Ứng Dụng Kỹ Thuật NAT Để Phát Hiện Sớm HIV, HBV, HCV Ở Người Hiến Máu

Tài liệu nghiên cứu Luận văn ứng dụng kỹ thuật nat để phát hiện sớm hiv hbv hcv ở người cho máu, tổng hợp lý thuyết và thực hành, cung cấp kiến thức chuyên sâu về kỹ thuật.

• Tác giả: Nguyễn Anh Trí
• Trường học: Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương
• Chuyên ngành: Y học
• Đề tài: Ứng dụng kỹ thuật NAT phát hiện sớm HIV, HBV, HCV ở người hiến máu
• Loại tài liệu: báo cáo kết quả nghiên cứu
• Năm xuất bản: 2008
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• Các chữ viết tắt
• Đặt vấn đề
• 1. Chương 1: Tổng quan tài liệu
• 1.1. Lịch sử sàng lọc các tác nhân lây bệnh qua đường truyền máu
• 1.1.1. Trên thế giới
• 1.2. Đặc điểm sinh học của HIV, HCV, HBV
• 1.2.1. Virus gây suy giảm miễn dịch ở người (HIV)
• 1.2.2. Virus viêm gan C
• 1.2.3. Virus viêm gan B
• 1.3. Các biện pháp bảo đảm an toàn truyền máu, phòng lây nhiễm HIV, HBV, HCV qua đường truyền máu
• 1.3.1. Lựa chọn NCM an toàn
• 1.3.2. Các kỹ thuật sàng lọc huyết thanh HIV, HBV, HCV cho NCM
• 1.3.3. Kỹ thuật sàng lọc NAT
• 1.3.3.1. Cơ sở sinh học phân tử
• 1.3.3.2. Nguyên lý kỹ thuật
• 1.3.3.3. Các giai đoạn kỹ thuật
• 1.4. Tình hình áp dụng quy trình kỹ thuật sàng lọc NAT để phát hiện sớm NCM nhiễm HIV, HBV, HCV trên thế giới và tại Việt Nam
• 1.4.1. Trên thế giới
• 1.4.2. Tại Việt Nam
• 2. Chương 2: Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
• 2.1. Đối tượng nghiên cứu
• 2.2. Vật liệu nghiên cứu
• 2.3. Phương pháp nghiên cứu
• 2.3.1. Kỹ thuật NAT
• 2.3.2. Xử lý số liệu
• 3. Chương 3: Kết quả nghiên cứu
• 3.1. Kết quả nghiên cứu hiệu quả sử dụng kỹ thuật NAT trong việc nâng cao tính an toàn sinh học của các chế phẩm máu
• 3.1.1. Kết quả xét nghiệm NAT của mẫu trộn 8 để phát hiện đồng thời cả 3 loại virus HIV, HBV, HCV
• 3.1.2. Kết quả tỉ lệ không có giá trị trong quá trình xét nghiệm
• 3.1.3. Số lần chạy có không có giá trị trong quá trình xét nghiệm
• 3.1.4. Kết quả xác định loại virus bằng Probe đặc hiệu
• 3.1.5. Kết quả xác định người cho máu bị nhiễm virus viêm gan C trong mẫu trộn dương tính
• 3.1.6. Tỉ lệ nhiễm các virus được sàng lọc bằng kỹ thuật NAT trong nghiên cứu
• 3.1.7. Kết quả RT-PCR của mẫu bị nhiễm virus HCV
• 3.2. Xây dựng labo sinh học phân tử (SHPT) thực hiện được các kỹ thuật SHPT trong đó có NAT phục vụ cho nội dung sàng lọc máu và đào tạo
• 4. Chương 4: Bàn luận
• 4.1. Kết quả nghiên cứu hiệu quả sử dụng kỹ thuật NAT trong việc nâng cao tính an toàn sinh học của các chế phẩm máu
• 4.1.1. Kỹ thuật NAT
• 4.1.2. Tỉ lệ dương tính khi phát hiện đồng thời cả 3 loại virus HIV, HBV, HCV (Procleix Ultrio Assay)
• 4.1.3. Tỉ lệ không có giá trị trong quá trình xét nghiệm
• 4.1.4. Kết quả xác định loại virus bằng Probe đặc hiệu
• 4.1.5. Kết quả xác định người cho máu bị nhiễm virus viêm gan C trong mẫu trộn dương tính
• 4.1.6. Tỉ lệ nhiễm các virus được sàng lọc bằng kỹ thuật NAT trong nghiên cứu
• 4.1.7. Kết quả RT-PCR và ELISA của mẫu bị nhiễm virus HCV
• 4.2. Xây dựng labo sinh học phân tử (SHPT) thực hiện được các kỹ thuật SHPT trong đó có NAT phục vụ cho nội dung sàng lọc máu và đào tạo
• Kết luận
• Kiến nghị
• Tài liệu tham khảo
• Danh sách mẫu huyết tương

Tóm tắt

I. Giới thiệu về kỹ thuật NAT và ứng dụng trong phát hiện sớm HIV HBV HCV

Kỹ thuật NAT (Nucleic Acid Testing) là một phương pháp xét nghiệm sinh học phân tử hiện đại, cho phép phát hiện trực tiếp RNA hoặc DNA của virus trong máu. Kỹ thuật này đã được ứng dụng rộng rãi trong việc phát hiện sớm HIV, HBV, HCV ở người hiến máu, giúp giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm qua đường truyền máu. So với các phương pháp huyết thanh học truyền thống như ELISA, NAT có khả năng rút ngắn giai đoạn cửa sổ từ 80-90 ngày xuống còn 23 ngày đối với HCV, từ 22-30 ngày xuống còn 11 ngày đối với HIV, và từ 50-60 ngày xuống còn 34 ngày đối với HBV.

