Xác Định Gen Kháng Thuốc Của Chủng Vi Khuẩn Salmonella Đa Kháng Từ Thịt Tươi Ở Hà Nội

Nghiên cứu xác định gen kháng thuốc của vi khuẩn salmonella đa kháng từ thịt tươi tại Hà Nội, góp phần nâng cao an toàn thực phẩm.

• Tác giả: Trần Thị Hoài Thu
• Người hướng dẫn: TS. Võ Thị Bích Thủy
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Xác định gen kháng thuốc của chủng vi khuẩn Salmonella đa kháng phân lập từ thịt tươi ở một số địa điểm tại Hà Nội
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2016
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• MỤC LỤC
• DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC ẢNH, HÌNH
• TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 1. CHƯƠNG 1: TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 2. CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ VI KHUẨN SALMONELLA VÀ BỆNH DO CHÚNG GÂY RA
• 2.1.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới
• 2.1.2. Tình hình nghiên cứu ở trong nước
• 3. CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Địa điểm nghiên cứu
• 3.2. Thời gian nghiên cứu
• 3.3. Đối tượng/vật liệu nghiên cứu
• 3.4. Vật liệu nghiên cứu
• 3.5. Nội dung nghiên cứu
• 3.6. Phương pháp nghiên cứu
• 3.6.1. Phương pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Salmonella spp.
• 3.6.2. Phương pháp xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh
• 3.6.3. Phương pháp định typ bằng phản ứng huyết thanh học
• 3.6.4. Phương pháp xác định một số gen kháng sinh của chủng Salmonella đa kháng bằng phương pháp RT-PCR
• 3.6.5. Phương pháp xử lý số liệu
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Kết quả nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Salmonella
• 4.2. Kết quả xác định tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella spp. trong mẫu thịt lợn, gà
• 4.3. Kết quả giám định các đặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn Salmonella spp. phân lập được
• 4.4. Kết quả kiểm tra khả năng mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn Salmonella phân lập được
• 4.5. Kết quả định typ chủng vi khuẩn Salmonella đa kháng phân lập được
• 4.6. Kết quả phát hiện và đánh giá gen kháng thuốc của chủng Salmonella đa kháng phân lập được
• 4.7. Kết quả tách chiết RNA tổng số của chủng Salmonella đa kháng phân lập được
• 4.8. Kết quả RT-PCR phát hiện gen kháng kháng sinh của chủng Salmonella đa kháng
• 4.9. Kết quả đánh giá gen kháng kháng sinh của chủng Salmonella đa kháng
• 5. CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Nghiên Cứu Gen Kháng Thuốc Salmonella Tại Hà Nội

Nghiên cứu về gen kháng thuốc của vi khuẩn Salmonella đang trở thành một vấn đề cấp thiết, đặc biệt khi chúng ta xem xét sự gia tăng của các chủng Salmonella đa kháng thuốc trong thịt tươi tại Hà Nội. Sự lây lan của các chủng vi khuẩn này không chỉ đe dọa an toàn thực phẩm mà còn gây ra những nguy cơ nghiêm trọng cho sức khỏe cộng đồng. Việc hiểu rõ về cơ chế kháng kháng sinh và sự phân bố của các gen kháng kháng sinh trong vi khuẩn Salmonella là vô cùng quan trọng để phát triển các biện pháp kiểm soát và phòng ngừa hiệu quả. Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định các gen kháng thuốc phổ biến trong các chủng Salmonella phân lập từ thịt lợn và thịt gà được bán tại các chợ ở Hà Nội, từ đó đánh giá mức độ đề kháng kháng sinh và nguy cơ tiềm ẩn đối với người tiêu dùng.

