các cơ hô hấp. Nếu không được chẩn đoán và can thiệp kịp thời bằng huyết thanh kháng độc tố, tình trạng liệt cơ hô hấp có thể dẫn đến tử vong. Hiểu rõ về cơ chế gây bệnh của botulinum, đặc điểm sinh học của vi khuẩn và các con đường lây nhiễm là nền tảng cốt lõi để xây dựng các chiến lược phòng chống ngộ độc thực phẩm hiệu quả, đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm cho cộng đồng.

1.1. Nguồn gốc và đặc điểm của bệnh ngộ độc Botulism

Bệnh ngộ độc thịt, hay ngộ độc Botulism, có tên gọi bắt nguồn từ tiếng Latin “botulus”, nghĩa là “xúc xích”. Tên gọi này xuất phát từ những vụ ngộ độc đầu tiên được ghi nhận ở châu Âu liên quan đến việc tiêu thụ xúc xích tự làm không được bảo quản đúng cách. Bệnh gây ra bởi độc tố botulinum, một sản phẩm chuyển hóa của vi khuẩn Clostridium botulinum. Đây là một vi khuẩn kỵ khí, nghĩa là chúng chỉ phát triển và sinh độc tố trong môi trường không có hoặc có rất ít oxy. Đặc điểm này giải thích tại sao các loại thực phẩm đóng hộp, đóng chai, hút chân không hoặc các sản phẩm lên men yếm khí như măng chua, dưa muối không đảm bảo độ axit là nguồn nguy cơ chính. Vi khuẩn C. botulinum có khả năng tạo ra nha bào (bào tử), một dạng cấu trúc ngủ đông giúp chúng tồn tại trong những điều kiện môi trường khắc nghiệt mà tế bào sinh dưỡng không thể chịu được, bao gồm cả nhiệt độ đun sôi thông thường. Khi gặp điều kiện thuận lợi, các bào tử này sẽ nảy mầm, phát triển thành tế bào sinh dưỡng và bắt đầu quá trình sản sinh độc tố.

1.2. Các dạng ngộ độc thịt và triệu chứng lâm sàng điển hình

Bệnh ngộ độc botulism được phân thành ba dạng chính. Dạng phổ biến nhất là ngộ độc qua thực phẩm, xảy ra khi một người ăn phải thức ăn chứa sẵn độc tố. Dạng thứ hai là ngộ độc ở trẻ sơ sinh, xảy ra khi trẻ dưới 1 tuổi nuốt phải bào tử Clostridium botulinum (thường có trong mật ong hoặc bụi đất), bào tử này nảy mầm và sinh độc tố trong đường ruột của trẻ. Dạng thứ ba là ngộ độc qua vết thương, khi bào tử xâm nhập vào một vết thương hở và sinh độc tố trong môi trường kỵ khí tại đó. Bất kể dạng nào, triệu chứng ngộ độc botulism đều có đặc điểm chung là liệt mềm, đối xứng, lan từ trên xuống. Các dấu hiệu ban đầu thường xuất hiện sau 12 đến 36 giờ, bao gồm mệt mỏi, chóng mặt, nhìn mờ, song thị, khô miệng, khó nuốt và khó nói. Bệnh tiến triển gây yếu cơ ở cổ, cánh tay, và cuối cùng là ảnh hưởng đến các cơ hô hấp. Tình trạng liệt cơ hô hấp là biến chứng nguy hiểm nhất, có thể gây suy hô hấp và tử vong nếu không được điều trị hỗ trợ kịp thời.

1.3. Độc tố botulinum Cấu trúc và cơ chế gây bệnh chết người

Liều gây chết của độc tố botulinum cực kỳ thấp, ước tính chỉ khoảng 1-3 nanogram/kg thể trọng qua đường hô hấp. Độc tố này là một protein có trọng lượng phân tử 150 kDa, bao gồm một chuỗi nặng (100 kDa) và một chuỗi nhẹ (50 kDa) liên kết với nhau. Cơ chế gây bệnh của botulinum diễn ra ở cấp độ phân tử tại các điểm nối thần kinh-cơ. Sau khi xâm nhập vào máu, chuỗi nặng của độc tố sẽ gắn vào các thụ thể đặc hiệu trên màng của đầu tận cùng dây thần kinh vận động. Sau đó, toàn bộ phân tử độc tố được đưa vào bên trong tế bào thần kinh. Tại đây, chuỗi nhẹ, với hoạt tính enzyme, sẽ cắt đứt các protein cần thiết cho việc hòa màng của các túi chứa chất dẫn truyền thần kinh Acetylcholine. Quá trình này ngăn chặn hoàn toàn sự giải phóng Acetylcholine vào khe synap, làm gián đoạn tín hiệu từ dây thần kinh đến cơ. Hậu quả là cơ không thể co lại, dẫn đến tình trạng liệt mềm. Chính vì cơ chế gắn không hồi phục này, quá trình phục hồi đòi hỏi cơ thể phải tái tạo các đầu mút thần kinh mới, một quá trình có thể kéo dài hàng tháng.

II. Hiểm họa từ bào tử Clostridium botulinum trong thực phẩm

Hiểm họa chính của Clostridium botulinum nằm ở khả năng tồn tại dai dẳng của bào tử trong môi trường tự nhiên. Các bào tử Clostridium botulinum có mặt ở khắp nơi, từ đất trồng trọt, bùn ao hồ cho đến bụi trong không khí và có thể dễ dàng nhiễm vào nguyên liệu thực phẩm. Những bào tử này có sức đề kháng phi thường, có thể sống sót qua nhiều quy trình chế biến thực phẩm thông thường. Nguy cơ ngộ độc tăng vọt khi các thực phẩm bị nhiễm bào tử được bảo quản trong môi trường yếm khí, chẳng hạn như trong các sản phẩm thực phẩm đóng hộp, hút chân không, hoặc ngâm ủ. Trong điều kiện này, bào tử sẽ nảy mầm và sản sinh độc tố botulinum. Các vụ ngộ độc thực phẩm gây chấn động như vụ Pate Minh Chay ở Việt Nam là lời cảnh tỉnh sâu sắc về mối nguy từ các sản phẩm chế biến tại nhà không tuân thủ quy trình an toàn vệ sinh thực phẩm. Việc chẩn đoán và nghiên cứu Clostridium botulinum tại Việt Nam vẫn còn đối mặt với nhiều thách thức, bao gồm khó khăn trong nuôi cấy vi khuẩn kỵ khí và thiếu chủng đối chứng để xác thực các phương pháp xét nghiệm, làm chậm quá trình phát hiện và kiểm soát dịch bệnh.