1.1. Cơ sở khoa học của kỹ thuật NAT

Kỹ thuật NAT dựa trên nguyên lý phát hiện acid nucleic của virus thông qua các phương pháp như PCR (Polymerase Chain Reaction). Phương pháp này cho phép xác định sự hiện diện của virus HIV, HBV, HCV ngay cả trong giai đoạn cửa sổ, khi các phương pháp huyết thanh học chưa thể phát hiện được. Điều này đặc biệt quan trọng trong việc đảm bảo an toàn truyền máu và ngăn chặn sự lây lan của các bệnh truyền nhiễm.

1.2. Lợi ích của kỹ thuật NAT trong y tế cộng đồng

Việc áp dụng kỹ thuật NAT trong sàng lọc máu không chỉ giúp phát hiện sớm các bệnh truyền nhiễm mà còn góp phần nâng cao sức khỏe cộng đồng. Nhờ khả năng phát hiện virus ở giai đoạn sớm, NAT giúp giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm qua đường truyền máu, đặc biệt là ở các quốc gia có tỷ lệ nhiễm HIV, HBV, HCV cao. Điều này đã được chứng minh qua các nghiên cứu tại Mỹ, Nhật Bản, và các nước châu Âu.

II. Phương pháp nghiên cứu và kết quả ứng dụng kỹ thuật NAT

Nghiên cứu được thực hiện từ tháng 10/2005 đến tháng 12/2007 tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương, với mục tiêu đánh giá hiệu quả của kỹ thuật NAT trong việc nâng cao tính an toàn của các chế phẩm máu. Kết quả cho thấy, NAT đã giúp phát hiện được các trường hợp nhiễm HIV, HBV, HCV mà các phương pháp truyền thống không thể phát hiện được, đặc biệt là trong giai đoạn cửa sổ.

2.1. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu được thực hiện trên 6000 mẫu máu từ người hiến máu, sử dụng kỹ thuật NAT để phát hiện đồng thời HIV, HBV, HCV. Các mẫu máu được xử lý và phân tích bằng phương pháp PCR, với độ nhạy và độ đặc hiệu cao. Kết quả cho thấy, NAT đã phát hiện được các trường hợp nhiễm virus mà phương pháp ELISA không thể phát hiện được.

2.2. Kết quả và đánh giá hiệu quả

Kết quả nghiên cứu cho thấy, kỹ thuật NAT đã giúp giảm đáng kể tỷ lệ lây nhiễm qua đường truyền máu. Cụ thể, tỷ lệ phát hiện HIV, HBV, HCV tăng lên đáng kể so với phương pháp truyền thống. Điều này khẳng định vai trò quan trọng của NAT trong việc đảm bảo an toàn truyền máu và nâng cao chất lượng y tế cộng đồng.

III. Kết luận và kiến nghị

Nghiên cứu đã chứng minh hiệu quả vượt trội của kỹ thuật NAT trong việc phát hiện sớm HIV, HBV, HCV ở người hiến máu. Việc áp dụng NAT không chỉ giúp giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm mà còn góp phần nâng cao chất lượng sàng lọc máu và đảm bảo an toàn truyền máu. Để phát huy tối đa hiệu quả của NAT, cần đầu tư thêm vào cơ sở hạ tầng và đào tạo nhân lực chuyên môn.

3.1. Ý nghĩa thực tiễn của nghiên cứu

Nghiên cứu này không chỉ mang lại lợi ích cho người hiến máu mà còn góp phần bảo vệ sức khỏe cộng đồng thông qua việc giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm các bệnh truyền nhiễm. Kỹ thuật NAT đã trở thành một công cụ không thể thiếu trong sàng lọc máu hiện đại.

3.2. Kiến nghị cho tương lai

Để mở rộng ứng dụng kỹ thuật NAT, cần có sự đầu tư mạnh mẽ từ các cơ quan y tế và chính phủ. Đồng thời, cần tăng cường đào tạo nhân lực chuyên môn để đảm bảo việc triển khai NAT một cách hiệu quả và bền vững.

Nội dung chính

Ứng Dụng Kỹ Thuật NAT Phát Hiện Sớm HIV, HBV, HCV Ở Người Cho Máu: Bước Đột Phá Nâng Cao An Toàn Truyền Máu Tại Việt Nam

---

Tóm tắt nghiên cứu (Research Summary)

• Câu hỏi nghiên cứu chính (Main Research Question): Việc ứng dụng kỹ thuật xét nghiệm khuếch đại acid nucleic (Nucleic Acid Testing - NAT) có mang lại hiệu quả vượt trội trong việc phát hiện sớm các tác nhân virus nguy hiểm gồm HIV, HBV, HCV ở những người cho máu đã có kết quả sàng lọc huyết thanh học (ELISA) âm tính hay không?
• Phương pháp nghiên cứu (Methodology Snapshot): Nghiên cứu tiến cứu cắt ngang thực hiện trên 9.392 mẫu huyết tương của người hiến máu tình nguyện và người cho máu tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương (từ tháng 01/2007 đến tháng 05/2007). Tất cả các mẫu đều đã âm tính với ELISA. Nghiên cứu sử dụng chiến lược gộp mẫu (pool 8) với bộ sinh phẩm Procleix Ultrio Assay và Discriminatory Assay dựa trên công nghệ khuếch đại phiên mã trung gian (TMA) kết hợp đầu dò phát quang (HPA).
• Phát hiện cốt lõi (Key Findings): Trong số 1.174 mẫu gộp (tương đương 9.392 mẫu đơn), kỹ thuật NAT đã phát hiện chính xác mẫu nhiễm virus viêm gan C (HCV-RNA dương tính) đang trong giai đoạn cửa sổ huyết thanh học mà ELISA bỏ sót. Tỷ lệ chạy xét nghiệm không hợp lệ (invalid rate) được kiểm soát ở mức cực thấp (0,68% ở lần 1 và 0% khi lặp lại).
• Ý nghĩa thực tiễn (Implications): Khẳng định tính cấp thiết và hiệu quả sinh học của việc tích hợp xét nghiệm NAT vào quy trình thường quy tại các trung tâm truyền máu, thu hẹp khoảng trống "giai đoạn cửa sổ", bảo vệ tối đa tính mạng người nhận máu và đặt nền móng cho chuẩn hóa an toàn truyền máu quốc gia.