1.1. Tầm quan trọng của nghiên cứu Salmonella kháng thuốc

Nghiên cứu này có ý nghĩa quan trọng trong việc đánh giá thực trạng kháng thuốc của vi khuẩn Salmonella tại Hà Nội. Kết quả nghiên cứu sẽ cung cấp thông tin quan trọng cho các cơ quan quản lý an toàn thực phẩm và các nhà hoạch định chính sách để đưa ra các biện pháp kiểm soát và phòng ngừa hiệu quả. Ngoài ra, nghiên cứu này cũng góp phần nâng cao nhận thức của cộng đồng về nguy cơ kháng kháng sinh và tầm quan trọng của việc sử dụng kháng sinh một cách hợp lý.

1.2. Mục tiêu và phạm vi nghiên cứu gen kháng thuốc

Mục tiêu chính của nghiên cứu là xác định sự có mặt và mức độ biểu hiện của một số gen kháng thuốc của chủng Salmonella gây bệnh phân lập từ thịt tươi ở một số địa điểm tại Hà Nội. Nghiên cứu cũng nhằm cảnh báo hiện tượng kháng kháng sinh của các chủng vi khuẩn Salmonella gây bệnh cho người lây truyền qua sản phẩm có nguồn gốc động vật, từ đó đưa ra biện pháp nhằm giảm sự kháng kháng sinh của vi khuẩn Salmonella trong thực phẩm tươi sống.

II. Thách Thức Từ Salmonella Đa Kháng Thuốc Trong Thịt Tươi

Sự xuất hiện của Salmonella đa kháng thuốc trong thịt tươi là một thách thức lớn đối với an toàn thực phẩm và sức khỏe cộng đồng. Việc sử dụng kháng sinh rộng rãi trong chăn nuôi đã tạo điều kiện cho sự phát triển và lan rộng của các chủng vi khuẩn này. Thịt nhiễm Salmonella có thể gây ra các bệnh nhiễm trùng nghiêm trọng ở người, đặc biệt là ở trẻ em, người già và những người có hệ miễn dịch suy yếu. Ngộ độc thực phẩm do Salmonella không chỉ gây ra các triệu chứng khó chịu như tiêu chảy, nôn mửa và đau bụng mà còn có thể dẫn đến các biến chứng nguy hiểm, thậm chí tử vong. Do đó, việc kiểm soát và ngăn chặn sự lây lan của Salmonella đa kháng thuốc trong chuỗi cung ứng thực phẩm là vô cùng quan trọng.

2.1. Nguy cơ ngộ độc thực phẩm từ thịt nhiễm Salmonella

Việc tiêu thụ thịt nhiễm Salmonella có thể dẫn đến ngộ độc thực phẩm với các triệu chứng như tiêu chảy, sốt, đau bụng và nôn mửa. Trong một số trường hợp nghiêm trọng, nhiễm trùng Salmonella có thể lan rộng ra ngoài đường ruột và gây ra các biến chứng nguy hiểm như nhiễm trùng máu, viêm màng não và viêm khớp. Theo tài liệu, từ năm 2000 đến 2006 ở Việt Nam đã có hàng trăm vụ ngộ độc, trong đó tỷ lệ ngộ độc do vi sinh vật chiếm 35 - 55%.

2.2. Tác động của kháng sinh trong chăn nuôi đến Salmonella

Việc sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi, đặc biệt là sử dụng không đúng cách hoặc lạm dụng, đã tạo ra áp lực chọn lọc, thúc đẩy sự phát triển của các chủng Salmonella kháng thuốc. Các gen kháng kháng sinh có thể lây lan giữa các vi khuẩn thông qua các cơ chế như truyền plasmid và gen di động, dẫn đến sự gia tăng của các chủng Salmonella đa kháng thuốc.

2.3. Ảnh hưởng của Salmonella kháng thuốc đến sức khỏe cộng đồng

Sự gia tăng của Salmonella kháng thuốc gây khó khăn cho việc điều trị các bệnh nhiễm trùng do Salmonella. Các kháng sinh thông thường có thể không còn hiệu quả, đòi hỏi phải sử dụng các kháng sinh mạnh hơn, đắt tiền hơn và có nhiều tác dụng phụ hơn. Điều này không chỉ làm tăng chi phí điều trị mà còn làm tăng nguy cơ thất bại trong điều trị và kéo dài thời gian nằm viện.

