I. Cải tiến quy trình ly trích DNA
Cải tiến quy trình ly trích DNA từ niêm mạc miệng là trọng tâm của nghiên cứu này. Mục tiêu là tối ưu hóa các bước thực hiện, giảm thời gian và chi phí, đồng thời đảm bảo độ chính xác trong xét nghiệm huyết thống. Quy trình cải tiến dựa trên phương pháp NaOH-SDS, với nồng độ SDS 0.01%, được chứng minh là phù hợp nhất cho phản ứng PCR-STR. Quy trình này chỉ gồm hai bước đơn giản, giảm rủi ro và rút ngắn thời gian ly trích xuống còn 15 phút.
1.1. Phương pháp ly trích NaOH SDS
Phương pháp ly trích NaOH-SDS được cải tiến từ quy trình ly trích thô DNA. Nồng độ SDS 0.01% được xác định là tối ưu cho việc ly trích DNA từ niêm mạc miệng. Phương pháp này giúp loại bỏ các tạp chất mà không cần qua nhiều bước phức tạp, đảm bảo DNA thu được có thể sử dụng trực tiếp trong phản ứng PCR-STR.
1.2. So sánh với bộ kit thương mại
Quy trình cải tiến được so sánh với bộ kit thương mại E.A Forensic DNA Kit. Kết quả cho thấy, mặc dù cường độ huỳnh quang trung bình thấp hơn, nhưng độ chính xác và khả năng ứng dụng của quy trình cải tiến tương đương. Điều này chứng minh tính khả thi của quy trình trong thực tiễn.
II. Ứng dụng trong xét nghiệm huyết thống
Ứng dụng DNA từ niêm mạc miệng trong xét nghiệm huyết thống là mục tiêu chính của nghiên cứu. Quy trình cải tiến được thử nghiệm trên 200 mẫu, cho kết quả chính xác và ổn định. Hơn 90% mẫu có cường độ huỳnh quang trên 100 RFU, và 100% mẫu có tín hiệu trên 50 RFU. Điều này khẳng định tính ứng dụng cao của quy trình trong các phòng xét nghiệm hiện đại.
2.1. Phân tích huyết thống bằng PCR STR
Phân tích huyết thống được thực hiện bằng kỹ thuật PCR-STR, sử dụng bộ kit PowerPlex ®Fusion System. Quy trình cải tiến cho phép khuếch đại 24 vị trí STR trong một phản ứng multiplex, đảm bảo độ chính xác cao trong việc xác định mối quan hệ huyết thống.
2.2. Đánh giá tính khả thi
Quy trình cải tiến được đánh giá tính khả thi thông qua việc thử nghiệm trên 200 mẫu. Kết quả cho thấy không có mẫu nào bị ức chế, và tất cả các cặp mẫu đã biết mối quan hệ huyết thống đều trùng khớp. Điều này chứng minh quy trình có thể ứng dụng rộng rãi trong thực tiễn.
III. Kỹ thuật DNA và công nghệ hiện đại
Kỹ thuật DNA và công nghệ DNA hiện đại đóng vai trò quan trọng trong việc cải tiến quy trình ly trích. Sự phát triển của các thế hệ Taq polymerase kháng ức chế cho phép thực hiện phản ứng PCR trên mẫu DNA chứa nhiều tạp chất. Điều này mở ra cơ hội ứng dụng các quy trình ly trích thô DNA trong các phòng xét nghiệm hiện đại.
3.1. Công nghệ Taq polymerase kháng ức chế
Công nghệ Taq polymerase kháng ức chế là yếu tố then chốt giúp quy trình ly trích thô DNA trở nên khả thi. Các thế hệ Taq polymerase mới có khả năng chịu được các tạp chất trong mẫu DNA, cho phép thực hiện phản ứng PCR phức tạp mà không cần qua bước làm sạch DNA.
3.2. Ưu thế của quy trình ly trích thô
Quy trình ly trích thô DNA có nhiều ưu thế, bao gồm giảm thời gian, chi phí và rủi ro trong quá trình xử lý mẫu. Quy trình này phù hợp với các phòng xét nghiệm cần kết quả nhanh chóng và chính xác, đặc biệt trong lĩnh vực xét nghiệm huyết thống.