---

Bối cảnh và tầm quan trọng (Context & Significance)

Thực trạng an toàn truyền máu và thách thức "Giai đoạn cửa sổ"

Máu và các chế phẩm từ máu là nguồn tài nguyên điều trị vô giá trong cấp cứu ngoại khoa, sản khoa và điều trị huyết học. Tuy nhiên, truyền máu cũng tiềm ẩn nguy cơ lây truyền các bệnh nhiễm trùng nghiêm trọng, đặc biệt là ba loại virus nguy hiểm: HIV (Human Immunodeficiency Virus), HBV (Hepatitis B Virus) và HCV (Hepatitis C Virus).

Từ năm 1994, Việt Nam đã triển khai sàng lọc bắt buộc 3 loại virus này bằng các kỹ thuật huyết thanh học như ELISA (phát hiện kháng nguyên HBsAg hoặc kháng thể kháng HIV, HCV). Mặc dù kỹ thuật ELISA thế hệ 3 và thế hệ 4 có độ nhạy cao, phương pháp này tồn tại một "lỗ hổng" sinh học không thể vượt qua: Giai đoạn cửa sổ (Window Period) – khoảng thời gian từ khi virus xâm nhập vào cơ thể đến khi lượng kháng nguyên/kháng thể đạt ngưỡng phát hiện miễn dịch. Trong giai đoạn này, người hiến máu mang mầm bệnh vẫn có kết quả xét nghiệm ELISA âm tính, tạo ra rủi ro lây nhiễm chéo cực kỳ nguy hiểm cho người nhận máu.

+-------------------------------------------------------------------------+
|                  RÚT NGẮN GIAI ĐOẠN CỬA SỔ NHỜ KỸ THUẬT NAT              |
|                                                                         |
| Virus HCV:  [====== ELISA: 80 - 90 ngày ======]                         |
|             [== NAT: 23 ngày ==]  (--> Rút ngắn ~60 ngày)               |
|                                                                         |
| Virus HBV:  [==== ELISA: 50 - 60 ngày ====]                             |
|             [== NAT: 34 ngày ==]  (--> Rút ngắn ~20-25 ngày)            |
|                                                                         |
| Virus HIV:  [=== ELISA: 22 - 30 ngày ===]                               |
|             [= NAT: 11 ngày =]    (--> Rút ngắn ~11-19 ngày)            |
+-------------------------------------------------------------------------+

Khoảng trống nghiên cứu và tính thời điểm

Tại các quốc gia phát triển như Mỹ, Đức, Nhật Bản hay Hà Lan, kỹ thuật NAT đã được phê duyệt và triển khai thường quy từ cuối thập niên 1990, giúp giảm tỷ lệ lây nhiễm qua truyền máu xuống mức kỷ lục (dưới 1/1.000.000 đến 1/4.000.000 đơn vị máu). Ngược lại, đến trước năm 2007, hệ thống y tế Việt Nam hoàn toàn chưa áp dụng NAT trong sàng lọc ngân hàng máu do rào cản chi phí, hạ tầng kỹ thuật và yêu cầu nghiêm ngặt về chuẩn phòng thí nghiệm sinh học phân tử.

Đề tài nghiên cứu cấp Bộ do PGS. Nguyễn Anh Trí và PGS. Bạch Khánh Hòa (Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương) làm chủ nhiệm ra đời đúng thời điểm then chốt. Nghiên cứu giải quyết bài toán cấp bách: Đánh giá khả năng thích ứng, độ tin cậy và hiệu quả kinh tế - kỹ thuật của giải pháp NAT trong điều kiện thực tế tại Việt Nam, mở đường cho bước chuyển mình mang tính chiến lược của ngành truyền máu nước nhà.

---

Phương pháp luận và cách tiếp cận (Methodology & Approach)

                            QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC NAT
                            
    +-----------------------------------------------------------------------+
    |         Tuyển chọn 9.710 Người Cho Máu (Theo tiêu chuẩn BYT)           |
    +-----------------------------------------------------------------------+
                                        |
                                        v
    +-----------------------------------------------------------------------+
    |       Sàng lọc Huyết thanh học ELISA thông thường: 9.392 Âm tính      |
    +-----------------------------------------------------------------------+
                                        |
                                        v
    +-----------------------------------------------------------------------+
    |    Tạo 1.174 Mẫu gộp Pool-8 (8 mẫu huyết tương / 1 ống xét nghiệm)     |
    +-----------------------------------------------------------------------+
                                        |
                                        v
    +-----------------------------------------------------------------------+
    |        Xét nghiệm NAT Đồng thời 3 virus (Procleix Ultrio Assay)       |
    |          Nguyên lý TMA (Khuếch đại) + HPA (Đầu dò phát quang)         |
    +-----------------------------------------------------------------------+
                      |                                       |
             1.162 Mẫu ÂM TÍNH                        12 Mẫu CÓ PHẢN ỨNG
             (An toàn sinh học)                               |
                                                              v
                                            +-------------------------------+
                                            |   Chạy lại xác nhận lần 2     |
                                            |       (1 Mẫu Dương tính)      |
                                            +-------------------------------+
                                                              |
                                                              v
                                            +-------------------------------+
                                            |   Xét nghiệm Mẫu Đơn & Phân   |
                                            |    biệt Virus (Discriminatory)|
                                            +-------------------------------+
                                                              |
                                                              v
                                            +-------------------------------+
                                            |  Khẳng định bằng RT-PCR / PCR  |
                                            |     (Xác định HCV-RNA (+))    |
                                            +-------------------------------+