III. Phương Pháp Xác Định Gen Kháng Thuốc Salmonella Đa Kháng

Nghiên cứu này sử dụng một loạt các phương pháp vi sinh vật và sinh học phân tử để xác định các gen kháng thuốc trong các chủng Salmonella đa kháng thuốc phân lập từ thịt tươi. Các phương pháp bao gồm phân lập Salmonella từ mẫu thịt, xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh, định typ bằng phản ứng huyết thanh học, tách chiết RNA, tổng hợp cDNA và RT-PCR để phát hiện và đánh giá các gen kháng kháng sinh. Kết quả từ các phương pháp này sẽ cung cấp thông tin chi tiết về các gen kháng thuốc phổ biến trong các chủng Salmonella tại Hà Nội.

3.1. Quy trình phân lập và xác định Salmonella từ thịt

Quy trình phân lập Salmonella bao gồm các bước như làm giàu mẫu trong môi trường BPW (Buffer Peptone Water), cấy chuyển lên các môi trường chọn lọc như XLD (Xylose Lysine Desoxycholate) và BSA (Bismuth Sulphite Agar), và xác định bằng các xét nghiệm sinh hóa. Các chủng Salmonella được xác định sẽ được lưu trữ để sử dụng cho các xét nghiệm tiếp theo.

3.2. Phương pháp xác định khả năng kháng kháng sinh kháng sinh đồ

Khả năng kháng kháng sinh của các chủng Salmonella được xác định bằng phương pháp kháng sinh đồ sử dụng đĩa giấy tẩm kháng sinh. Vùng ức chế xung quanh đĩa giấy được đo và so sánh với các tiêu chuẩn của CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute) để xác định mức độ mẫn cảm hoặc kháng thuốc của vi khuẩn.

3.3. Kỹ thuật RT PCR phát hiện gen kháng kháng sinh

Kỹ thuật RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) được sử dụng để phát hiện và định lượng các gen kháng kháng sinh trong các chủng Salmonella. RNA được chiết xuất từ vi khuẩn, chuyển đổi thành cDNA và khuếch đại bằng PCR sử dụng các cặp mồi đặc hiệu cho từng gen kháng thuốc. Sản phẩm PCR được điện di trên gel agarose để xác định sự có mặt của gen.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Gen Kháng Thuốc Salmonella Tại Hà Nội

Kết quả nghiên cứu cho thấy tỷ lệ nhiễm Salmonella trong các mẫu thịt tươi tại các chợ ở Hà Nội là đáng báo động. Nhiều chủng Salmonella phân lập được có khả năng kháng nhiều loại kháng sinh, bao gồm cả các kháng sinh thường được sử dụng trong điều trị nhiễm trùng ở người. Nghiên cứu cũng xác định được một số gen kháng thuốc phổ biến trong các chủng Salmonella, như tetA, cat-1, cmlA và floR, mã hóa khả năng kháng tetracycline, chloramphenicol và phenicol. Những kết quả này cho thấy nguy cơ tiềm ẩn đối với an toàn thực phẩm và sức khỏe cộng đồng do sự lây lan của Salmonella đa kháng thuốc.

4.1. Tỷ lệ nhiễm Salmonella trong thịt lợn và thịt gà

Nghiên cứu cho thấy tỷ lệ nhiễm Salmonella trong thịt lợn và thịt gà tại các chợ ở Hà Nội là 21,67%, trong đó, thịt lợn chiếm 20,0%, thịt gà chiếm 23,3%. Tỷ lệ này cho thấy sự ô nhiễm Salmonella trong thịt tươi là một vấn đề đáng quan tâm.

4.2. Mức độ kháng kháng sinh của các chủng Salmonella phân lập

Các chủng Salmonella phân lập được có khả năng kháng cao với streptomycine (83,3%), tetracycline (66,7%), chloramphenicol (50%), amoxicillin (50%), trimethoprime/sulfamethoxazol (50%) và ampicillin (50%). Các chủng được lựa chọn có khả năng đa kháng kháng sinh với 4 - 7 loại kháng sinh.

