Luận án tiến sĩ sinh học: Ảnh hưởng của chất kích kháng lên biểu hiện gen trong quá trình sinh tổng hợp curcuminoid ở nghệ đen

Người đăng

Ẩn danh

Thể loại

luận án
139
0
0

Phí lưu trữ

30.000 VNĐ

Mục lục chi tiết

LỜI CAM ĐOAN

BẢNG CHÚ THÍCH CHỮ VIẾT TẮT

MỤC LỤC

1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1. CÂY NGHỆ ĐEN

1.1.1. Đặc điểm thực vật học

1.1.2. Phân bố

1.1.3. Thành phần hóa học chính của củ nghệ đen

1.1.3.1. Tinh dầu
1.1.3.2. Curcuminoid

1.1.4. Công dụng của nghệ đen

1.1.4.1. Hoạt tính giảm đau
1.1.4.2. Hoạt tính kháng ung thư
1.1.4.3. Hoạt tính bảo vệ gan
1.1.4.4. Hoạt tính kháng viêm và chống loét
1.1.4.5. Hoạt tính chống oxy hóa
1.1.4.6. Hoạt tính kháng khuẩn và kháng nấm
1.1.4.7. Các hoạt tính khác

1.2. ELICITOR VÀ CÁC ỨNG DỤNG

1.2.1. Cơ chế kích kháng

1.2.2. Các yếu tố ảnh hưởng đến sự kích kháng

1.2.3. Ứng dụng của elicitor

1.2.4. Elicitor sinh học

1.2.5. Elicitor phi sinh học

1.3. CÁC GEN THAM GIA TỔNG HỢP CURCUMINOID

1.3.1. Các con đường sinh tổng hợp curcuminoid

1.3.2. Vai trò của các gen tham gia chu trình tổng hợp curcuminoid

1.3.3. Gen mã hóa enzyme diketide-CoA synthase (DCS)

1.3.4. Gen mã hóa enzyme curcumin synthase (CURS)

1.3.5. Gen mã hóa enzyme Curcuminoid synthase

1.3.6. Gen mã hóa enzyme Chalcone synthase

1.3.7. Tổng hợp curcuminoid theo phương thức tái tổ hợp

1.3.8. Cải thiện sự biểu hiện gen bằng xử lý elicitor

2. CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1. Nuôi cấy in vitro cây nghệ đen

2.2.2. Khử trùng mẫu vật

2.2.3. Tái sinh chồi và tạo rễ in vitro

2.2.4. Nuôi cấy callus

2.2.5. Nuôi cấy tế bào

2.2.6. Phân lập các gen tổng hợp curcuminoid

2.2.7. Tách chiết DNA tổng số

2.2.8. Khuếch đại PCR

2.2.9. Tạo dòng và chú giải gen

2.2.10. Xây dựng cây phả hệ

2.2.11. Xác định sự biểu hiện của các gen tổng hợp curcuminoid

2.2.12. Phân tích RT-PCR

2.2.13. Phân tích HPLC

2.2.14. Xử lý thống kê

3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

3.1. THIẾT LẬP NUÔI CẤY TẾ BÀO

3.1.1. Nhân giống cây nghệ đen in vitro

3.1.2. Tạo rễ in vitro

3.1.3. Nuôi cấy callus

3.1.4. Ảnh hưởng của 2,4-D và KIN

3.1.5. Ảnh hưởng của 2,4-D và NAA

3.1.6. Ảnh hưởng của 2,4-D và AgNO3

3.1.7. Nuôi cấy tế bào nghệ đen

3.2. NHẬN DẠNG CÁC GEN TỔNG HỢP CURCUMINOID

3.2.1. Phân lập gen

3.2.2. Phân tích biểu hiện của các gen tổng hợp curcuminoid

3.3. ẢNH HƯỞNG CỦA ELICITOR LÊN QUÁ TRÌNH SINH TỔNG HỢP CURCUMINOID

3.3.1. Thăm dò ảnh hưởng của các elicitor lên biểu hiện của các gen tổng hợp curcuminoid

3.3.2. Biểu hiện của gen tổng hợp curcuminoid

3.4. THIẾT LẬP NUÔI CẤY TẾ BÀO (LẶP)

3.4.1. Nhân giống cây nghệ đen in vitro

3.4.2. Nuôi cấy callus và tế bào cây nghệ đen

3.5. PHÂN LẬP CÁC GEN TỔNG HỢP CURCUMINOID

3.5.1. Phân lập gen tổng hợp curcuminoid

3.5.2. Sự biểu hiện của các gen tổng hợp curcuminoid

3.6. NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ELICITOR LÊN SỰ BIỂU HIỆN CỦA CÁC GEN TỔNG HỢP CURCUMINOID

3.6.1. Đặc điểm của các elicitor sử dụng trong nghiên cứu

3.6.2. Dịch chiết nấm men

3.6.3. Ảnh hưởng của elicitor lên sự sinh trưởng của tế bào

3.6.4. Ảnh hưởng của elicitor lên mức độ biểu hiện gen

