Nghiên cứu tách dòng và biểu hiện gene kháng nguyên bề mặt Trypanosoma evansi trên trâu tại Tuyên Quang

LỜI CẢM ƠN

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH

DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT

1. PHẦN 1: MỞ ĐẦU

1.1. Tính cấp thiết của đề tài

1.2. Mục tiêu của đề tài

1.3. Điểm mới của đề tài

1.4. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

1.4.1. Ý nghĩa khoa học

1.4.2. Ý nghĩa thực tiễn

2. PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1. Tiên mao trùng và bệnh tiên mao trùng ở gia súc

2.2. Đặc điểm hình thái, cấu trúc và phân loại tiên mao trùng

2.2.1. Vị trí của tiên mao trùng Trypanosoma trong hệ thống phân loại động vật nguyên sinh

2.2.2. Đặc điểm hình thái, cấu tạo của tiên mao trùng

2.2.3. Cấu trúc kháng nguyên của tiên mao trùng Trypanosoma evansi

2.2.3.1. Kháng nguyên ổn định (kháng nguyên không biến đổi)

2.2.3.2. Kháng nguyên biến đổi

2.2.3.3. Cơ chế di truyền của kháng nguyên biến đổi

2.3. Dịch tễ học bệnh tiên mao trùng

2.3.1. Phân bố của bệnh

2.3.2. Vật chủ và vật môi giới truyền bệnh tiên mao trùng

3. PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1. Sinh phẩm trong nghiên cứu

3.2. Thiết bị và dụng cụ nghiên cứu

3.3. Môi trường và hóa chất

3.4. Cặp mồi dùng trong nghiên cứu

3.5. Địa điểm, thời gian nghiên cứu

3.6. Nội dung nghiên cứu

3.6.1. Nghiên cứu các điều kiện tách dòng gene mã hóa kháng nguyên bề mặt của Trypanosoma evansi

3.6.2. Nghiên cứu biểu hiện gene mã hóa kháng nguyên bề mặt của Trypanosoma evansi

3.7. Phương pháp nghiên cứu

3.7.1. Tách chiết ADN từ ký sinh trùng Trypanosoma evansi

3.7.2. Phương pháp điện di trên gel agarose

3.7.3. Khuếch đại đoạn gene mã hóa kháng nguyên RoTAT 1.2 bằng phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction)

3.7.4. Phương pháp tinh sạch ADN không sử dụng gel agarose

3.7.5. Phương pháp nối gene

3.7.6. Phương pháp tạo tế bào khả biến

3.7.7. Phương pháp chuyển ADN tái tổ hợp mang đoạn gene RoTAT 1.2 vào tế bào khả biến (biến nạp)

3.7.8. Phương pháp tách plasmid

3.7.9. Phương pháp cắt bằng enzyme giới hạn

3.7.10. Phương pháp tinh sạch ADN bằng gel agarose

3.7.11. Phương pháp điện di gel SDS-PAGE

3.7.12. Phương pháp biểu hiện protein T4 trong E.

3.7.13. Phương pháp Western blot

4. PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.1. Tách dòng và xác định trình tự gene mã hóa kháng nguyên bề mặt RoTAT 1.2 của Trypanosoma evansi

4.2. Kết quả biểu hiện gene mã hóa kháng nguyên của T.

5. PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

5.1. Kết quả tách dòng và xác định trình tự gene mã hóa kháng nguyên bề mặt RoTAT 1.2 của Trypanosoma evansi

5.2. Kết quả biểu hiện gene mã hóa kháng nguyên bề mặt của T.

TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Giới thiệu và tính cấp thiết của nghiên cứu

Nghiên cứu tập trung vào việc tách dòng và biểu hiện gene mã hóa kháng nguyên bề mặt của Trypanosoma evansi, một loại ký sinh trùng gây bệnh trên trâu tại Tuyên Quang. Trypanosoma evansi là tác nhân chính gây bệnh tiên mao trùng, ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe gia súc và nền kinh tế nông nghiệp. Việc nghiên cứu này nhằm mục đích tạo ra các công cụ chẩn đoán hiệu quả, đặc biệt là Kit chẩn đoán dựa trên kháng nguyên RoTAT 1.2, giúp phát hiện sớm và kiểm soát bệnh. Nghiên cứu này có ý nghĩa khoa học và thực tiễn lớn, góp phần vào việc bảo vệ sức khỏe động vật và phát triển công nghệ sinh học trong lĩnh vực thú y.