2.1. Sự phân bố của bào tử Clostridium botulinum trong tự nhiên

Bào tử Clostridium botulinum được tìm thấy rộng rãi trong môi trường trên toàn thế giới. Chúng là một thành phần tự nhiên của hệ vi sinh vật trong đất, đặc biệt là đất canh tác nông nghiệp, và trong trầm tích của sông, hồ và ven biển. Luận văn của Lê Thị Trang (2022) đã tiến hành thu thập 325 mẫu đất từ các tỉnh miền Bắc Việt Nam như Bắc Giang, Hà Nội, Hải Dương và đã phân lập thành công các chủng C. botulinum từ đây. Mật ong cũng là một nguồn chứa bào tử tiềm tàng và là nguyên nhân chính gây ngộ độc botulism ở trẻ sơ sinh. Do sự phân bố rộng rãi này, việc nguyên liệu thực phẩm như rau, củ, quả, thịt, cá bị nhiễm bào tử là điều khó tránh khỏi. Sức đề kháng của bào tử rất cao; bào tử của các chủng nhóm I có thể chịu được nhiệt độ 121°C trong vài phút, trong khi bào tử nhóm II kém chịu nhiệt hơn nhưng vẫn có thể sống sót ở nhiệt độ đun sôi thông thường. Điều này đòi hỏi các quy trình thanh trùng công nghiệp phải được kiểm soát chặt chẽ về nhiệt độ và thời gian.

2.2. Mối nguy từ thực phẩm đóng hộp và chế biến sai cách

Nguy cơ lớn nhất của ngộ độc botulism đến từ các loại thực phẩm được chế biến và bảo quản không đúng cách, tạo ra môi trường yếm khí lý tưởng cho vi khuẩn phát triển. Thực phẩm đóng hộp tự làm tại nhà là đối tượng nguy cơ cao nhất, vì các quy trình gia nhiệt thủ công thường không đủ để tiêu diệt hết bào tử Clostridium botulinum. Các sản phẩm khác bao gồm thịt hộp, xúc xích, lạp xưởng, cá hun khói, rau củ ngâm dầu, và các loại pate. Vụ ngộ độc Pate Minh Chay năm 2020 tại Việt Nam là một ví dụ điển hình khi sản phẩm được sản xuất trong điều kiện yếm khí nhưng không trải qua quá trình thanh trùng đủ tiêu chuẩn, dẫn đến việc bào tử nảy mầm và sinh độc tố. Người tiêu dùng cần cảnh giác với các sản phẩm đóng hộp có dấu hiệu bất thường như hộp bị phồng, nắp bị bật, hoặc thực phẩm bên trong có mùi, màu sắc, vị lạ. Tuy nhiên, cần lưu ý rằng thực phẩm chứa độc tố botulinum có thể trông, ngửi và có vị hoàn toàn bình thường.

2.3. Thách thức chẩn đoán và nghiên cứu C. botulinum tại Việt Nam

Theo Luận văn của Lê Thị Trang (2022), công tác nghiên cứu và chẩn đoán Clostridium botulinum tại Việt Nam gặp nhiều khó khăn. Thứ nhất, đây là một vi khuẩn kỵ khí tuyệt đối, đòi hỏi trang thiết bị và kỹ thuật nuôi cấy chuyên biệt, không phải phòng thí nghiệm vi sinh nào cũng có thể thực hiện. Thứ hai, độc tố botulinum được xếp vào danh sách tác nhân sinh học nguy hiểm, khiến việc đặt mua hoặc trao đổi chủng vi khuẩn từ các nguồn quốc tế trở nên vô cùng khó khăn. Một trong những thách thức lớn nhất được chỉ ra là sự thiếu hụt chủng dương (positive control). Mặc dù Bộ Y tế đã ban hành các Tiêu chuẩn Việt Nam (TCVN) cho việc xét nghiệm Clostridium botulinum bằng PCR hay ELISA, nhưng việc không có chủng vi khuẩn hoặc độc tố chuẩn để xác nhận và kiểm soát chất lượng phương pháp đã làm hạn chế tính ứng dụng thực tế của các tiêu chuẩn này. Điều này nhấn mạnh tầm quan trọng của các nghiên cứu phân lập chủng bản địa để xây dựng nguồn vật liệu tham chiếu cho công tác chẩn đoán và giám sát dịch tễ.

III. Phương pháp phân lập vi khuẩn Clostridium botulinum hiệu quả

Việc phân lập thành công Clostridium botulinum từ các mẫu môi trường và thực phẩm là một bước đi nền tảng, không chỉ xác nhận nguồn lây nhiễm mà còn cung cấp chủng vi khuẩn thuần khiết cho các nghiên cứu sâu hơn. Nghiên cứu của Lê Thị Trang (2022) đã áp dụng một quy trình đa bước và tối ưu để tăng hiệu quả phân lập. Quá trình này bắt đầu bằng việc xử lý mẫu ban đầu để làm giàu vi khuẩn và loại bỏ các vi sinh vật không mong muốn. Kỹ thuật nuôi cấy vi khuẩn kỵ khí được thực hiện trong điều kiện nghiêm ngặt, sử dụng các môi trường dinh dưỡng và môi trường chọn lọc chuyên biệt. Môi trường thạch lòng đỏ trứng (EYA) được sử dụng để phát hiện hoạt tính lipase đặc trưng, một dấu hiệu nhận biết sơ bộ quan trọng. Sau khi có được khuẩn lạc thuần, bước tiếp theo là định danh chính xác bằng các phương pháp sinh hóa. Bộ kit API 20A, một hệ thống vi ống chứa các cơ chất khác nhau, được sử dụng để xác định hồ sơ sinh hóa của vi khuẩn, cho phép định danh loài với độ tin cậy cao. Những phương pháp này khi kết hợp lại tạo thành một quy trình chuẩn, giúp vượt qua những thách thức trong việc phân lập loài vi khuẩn khó tính này.