1. Thiết kế nghiên cứu và cỡ mẫu

Đề tài áp dụng thiết kế nghiên cứu cắt ngang mô tả có can thiệp kỹ thuật tiến cứu. Đối tượng nghiên cứu bao gồm 9.392 mẫu huyết tương thu thập từ 08/01/2007 đến 07/05/2007 tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương. Toàn bộ mẫu này đều đạt tiêu chuẩn lâm sàng của Bộ Y tế và đã có kết quả xét nghiệm ELISA âm tính đối với HIV, HBV và HCV.

2. Chiến lược gộp mẫu (Pool-8) tối ưu hóa chi phí

Để đảm bảo tính khả thi về mặt kinh phí mà không làm suy giảm độ nhạy chẩn đoán, nhóm nghiên cứu đã áp dụng kỹ thuật gộp mẫu theo tỷ lệ 1:8 (Pool 8). Cứ 8 mẫu huyết tương người cho máu được trộn đều bằng máy Vortex với thể tích chính xác để tạo thành 1.174 mẫu pool, giúp tiết kiệm đáng kể lượng hóa chất sinh phẩm đắt tiền.

3. Công nghệ sinh học phân tử cốt lõi

Quy trình kỹ thuật NAT được thực hiện dựa trên nền tảng công nghệ tiên tiến của hãng Gen-Probe/Chiron thông qua 3 giai đoạn khép kín:

• Bắt giữ trình tự đích (Target Capture): Sử dụng các vi hạt mang từ tính kết hợp đoạn mồi Oligonucleotide gắn hạt từ để phân lập và tinh sạch trực tiếp RNA/DNA của virus ra khỏi huyết tương trong môi trường đệm chuyên biệt.
• Khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian phiên mã (TMA - Transcription-Mediated Amplification): Khác với PCR truyền thống cần chu kỳ nhiệt phức tạp, TMA vận hành ở nhiệt độ đẳng nhiệt ổn định (41,5°C) nhờ sự phối hợp của 2 enzyme: MMLV Reverse Transcriptase và T7 RNA Polymerase. Hệ thống có khả năng tạo ra hơn một tỷ bản sao RNA amplicon trong vòng chưa đầy 60 phút.
• Phát hiện bằng đầu dò phát quang (HPA - Hybridization Protection Assay): Sử dụng các đoạn dò (Probe) gắn hợp chất phát quang Acridinium Ester (AE). Hóa chất chọn lọc (Selection Reagent) sẽ thủy phân và triệt tiêu tín hiệu của các phân tử AE tự do không lai, chỉ giữ lại tín hiệu từ các phức hợp lai đặc hiệu với virus. Cường độ ánh sáng được đo tự động trên máy Procleix HC+ Luminometer với đơn vị RLU (Relative Light Units).

4. Kiểm soát chất lượng và tính hợp lệ (Validity & Reliability)

Thiết kế phòng thí nghiệm tuân thủ nghiêm ngặt nguyên tắc một chiều gồm 4 khu vực biệt lập: Khu vực chuẩn bị hóa chất, khu vực xử lý mẫu, khu vực khuếch đại và khu vực phát hiện/đọc kết quả. Việc khử nhiễm được thực hiện định kỳ bằng dung dịch Natri Hypochlorite (Bleach 0,5%) và dung dịch bất hoạt chuyên dụng Deactivation Fluid. Mỗi lượt chạy (run) đều bắt buộc tích hợp chất nội kiểm (Internal Control - IC) cùng hệ thống mẫu chuẩn âm, chuẩn dương nghiêm ngặt để tính toán ngưỡng cắt tự động (Analyte Cut-off và IC Cut-off).

---

Phát hiện chính của nghiên cứu (Major Findings)

1. Năng lực phát hiện ca nhiễm virus trong "Giai đoạn cửa sổ"

Phát hiện mang tính bước ngoặt của đề tài là việc xác định thành công mẫu huyết tương nhiễm virus viêm gan C (HCV) trong tập hợp 9.392 mẫu đã được khẳng định âm tính bằng ELISA trước đó. Mẫu này sau khi giải phóng khỏi pool 8 đã cho tín hiệu dương tính mạnh với Procleix HCV Discriminatory Assay và được khẳng định chuẩn xác bằng kỹ thuật RT-PCR. Kết quả chứng minh: NAT thực sự phát hiện được virus khi kháng thể chưa kịp hình thành trong máu người cho.

2. Hiệu năng sàng lọc mẫu gộp (Pool 8) và tỷ lệ dương tính sơ bộ

Trong lần chạy đầu tiên trên 1.174 mẫu gộp bằng Procleix Ultrio Assay:

• 1.162 mẫu (98,98%): Hoàn toàn không có phản ứng ($S/CO < 1$).
• 12 mẫu (1,02%): Có phản ứng sơ bộ ($S/CO \ge 1$).

Khi tiến hành kiểm tra lặp lại (retest) đối với 12 mẫu nghi ngờ này, chỉ có 1 mẫu duy nhất khẳng định dương tính thực sự với chỉ số $S/CO = 21,15$, trong khi 11 mẫu còn lại cho kết quả âm tính ($S/CO < 1$). Điều này phản ánh rõ quy luật kiểm tra lặp lại nhằm loại trừ hiện tượng dương tính giả sinh học hoặc tạp nhiễm vi lượng trong thao tác phòng thí nghiệm.

