BOÄ GIAÙO DUÏC & ÑAØO TAÏO TRÖÔØNG ÑAÏI HOÏC MÔÛ _ BAÙN COÂNG TPHCM KHOA COÂNG NGHEÄ SINH HOÏC ÑEÀ TAØI: NGHIEÂN CÖÙU SÖÛ DUÏNG ENZYM VI SINH VAÄT ÑEÅ TAÊNG HIEÄU SUAÁT TAÙCH VOÛ HAÏT CAØ PHEÂ. LUAÄN VAÊN TOÁT NGHIEÄP CÖÛ NHAÂN KHOA HOÏC CHUYEÂN NGAØNH: SINH HOAÙ GIAÙO VIEÂN HÖÔÙNG DAÃN : TH.S ÑAËNG VUÕ BÍCH HAÏNH SINH VIEÂN THÖÏC HIEÄN : NGOÂ ÑÌNH LY NA KHOAÙ HOÏC: 2001-2005 Lôøi Caûm Ôn Xin kính gôûi nhöõng lôøi caûm ôn chaân thaønh vaø saâu saéc nhaát ñeán: ✔ Coâ Th.s Ñaëng Vuõ Bích Haïnh ñaõ nhieät tình höôùng daãn, ñoäng vieân, giuùp ñôõ, taïo ñieàu kieän toát nhaát cho em hoaøn thaønh luaän vaên naøy. ✔ Quyù thaày coâ Khoa Coâng Ngheä Sinh Hoïc ñaõ mang heát nhöõng taâm huyeát cuûa mình ñeå truyeàn ñaït cho em nhöõng kieán thöùc quyù baùu. ✔ Anh Nguyeãn Vaên Höng ñaõ truyeàn ñaït nhöõng kinh nghieäm cho em trong quaù trình laøm luaän vaên.
✔ Caùc anh chò ôû phoøng thí nghieäm sinh hoaù ñaõ nhieät tình giuùp ñôõ em hoaøn thaønh luaän vaên naøy. Luaän vaên toát nghieäp LÔØI MÔÛ ÑAÀU Söï soáng cuûa con ngöôøi vaø caùc loaøi sinh vaät phuï thuoäc vaøo maïng löôùi chuyeån hoaù vaät chaát voâ cuøng phöùc taïp vaø coù lieân quan chaët cheõ vôùi nhau, haàu nhö khoâng coù moät quaù trình hoaù hoïc naøo trong cô theå soáng laïi khoâng lieân quan maät thieát ñeán caùc quaù trình xuùc taùc sinh hoïc do taùc duïng cuûa enzym, coù theå noùi raèng söï soáng gaén lieàn vôùi vai troø cuûa enzym. Trong caùc ngaønh coâng ngheä thöïc phaåm, vaø moät soá ngaønh coâng ngheä khaùc enzym cellulase coù moät giaù trò söû duïng roäng raõi.Vieäc söû duïng cellulase ñaõ trôû thaønh vieäc raát phoå bieán vaø quan troïng trong coâng taùc nghieân cöùu choïn gioáng thöïc vaät. Saûn xuaát Glucose töø cheá phaåm cellulose saûn xuaát ra Glucose tinh khieát laøm chaát boå döôõng cho ngöôøi ; hoaëc laøm dòch Glucose thoâ roài söû duïng dòch naøy ñeå cheá bieán thöùc aên gia suùc, hoaëc duøng noù ñeå leân men naám men cho gia suùc, laøm phaân boùn cho caây troàng.
Coù theå thu nhaän cellulase töø nhieàu nguoàn, trong ñoù vi sinh vaät laø ñaùng keå nhaát. Hieän nay naám moác laø ñoái töôïng ñang ñöôïc quan taâm nhö: Asp.viride, Penicillium notatum…. Ôû Vieät Nam ñaõ coù moät soá nghieân cöùu veà khaû naêng sinh cellulase ôû naám moác nhö Trichoderma vaø xaï khuaån…Cellulase coøn ñöôïc öùng duïng trong caùc lónh vöïc nhö y hoïc, xöû lyù moâi tröôøng, cheá bieán thöïc phaåm, trong ñoù naâng cao hieäu quaû thu nhaän caùc saûn phaåm sau thu hoaïch cuõng ñang ñöôïc chuù yù. Vì vaäy, chuùng toâi choïn höôùng nghieân cöùu öùng duïng cellulase trong taùch voû caø pheâ.