4.3. Phát hiện các gen kháng thuốc phổ biến tetA cat 1 cmlA floR

Nghiên cứu đã phát hiện 4 kiểu gen kháng sinh là tetA, cat-1, cmlA, floR kháng tetracycline, chloramphenicol và phenicol của chủng Salmonella đa kháng. Tỷ lệ kháng chloramphenicol khá cao, đặc biệt là tỷ lệ kiểu gen cmlA với 83,7% ở chủng L5 (nguồn gốc thịt lợn).

V. Ứng Dụng Và Giải Pháp Kiểm Soát Salmonella Kháng Thuốc

Kết quả nghiên cứu này có thể được sử dụng để phát triển các biện pháp kiểm soát và phòng ngừa sự lây lan của Salmonella đa kháng thuốc trong chuỗi cung ứng thực phẩm. Các biện pháp này bao gồm tăng cường kiểm tra vệ sinh an toàn thực phẩm tại các chợ và lò mổ, khuyến khích sử dụng kháng sinh một cách hợp lý trong chăn nuôi, và nâng cao nhận thức của người tiêu dùng về nguy cơ kháng kháng sinh. Ngoài ra, cần có các nghiên cứu sâu hơn về cơ chế kháng thuốc của Salmonella để phát triển các phương pháp điều trị hiệu quả hơn.

5.1. Biện pháp kiểm soát Salmonella tại các chợ và lò mổ

Cần tăng cường kiểm tra vệ sinh an toàn thực phẩm tại các chợ và lò mổ để đảm bảo rằng thịt được xử lý và bảo quản đúng cách. Các biện pháp vệ sinh như rửa tay, khử trùng dụng cụ và bề mặt tiếp xúc với thịt cần được thực hiện nghiêm ngặt để ngăn ngừa sự lây lan của Salmonella.

5.2. Hướng dẫn sử dụng kháng sinh hợp lý trong chăn nuôi

Cần có các hướng dẫn và quy định rõ ràng về việc sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi để đảm bảo rằng kháng sinh chỉ được sử dụng khi cần thiết và theo chỉ định của bác sĩ thú y. Việc sử dụng kháng sinh để kích thích tăng trưởng cần được loại bỏ hoàn toàn.

5.3. Nâng cao nhận thức cộng đồng về kháng kháng sinh

Cần nâng cao nhận thức của cộng đồng về nguy cơ kháng kháng sinh và tầm quan trọng của việc sử dụng kháng sinh một cách hợp lý. Người tiêu dùng cần được khuyến khích mua thịt từ các nguồn uy tín và nấu chín thịt kỹ trước khi ăn.

VI. Kết Luận Và Hướng Nghiên Cứu Về Gen Kháng Thuốc Salmonella

Nghiên cứu này đã cung cấp những bằng chứng quan trọng về sự lây lan của Salmonella đa kháng thuốc trong thịt tươi tại Hà Nội. Kết quả nghiên cứu cho thấy cần có các biện pháp kiểm soát và phòng ngừa hiệu quả để bảo vệ an toàn thực phẩm và sức khỏe cộng đồng. Trong tương lai, cần có các nghiên cứu sâu hơn về cơ chế kháng thuốc của Salmonella, sự lây lan của gen kháng kháng sinh và tác động của Salmonella đa kháng thuốc đối với sức khỏe con người.

6.1. Tóm tắt kết quả chính và ý nghĩa của nghiên cứu

Nghiên cứu đã xác định được tỷ lệ nhiễm Salmonella cao trong thịt tươi tại Hà Nội, mức độ kháng kháng sinh đáng báo động của các chủng Salmonella phân lập và sự có mặt của các gen kháng thuốc phổ biến. Kết quả nghiên cứu này có ý nghĩa quan trọng trong việc cảnh báo nguy cơ kháng kháng sinh và định hướng các biện pháp kiểm soát và phòng ngừa.