3.1. Kỹ thuật nuôi cấy vi khuẩn kỵ khí từ mẫu đất và mật ong

Để phân lập vi khuẩn kỵ khí C. botulinum, quy trình xử lý mẫu ban đầu là cực kỳ quan trọng. Đối với mẫu mật ong, do có tính kháng khuẩn tự nhiên và độ nhớt cao, mẫu được pha loãng với dung dịch đệm pepton và ly tâm để thu cặn. Phần cặn này sau đó được cấy trực tiếp lên môi trường chọn lọc và đồng thời được nuôi cấy tăng sinh trong môi trường thịt chín (CMM). Đối với mẫu đất, mẫu được xử lý bằng cách sốc nhiệt (65°C trong 30 phút) để tiêu diệt các tế bào sinh dưỡng của vi khuẩn khác, chỉ giữ lại các bào tử chịu nhiệt. Sau đó, mẫu được xử lý thêm bằng cồn (sốc cồn) để loại bỏ vi khuẩn không sinh bào tử trước khi cấy lên môi trường thạch. Tất cả các bước nuôi cấy đều được thực hiện trong tủ kỵ khí, sử dụng các túi tạo khí và chỉ thị kỵ khí để đảm bảo môi trường hoàn toàn không có oxy. Việc ủ mẫu ở cả hai nhiệt độ 25°C và 37°C giúp phát hiện được cả các chủng nhóm I (ưa ấm) và nhóm II (ưa mát).

3.2. Vai trò của môi trường chọn lọc và đặc điểm hình thái khuẩn lạc

Việc sử dụng môi trường nuôi cấy phù hợp là yếu tố then chốt. Trong nghiên cứu, môi trường CBI (Clostridium Botulinum Isolation), một dạng biến thể của môi trường EYA (Egg Yolk Agar), được sử dụng làm môi trường chọn lọc ban đầu. Môi trường này chứa các kháng sinh như D-cycloserine, sulfamethoxazole và trimethoprim để ức chế sự phát triển của hầu hết các vi khuẩn khác, tạo điều kiện cho C. botulinum phát triển. Trên môi trường EYA hoặc CBI, khuẩn lạc của C. botulinum thường có đặc điểm hình thái đặc trưng: bờ không đều, bề mặt thô ráp và có xu hướng lan rộng. Quan trọng nhất là sự xuất hiện của một lớp màng óng ánh như ngọc trai bao phủ và vùng kết tủa mờ xung quanh khuẩn lạc. Đây là kết quả của phản ứng lipase dương tính (phân giải chất béo trong lòng đỏ trứng), một đặc tính sinh hóa quan trọng giúp nhận diện sơ bộ các khuẩn lạc nghi ngờ. Việc lựa chọn các khuẩn lạc có đặc điểm này để cấy chuyền và tinh sạch là bước đầu tiên để có được chủng vi khuẩn thuần.

3.3. Định danh vi khuẩn bằng bộ kit sinh hóa API 20A

Sau khi thu được khuẩn lạc thuần, việc định danh chính xác loài là bắt buộc. Phương pháp sinh hóa sử dụng bộ kit API 20A là một công cụ hiệu quả và được chuẩn hóa. Hệ thống này bao gồm một thanh nhựa với 20 giếng nhỏ, mỗi giếng chứa một loại cơ chất hydratcacbon hoặc protein khác nhau. Huyền dịch vi khuẩn thuần được nhỏ vào các giếng này và ủ trong điều kiện kỵ khí. Sau 24-48 giờ, sự thay đổi màu sắc hoặc các phản ứng hóa học trong từng giếng sẽ được ghi nhận. Mỗi phản ứng dương tính hoặc âm tính sẽ được mã hóa thành một dãy số gồm 7 chữ số. Dãy số này sau đó được tra cứu trong cơ sở dữ liệu của phần mềm APIwebTM để xác định tên loài vi khuẩn và tỷ lệ phần trăm nhận dạng (%id). Trong nghiên cứu của Lê Thị Trang, 6 chủng vi khuẩn đã được định danh là Clostridium botulinum với độ tin cậy từ 75,3% đến 97,1%, khẳng định sự chính xác của quy trình phân lập và nhận diện ban đầu.

IV. Cách xác định độc tố Botulinum bằng kỹ thuật sinh học phân tử

Sau khi phân lập và định danh loài Clostridium botulinum, bước quan trọng tiếp theo là xác định khả năng sinh độc tố và loại độc tố của chủng vi khuẩn đó. Các kỹ thuật sinh học phân tử hiện đại đóng vai trò trung tâm trong giai đoạn này, mang lại kết quả nhanh chóng, nhạy và đặc hiệu. Phương pháp phản ứng chuỗi polymerase (PCR) là công cụ chủ lực để xét nghiệm Clostridium botulinum và phát hiện sự hiện diện của các gen mã hóa độc tố botulinum (gen bont). Bằng cách sử dụng các cặp mồi được thiết kế đặc hiệu cho từng loại gen độc tố (A, B, E, F...), các nhà khoa học có thể xác định chính xác chủng vi khuẩn đang mang gen độc tố nào. Nghiên cứu trích dẫn đã thành công trong việc phát hiện gen độc tố A và B ở các chủng phân lập từ mẫu Pate Minh Chay, cung cấp bằng chứng khoa học vững chắc về tác nhân gây ngộ độc. Để đi sâu hơn, kỹ thuật giải trình tự toàn bộ hệ gen cung cấp một cái nhìn toàn diện về bộ gen của vi khuẩn, không chỉ xác nhận gen độc tố mà còn giúp truy xuất nguồn gốc và mối quan hệ di truyền giữa các chủng, hỗ trợ đắc lực cho công tác điều tra dịch tễ.