Ñoù laø lyù do ra ñôøi cuûa ñeà taøi “nghieân cöùu öùng duïng enzym vi sinh vaät ñeå taêng hieäu suaát taùch voû haït caø pheâ”. SVTH : Ngoâ Ñình Ly Na Trang 1 Luaän vaên toát nghieäp Phaïm vi nghieân cöùu cuûa ñeà taøi: 1. Xaùc ñònh khaû naêng toång hôïp enzym cellulase cuûa Aspergillus treân 3 chuûng: Asp. So saùnh khaû naêng toång hôïp enzym cellulase cuûa 3 chuûng.
Xaùc ñònh hieäu quaû boùc voû cuûa cheá phaåm enzym thoâ treân 3 chuûng vi sinh vaät. Thôøi gian thöïc hieän laø 6 thaùng, töø thaùng 8 ñeán thaùng 2 naêm 2006. SVTH : Ngoâ Ñình Ly Na Trang 2 Luaän vaên toát nghieäp PHAÀN I TOÅNG QUAN TAØI LIEÄU SVTH : Ngoâ Ñình Ly Na Trang 3 Luaän vaên toát nghieäp SVTH : Ngoâ Ñình Ly Na Trang 4 Luaän vaên toát nghieäp 1.1 Ñònh nghóa enzym. Enzym hay coøn goïi laø MEN laø chaát xuùc taùc sinh hoïc coù baûn chaát laø protein.Vì coù nguoàn goác töø caùc hoaït ñoäng sinh hoïc do ñoù enzym thöôøng ñöôïc goïi laø chaát xuùc taùc sinh hoïc (biocatalisateur) nhaèm phaân bieät vôùi caùc chaát xuùc taùc hoùa hoïc khaùc.2 Caáu taïo hoùa hoïc cuûa enzym: ❖ Caáu taïo cuûa enzym:.
Döïa vaøo thaønh phaàn hoùa hoïc cuûa enzym, ngöôøi ta chia enzym ra laøm 2 nhoùm lôùn: ✔ Enzym moät caáu töû: laø enzym trong thaønh phaàn caáu taïo chæ coù protein. Ví duï:urease, amylase… ✔ Enzym hai caáu töû: laø enzym trong thaønh phaàn cuûa noù ngoaøi protein (goïi laø “feron” hay “apoenzym”) coøn coù moät phaàn phi protein (khoâng phaûi protein) goïi laø “nhoùm ngoaïi” (hay “Agon”, hay “coenzym”). Baûn chaát hoùa hoïc cuûa nhoùm ngoaïi enzym raát ña daïng, phong phuù. Thöôøng nhoùm ngoaïi enzym laø caùc daãn xuaát cuûa vitamin, caùc kim loaïi, nucleotide…Viduï: catalase, b peroxydase, cytocrom… Apoenzym quyeát ñònh tính ñaëc hieäu cao cuûa enzym vaø laøm taêng hoaït tính xuùc taùc cuûa coenzym.
Coenzym quyeát ñònh kieåu phaûn öùng maø enzym xuùc taùc, tröïc tieáp tham gia trong phaûn öùng vaø laøm taêng ñoä beàn apoenzym ñoái vôùi caùc yeáu toá gaây bieán tính. ❖ Trung taâm hoaït ñoäng cuûa enzym. Trung taâm hoaït ñoäng laø moät phaàn cuûa phaân töû enzym tröïc tieáp keát hôïp vôùi cô chaát, taïo thaønh vaø chuyeån hoùa phöùc chaát trung gian giöõa enzym vaø cô SVTH : Ngoâ Ñình Ly Na Trang 5 Luaän vaên toát nghieäp chaát. Phaàn naøy thöôøng coù kích thöôùc raát nhoû so vôùi toaøn boä phaân töû enzym.
Soá trung taâm hoaït ñoäng cuûa phaân töû enzym coù theå laø moät hay nhieàu hôn. Vôùi enzym moät caáu töû thì trung taâm hoaït ñoäng goàm moät soá nhoùm chöùc cuûa acid amin lieân keát laïi vôùi nhau. Nhôø coù caáu truùc baäc 3,4 caùc nhoùm naøy tuy naèm xa nhau trong maïch polypeptide, nhöng do xoaén cuoän maïch maø ñöôïc gaàn nhau. Vôùi enzym hai caáu töû, ngoaøi moät soá nhoùm chöùc cuûa acid anim coøn coù nhoùm ngoaïi tham gia trong trung taâm hoaït ñoäng cuûa enzym.
