Nghiên cứu tạo kháng thể đơn dòng kháng progesterone ở bò

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu vnua nghiên cứu tạo kháng thể đơn dòng kháng progesterone ở bò, khảo sát thực trạng, phân tích nguyên nhân, đề xuất giải pháp cải thiện thực tiễn.

• Tác giả: Dương Văn Cường
• Người hướng dẫn: TS. Cù Thị Thiên Thu
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Chăn nuôi
• Đề tài: Nghiên cứu tạo kháng thể đơn dòng kháng progesterone ở bò
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 2. DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• 3. DANH MỤC BẢNG
• 4. DANH MỤC HÌNH
• 5. TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 6. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 7. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
• 8. NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI, Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN
• 9. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 9.1. TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU THUỘC LĨNH VỰC CỦA ĐỀ TÀI TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC
• 9.1.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới
• 9.1.2. Tình hình nghiên cứu trong nước
• 9.2. QUÁ TRÌNH HÌNH THÀNH VÀ CHỨC NĂNG CỦA HORMONE PROGESTERONE
• 9.2.1. Tổng quan về Hormone

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu kháng thể đơn dòng kháng progesterone ở bò

Nghiên cứu kháng thể đơn dòng kháng progesterone ở bò là một lĩnh vực quan trọng trong ngành chăn nuôi. Hormone progesterone đóng vai trò thiết yếu trong việc điều hòa sinh sản của bò. Việc phát hiện sớm thai kỳ thông qua kháng thể đơn dòng có thể cải thiện hiệu quả chăn nuôi và sản xuất sữa. Nghiên cứu này không chỉ giúp nâng cao năng suất mà còn giảm thiểu chi phí cho người chăn nuôi.

1.1. Kháng thể đơn dòng và ứng dụng trong chăn nuôi

Kháng thể đơn dòng là sản phẩm của tế bào lai, có khả năng nhận diện và liên kết với một kháng nguyên cụ thể. Trong chăn nuôi, kháng thể đơn dòng kháng progesterone có thể được sử dụng để phát hiện sớm thai kỳ ở bò, từ đó giúp nâng cao hiệu quả sản xuất.

1.2. Hormone progesterone và vai trò trong sinh sản

Hormone progesterone được sản xuất chủ yếu từ thể vàng, có vai trò quan trọng trong việc duy trì thai kỳ. Nồng độ progesterone trong máu có thể phản ánh tình trạng sinh lý của bò, giúp chẩn đoán có thai sớm và chính xác.

II. Vấn đề và thách thức trong nghiên cứu kháng thể đơn dòng

Mặc dù nghiên cứu kháng thể đơn dòng kháng progesterone mang lại nhiều lợi ích, nhưng vẫn tồn tại một số thách thức. Việc sản xuất kháng thể đơn dòng đòi hỏi quy trình phức tạp và chi phí cao. Ngoài ra, việc đảm bảo tính đặc hiệu và độ nhạy của kháng thể cũng là một vấn đề cần được giải quyết.

2.1. Chi phí và quy trình sản xuất kháng thể

Quy trình sản xuất kháng thể đơn dòng bao gồm nhiều bước như gây miễn dịch, thu tế bào lympho B, và dung hợp tế bào. Mỗi bước đều yêu cầu kỹ thuật cao và trang thiết bị hiện đại, dẫn đến chi phí sản xuất cao.

2.2. Đảm bảo tính đặc hiệu và độ nhạy của kháng thể

Tính đặc hiệu và độ nhạy của kháng thể đơn dòng là yếu tố quyết định đến hiệu quả chẩn đoán. Cần thực hiện các thử nghiệm để xác định khả năng nhận diện kháng nguyên của kháng thể, nhằm đảm bảo kết quả chính xác trong chẩn đoán thai kỳ.

III. Phương pháp nghiên cứu kháng thể đơn dòng kháng progesterone

Nghiên cứu kháng thể đơn dòng kháng progesterone được thực hiện thông qua các phương pháp khoa học hiện đại. Các bước chính bao gồm gây miễn dịch cho chuột, thu tế bào lympho B, và sàng lọc tế bào lai. Phương pháp ELISA được sử dụng để xác định khả năng sản xuất kháng thể.