6.2. Hướng nghiên cứu tiếp theo về Salmonella kháng thuốc

Các hướng nghiên cứu tiếp theo có thể tập trung vào việc nghiên cứu cơ chế kháng thuốc của Salmonella, sự lây lan của gen kháng kháng sinh giữa các vi khuẩn và tác động của Salmonella đa kháng thuốc đối với sức khỏe con người. Ngoài ra, cần có các nghiên cứu về hiệu quả của các biện pháp kiểm soát và phòng ngừa khác nhau để đưa ra các khuyến nghị dựa trên bằng chứng.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM TRẦN THỊ HOÀI THU XÁC ĐỊNH GEN KHÁNG THUỐC CỦA CHỦNG VI KHUẨN SALMONELLA ĐA KHÁNG THUỐC PHÂN LẬP TỪ THỊT TƯƠI Ở MỘT SỐ ĐỊA ĐIỂM TẠI HÀ NỘI Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: TS. Võ Thị Bích Thủy PGS. Huỳnh Thị Mỹ Lệ NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 c LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu do tôi trực tiếp thực hiện với sự giúp đỡ của cán bộ, công nhân viên Phòng Hệ gen học vi sinh - Viện nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam dưới sự hướng dẫn khoa học của TS. Võ Thị Bích Thủy.

Các số liệu, kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng được công bố trong công trình nghiên cứu nào khác. Các tài liệu trích dẫn đều được chỉ rõ nguồn gốc xuất xứ, tên tác giả. Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Trần Thị Hoài Thu i c LỜI CẢM ƠN Trước tiên tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Võ Thị Bích Thủy, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn tốt nghiệp.

Tôi xin chân thành cảm ơn thầy giáo PGS. Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Trưởng Bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm - Khoa thú y – Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã đóng góp những ý kiến quý báu giúp tôi trong quá trình hoàn thiện luận văn này. Tôi xin chân thành cám ơn tập thể cán bộ Phòng Hệ gen học vi sinh, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, tập thể Bộ môn Vệ sinh thú y, Viện Thú y Quốc gia đã tạo điều kiện thuận lợi, tận tình giúp đỡ và động viên trong suốt quá trình hoàn thiện luận văn này. Tôi xin được bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới Ban quản lý đào tạo – Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt hai năm học vừa qua.

Cuối cùng, tôi xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới tập thể cán bộ Trung tâm Nghiên cứu ứng dụng và Chuyển giao công nghệ Thú y, gia đình và bạn bè đồng nghiệp đã động viên, cổ vũ và giúp đỡ trong suốt quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Trần Thị Hoài Thu ii c MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.v Danh mục bảng.

vi Danh mục ảnh, hình. vii Trích yếu luận văn. viii Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài.

Mục tiêu nghiên cứu. Tổng quan tài liệu. Tình hình nghiên cứu về vi khuẩn salmonella và bệnh do chúng gây ra. Tình hình nghiên cứu trên thế giới.

Tình hình nghiên cứu ở trong nước. Ô nhiễm salmonella trong thực phẩm có nguồn gốc động vật. Một số đặc điểm của vi khuẩn salmonella. Đặc điểm hình thái.

Đặc tính nuôi cấy. Đặc tính sinh hoá. Sức đề kháng của vi khuẩn Salmonella. Cấu trúc kháng nguyên của vi khuẩn Salmonella.

Các yếu tố gây bệnh của Salmonella. Hiện tượng kháng thuốc của Salmonella. Hiện tượng kháng thuốc của vi khuẩn. Hiện tượng kháng thuốc của Salmonella.

Gen kháng kháng sinh. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu. Thời gian nghiên cứu.

Đối tượng/vật liệu nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu. Phương pháp nghiên cứu.

Phương pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Salmonella spp. Phương pháp xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh. Phương pháp định typ bằng phản ứng huyết thanh học. Phương pháp xác định một số gen kháng sinh của chủng Salmonella đa kháng bằng phương pháp RT-PCR.