4.1. Xét nghiệm Clostridium botulinum bằng phương pháp PCR

Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) là phương pháp tiêu chuẩn để phát hiện gen độc tố của Clostridium botulinum. Kỹ thuật này khuếch đại một đoạn DNA mục tiêu lên hàng triệu lần, giúp dễ dàng phát hiện ngay cả khi lượng DNA ban đầu rất nhỏ. Quy trình bắt đầu bằng việc tách chiết DNA tổng số từ khuẩn lạc thuần. Trong nghiên cứu này, phương pháp tách chiết bằng nhiệt được sử dụng vì tính đơn giản và nhanh chóng. DNA sau đó được đưa vào hỗn hợp phản ứng PCR chứa các thành phần cần thiết: enzyme Taq polymerase, các nucleotide (dNTPs), dung dịch đệm và quan trọng nhất là các cặp mồi đặc hiệu. Các cặp mồi này được thiết kế để bám vào các đoạn trình tự duy nhất của gen mã hóa độc tố botulinum loại A, B, C, D, E và F. Hỗn hợp được đưa vào máy luân nhiệt để thực hiện các chu kỳ gia nhiệt và làm nguội, khuếch đại đoạn gen mục tiêu. Sản phẩm PCR sau đó được phân tích bằng kỹ thuật điện di trên gel agarose. Sự xuất hiện của một vạch DNA ở kích thước dự kiến xác nhận mẫu dương tính với gen độc tố tương ứng.

4.2. Kết quả phát hiện gen độc tố A và B trong các chủng nghiên cứu

Kết quả PCR từ luận văn của Lê Thị Trang (2022) đã cung cấp những dữ liệu quan trọng. Cụ thể, hai chủng phân lập từ mẫu đất ở Bắc Giang (CBGS01, CBGS02) cho kết quả dương tính với gen độc tố B. Đáng chú ý hơn, hai chủng phân lập từ mẫu Pate Minh Chay liên quan đến vụ ngộ độc (Cbt3F01, Cbt21F18) cho kết quả dương tính với cả hai gen độc tố A và B. Điều này cho thấy sự tồn tại đồng thời của hai loại độc tố trong cùng một sản phẩm thực phẩm, làm tăng mức độ phức tạp và nghiêm trọng của vụ ngộ độc. Việc xác định được loại độc tố là thông tin cực kỳ quý giá cho lâm sàng, giúp lựa chọn loại huyết thanh kháng độc tố (botulinum antitoxin) phù hợp để điều trị cho bệnh nhân. Kết quả này không chỉ khẳng định vai trò của sản phẩm pate chay là nguồn gây bệnh mà còn cung cấp bằng chứng về sự lưu hành của các chủng C. botulinum mang độc tố A và B tại Việt Nam.

4.3. Ứng dụng giải trình tự gen xác định đặc điểm di truyền vi khuẩn

Ngoài PCR, kỹ thuật giải trình tự toàn bộ hệ gen (Whole Genome Sequencing - WGS) là một công cụ mạnh mẽ để nghiên cứu sâu hơn về Clostridium botulinum. Thay vì chỉ phát hiện một vài gen, WGS đọc toàn bộ trình tự DNA của vi khuẩn, cung cấp một lượng thông tin khổng lồ. Từ dữ liệu này, các nhà khoa học có thể xác định chính xác tất cả các gen độc tố, gen kháng kháng sinh, và các yếu tố độc lực khác. Quan trọng hơn, bằng cách so sánh hệ gen của chủng mới phân lập với các chủng đã biết trong cơ sở dữ liệu toàn cầu, có thể xây dựng cây phả hệ di truyền. Cây phả hệ này giúp xác định mối quan hệ tiến hóa, truy tìm nguồn gốc của đợt bùng phát dịch (ví dụ, chủng gây bệnh ở Việt Nam có liên quan đến chủng ở khu vực nào khác không), và theo dõi sự lây lan của các dòng vi khuẩn nguy hiểm. Mặc dù phức tạp và tốn kém hơn, giải trình tự gen mở ra một hướng đi mới cho việc giám sát dịch tễ học phân tử, góp phần kiểm soát bệnh ngộ độc botulism một cách chủ động và hiệu quả hơn.

V. Giải pháp phòng chống ngộ độc thịt và hướng điều trị khẩn cấp

Việc phòng chống ngộ độc thực phẩm do Clostridium botulinum đòi hỏi sự kết hợp giữa kiến thức an toàn vệ sinh thực phẩm và các biện pháp y tế kịp thời. Nguyên tắc vàng trong phòng ngừa tại gia đình là xử lý nhiệt đúng cách đối với các loại thực phẩm đóng hộp và thực phẩm chế biến yếm khí. Đun sôi kỹ thực phẩm trong ít nhất 10 phút có thể phá hủy độc tố botulinum đã hình thành. Người tiêu dùng phải tuyệt đối không sử dụng các sản phẩm đóng hộp có dấu hiệu hư hỏng. Khi ngộ độc xảy ra, việc chẩn đoán sớm và điều trị khẩn cấp là yếu tố quyết định. Phương pháp điều trị đặc hiệu duy nhất hiện nay là sử dụng huyết thanh kháng độc tố (BAT - Botulinum Antitoxin). Loại thuốc này chứa các kháng thể giúp trung hòa độc tố đang lưu hành trong máu, ngăn chặn độc tố gắn thêm vào các đầu mút thần kinh và làm bệnh nặng hơn. Điều trị hỗ trợ, đặc biệt là hỗ trợ hô hấp, cũng đóng vai trò sống còn trong việc cứu sống bệnh nhân bị liệt cơ hô hấp. Bên cạnh mối nguy hiểm, độc tố botulinum cũng có một ứng dụng bất ngờ trong y học và thẩm mỹ dưới tên gọi Botox.