3.6.5. Ảnh hưởng của các elicitor lên khả năng sản xuất curcumin

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

DANH MỤC CÁC CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Giới thiệu về nghệ đen và curcuminoid

Nghệ đen (Curcuma zedoaria Roscoe) là một loài thảo dược thuộc họ Gừng, được sử dụng rộng rãi trong y học cổ truyền. Củ nghệ đen chứa các hợp chất curcuminoid, bao gồm curcumin, demethoxycurcumin và bisdemethoxycurcumin, có nhiều hoạt tính sinh học như kháng viêm, kháng khuẩn, chống oxy hóa và kháng ung thư. Nghiên cứu này tập trung vào việc tăng cường sinh tổng hợp các curcuminoid thông qua việc sử dụng các chất kích kháng để điều chỉnh biểu hiện gen liên quan.

1.1. Đặc điểm thực vật học và thành phần hóa học

Nghệ đen là cây thân thảo, cao khoảng 1-1,5m, có củ hình trứng với màu vàng lưu huỳnh. Củ chứa các hợp chất chính như tinh dầu và curcuminoid. Tinh dầu bao gồm các sesquiterpene như curzerenone và germacrone, trong khi curcuminoid là nhóm chất màu vàng có hoạt tính sinh học cao. Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng curcuminoid có khả năng ức chế sự phát triển của tế bào ung thư và bảo vệ gan.

1.2. Công dụng y học của nghệ đen

Nghệ đen được sử dụng trong y học cổ truyền để điều trị các bệnh như viêm, đau nhức, và các vấn đề về da. Các hoạt chất trong nghệ đen, đặc biệt là curcuminoid, có tác dụng kháng viêm, kháng khuẩn, và chống oxy hóa. Nghiên cứu gần đây cũng cho thấy curcuminoid có tiềm năng trong điều trị các bệnh ung thư và bệnh Alzheimer.

II. Chất kích kháng và biểu hiện gen

Chất kích kháng (elicitor) là các chất hóa học hoặc sinh học được sử dụng để kích thích cơ chế bảo vệ của thực vật, từ đó tăng cường sinh tổng hợp các hợp chất thứ cấp như curcuminoid. Nghiên cứu này tập trung vào việc sử dụng các chất kích kháng như dịch chiết nấm men (YE), salicylic acid (SA) và methyl jasmonate (MeJA) để điều chỉnh biểu hiện gen liên quan đến sinh tổng hợp curcuminoid trong nghệ đen.

2.1. Cơ chế kích kháng

Chất kích kháng hoạt động bằng cách kích thích các con đường chuyển hóa thứ cấp trong tế bào thực vật, dẫn đến sự gia tăng biểu hiện gen liên quan đến sinh tổng hợp các hợp chất có giá trị dược phẩm. Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng YE và SA có khả năng tăng cường biểu hiện gen của các enzyme tham gia vào quá trình tổng hợp curcuminoid.

2.2. Ứng dụng của chất kích kháng

Các chất kích kháng như YE và SA đã được sử dụng rộng rãi trong nuôi cấy in vitro để tăng cường sản xuất các hợp chất thứ cấp. Nghiên cứu này sử dụng các chất kích kháng để tăng cường biểu hiện gen của các enzyme như diketide-CoA synthase (DCS) và curcumin synthase (CURS) trong nghệ đen, từ đó tăng cường sinh tổng hợp curcuminoid.

III. Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích kháng lên biểu hiện gen

Nghiên cứu này nhằm xác định ảnh hưởng của các chất kích kháng lên biểu hiện gen liên quan đến sinh tổng hợp curcuminoid trong nghệ đen. Các gen được nghiên cứu bao gồm CzDCS, CzCURS1, CzCURS2 và CzCURS3. Kết quả cho thấy việc sử dụng YE và SA làm tăng đáng kể biểu hiện gen và sản lượng curcuminoid.