1.1. Mục tiêu nghiên cứu

Mục tiêu chính của nghiên cứu là xác định gene mã hóa kháng nguyên bề mặt của Trypanosoma evansi và tạo ra tế bào chủ biểu hiện gene này. Điều này sẽ cung cấp nền tảng cho việc sản xuất kháng nguyên tái tổ hợp, phục vụ cho việc chế tạo các Kit chẩn đoán bệnh tiên mao trùng. Nghiên cứu cũng hướng đến việc cải thiện độ nhạy và độ đặc hiệu của các phương pháp chẩn đoán hiện có.

1.2. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn

Nghiên cứu này có ý nghĩa khoa học lớn khi cung cấp hiểu biết sâu hơn về cấu trúc gene và kháng nguyên của Trypanosoma evansi. Về mặt thực tiễn, kết quả nghiên cứu sẽ là cơ sở để phát triển các Kit chẩn đoán hiệu quả, giúp kiểm soát và phòng ngừa bệnh tiên mao trùng trên trâu và các gia súc khác, đặc biệt là tại các vùng nông thôn và miền núi như Tuyên Quang.

II. Tổng quan về Trypanosoma evansi và bệnh tiên mao trùng

Trypanosoma evansi là một loại ký sinh trùng đơn bào, gây bệnh tiên mao trùng trên gia súc, đặc biệt là trâu và bò. Bệnh này phân bố rộng rãi ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới, gây thiệt hại lớn về kinh tế và sức khỏe động vật. Trypanosoma evansi có khả năng biến đổi kháng nguyên bề mặt, giúp chúng né tránh hệ thống miễn dịch của vật chủ. Điều này làm cho việc chẩn đoán và điều trị bệnh trở nên phức tạp. Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích cấu trúc gene và kháng nguyên của Trypanosoma evansi, nhằm tìm ra các phương pháp chẩn đoán và phòng ngừa hiệu quả hơn.

2.1. Đặc điểm hình thái và cấu trúc

Trypanosoma evansi có cấu trúc đơn bào, với kích thước nhỏ và hình dạng thon dài. Cơ thể của chúng được bao phủ bởi một lớp kháng nguyên bề mặt (VSG), có khả năng biến đổi để né tránh hệ thống miễn dịch của vật chủ. Cấu trúc gene của Trypanosoma evansi chứa nhiều gene mã hóa cho các loại kháng nguyên khác nhau, giúp chúng thích nghi và tồn tại trong môi trường ký sinh.

2.2. Dịch tễ học và phân bố bệnh

Bệnh tiên mao trùng do Trypanosoma evansi gây ra phân bố rộng rãi ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới, đặc biệt là ở châu Á, châu Phi và Nam Mỹ. Tại Việt Nam, bệnh xuất hiện ở nhiều vùng sinh thái khác nhau, từ miền núi đến đồng bằng. Trâu và bò là những vật chủ chính của bệnh này, với tỷ lệ nhiễm cao ở các vùng miền núi phía Bắc như Tuyên Quang.

III. Phương pháp nghiên cứu và kết quả

Nghiên cứu sử dụng các phương pháp sinh học phân tử để tách dòng và biểu hiện gene mã hóa kháng nguyên bề mặt của Trypanosoma evansi. Quá trình bao gồm việc tách chiết ADN, khuếch đại gene bằng PCR, và tạo ra các vector tái tổ hợp để biểu hiện gene trong tế bào chủ. Kết quả nghiên cứu cho thấy việc tách dòng và biểu hiện gene RoTAT 1.2 thành công, mở ra tiềm năng lớn trong việc sản xuất các Kit chẩn đoán bệnh tiên mao trùng.

3.1. Tách dòng gene

Quá trình tách dòng gene bao gồm việc tách chiết ADN từ Trypanosoma evansi, sau đó khuếch đại gene RoTAT 1.2 bằng phương pháp PCR. Gene này sau đó được chèn vào vector tái tổ hợp và biến nạp vào tế bào chủ để biểu hiện. Kết quả cho thấy gene RoTAT 1.2 được tách dòng thành công, tạo cơ sở cho các nghiên cứu tiếp theo.

3.2. Biểu hiện gene và ứng dụng

Gene RoTAT 1.2 được biểu hiện thành công trong tế bào chủ, tạo ra kháng nguyên tái tổ hợp có khả năng phát hiện đặc hiệu Trypanosoma evansi. Kết quả này mở ra tiềm năng lớn trong việc sản xuất các Kit chẩn đoán bệnh tiên mao trùng, giúp cải thiện hiệu quả chẩn đoán và kiểm soát bệnh trên gia súc.

Luận Văn Thạc Sĩ: Tách Dòng và Biểu Hiện Gene Kháng Nguyên Bề Mặt Trypanosoma Evansi Trên Trâu Ở Tuyên Quang