+-------------------------------------------------------------------------------+
|             BẢNG TỔNG HỢP KẾT QUẢ SÀNG LỌC NAT TRÊN 1.174 MẪU POOL 8           |
+----------------------+--------------------+-----------------------------------+
| Chỉ tiêu đánh giá    | Lần xét nghiệm 1   | Lần xét nghiệm 2 (trên 12 mẫu (+))|
+----------------------+--------------------+-----------------------------------+
| Mẫu có phản ứng      | 12 mẫu (1,02%)     | 1 mẫu (8,33% trên 12 mẫu retest)  |
| Mẫu không phản ứng   | 1.162 mẫu (98,98%) | 11 mẫu (91,67%)                   |
| Mẫu không hợp lệ     | 8 mẫu (0,68%)      | 0 mẫu (0%)                        |
| Tỷ lệ tin cậy tổng   | Đạt tiêu chuẩn     | Khẳng định 01 ca HCV cửa sổ       |
+----------------------+--------------------+-----------------------------------+

3. Tỷ lệ kết quả không có giá trị (Invalid Rate) ở mức tối ưu

Nghiên cứu ghi nhận tỷ lệ mẫu không có giá trị ở lần chạy đầu tiên chỉ là 0,68% (8/1.174 mẫu) do tín hiệu chất nội kiểm thấp hơn ngưỡng quy định ($IC < IC\text{ Cut-off}$). Khi kiểm tra lại lần thứ hai, 100% các mẫu này đều đạt giá trị hợp lệ. Trong tổng số 23 lượt chạy máy, chỉ có duy nhất 01 lượt chạy bị hủy toàn bộ kết quả do lỗi kỹ thuật của mẫu chuẩn âm, chứng minh tính ổn định rất cao của hệ thống thiết bị và tay nghề kỹ thuật viên.

---

Đóng góp khoa học và giá trị ứng dụng (Scientific Contributions)

                            CÁC TRỤ CỘT ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI
                            
        HỌC THUẬT & LÝ LUẬN                  ỨNG DỤNG & CÔNG NGHỆ
  +-------------------------------+    +-------------------------------+
  | Cung cấp bằng chứng thực địa  |    | Thiết lập thành công Labo     |
  | đầu tiên tại Việt Nam về tính |    | sinh học phân tử chuẩn 1 chiều|
  | ưu việt của phát hiện trực    |    | vận hành kỹ thuật TMA/HPA     |
  | tiếp RNA/DNA virus.           |    | đẳng nhiệt tự động.           |
  +-------------------------------+    +-------------------------------+
                  \                                   /
                   \                                 /
  +-------------------------------------------------------------------+
  |               CHÍNH SÁCH VÀ CHIẾN LƯỢC Y TẾ QUỐC GIA              |
  | Cơ sở thực tiễn để Bộ Y tế ban hành Thông tư hướng dẫn và đưa NAT |
  | trở thành quy chuẩn sàng lọc bắt buộc tại các Trung tâm truyền máu|
  +-------------------------------------------------------------------+

1. Đóng góp về mặt học thuật và dịch tễ học

Đề tài cung cấp bộ dữ liệu thực chứng quy mô lớn đầu tiên tại Việt Nam về tỷ lệ nhiễm virus thể ẩn và giai đoạn cửa sổ ở đối tượng người hiến máu. Kết quả nghiên cứu chứng minh trên thực tế lâm sàng rằng việc dựa hoàn toàn vào miễn dịch huỳnh quang hay ELISA vẫn tiềm ẩn lỗ hổng an toàn sinh học, qua đó củng cố lý thuyết dịch tễ về sự cần thiết của các dấu ấn sinh học phân tử trực tiếp.

2. Đổi mới giải pháp công nghệ và chuẩn hóa quy trình

• Xây dựng thành công Labo Sinh học phân tử đạt chuẩn: Đề tài đã thiết lập hoàn chỉnh mô hình phòng xét nghiệm NAT một chiều khép kín, ngăn ngừa triệt để hiện tượng nhiễm chéo sản phẩm khuếch đại (amplicon contamination) – thách thức lớn nhất trong các kỹ thuật nhạy như PCR/TMA.
• Quy trình gộp mẫu tối ưu hóa: Chứng minh tính hiệu quả của chiến lược gộp 8 mẫu, giúp các trung tâm truyền máu tại các nước đang phát triển giảm thiểu chi phí đầu tư hóa chất từ 60-70% mà vẫn bảo toàn độ nhạy phát hiện.

3. Tác động chính sách và an sinh xã hội

Nghiên cứu là luận cứ khoa học trực tiếp giúp Bộ Y tế xây dựng lộ trình quy chuẩn hóa công tác an toàn truyền máu tại Việt Nam, thúc đẩy việc ban hành các chính sách chi trả bảo hiểm y tế cho xét nghiệm NAT và nâng cao tiêu chuẩn ngân hàng máu tương đương với các nước tiên tiến trong khu vực ASEAN.

---

Đối tượng thụ hưởng và quan tâm (Target Audience)

• Bác sĩ và Chuyên viên Huyết học - Truyền máu: Nắm bắt quy trình thực hành chuẩn, tiêu chuẩn kiểm tra chất lượng nội kiểm (IC), cách xử lý các trường hợp dương tính giả và kỹ thuật giải pool trong sàng lọc máu quy mô lớn.
• Nhà nghiên cứu Sinh học phân tử Y học: Tham khảo ứng dụng thực tiễn của công nghệ khuếch đại đẳng nhiệt TMA và kỹ thuật bảo vệ lai HPA trong chẩn đoán virus tải lượng thấp.
• Các nhà hoạch định chính sách Y tế & Quản lý bệnh viện: Có căn cứ khoa học và phân tích chi phí - hiệu quả để phê duyệt kế hoạch mua sắm trang thiết bị, hóa chất và xây dựng danh mục kỹ thuật cao trong khám chữa bệnh.
• Người nhận máu và Cộng đồng: Thụ hưởng nguồn máu an toàn sinh học cao nhất, giải tỏa nỗi lo lây nhiễm các bệnh hiểm nghèo qua đường truyền máu.