Moät soá nhoùm ñònh chöùc thöôøng tham gia taïo thaønh trung taâm hoaït ñoäng cuûa enzym nhö: -SH cuûa cystein, OH cuûa serin, voøng imidazol cuûa histidin, ε - NH2 cuûa lizin, ω -COOH cuûa aspartic vaø glutamic, α-COOH cuûa acid anim cuoái maïch. ❖ Cô cheá taùc duïng cuûa enzym: Baûn chaát cuûa caùc phaûn öùng enzim laø khi coù söï tham gia xuùc taùc cuûa caùc enzim, caùc cô chaát seõ ñöôïc hoaït hoùa maïnh, töø ñoù laøm thay ñoåi tính chaát hoùa hoïc cuûa cô chaát, keát quaû sau phaûn öùng seõ taïo ra nhöõng saûn phaåm cuûa phaûn öùng. Döôùi taùc duïng cuûa enzim cô chaát coù theå coù nhöõng thay ñoåi, khoâng chæ veà caáu truùc hoùa hoïc maø coøn thay ñoåi tính chaát hoùa hoïc. Quaù trình xuùc taùc cuûa enzim xaûy ra qua 3 giai ñoaïn : ✔ Giai ñoïan thöù nhaát : Enzim seõ keát hôïp vôùi cô chaát baèng lieân keát yeáu, nhôø ñoù taïo ra phöùc heä enzim-cô chaát.
Phöùc heä naøy thöôøng khoâng beàn, phaûn öùng taïo ra phöùc heä enzim-cô chaát thöôøng xaûy raát nhanh vaø ñoøi hoûi moät ít naêng löôïng. ✔ Giai ñoïan thöù hai: Khi cô chaát taïo phöùc vôùi enzim seõ bò thay ñoåi caû caáu hình khoâng gian, caû veà möùc ñoä beàn vöõng cuûa caùc lieân keát. Keát quaû laø caùc lieân keát bò phaù vôõ vaø taïo ra saûn phaåm. ✔ Giai ñoïan thöù ba :Ñaây laø cuoái cuøng, saûn phaâm phaûn öùng ñöôïc taïo thaønh vaø taùch khoûi enzim.
SVTH : Ngoâ Ñình Ly Na Trang 6 Luaän vaên toát nghieäp E + S ⇔ ES → E + P E-enzim S-côchaát (substrate) P-saûn phaåm(products) ❖ Xaùc ñònh khaû naêng xuùc taùc cuûa enzim: Ngöôøi ta xaùc ñònh khaû naêng xuùc taùc cuûa enzim thoâng qua vieäc xaùc ñònh hoaït ñoä hoaït ñoäng cuûa enzim. Ngöôøi ta cuõng khoâng theå ñònh löôïng enzym tröïc tieáp maø phaûi xaùc ñònh giaùn tieáp thoâng qua hoaït ñoä hoaït ñoäng cuûa chuùng hoaëc thoâng qua khaû naêng laøm giaûm cô chaát sau moät thôøi gian phaûn öùng. Hieän nay nhieàu phoøng thí nghieäm söû duïng moät trong ba nhoùm phöông phaùp sau ñeå xaùc ñònh khaû naêng xuùc taùc cuûa enzym. Tieán haønh ño löôïng cô chaát bò maát ñi hay löôïng saûn phaûm taïo thaønh sau moät thôøi gian nhaát ñònh vaø löôïng enzim ñaõ xaùc ñònh tröôùc.