3.1. Gây miễn dịch cho chuột BALB c

Chuột BALB/c được gây miễn dịch bằng các kháng nguyên progesterone khác nhau. Quá trình này giúp kích thích hệ miễn dịch của chuột sản xuất kháng thể đặc hiệu.

3.2. Sàng lọc tế bào lai tiết kháng thể

Sau khi thu tế bào lympho B, các tế bào này được dung hợp với tế bào myeloma để tạo ra tế bào lai. Các tế bào lai này sẽ được sàng lọc bằng phương pháp ELISA để xác định khả năng sản xuất kháng thể đơn dòng.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn

Kết quả nghiên cứu cho thấy đã tạo ra nhiều dòng tế bào lai có khả năng tiết kháng thể đơn dòng kháng progesterone. Những kháng thể này có thể được ứng dụng trong việc sản xuất các bộ kit chẩn đoán thai kỳ nhanh cho bò, giúp nâng cao hiệu quả chăn nuôi.

4.1. Các dòng tế bào lai và khả năng sản xuất kháng thể

Nghiên cứu đã tạo ra nhiều dòng tế bào lai khác nhau, mỗi dòng có khả năng sản xuất kháng thể đơn dòng đặc hiệu với progesterone. Điều này mở ra cơ hội cho việc phát triển các sản phẩm chẩn đoán mới.

4.2. Ứng dụng trong sản xuất que thử thai nhanh

Kháng thể đơn dòng kháng progesterone có thể được sử dụng để sản xuất que thử thai nhanh cho bò. Phương pháp này giúp phát hiện thai kỳ sớm, từ đó nâng cao hiệu quả chăn nuôi và giảm chi phí cho người chăn nuôi.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu

Nghiên cứu kháng thể đơn dòng kháng progesterone ở bò không chỉ có ý nghĩa khoa học mà còn mang lại giá trị thực tiễn cao. Việc phát triển các sản phẩm chẩn đoán thai kỳ nhanh sẽ góp phần nâng cao năng suất và hiệu quả trong ngành chăn nuôi bò sữa tại Việt Nam.

5.1. Ý nghĩa khoa học của nghiên cứu

Nghiên cứu này đóng góp vào kho tàng kiến thức về miễn dịch học và sinh sản động vật. Các kết quả đạt được sẽ là cơ sở cho các nghiên cứu tiếp theo trong lĩnh vực này.

5.2. Triển vọng phát triển sản phẩm chẩn đoán

Với những kết quả đạt được, việc phát triển các sản phẩm chẩn đoán thai kỳ nhanh cho bò sẽ trở thành hiện thực. Điều này không chỉ giúp nâng cao năng suất chăn nuôi mà còn đáp ứng nhu cầu thực phẩm ngày càng tăng của thị trường.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM DƯƠNG VĂN CƯỜNG NGHİÊN CỨU TẠO KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG KHÁNG PROGESTERONE Ở BÒ Ngành: Chăn nuôi Mã số: 8620105 Người hướng dẫn khoa học: 1. TS Cù Thị Thiên Thu 2.TS Nguyễn Bá Mùi NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ lấy bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cảm ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng 11 năm 2019 Tác giả luận văn Dương Văn Cường i LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình.

Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới TS Cù Thị Thiên Thu và PGS-TS Nguyễn Bá Mùi đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài luận văn. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Sinh lý - Tập tính động vật, Khoa Chăn Nuôi - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tạo điều kiện, giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán bộ viên chức Khoa Thú y, Bệnh viện Thú y – Học viện Nông nghiệp Việt Nam, đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Tôi xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn.

Hà Nội, ngày. tháng 11 năm 2019 Tác giả luận văn Dương Văn Cường ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.

vi Danh mục bảng. vii Danh mục hình. viii Trích yếu luận văn. ix Thesis abstract.

Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu nghiên cứu. Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học và thực tiễn. Tổng quan tài liệu.

Tổng quan tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực của đề tài trong và ngoài nước. Tình hình nghiên cứu trên thế giới. Tình hình nghiên cứu trong nước. Quá trình hình thành và chức năng của Hormone Progesterone.

Tổng quan về Hormone. Sự điều hoà hoạt động sinh dục tuyến nội tiết. Một số hiểu biết về miễn dịch học. Miễn dịch và đáp ứng miễn dịch.