---

Câu hỏi thường gặp (FAQ)

1. Phát hiện quan trọng và có giá trị nhất của đề tài là gì?

Trả lời: Phát hiện có giá trị nhất là việc ứng dụng NAT đã tìm ra 01 mẫu máu nhiễm virus viêm gan C (HCV) trong số 9.392 mẫu đã có kết quả ELISA âm tính. Điều này khẳng định kỹ thuật NAT có khả năng phát hiện virus ngay trong giai đoạn cửa sổ huyết thanh học, điều mà kỹ thuật ELISA không thể làm được.

2. Kỹ thuật TMA trong xét nghiệm NAT có gì ưu việt hơn PCR truyền thống?

Trả lời: TMA là phản ứng khuếch đại đẳng nhiệt ở 41,5°C, không cần máy luân nhiệt (thermal cycler) đắt tiền. TMA sử dụng mẫu RNA làm đích và tạo ra trực tiếp sản phẩm RNA amplicon với tốc độ khuếch đại cực nhanh (hơn 1 tỷ bản sao trong vòng chưa đầy 1 giờ), đồng thời RNA kém bền hơn DNA trong môi trường tự nhiên nên nguy cơ ô nhiễm chéo phòng lab thấp hơn đáng kể so với PCR.

3. Kết quả sàng lọc mẫu gộp Pool-8 có nguy cơ bỏ sót người nhiễm virus tải lượng thấp không?

Trả lời: Mặc dù việc pha loãng 8 lần có thể làm giảm nhẹ nồng độ virus trong ống nghiệm, độ nhạy giải tích của hệ thống sinh phẩm Procleix Ultrio cực kỳ cao (ngưỡng phát hiện đạt từ vài chục đến vài trăm bản sao/ml). Kết quả thực nghiệm cho thấy phương pháp pool-8 vẫn đảm bảo phát hiện chính xác các trường hợp nhiễm virus giai đoạn sớm với độ tin cậy tương đương mẫu đơn mà lại tiết kiệm chi phí tối đa.

4. Hướng phát triển tiếp theo sau nghiên cứu này là gì?

Trả lời: Mở rộng nghiên cứu trên cỡ mẫu hàng trăm nghìn đơn vị máu trên toàn quốc; nghiên cứu chuyển giao công nghệ sàng lọc mẫu đơn (Individual Donation - ID-NAT) cho các đối tượng nguy cơ cao; và nâng cấp hệ thống máy tự động hóa hoàn toàn từ khâu tra mẫu đến trả kết quả (như hệ thống Tigris hoặc Panther).

5. Xét nghiệm NAT có thay thế hoàn toàn kỹ thuật ELISA không?

Trả lời: Không. NAT và ELISA là hai phương pháp bổ trợ cho nhau. ELISA giúp phát hiện các trường hợp nhiễm mạn tính có nồng độ kháng thể cao nhưng tải lượng virus thấp, trong khi NAT phát hiện các trường hợp nhiễm cấp tính trong giai đoạn cửa sổ. Quy chuẩn an toàn truyền máu hiện đại đòi hỏi kết hợp song song cả hai phương pháp.

---

Kết luận (Conclusion)

Đề tài nghiên cứu cấp Bộ "Ứng dụng kỹ thuật NAT để phát hiện sớm HIV, HBV, HCV ở người cho máu" do Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương thực hiện là một công trình mang ý nghĩa khoa học và thực tiễn sâu sắc. Nghiên cứu đã chứng minh tính ưu việt tuyệt đối của kỹ thuật NAT trong việc loại trừ các đơn vị máu nhiễm mầm bệnh trong giai đoạn cửa sổ huyết thanh học, hạn chế tối đa nguy cơ lây truyền HIV, viêm gan B và viêm gan C cho người bệnh.

Thành công của đề tài không chỉ khẳng định năng lực làm chủ công nghệ sinh học phân tử cao của đội ngũ y bác sĩ Việt Nam mà còn đặt nền móng vững chắc cho việc luật hóa và triển khai xét nghiệm NAT thường quy trên toàn bộ hệ thống ngân hàng máu quốc gia. Đây là bước tiến vượt bậc hướng tới mục tiêu cung cấp những đơn vị máu an toàn nhất vì sự sống của người bệnh.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Bé y tÕ ****** B¸o c¸o kÕt qu¶ nghiªn cøu ®Ò tµi cÊp bé øng dông kü thuËt nat ®Ó ph¸t hiÖn sím hiv, HBV, hcv ë ng−êi cho m¸u Chñ nhiÖm ®Ò tµi: PGS. NguyÔn Anh TrÝ PGS. B¹ch Kh¸nh Hßa C¬ quan chñ tr× ®Ò tµi: ViÖn HuyÕt häc – TruyÒn m¸u TW 6909 26/6/2008 Hµ Néi – 2008 Bé y tÕ ****** B¸o c¸o kÕt qu¶ nghiªn cøu ®Ò tµi cÊp bé øng dông kü thuËt nat ®Ó ph¸t hiÖn sím hiv, HBV, hcv ë ng−êi cho m¸u Chñ nhiÖm ®Ò tµi: PGS. NguyÔn Anh TrÝ PGS.