Phương pháp xử lý số liệu. Kết quả và thảo luận. Kết quả nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Salmonella. Kết quả xác định tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella spp.

trong mẫu thịt lợn, gà. Kết quả giám định các đặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn Salmonella spp. phân lập được. Kết quả kiểm tra khả năng mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn salmonella phân lập được.

Kết quả định typ chủng vi khuẩn salmonella đa kháng phân lập được. Kết quả phát hiện và đánh giá gen kháng thuốc của chủng Salmonella đa kháng phân lập được. Kết quả tách chiết RNA tổng số của chủng Salmonella đa kháng phân lập được. Kết quả RT-PCR phát hiện gen kháng kháng sinh của chủng Salmonella đa kháng.

Kết quả đánh giá gen kháng kháng sinh của chủng Salmonella đa kháng. Kết luận và kiến nghị .55 Tài liệu tham khảo .57 iv c DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ACMSF Advisory Committee on the Microbiological Safety of Food BGA Brilliant Green Agar BHI Brain Heart Infusion BLAST Basic Local Alignment Search Tool BPW Buffer Peptone Water BSA Bismuth Sulphite Agar CDC Center for Diease Control and Prevention CIRAD Centre International de Reseaux Agriculture and Development CLSI Clinical Laboratory Standards Instittute Cs Cộng sự DEPC- DW Diethylpyrocarbonate Distilled water DNA Deoxyribonucleic Acid FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations ISO International Organization for Standardization LCD Lysine Decarboxylase broth MK Muller kauffmann MSRV Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis NCBI National Center for Biotechnology Information RNA RibonucleicAcid RT-PCR Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam Tp Thành phố TSI Triple Sugar Iron VSATTP Vệ sinh an toàn thực phẩm XLD Xylose Lysine Desoxycholate XLT4 Xylose Lysine Tergitol 4 v c DANH MỤC BẢNG Bảng 3. Bảng đánh giá mức độ mẫn cảm của vi khuẩnvới một số loại kháng sinh. Trình tự các cặp mồi đặc hiệu xác định gen kháng kháng sinh.

Tỷ lệ phân lập vi khuẩn Salmonella spp. từ các mẫu thịt. Kết quả giám định đặc tính nuôi cấy và hình thái khuẩn lạc của các chủng Salmonella spp. trong quá trình phân lập.

Kết quả giám định một số đặc tính sinh hoá của các chủng vi khuẩn Salmonella spp. phân lập được. Kết quả kiểm tra mức độ mẫn cảm với một số loại khángsinh của các chủng vi khuẩn Salmonellaspp. phân lập được.

Mức độ kháng kháng sinh của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập được. Kết quả kháng chloramphenicol và tetracycline của chủng vi khuẩn Salmonella phân lập được. Kết quả xác định serotype của 2 chủng vi khuẩn Salmonella đa kháng sinh. Nồng độ RNA của chủng Salmonella sau khi tách chiết .46 vi c DANH MỤC ẢNH, HÌNH Hình 4.

Vi khuẩn Salmonella trên môi trường MSRV. Vi khuẩn Salmonella trên môi trường thạch XLT4. Vi khuẩn Salmonella trên môi trường thạch Rambach. Vi khuẩn Salmonella trên môi trường thạch Kligler.

Vi khuẩn Salmonella trên môi trường thạch Kligler. Vi khuẩn Salmonella trong môi trường Lysine decarboxylase broth (LDC). Vi khẩn Salmonella trên môi trường thạch nghiêng Simmoncitrate. Vi khuẩn Salmonella trong môi trường Ureaza broth.

Tần số kháng kháng sinh của các chủng Salmonella phân lập được. Kết quả kiểm tra RNA 6 chủng Salmonella L5, G7, L2(1), L2(2), G1(1), G1(2). Kết quả RT – PCR phát hiện sự có mặt của gen tetB mã hóa kháng tetracycline của chủng Salmonella đa kháng. Kết quả RT - PCR phát hiện gen floR mã hóa kháng phenicol của chủng Salmonella đa kháng nguồn gốc từ gà G7.