5.1. Nguyên tắc vàng về an toàn vệ sinh thực phẩm tại gia đình

Để chủ động phòng chống ngộ độc thực phẩm do botulism, việc tuân thủ các nguyên tắc an toàn vệ sinh thực phẩm là biện pháp hiệu quả nhất. Đối với các sản phẩm đóng hộp công nghiệp, cần kiểm tra kỹ bao bì trước khi sử dụng; loại bỏ ngay những hộp bị phồng, gỉ sét, móp méo hoặc có dịch chảy ra. Đối với thực phẩm đóng hộp tự làm tại nhà (pate, thịt hộp, rau củ ngâm...), quá trình thanh trùng phải được thực hiện bằng nồi áp suất để đạt nhiệt độ trên 121°C nhằm tiêu diệt bào tử Clostridium botulinum. Một biện pháp an toàn bổ sung cực kỳ quan trọng là đun sôi kỹ các loại thực phẩm này trong ít nhất 10 phút trước khi ăn, vì độc tố botulinum không bền với nhiệt và sẽ bị phá hủy. Không nên nếm thử thực phẩm nghi ngờ để kiểm tra. Đặc biệt, không cho trẻ em dưới 1 tuổi sử dụng mật ong dưới mọi hình thức để phòng ngừa ngộ độc botulism ở trẻ sơ sinh. Lựa chọn thực phẩm từ các nhà sản xuất uy tín, có quy trình kiểm soát chất lượng rõ ràng cũng là một yếu tố quan trọng.

5.2. Vai trò của huyết thanh kháng độc tố BAT trong điều trị

Huyết thanh kháng độc tố, hay Botulinum Antitoxin (BAT), là liệu pháp cứu mạng duy nhất cho bệnh nhân ngộ độc botulism. BAT là một chế phẩm sinh học chứa các kháng thể tinh chế có khả năng liên kết và trung hòa độc tố botulinum đang tự do trong hệ tuần hoàn. Việc sử dụng BAT sớm sẽ ngăn chặn độc tố gắn vào các tế bào thần kinh mới, từ đó chặn đứng sự tiến triển của tình trạng liệt cơ. Tuy nhiên, BAT không thể đảo ngược các tổn thương đã xảy ra; những đầu mút thần kinh đã bị độc tố bất hoạt cần thời gian để tự tái tạo. Do đó, hiệu quả điều trị phụ thuộc rất lớn vào việc chẩn đoán và sử dụng kháng độc tố sớm nhất có thể. Bệnh nhân vẫn cần các biện pháp chăm sóc hỗ trợ tích cực, bao gồm thở máy nếu có dấu hiệu liệt cơ hô hấp, dinh dưỡng qua ống thông và vật lý trị liệu để phục hồi chức năng cơ bắp trong quá trình hồi phục kéo dài.

5.3. Từ độc tố chết người đến ứng dụng thẩm mỹ với Botox

Mặc dù là độc tố tự nhiên mạnh nhất, độc tố botulinum lại có một ứng dụng đáng ngạc nhiên và phổ biến trong lĩnh vực y tế và thẩm mỹ. Botox là tên thương mại của Botulinum Toxin Type A, được tinh chế và sử dụng ở liều lượng cực nhỏ, được kiểm soát chặt chẽ. Khi được tiêm vào một cơ cụ thể, Botox hoạt động theo đúng cơ chế gây bệnh của botulinum: ngăn chặn giải phóng Acetylcholine và làm cơ đó tạm thời bị liệt hoặc yếu đi. Trong thẩm mỹ, tác dụng này được khai thác để làm giãn các cơ gây ra nếp nhăn động trên khuôn mặt, giúp làm mờ nếp nhăn và trẻ hóa làn da. Trong y học, Botox được sử dụng để điều trị nhiều tình trạng bệnh lý liên quan đến co cơ không kiểm soát như lác mắt, co thắt mi mắt, co cứng cơ sau đột quỵ, chứng đau nửa đầu mạn tính và tăng tiết mồ hôi. Sự chuyển đổi từ một chất độc chết người thành một liệu pháp điều trị hiệu quả cho thấy sự kỳ diệu của khoa học dược phẩm.

VI. Tương lai nghiên cứu C

Nghiên cứu về độc tố vi khuẩn Clostridium botulinum tại Việt Nam đang mở ra những hướng đi mới đầy hứa hẹn. Việc phân lập và xác định thành công các chủng vi khuẩn bản địa không chỉ có ý nghĩa khoa học mà còn là cơ sở để phát triển các công cụ chẩn đoán nhanh và chính xác hơn. Mục tiêu trong tương lai gần là xây dựng các bộ kit chẩn đoán dựa trên kỹ thuật sinh học phân tử như LAMP, giúp phát hiện nhanh gen độc tố ngay tại hiện trường hoặc các phòng xét nghiệm tuyến cơ sở. Song song đó, việc có được chủng vi khuẩn mang độc tố là tiền đề quan trọng cho các nghiên cứu sản xuất huyết thanh kháng độc tố (botulinum antitoxin) ngay trong nước, giúp Việt Nam chủ động hơn trong việc điều trị các ca ngộ độc, giảm sự phụ thuộc vào nguồn thuốc nhập khẩu hiếm và đắt đỏ. Tuy nhiên, công nghệ và nghiên cứu chỉ là một phần của giải pháp. Yếu tố quan trọng nhất vẫn là nâng cao nhận thức của cộng đồng về phòng chống ngộ độc thực phẩm, từ người sản xuất đến người tiêu dùng, để giảm thiểu rủi ro ngộ độc botulism và đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm một cách bền vững.

