HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM PHẠM TRUNG TRỰC NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ỨC CHẾ VI KHUẨN IN VITRO VÀ ỨNG DỤNG ĐIỀU TRỊ BỆNH VIÊM TỬCUNG BÒ CỦA NANO BẠC VÀ DỊCH CHIẾT CÂY SÀI ĐẤT WEDELIA CHINENSIS (OSBECK) MERR Chuyên ngành: Thú Y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: 1. Nguyễn Thanh Hải 2. Nguyễn Văn Thanh NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP- 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa hề được công bố trong bất cứ công trình nghiên cứu nào khác. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn, tài liệu tham khảo đều được chỉ rõ nguồn gốc trong danh mục tài liệu tham khảo của luận văn.
Hà Nội, ngày 09 tháng 7 năm 2017 Tác giả luận văn Phạm Trung Trực i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, ngoài sự nỗ lực thực sự của bản thân, tôi đã luôn nhận được sự giúp đỡ, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo trong Khoa Thú y, Khoa Công nghệ sinh học, Ban quản lý đào tạo - Học viện Nông nghiệp Việt Nam. Tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới hai thầy hướng dẫn khoa học PGS. Nguyễn Văn Thanh, PGS. Ngyễn Thanh Hải đã tận tình giúp đỡ, chỉ bảo và hướng dẫn tôi trong quá trình nghiên cứu và hoàn thiện luận văn.
Tôi xin chân thành cảm ơn sự quan tâm của ban lãnh đạo, các thầy cô giáo trong bộ môn Ngoại Sản - Khoa thú y, bộ môn Công nghệ sinh học thực vật – Khoa Công nghệ sinh học; tập thể cán bộ, kỹ thuật viên phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Sinh học Thú y đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài nghiên cứu. Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân, bạn bè, những người luôn tạo điều kiện, động viên, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày 09 tháng 7 năm 2017 Tác giả luận văn Phạm Trung Trực ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục.
iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng .vii Danh mục hình ảnh .viii Trích yếu luận văn. ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài.
Mục đích của đề tài. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn. Tổng quan tài liệu. Tình hình phát triển chăn nuôi bò sữa trên thế giới và tại việt nam.
Hiện tượng kháng thuốc của vi khuẩn và tồn dư kháng sinh trong sản phẩm chăn nuôi. Hiện tượng kháng thuốc của vi khuẩn. Vấn đề tồn dư kháng sinh trong sản phẩm chăn nuôi. Bệnh viêm tử cung ở bò.
Một số yếu tố ảnh hưởng đến bệnh viêm tử cung ở bò sữa. Nano bạc và các ưng dụng trong phòng và trị bệnh. Tình hình nghiên cứu và sử dụng sản phẩm thảo dược trên thế giới và việt Nam. Tình hình nghiên cứu và sử dụng sản phẩm thảo dược trên thế giới.
Tình hình nghiên cứu và sử dụng sản phẩm thảo dược ở Việt Nam. Cây sài đất (Wedelia calendulaceae less. Nguồn gốc phân loại. Bộ phận dùng.
Tác dụng và sử dụng theo y học cổ truyền. 24 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Thành phần hóa học. Tổng quan nghiên cứu về tác dụng cây Sài đất.
Đối tượng, nội dung và phương pháp nghiên cứu. Địa điểm và thời gian nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu. Cao khô dược liệu Sài đất.
Vi khuẩn nghiên cứu. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất thí nghiệm. Nội dung nghiên cứu. Phương pháp nghiên cứu.
Kết quả và thảo luận. Tỷ lệ mắc bệnh viêm tử cung trên bò sữa ở một số địa phương thuộc huyện vĩnh tường tỉnh vĩnh phúc. Kết quả phân lập và giám định thành phần vi khuẩn trong dịch tử cung của bò sữa. Kết quả xác định sự biến đổi về tổng số vi khuẩn hiếu khí có trong dịch tử cung của bò sữa.
Kết quả xác định sự biến đổi về thành phần vi khuẩn hiếu khí có trong dịch viêm tử cung của bò sữa. Đánh giá hiệu suất và định tính các nhóm chất trong cao khô dịch chiết sài đất sử dụng các dung môi tách chiết khác nhau. Hiệu suất tách chiết cao khô dịch chiết Sài đất sử dụng các dung môi tách chiết khác nhau. Định tính xác định một số nhóm hoạt chất hòa tan trong cao khô dịch chiết lá Sài đất bằng phương pháp hóa học.
Đánh giá khả năng ức chế vi khuẩn in vitro của cao dịch chiết trong các dung môi khác nhau với vi khuẩn phân lập từ dịch viêm tử cung bò. Khả năng ức chế in vitro của cao khô dịch chiết sử dụng các dung môi khác nhau trên vi khuẩn Staphylococcus spp phân lập từ dịch viêm tử cung bò. 46 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Khả năng ức chế in vitro của cao khô dịch chiết sử dụng các dung môi khác nhau trên vi khuẩn Streptococcus spp phân lập từ dịch viêm tử cung bò.
Khả năng ức chế in vitro của cao khô dịch chiết sử dụng dung môi ethanol 70% trên vi khuẩn phân lập từ dịch viêm tử cung bò khi pha loãng. Đánh giá khả năng ức chế vi khuẩn Streptococcus spp. và Staphylococcus spp. của nano bạc.