B¹ch Kh¸nh Hßa C¬ quan chñ tr× ®Ò tµi: ViÖn HuyÕt häc – TruyÒn m¸u TW CÊp qu¶n lý: Bé Y tÕ Thêi gian thùc hiÖn: tõ th¸ng 10/2005 ®Õn th¸ng 12/2007 Tæng kinh phÝ : 350 triÖu ®ång (ba tr¨m n¨m m−¬i triÖu ®ång) Trong ®ã, kinh phÝ SNKH: 100% Hµ Néi – 2008 B¸o c¸o kÕt qu¶ nghiªn cøu ®Ò tµi cÊp bé 1. Tªn ®Ò tµi: øng dông kü thuËt nat ®Ó ph¸t hiÖn sím hiv, HBV, hcv ë ng−êi cho m¸u. Chñ nhiÖm ®Ò tµi: PGS. NguyÔn Anh TrÝ.

B¹ch Kh¸nh Hßa. Th− ký ®Ò tµi: NguyÔn Quèc C−êng TrÇn V©n Chi 4. Danh s¸ch nh÷ng ng−êi thùc hiÖn chÝnh: TT Hä vµ tªn c¸n bé thùc Häc vÞ, häc C¬ quan c«ng t¸c hiÖn ®Ò tµi hµm, chøc vô 1 NguyÔn ChÝ TuyÓn B¸c sü ViÖn HuyÕt häc-TruyÒn m¸u TW 2 NguyÔn Quèc C−êng Cö nh©n ViÖn HuyÕt häc-TruyÒn m¸u TW 3 Chö ThÞ Thu H−êng B¸c sü Néi tró §¹i häc Y Hµ Néi 4 NguyÔn Minh Ph−¬ng Cö nh©n ViÖn HuyÕt häc-TruyÒn m¸u TW 5 NguyÔn Kim Dòng Kü thuËt viªn ViÖn HuyÕt häc-TruyÒn m¸u TW 5. Thêi gian thùc hiÖn ®Ò tµi: tõ th¸ng 10/2005 ®Õn th¸ng 12/2007.

Chóng t«i ch©n thµnh c¶m ¬n Vô Khoa häc vµ §µo t¹o - Bé Y tÕ, Ban l·nh ®¹o ViÖn HuyÕt häc – TruyÒn m¸u TW, Khoa Thu gom m¸u - ViÖn HuyÕt häc - TruyÒn m¸u TW, H·ng CHIRON gióp ®ì vµ t¹o ®iÒu kiÖn ®Ó chóng t«i hoµn thµnh tèt ®Ò tµi nµy. B¶n tù ®¸nh gi¸ VÒ t×nh h×nh thùc hiÖn vµ nh÷ng ®ãng gãp míi cña ®Ò tµi KH&CN cÊp Bé 1. T×nh h×nh thùc hiÖn ®Ò tµi so víi ®Ò c−¬ng: 1.1/ VÒ møc ®é hoµn thµnh, khèi l−îng c«ng viÖc: ®· hoµn thµnh v−ît møc khèi l−îng c«ng viÖc so víi ®Ò c−¬ng. §Ò c−¬ng ®Æt ra lµ 6000 mÉu thùc hiÖn 9.2/ VÒ c¸c yªu cÇu khoa häc vµ chØ tiªu c¬ b¶n cña c¸c s¶n phÈm KHCN: ®· øng dông kü thuËt sinh häc ph©n tö (NAT) thùc hiÖn trong sµng läc m¸u.3/ VÒ tiÕn ®é thùc hiÖn : ®· hoµn thµnh ®óng tiÕn ®é ®Ò ra.

VÒ nh÷ng ®ãng gãp míi cña ®Ò tµi: Trªn c¬ së so s¸nh víi nh÷ng th«ng tin ®· ®−îc c«ng bè trªn c¸c Ên phÈm trong vµ ngoµi n−íc ®Õn thêi ®iÓm kÕt thóc ®Ò tµi, ®Ò tµi cã nh÷ng ®iÓm míi sau ®©y: VÒ gi¶i ph¸p Khoa häc – C«ng nghÖ: øng dông kü thuËt míi trong sµng läc ®Ó thùc hiÖn an toµn truyÒn m¸u. Hµ Néi, ngµy 26 th¸ng 1 n¨m 2008. Chñ nhiÖm ®Ò tµi PGS. NguyÔn Anh TrÝ C¸c ch÷ viÕt t¾t A : Adenine AIDS : Aquired Immune Deficiency Symdrome (Héi chøng suy gi¶m miÔn dÞch m¾c ph¶i) Anti HBs : Anti Hepatitis B surface (Kh¸ng thÓ kh¸ng kh¸ng nguyªn bÒ mÆt virus viªm gan B) Anti HBc : Anti Hepatitis B core (Kh¸ng thÓ kh¸ng kh¸ng nguyªn lâi virus viªm gan B) Anti HBe : Anti Hepatitis B e (Kh¸ng thÓ kh¸ng kh¸ng nguyªn e virus viªm gan B) Au : Australia BN : BÖnh nh©n C : Cytosin DNA : Acid Desoxyribonucleic ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Kü thuËt miÔn dÞch g¾n enzym) EIA : Enzyme Immunoassay (Kü thuËt miÔn dÞch enzym) FDA : Food and Drug Administration (Côc qu¶n lý thùc vµ d−îc phÈm Hoa Kú) G : Guanin HBcAg : Hepatitis B core Antigen (Kh¸ng nguyªn lâi virus viªm gan B) HBsAg : Hepatitis B surface Antigen (Kh¸ng nguyªn bÒ mÆt virus viªm gan B) HBeAg : Hepatitis B e Antigen (Kh¸ng nguyªn e virus viªm gan B) HBV : Hepatitis B virus (Virus viªm gan B) HCV : Hepatitis C virus (Virus viªm gan C) HH-TM TW: HuyÕt Häc TruyÒn m¸u Trung ¦¬ng IC : Internal Control (Néi kiÓm tra) KN : Kh¸ng nguyªn KT : Kh¸ng thÓ NAT : Nucleic acid testing (XÐt nghiÖm ph¸t hiÖn acid nucleic) NCM : Ng−êi cho m¸u NCMCN : Ng−êi cho m¸u chuyªn nghiÖp NCMTN : Ng−êi cho m¸u t×nh nguyÖn NNCM : Ng−êi nhµ cho m¸u PCR : Polymerase Chain Reaction (Ph¶n øng khuÕch ®¹i chuçi) RNA : Acid Ribonucleic wTCR : working Target Capture Reagent (Hãa chÊt b¾t gi÷ tr×nh tù ®Ých) T : Tymin TTUs : Ten tips Unit (Thanh chøa 10 tip ®ùng mÉu) TTC : Ten tips Cassette (Thanh cã chøa 10 ®Çu c«n ®Ó röa) XN : XÐt nghiÖm Môc lôc ®Æt vÊn ®Ò 1 Ch−¬ng I: tæng quan tµi liÖu 3 1.