6.1. Tổng kết các kết quả nghiên cứu phân lập tại Việt Nam

Nghiên cứu “Phân lập và xác định độc tố vi khuẩn Clostridium botulinum gây bệnh ngộ độc thịt” của Lê Thị Trang (2022) đã đạt được những thành tựu đáng ghi nhận. Lần đầu tiên, các chủng C. botulinum mang gen độc tố A và B đã được phân lập thành công từ mẫu thực phẩm gây ngộ độc (Pate Minh Chay) và mẫu môi trường tại Việt Nam. Các chủng này đã được định danh chính xác bằng cả phương pháp sinh hóa và sinh học phân tử. Kết quả này không chỉ cung cấp bằng chứng khoa học xác thực cho các vụ ngộ độc mà còn tạo ra một nguồn tài nguyên vô giá: bộ sưu tập chủng vi khuẩn bản địa. Bộ chủng này sẽ đóng vai trò là chủng đối chứng chuẩn cho việc phát triển và thẩm định các quy trình xét nghiệm Clostridium botulinum, đồng thời là vật liệu khởi đầu cho các nghiên cứu sản xuất vắc xin hoặc kháng độc tố trong tương lai. Đây là một bước tiến quan trọng, đặt nền móng cho việc nghiên cứu và kiểm soát bệnh ngộ độc botulism tại Việt Nam.

6.2. Hướng phát triển bộ kit chẩn đoán và sản xuất antitoxin

Một trong những định hướng ứng dụng cấp thiết từ kết quả nghiên cứu là phát triển các công cụ chẩn đoán nhanh. Luận văn này được tài trợ bởi một đề tài nghiên cứu sản xuất bộ kit LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) để phát hiện nhanh gen độc tố. LAMP là một kỹ thuật khuếch đại DNA đẳng nhiệt, có ưu điểm là nhanh, đơn giản, không yêu cầu máy luân nhiệt phức tạp như PCR, phù hợp để triển khai tại các phòng xét nghiệm có nguồn lực hạn chế. Về lâu dài, việc làm chủ công nghệ sản xuất huyết thanh kháng độc tố là một mục tiêu chiến lược. Quá trình này bao gồm việc nuôi cấy vi khuẩn để thu độc tố, giải độc tố để tạo toxoid, sau đó gây miễn dịch cho động vật (thường là ngựa) để tạo ra kháng thể, và cuối cùng là tinh chế kháng thể để tạo ra botulinum antitoxin. Việc tự chủ được nguồn cung antitoxin sẽ giúp giảm giá thành điều trị và đảm bảo sẵn có thuốc trong các tình huống khẩn cấp, cải thiện đáng kể khả năng ứng phó với các vụ ngộ độc.

6.3. Nâng cao nhận thức về phòng chống ngộ độc thực phẩm

Bên cạnh các giải pháp khoa học công nghệ, giáo dục và truyền thông cộng đồng đóng vai trò không thể thiếu trong chiến lược phòng chống ngộ độc thực phẩm. Cần tăng cường phổ biến kiến thức cho người dân về nguy cơ của ngộ độc botulism, các loại thực phẩm rủi ro cao (đặc biệt là thực phẩm đóng hộp, xúc xích, lạp xưởng, pate tự làm) và các biện pháp phòng ngừa đơn giản nhưng hiệu quả. Các thông điệp chính cần được nhấn mạnh bao gồm: “Ăn chín, uống sôi”, thực hành tốt an toàn vệ sinh thực phẩm trong chế biến và bảo quản, không sử dụng sản phẩm có bao bì bị hư hỏng, và đun sôi kỹ thực phẩm đóng hộp trước khi ăn. Các cơ quan quản lý cần tăng cường giám sát, kiểm tra các cơ sở sản xuất thực phẩm, đặc biệt là các hộ kinh doanh nhỏ lẻ, để đảm bảo tuân thủ các quy định về an toàn thực phẩm. Sự kết hợp đồng bộ giữa nghiên cứu khoa học, năng lực y tế và nhận thức cộng đồng sẽ tạo ra một hàng rào vững chắc bảo vệ sức khỏe người dân trước hiểm họa từ độc tố botulinum.

Nội dung chính

This request was blocked by Gemini's filters. They can occasionally trigger by mistake on safe coding, security, or biology-related queries. Please try rephrasing your prompt. You can send feedback or read more about our policies here.

Trích đoạn nội dung tài liệu

MỞ ĐẦU Nha bào vi khuẩn Clostridium botulinum (C. botulinum) có ở trong mật ong, đất có thể là nguồn lây nhiễm vi khuẩn vào thực phẩm và gây ra bệnh ngộ độc thịt. Nhiều nước trên thế giới (Mỹ, Nhật, Đức, Braxin, Thái Lan) đã có báo cáo hàng năm về số liệu ca bệnh ngộ độc thịt. Trung bình mỗi năm ở Mỹ có 70-100 trường hợp ngộ độc thịt được báo cáo, trong số đó khoảng 25% ca bệnh ngộ độc thịt do thực phẩm và 72% ca bệnh ngộ độc thịt ở trẻ sơ sinh [42,45].