Đánh giá tác dụng ức chế vi khuẩn in vitro khi phối hợp Nano bạc và cao dịch chiết. Sử dụng cao dịch chiết sai dất kết hợp với nano bạc dể diều trị thử nghiệm bo bị viêm tử cung. Kết luận và kiến nghị. 61 Tài liệu tham khảo.
62 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 1. DMSO – Dimethyl Sulfoxide vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 4. Tỷ lệ bò sữa mắc bệnh viêm tử cung ở một số địa phương thuộc huyện Vĩnh Tường tỉnh Vĩnh Phúc. Tổng số vi khuẩn hiếu khí có trong dịch tử cung của bò.
Tần suất xuất hiện của một số vi khuẩn hiếu khí trong dịch tử cung. Hiệu suất tách chiết Sài đất trong các loại dung môi khác nhau nhau. Kết quả định tính sơ bộ thành phần hóa học của cao khô dịch chiết Sài đất sử dụng dung môi khác nhau. Khả năng ức chế in vitro của cao khô dịch chiết Sài đất trong các dung môi khác nhau với vi khuẩn Staphylococcus spp.
Khả năng ức chế in vitro của cao khô dịch chiết Sài đất trong các dung môi khác nhau với vi khuẩn Streptococcus spp. Khả năng ức chế vi khuẩn khi pha loãng cao khô dịch chiết dược liệu Sài đất. Kết quả khảo sát hoạt tính diệt khuẩn in vitro của dung dịch nano bạc đối với vi khuẩn Streptococcus spp. Và Staphylococcus spp.
Khả năng ức chế vi khuẩn khi pha loãng cao khô dịch chiết dược liệu Sài đất (sử dụng dung môi ethanol 70%) phối hợp với nano bạc. Kết quả thử nghiệm điều trị bò mắc bệnh viêm tử cung .57 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 4. Biểu đồ tỷ lệ bò sữa mắc bệnh viêm tử cung ở một số địa phương thuộc huyện Vĩnh Tường tỉnh Vĩnh Phúc. Màu sắc dịch chiết và cao dịch chiết sài đất khi sử dụng các dung môi khác nhau.
Hiệu suất tách chiết Sài đất sử dụng các loại dung môi khác nhau. Phản ứng định tính xác định các nhóm hoạt chất có trong cao dịch chiết lá Sài đất. Khả năng ức chế in vitro của cao khô dịch chiết sử dụng các dung môi khác nhau với vi khuẩn Staphylococcus spp. Khả năng ức chế in vitro của cao khô dịch chiết sử dụng các dung môi khác nhau với vi khuẩn Streptococcus spp.
Tác dụng ức chế vi khuẩn in vitro của Nano bạc khi pha loãng. So sánh khả năng ức chế vi khuẩn in vitro của cao dịch chiết có và không bổ sung nano bạc. Kết quả điều trị thử nghiệm trên bò mắc bệnh viêm tử cung. 58 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Phạm Trung Trực Tên luận văn: “Nghiên cứu tác dụng ức chế vi khuẩn in vitro và ứng dụng điều trị bệnh viêm tử cung bò của nano bạc và dịch chiết cây Sài đất Wedelia Chinensis (Osbeck) Merr”.
Ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: Đánh giá được thực trạng tỷ lệ bò mắc bệnh viêm tử cung trên địa bàn một số địa phương thuộc huyện Vĩnh Tường, Tỉnh Vĩnh Phúc. Phân lập và đánh giá tỷ lệ các loài vi khuẩn có trong dịch tử cung bò Đánh giá khả năng ức chế vi khuẩn in vitro của cao khô dịch chiết cây Sài đất sử dụng các dung môi khác nhau và nano bạc đối với vi khuẩn Staphylococus spp. và Streptococus spp. phân lập từ dịch viêm tử cung bò.
Thử nghiệm hiệu quả điều trị bệnh viêm tử cung bò bằng cao khô dịch chiết Sài đất kết hợp với nano bạc Phương pháp: - Điều tra tỷ lệ bò mắc bệnh viêm tử cung: Tiến hành kiểm tra tỷ lệ bò sữa bị viêm tử cung tại 03 xã thuộc huyện Vĩnh Tường tỉnh Vĩnh Phúc. - Lấy mẫu dịch viêm tử cung bò: Tiến hành lấy mẫu dịch viêm tử cung bò trên đàn bò sữa được nuôi tại các nông hộ thuộc 03 xã thuộc huyện Vĩnh Tường tỉnh Vĩnh Phúc. - Xác định vi khuẩn gây bệnh viêm tử cung bò bằng phương pháp phân lập vi khuẩn: Vi khuẩn gây bệnh viêm tử cung được phân lập theo phương pháp thường qui. - Phương pháp điều trị thử nghiệm: Sử dụng 3 phác đồ điều trị, thụt rửa tử cung bằng dung dịch Rivanol 0,1%.
- Phương pháp xử lý số liệu: Các thí nghiệm được bố trí ngẫu nhiên và được lặp lại 3 lần. Số liệu thu được xử lý thống kê sinh học bằng phần mềm Excel 2007. Kết quả chính: Tỷ lệ bò mắc bệnh viêm tử cung tại 03 xã thuộc huyện Vĩnh Tường, Vĩnh Phúc có sự chênh lệch cao biến đổi từ 18,26% đến 28,33%. Bò bị viêm tử cung sau đẻ, chiếm tỉ lệ bình quân 23,44%.
ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Tổng số vi khuẩn hiếu khí có trong dịch viêm tử cung tăng lên gấp 120,34 lần so với trong dịch tử cung của bò sữa không bị viêm (7,77±2,71)x108 so (6,46±2,95)x106CFU/ml.