Tieán haønh xaùc ñònh thôøi gian caàn thieát ñeå thu nhaän moät long bieán ñoåi nhaát ñònh cuûa löôïng cô chaát hay löôïng saûn phaåm töông öùng vôùi moät löôïng enzim nhaát ñònh. Tieán haønh choïn noàng ñoä enzim caàn thieát ñeå trong moät thôøi gian nhaát ñònh seõ thu ñöôïc söï bieán ñoåi nhaát ñònh veà cô chaát hay saûn phaåm.2 ENZYM TÖØ VI SINH VAÄT Enzym thu nhaän töø vi sinh vaät coù hoaït tính raát cao.1 Moät soá Vi Sinh Vaät toång hôïp enzym cellulase: Trong ñieàu kieän töï nhieân, cellulose bò phaân huûy bôûi vi sinh vaät caû trong ñieàu kieän hieáu khí vaø caû trong ñieàu kieän yeám khí. Caùc loaøi vi sinh vaät thay phieân nhau phaân huyû cellulose ñeán saûn phaåm cuoái cuøng laø glucose. Altenaria tenuis, Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus sydovii, Aspergillus terrus, Celluvibrio gilvus, Fusarium culmorum, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Trichoderma koningi, Trichoderma lignorum, Trichoderma roseum, Trichoderma reesei, Actnomyces spp, Penicillium spp.
SVTH : Ngoâ Ñình Ly Na Trang 7 Luaän vaên toát nghieäp Chuùng thuoäc naám sôïi xaï khuaån, vi khuaån vaø trong moät soá tröôøng hôïp, caùc nhaøkhoa hoïc, coøn thaáy caû naám men cuõng tham gia quaù trình phaân giaûi naøy. Trong ñoù, nhöõng vi sinh vaät ñöôïc caùc nhaø khoa hoïc nghieân cöùu kyõ nhaát: Ñoái töôïng chuû yeáu trong caùc nghieân cöùu veà cellulose hieän nay thöôøng laø naám (naám moác vaø naám coù quûa theå), moät soá loaøi ñöôïc chuù yù nhieàu : • Alternaria tenuis • Aspergillus amstelodamy Nghieân cöùu cuûa Loginova (1965) cho bieát hoïat tính enzim coù t°opt (nhieät ñoä toái thích) laø 55°C,ø pH opt =4,5 • Aspergillus flavus • Aspergillus niger Nghieân cöùu cuûa suguira vaø ñoàng söï (1966) cho bieát cellulose cuûa naám naøy phaân huyû giaáy loïc vaø hoaït tính enzim coù t° opt = 40°C, pH opt = 4,5, oån ñònh ôû nhieät ñoä 37-50°C • Aspergillus oryzae • Aspergillus terreus • Aspergillus sydovii…. Theo nghieân cöùu cuûa Wa-tanabe(1968) thì cellulose cuûa naám naøy coù troïng löôïng phaân töû (MW) =25800, hoïat tính enzim coù t°opt=40°C, pHopt=4,0 vaø moät soá caùc chuûng vi sinh vaät khaùc. ❖ Öùng duïng VSV trong coâng nghieäp: VSV ñöôïc öùng duïng nhieàu trong coâng nghieäp vì: ⮚ Toác ñoä sinh saûn cuûa VSV raát maïnh: Trong moät thôøi gian ngaén, ta coù theå thu ñöôïc moät löôïng sinh khoái raát lôùn.
Nhieàu nghieân cöùu cho thaáy raèng trong moät ngaøy ñeâm toác ñoä taïo sinh khoái ôû VSV cao gaáp haøng ngaøn laàn so vôùi toác ñoä taêng sinh khoái ôû ñoäng vaät vaø thöïc vaät. Ñeå ñaït ñöôïc toác ñoä taêng sinh khoái lôùn nhö vaäy, VSV phaûi chuyeån hoùa moät khoái löôïng lôùn SVTH : Ngoâ Ñình Ly Na Trang 8 Luaän vaên toát nghieäp cô chaát. Bôûi vì, moïi chuyeån hoùa cô chaát trong teá baøo laø do enzym ñaûm nhaän. Chính vì theá, neáu söû duïng VSV nhö nguoàn sinh hoïc ñeå saûn xuaát enzim raát coù lôïi.
⮚ Enzym thu nhaän töø VSV coù hoïat tính raát cao: Öu ñieåm naøy gaén lieàn vôùi toác ñoä chuyeån hoùa cô chaát vaø gaén lieàn vôùi toác ñoä sinh saûn vaø phaùt trieån cuûa VSV ❖ Moät soá öùng duïng cuûa enzim: ✔ Öùng duïng enzim trong cheá bieán boät vaø saûn xuaát baùnh keïo. ✔ Öùng duïng enzim trong saûn xuaát siroâ vaø caùc saûn phaåm chöùa ñöôøng. ✔ Öùng duïng enzim trong coâng ngheä saûn xuaát baùnh mì .