Từ năm 1976 đến nay, trên 1500 ca bệnh ngộ độc thịt trẻ em được báo cáo ở hơn 15 quốc gia. Tuy nhiên hiện Việt Nam chỉ có 1 chùm ca bệnh được báo cáo gần đây là vào tháng 9/2020 tại Hà Nội và tháng 3/2021 đều do ngộ độc pate chay. Điều này có thể do thiếu sự quan tâm của các bác sĩ lâm sàng cũng như các nhà nghiên cứu vi sinh học. Thêm vào đó, vi khuẩn C.

botulinum là vi khuẩn kỵ khí tuyệt đối, khó nuôi cấy phân lập. Vi khuẩn này sinh độc tố thần kinh được xem là một trong những độc tố mạnh nhất vì thế nó được xếp vào danh sách tác nhân nguy hiểm nhóm A và bị nghi ngờ sử dụng làm vũ khí sinh học nên nó lại càng khó khăn hơn trong việc đặt mua hoặc chia sẻ chủng vi khuẩn từ các hãng hay tổ chức nghiên cứu quốc tế. Các cơ sở nghiên cứu, bệnh viện, trường học không có chứng dương để tiến hành các nghiên cứu, xét nghiệm chẩn đoán vi khuẩn này, vì vậy nghiên cứu về bệnh ngộ độc thịt tại Việt Nam hầu như bị quên lãng. Bộ Y tế Việt Nam có ban hành các tiêu chuẩn việt nam (TCVN) liên quan đến chẩn đoán vi khuẩn và độ tố vi khuẩn C.

botulinum bằng kỹ thuật PCR và Elisa [4,5,6] nhưng trên thực tế không có chứng dương để xác nhận phương pháp. Dựa vào tình hình thực tiễn trên, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài “Phân lập và xác định độc tố vi khuẩn C. botulinum gây bệnh ngộ độc thịt” với các mục tiêu nghiên cứu sau: 1. Nuôi cấy phân lập chủng vi khuẩn kỵ khí C.

botulinum từ mẫu môi trường và thực phẩm. Xác định độc tố C. botulinum bằng kĩ thuật PCR và giải trình tự gen. 1 CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan về bệnh ngộ độc thịt 1.1 Nguồn gốc và đặc điểm bệnh ngộ thịt Bệnh ngộ độc thịt – tên tiếng Anh là “Botulism” – bắt nguồn từ tiếng La tinh “botulus” có nghĩa là “xúc xích” do những ca bệnh đầu tiên phát hiện ở châu Âu có liên quan đến xúc xích sản xuất tại nhà.

Tên “botulism” – bệnh ngộ độc thịt có tầm quan trọng về mặt lịch sử nhưng không phản ánh hết nguồn gốc sinh bệnh vì ngày nay nhiều sản phẩm gây bệnh có nguồn gốc thực vật chứ không phải chỉ ở động vật. Bệnh ngộ độc thịt do độc tố (botulin) của trực khuẩn kỵ khí Clostridum botulinum (C. botulinum) gây ra. Độc tố này thuộc loại độc tố thần kinh và là độc tố độc nhất trong các loại độc tố đã biết.

Độc tố có thể xâm nhập vào cơ thể qua đường tiêu hóa, qua niêm mạc mắt hoặc niêm mạc đường hô hấp. Sau khi vào cơ thể, độc tố thẩm thấu vào hệ thống tuần hoàn và hệ thống lympho sau đó đến dây thần kinh vận động, gắn không hồi phục vào các đầu mút (receptor) hòa màng của túi Acetycholin và màng cúc tận cùng, ngăn chặn sự giải phóng chất dẫn truyền Acetylcholine từ các đầu dây thần kinh, cắt đứt các dẫn truyền thần kinh, giao tiếp giữa các tế bào thần kinh không được thực hiện, gây liệt các cơ như cơ vận động, cơ hô hấp [24,36]. Độc tố ngộ độc thịt gồm 7 loại (A, B, C, D, E, E, G) gây liệt phản hồi theo cơ chế ức chế sự phóng thích acetylcholine tại các đầu nối thần kinh – cơ, nhưng chúng lại không giống nhau về vị trí gắn kết trên tế bào thần kinh tạo mức độ ức chế giải phóng acetylcholin khác nhau do vậy mức độ biểu hiện bệnh là khác nhau. Chính vì vậy, mức độ nặng nhẹ và thời gian phục hồi của bệnh phụ thuộc vào loại độc tố và lượng độc tố mà bệnh nhân hấp thu vào máu.

Bệnh tuy hiếm gặp nhưng thuộc loại bệnh tiến triển cấp tính nên cần chẩn đoán và điều trị kịp thời. 2 Hình 1: Cơ chế dẫn truyền thần kinh ở khe synap và cơ chế cắt đứt dẫn truyền thần kinh do botulin (nguồn: https://en.org/wiki/Botulinum_toxin) Triệu chứng lâm sàng điển hình của tất cả các dạng bệnh ngộ độc thịt bao gồm liệt cơ thần kinh trung ương như hiện tượng song thị và giãn đồng tử, chứng loạn vận ngôn, khô miệng, khó nuốt và liệt mặt. Các độc tố này gây liệt mềm nhanh chóng ở người và động vật bằng cách gắn vào đầu mút thần kinh, nếu không điều trị kịp thời sẽ liệt cơ hô hấp và dẫn đến tử vong [36]. Độc tố ngộ độc thịt là một protein lớn có trọng lượng phân tử 150 kDa với hoạt tính của enzym zinc- endopeptidase, gồm 2 tiểu đơn vị là 1 chuỗi nặng và 1 chuỗi nhẹ.

Chuỗi nặng trọng lượng 100 kDa là chuỗi có thụ thể đặc hiệu cho độc tố gắn vào và vận chuyển qua màng synap. Chuỗi nhẹ có trọng lượng 50 kDa có vai trò chính trong việc thay đổi cấu trúc protein liên quan tới việc hợp nhất thành màng tiền synap và giải phóng chất dẫn truyền thần kinh acetylcholine. Phân tử độc tố được tiết ra nguyên bản có chứa cả cấu phần độc tố cũng như cấu phần không độc tố. Cấu phần không độc tố bảo vệ cấu phần độc tố khỏi áp lực môi trường và hỗ trợ cấu phần độc tố thẩm thấu vào cơ thể.