Các cơ quan và tế bào tham gia vào đáp ứng miễn dịch. Kháng nguyên (Antigen). Kháng thể. Sự kết hợp giữa kháng nguyên và kháng thể.

Kháng thể đơn dòng và ứng dụng. Kỹ thuật ELISA. Vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu.

Thời gian và địa điểm nghiên cứu. 33 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Nội dung nghiên cứu. Gây miễn dịch cho chuột thuần chủng BALB/c bằng các kháng nguyên khác nhau.

Thu số lượng tế bào lympho B ở chuột gây miễn dịch. Đánh thức và nuôi cấy tế bào Myeloma Sp2/0 dùng để dung hợp với tế bào Lympho B. Sàng lọc tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng bằng phản ứng ELISA. Nuôi cấy tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu progesterone.

Xác định nồng độ kháng thể đơn dòng được tạo ra trong dịch báng của chuột BALB/c. Kiểm tra khả năng bắt cặp đặc hiệu, bắt cặp chéo giữa kháng thể đơn dòng với các kháng nguyên. Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp gây miễn dịch cho chuột thuần chủng BALB/c bằng các kháng nguyên khác nhau.

Phương pháp thu số lượng tế bào lympho B ở chuột gây miễn dịch. Phương pháp đánh thức và nuôi cấy tế bào Myeloma Sp2/0 dùng để dung hợp với tế bào Lympho B. Sàng lọc dòng tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng bằng phương pháp ELISA. Phương pháp nuôi cấy tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu progesterone.

Phương pháp xác định nồng độ kháng thể đơn dòng được tạo ra trong dịch báng của chuột BALB/c. Kiểm tra khả năng bắt cặp đặc hiệu, bắt cặp chéo giữa kháng thể đơn dòng với các kháng nguyên. Kết quả và thảo luận. Kết quả đáp ứng miễn dịch của chuột với các kháng nguyên.

Kết quả thu số lượng tế bào Lympho B ở chuột gây miễn dịch. Kết quả dung hợp tế bào Myeloma SP2/0 với tế bào Lympho B. Kết quả sàng lọc tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng bằng phản ứng ELISA. 47 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.

Kết quả nuôi cấy tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng. Xác định nồng độ kháng thể đơn dòng được tạo ra trong dịch báng của chuột BALB/c. Kết quả xác định hiệu giá kháng thể bằng phương pháp ELISA. Kết quả tinh chế kháng thể từ dịch nước báng.

Kết quả chạy điện di kháng thể IgG thu được trên gel SDS-PAGE. Kết qủa kiểm tra khẳ năng bắt cặp đặc hiệu, bắt cặp chéo giữa kháng thể đơn dòng với các kháng nguyên. Kết luận và kiến nghị. 58 Tài liệu tham khảo.

59 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BSA Bovine Serum Albumin Cs Cộng sự DMEM Dulbeco Modified Eagl Medium ĐƯMD Đáp ứng miễn dịch EIA Enzyme Immuno Assay ELISA Enzyme Linkied Imumuno Sorbent Assay FBS Fetal Bovine Serum FCA Freund complete Adjuvant FIA Freund’s Incomplete Adjuvant FSH Follicle Stimulating Hormone GnRH Gonadotropin Realising Hormone HAT HypoxanthineAminopterinThimidine HPRT Hypoxathin Phospho Ribosyl Transferase HT Hypoxanthine Thimidine KN Kháng nguyên KT Kháng thể KTĐD Kháng thể đơn dòng LH Luteinizing Hormone PBS FetalBovineSerum PEG Polyethylene glycol PGF2α Progesterone F2α RIA Radio Immuno Assay vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC BẢNG Bảng 4. Giá trị OD450 mẫu huyết thanh chuột ở các nồng độ gây miễn dịch khác nhau đối với từng loại kháng nguyên. Số lượng tế bào Lympho B ở chuột có khả năng đáp ứng miễn dịch tốt nhất với 3 kháng nguyên khác nhau. Kết quả lai giữa tế bào Myeloma Sp2/0 và tế bào lymphoB của chuột BALB/c được gây miễn dịch với các kháng nguyên khác nhau.