Kết quả RT – PCR phát hiện gen cmlA mã hóa kháng chloramphenicol của chủng Salmonella đa kháng nguồn gốc từ lợn L5. Tỷ lệ biểu hiện gen tetA/16S rRNA của chủng Salmonella đa kháng được phân tích bằng phương pháp RT-PCR. Gen 16SrRNA (house keeping gene) được dùng để so sánh. Tỷ lệ biểu hiện gen cat-1/16SrRNA của chủng Salmonella đa kháng được phân tích bằng phương pháp RT-PCR.

Gen 16SrRNA (house keeping gene) được dùng để so sánh. Tỷ lệ biểu hiện gen cmlA/16S rRNA của chủng Salmonella đa kháng được phân tích bằng phương pháp RT-PCR. Gen 16SrRNA (house keeping gene) được dùng để so sánh. Tỷ lệ biểu hiện gen floR/16S rRNA của chủng Salmonella đa kháng được phân tích bằng phương pháp RT-PCR.

Gen 16SrRNA (house keeping gene) được dùng để so sánh .53 vii c TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Trần Thị Hoài Thu Tên Luận văn: Xác định gen kháng thuốc của chủng vi khuẩ Salmonella đa kháng phân lập từ thịt tươi ở một số địa điểm tại Hà Nội. Ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu 60 mẫu thực phẩm nguồn gốc động vật (thịt lợn, thịt gà) bày bán tại các chợ Hà Nội được kiểm tra để xác định sự có mặt và mức độ biểu hiện của một số gen kháng thuốc của chủng Salmonella gây bệnh. Phương pháp nghiên cứu Phương pháp lấy mẫu, nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Salmonella, xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh, định typ bằng phản ứng huyết thanh học. Phương pháp tách chiết RNA tổng số, tổng hợp cDNA, thiết kế mồi, RT-PCR và điện di agarogel.

Kết quả chính và kết luận - Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella spp. trong các mẫu thịt thu thập từ một số chợ tự do trên địa bàn Hà Nội là 21,67% trong đó, thịt lợn chiếm 20,0%, thịt gà chiếm 23,3%. - Các chủng vi khuẩn Salmonella được kiểm tra đều mang các đặc tính sinh vật hóa học đặc trưng như các tài liệu trong và ngoài nước đã mô tả. - Trong số 13 chủng Salmonella phân lập được khi kiểm tra mức độ mẫn cảm với 10 loại kháng sinh thông dụng đều kháng cao với streptomycine (chiếm tỷ lệ 83,3%), tetracycline (chiếm tỷ lệ 66,7%), tiếp theo là kháng chloramphenicol (50%), amoxicillin (50%), trimethoprime/sulfamethoxazol (50%), ampicillin (50%).Các chủng được lựa chọn có khả năng đa kháng kháng sinh với 4 - 7 loại kháng sinh.

- Từ các chủng Salmonella đa kháng thực hiện định typ: 2 serovar đã được xác định là S. Rissen có mặt ở mẫu thịt gà (G7) S. Meleagridis có mặt ở mẫu có nguồn gốc thịt lơn (L5). - Đã tách chiết thành công các mẫu RNA tổng số và tổng hợp được cDNA phục vụ cho tiến hành thí nghiệm RT-PCR.

- Phát hiện 4 kiểu gen kháng sinh là tetA, cat-1, cmlA, floR kháng tetracycline, chloramphenicol và phenicol của chủng Salmonella đa kháng. viii c - Tỷ lệ kháng chloramphenicol khá cao, đặc biệt là tỷ lệ kiểu gen cmlA với 83,7% ở chủng L5(nguồn gốc thịt lợn). - Mẫu thịt lợn có tỷ lệ gen kháng sinh chủng Salmonella đa kháng cao hơn mẫu thịt gà. ix c THESIS ABSTRACT Master candidate: Tran Thi Hoai Thu Thesis title: Determination of resistance genes multidrug-resistant Salmonella strains isolated from fresh meat in some places in Hanoi.