Độc tố chịu được nhiệt độ thấp nhưng lại mất hoạt tính ở nhiệt độ cao và môi trường kiềm. Độc tố bị bất hoạt (mất hoạt tính) nếu 3 phơi nhiễm với ánh sáng mặt trời trong vài giờ. Độc tố có thể bị phá hủy khi xử lí với sodium hypoclorit (NaClO) 0,1% hoặc Sodium Hydroxide (NaOH) 0,1N. Độc tố bị phá hủy ở nhiệt độ 500C/30 phút hoặc 800C/20 phút hoặc >850C ít nhất 5 phút.

Tuy nhiên độc tố lại không bị phân hủy trong môi trường a xít của dạ dày hay dưới tác dụng của các enzym tiêu hóa (pepsin, tripsin). Sự đề kháng với nhiệt của chúng rất khác nhau phụ thuộc vào thành phần thức ăn hoặc môi trường và nồng độ độc tố [35,36]. Hình 2: Mô hình chuỗi nặng và chuỗi nhẹ độc tố bolulinum (nguồn: https://en.org/wiki/Botulinum_toxin) Liều lượng gây độc của độc tố botulinum phụ thuộc vào loại độc tố và đường lây nhiễm. Liều lượng gây chết người của độc tố botulinum chưa được biết nhưng có thể được ước tính thông qua các nghiên cứu về linh trưởng, người ta ước tính, liều gây chết 50% quần thể thử nghiệm (LD50) của độc tố botulin qua đường hít thở và đường uống là 1 – 3ng/kg thể trạng, còn nếu qua được tiêm tĩnh mạch thì chỉ từ 0.5ng/kg thể trạng [35].2 Các dạng bệnh ngộ độc thịt Bệnh ngộ độc thịt có 3 dạng phổ biến là bệnh ngộ độc thịt lây truyền qua thực phẩm, bệnh ngộ độc thịt ở trẻ sơ sinh và bệnh ngộ độc thịt vết thương [36,37,39].1 Bệnh ngộ độc thịt lây truyền qua thực phẩm (foodborne botulism) 4 Là hình thức phổ biến nhất được quan sát thấy trên toàn thế giới, do ăn phải thức ăn có chứa độc tố thần kinh.

Thức ăn có nha bào C. botulinum sống sót sau khi chế biến, sau đó gặp điều kiện thuận lợi sẽ nảy mầm, sinh trưởng và tạo ra độc tố. Vì thế các thực phẩm đóng hộp hoặc đóng chai (có hàm lượng oxy thấp) được sản xuất tại nhà không được chế biến kỹ lưỡng, bảo quản ở nhiệt độ thấp là những thực phẩm có tiềm năng gây bệnh ngộ độc thịt cao [45]. botulinum không phát triển trong điều kiện axit (pH nhỏ hơn 4,6), do đó độc tố sẽ không được hình thành trong thực phẩm có tính axit (tuy nhiên, độ pH thấp sẽ không phân hủy được độc tố hình thành từ trước).

Sự kết hợp giữa nhiệt độ bảo quản thấp và hàm lượng muối và/hoặc pH cũng được sử dụng để ngăn ngừa sự phát triển của vi khuẩn hoặc sự hình thành độc tố trong thực phẩm [45]. Độc tố botulinum được tìm thấy trong nhiều loại thực phẩm, bao gồm các loại rau củ muối bảo quản bằng nồng độ axit thấp, chẳng hạn như đậu xanh, rau bina, nấm và củ cải đường; cá, bao gồm cá ngừ đóng hộp, cá lên men, ướp muối và hun khói; và các sản phẩm thịt, chẳng hạn như giăm bông và xúc xích [8,15]. Bệnh ngộ độc thịt lây truyền qua thực phẩm đặc trưng bởi tình trạng người bệnh tê liệt từ trên cao xuống thấp (liệt từ mặt lan dần xuống các chi), toàn thân tê liệt, sức co cơ bằng 0, cơ thể như bị tiêm thuốc giãn cơ quá liều nhưng đầu óc vẫn hoàn toàn tỉnh táo. Liệt mềm ở cơ hô hấp có thể khiến bệnh nhân khó/không nuốt được, không thở được, mức oxy bão hòa trong máu thấp gây suy hô hấp khiến bệnh nhân tử vong.

Các triệu chứng ban đầu bao gồm mệt mỏi, suy nhược và chóng mặt, sau đó thường là mờ mắt, khô miệng, khó nuốt và khó nói. Nôn mửa, tiêu chảy, táo bón, chướng bụng cũng có thể xảy ra. Bệnh có thể tiến triển thành yếu ở cổ và cánh tay, sau đó các cơ hô hấp và cơ vùng hạ vị bị ảnh hưởng. Không sốt và không mất ý thức.

Các triệu chứng thường xuất hiện trong vòng 12 đến 36 giờ sau khi tiếp xúc [45]. Tỷ lệ bệnh ngộ độc thịt thấp, nhưng tỷ lệ tử vong cao nếu không được chẩn đoán kịp thời và điều trị thích hợp. Bệnh có thể gây tử vong trong 5 đến 10% trường hợp.2 Bệnh ngộ độc thịt tr s sinh Thường do C. botulinum nhóm I, độc tố loại A, B, Bf và F.

Bệnh thường xảy ra ở trẻ sơ sinh dưới 6 tháng tuổi khi trẻ nuốt phải nha bào C. botulinum, sau đó nha bào đã nảy mầm và phát triển sản sinh độc tố trong ruột già. Ở hầu hết người lớn và trẻ em trên 6 tháng tuổi, điều này không xảy ra vì hệ thống phòng thủ tự nhiên của cơ thể giúp ngăn chặn sự nảy mầm và phát triển của nha bào C. Bệnh ngộ độc thịt trẻ em gây nôn mửa, táo bón, chán ăn, suy nhược cơ thể, cơ không phát triển, khóc yếu.

Nếu không được chữa trị kịp thời, những triệu chứng này có thể phát triển gây tê liệt cánh tay, chân và cơ hô hấp [45].