Kết quả sàng lọc tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên Progesteron Antigen bằng phản ứng ELISA. Kết quả sàng lọc tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên Progesterone-3-BSA Antigen bằng phản ứng ELISA. Kết quả sàng lọc tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên Progesterone -3- CMO:BSA Antigen bằng phản ứng ELISA. Số lượng tế bào sau khi phục hồi.

Hàm lượng kháng thể đặc hiệu progesterone sau tinh chế. Tính đặc hiệu của các kháng thể đơn dòng tạo ra với các kháng nguyên tương ứng. Khả năng bắt cặp chéo giữa các kháng thể đơn dòng đặc hiệu với các kháng nguyên khác bằng phản ứng ELISA. 57 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC HÌNH Hình 2.

Cơ chế tác dụng của hormone. Điều hoà tiết các hormone và vị trí tác động của chúng trong kỳ động dục của bò. Công thức cấu tạo progesterone. Biến thiên nồng độ progesteron sau khi thụ tinh có kết quả và thời điểm lấy mẫu chẩn đoán có thai.

Công thức cấu tạo của kháng thể (Đỗ Ngọc Liên, 1999). Kháng thể đơn dòng liên kết với một epitope đặc hiệu. Qui trình sản xuất kháng thể đơn dòng. Kỹ thuật ELISA.

Gây miễn dịch cho chuột BALB/c. Thu hạch bẹn chuột. Thu lách chuột. Nghiền nhỏ hạch bẹn và lách chuột.

Chuột BALB/c trước khi tiêm. Tiêm tế bào lai vào xoang phúc mạc chuột. Thu dịch báng trong xoang phúc mạc chuột. Dịch báng thu được sau khi ly tâm loại bỏ cặn.

Tế bào lai sau 24h phục hồi. Tế bào lai sau 72h phục hồi. Kết quả ELISA dịch nước báng ở các độ pha loãng khác nhau. Đồ thị biểu diễn các phân đoạn thu được khi tinh chế kháng thể đơn dòng từ dịch nước báng.

Dịch thu được ở các phân đoạn 2-9. 55 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Dương Văn Cường Tên luận văn: Nghiên cứu tạo kháng thể đơn dòng kháng progesterone ở bò Ngành : Chăn nuôi Mã số: 8620105 Cơ sở đào tạo: Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Mục tiêu nghiên cứu Tạo được các dòng tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng kháng progesterone, làm cơ sở cho việc ứng dụng sản xuất que thử thai nhanh trên bò tại Việt Nam. Phương pháp nghiên cứu - Gây miễn dịch trên chuột BALB/c bằng ba kháng nguyên chuẩn: Progesterone Antigen (Mã code MBS238011, hãng Mybiosource, Mỹ); Progesterone-3-BSA Antigen (Mã code LA330, hãng EastCoast Bio, Mỹ); Proesterone-3-CMO:BSA Antigen (Mã code ND-R0752, hãng Novateinbio, Mỹ). - Tế bào lympho B mẫn cảm với kháng nguyên được thu từ lách và hạch của chuột BALB/c - Đánh thức và nuôi cấy tế bào Myeloma dùng để dung hợp với tế bào Lympho B để tạo dòng tế bào lai hybrydoma có khả năng tiết kháng thể đơn dòng.

- Bằng phản ứng ELISA sàng lọc được các dòng tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với Progesterone. - Kiểm tra khả năng bắt cặp đặc hiệu và khả năng bắt cặp chéo giữa kháng thể đơn dòng với các kháng nguyên bằng phương pháp ELISA. Kết quả chính và kết luận - Chuột có khả năng đáp ứng miễn dịch tốt nhất đối với các kháng nguyên progesterone ở nồng độ 200 µg/lần/con. - Đã tạo được 5 dòng tế bào lai (đặt tên là: E4, E3, C6, H3, F10) có khả năng tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên Progesterone Antigen.

- Đã tạo được 3 dòng tế bào lai (đặt tên là: C12, D7, F11) có khả năng tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên Progesterone-3-BSA antigen. - Đã tạo được 3 dòng tế bào lai (đặt tên là: G5, H3, A7) có khả năng tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên Progesterone-3-CMO:BSA Antigen. ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.