3.1. Phân lập và biểu hiện gen

Các gen CzDCS, CzCURS1, CzCURS2 và CzCURS3 đã được phân lập và xác định mức độ biểu hiện trong củ và callus của nghệ đen. Kết quả cho thấy gen CzDCS có vai trò quan trọng nhất trong sinh tổng hợp curcuminoid, với mức độ biểu hiện cao hơn so với các gen khác.

3.2. Ảnh hưởng của chất kích kháng

Việc sử dụng YE và SA làm tăng mức độ biểu hiện gen của các enzyme tham gia vào sinh tổng hợp curcuminoid. Đặc biệt, YE ở nồng độ 1 g/L sau 5 ngày nuôi cấy đã làm tăng biểu hiện gen lên 2,78 lần so với đối chứng, đồng thời tăng sản lượng curcuminoid trong tế bào nghệ đen.

IV. Kết luận và ứng dụng thực tiễn

Nghiên cứu này đã cung cấp bằng chứng về việc sử dụng chất kích kháng để tăng cường biểu hiện gensinh tổng hợp curcuminoid trong nghệ đen. Kết quả có ý nghĩa quan trọng trong việc phát triển các phương pháp nuôi cấy in vitro để sản xuất curcuminoid với hiệu suất cao, phục vụ cho ngành dược phẩm và y học.

4.1. Đóng góp mới của nghiên cứu

Nghiên cứu này là một trong những nghiên cứu đầu tiên xác định và phân tích các gen liên quan đến sinh tổng hợp curcuminoid trong nghệ đen. Việc sử dụng AgNO3 trong nuôi cấy in vitro cũng là một đóng góp mới, giúp tăng hiệu quả nuôi cấy so với các nghiên cứu trước đây.

4.2. Ứng dụng thực tiễn

Kết quả nghiên cứu có thể được ứng dụng trong việc sản xuất curcuminoid với quy mô lớn, phục vụ cho ngành dược phẩm. Các chất kích kháng như YE và SA có thể được sử dụng để tăng cường sản xuất curcuminoid trong các hệ thống nuôi cấy tế bào thực vật.

01/03/2025
Luận án tiến sĩ sinh học nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích kháng lên sự biểu hiện của một số gen tham gia quá trình sinh tổng hợp curcuminoid ở tế bào nghệ đen curcuma zedoaria roscoe

Bạn đang xem trước tài liệu:

Luận án tiến sĩ sinh học nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích kháng lên sự biểu hiện của một số gen tham gia quá trình sinh tổng hợp curcuminoid ở tế bào nghệ đen curcuma zedoaria roscoe

Nghiên cứu "Ảnh hưởng chất kích kháng lên biểu hiện gen sinh tổng hợp curcuminoid ở nghệ đen Curcuma zedoaria Roscoe" tập trung vào việc khám phá cách các chất kích kháng tác động đến quá trình sinh tổng hợp curcuminoid, một hợp chất có giá trị dược liệu cao trong nghệ đen. Nghiên cứu này không chỉ làm sáng tỏ cơ chế điều hòa gen liên quan mà còn mở ra tiềm năng ứng dụng trong việc tăng cường sản xuất curcuminoid, mang lại lợi ích cho ngành dược phẩm và thực phẩm chức năng. Để hiểu sâu hơn về các phương pháp tối ưu hóa quá trình sinh tổng hợp hợp chất tự nhiên, bạn có thể tham khảo Luận văn thạc sĩ công nghệ sinh học khảo sát ảnh hưởng của một số yếu tố hóa học lên tăng trưởng và sinh tổng hợp carotenoid từ rễ cà rốt daucuc carota, nghiên cứu này cung cấp góc nhìn tương tự về việc điều chỉnh yếu tố hóa học để tăng cường sản xuất hợp chất sinh học. Ngoài ra, Luận án tiến sĩ nghiên cứu thu nhận chế phẩm phytoestrogen từ phôi đậu tương ngành công nghệ sinh học cũng là một tài liệu hữu ích, giúp bạn hiểu rõ hơn về quy trình thu nhận và tối ưu hóa các hợp chất tự nhiên. Cuối cùng, Luận văn thạc sĩ công nghệ thực phẩm nghiên cứu thu nhận và làm sạch lactase từ lactobacillus acidophilus cung cấp thêm kiến thức về quy trình tách chiết và tinh chế enzyme, một khía cạnh quan trọng trong nghiên cứu sinh học.