LÞch sö sµng läc c¸c t¸c nh©n l©y bÖnh qua ®−êng truyÒn 3 m¸u 1. Trªn thÕ giíi 3 1. §Æc ®iÓm sinh häc cña HIV, HCV, HBV 6 1. Virus g©y suy gi¶m miÔn dÞch ë ng−êi (HIV) 6 1.

Virus viªm gan C 9 1. Virus viªm gan B 10 1. C¸c biÖn ph¸p b¶o ®¶m an toµn truyÒn m¸u, phßng l©y 14 nhiÔm HIV, HBV, HCV qua ®−êng truyÒn m¸u 1. Lùa chän NCM an toµn 14 1.

C¸c kü thuËt sµng läc huyÕt thanh HIV, HBV, HCV cho NCM 15 1. Kü thuËt sµng läc NAT 18 1. C¬ së sinh häc ph©n tö 18 1. Nguyªn lý kü thuËt 20 1.

C¸c giai ®o¹n kü thuËt 21 1. T×nh h×nh ¸p dông quy tr×nh kü thuËt sµng läc NAT ®Ó ph¸t hiÖn sím NCM nhiÔm HIV, HBV, HCV trªn thÕ giíi vµ t¹i ViÖt 23 Nam 1. Trªn thÕ giíi 23 1. T¹i ViÖt Nam 24 Ch−¬ng 2: ®èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸p 25 nghiªn cøu 2.1 §èi t−îng nghiªn cøu 25 2.2 VËt liÖu nghiªn cøu 25 2.3 Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu 27 2.

Kü thuËt NAT 29 2. Xö lý sè liÖu 37 Ch−¬ng III: KÕt qu¶ nghiªn cøu 38 3. KÕt qu¶ nghiªn cøu hiÖu qu¶ sö dông kü thuËt NAT trong 38 viÖc n©ng cao tÝnh an toµn sinh häc cña c¸c chÕ phÈm m¸u 3. KÕt qu¶ xÐt nghiÖm NAT cña mÉu trén 8 ®Ó ph¸t hiÖn ®ång 38 thêi c¶ 3 lo¹i virus HIV, HBV, HCV 3.

KÕt qu¶ tØ lÖ kh«ng cã gi¸ trÞ trong qu¸ tr×nh xÐt ngiÖm 39 3. Sè lÇn ch¹y cã kh«ng cã gi¸ trÞ trong qu¸ tr×nh xÐt nghiÖm 41 3. KÕt qu¶ x¸c ®Þnh lo¹i virus b»ng Probe ®Æc hiÖu 41 3. KÕt qu¶ x¸c ®Þnh ng−êi cho m¸u bÞ nhiÔm virus viªm gan C 43 trong mÉu trén d−¬ng tÝnh 3.

TØ lÖ nhiÔm c¸c virus ®−îc sµng läc b»ng kü thuËt NAT trong 43 nghiªn cøu 3. KÕt qu¶ RT-PCR cña mÉu bÞ nhiÔm virus HCV 43 3. X©y dùng labo sinh häc ph©n tö (SHPT) thùc hiÖn ®−îc c¸c kü thuËt SHPT trong ®ã cã NAT phôc vô cho néi dung sµng läc 44 m¸u vµ ®µo t¹o Ch−¬ng IV: Bµn luËn 45 4. KÕt qu¶ nghiªn cøu hiÖu qu¶ sö dông kü thuËt NAT trong 45 viÖc n©ng cao tÝnh an toµn sinh häc cña c¸c chÕ phÈm m¸u 4.

Kü thuËt NAT 45 4. TØ lÖ d−¬ng tÝnh khi ph¸t hiÖn ®ång thêi c¶ 3 lo¹i virus HIV, 47 HBV, HCV (Procleix Ultrio Assay) 4. TØ lÖ kh«ng cã gi¸ trÞ trong qu¸ tr×nh xÐt nghiÖm 49 4. KÕt qu¶ x¸c ®Þnh lo¹i virus b»ng Probe ®Æc hiÖu 51 4.

KÕt qu¶ x¸c ®Þnh ng−êi cho m¸u bÞ nhiÔm virus viªm gan C 52 trong mÉu trén d−¬ng tÝnh 4. TØ lÖ nhiÔm c¸c virus ®−îc sµng läc b»ng kü thuËt NAT trong 52 nghiªn cøu 4. KÕt qu¶ RT-PCR vµ ELISA cña mÉu bÞ nhiÔm virus HCV 56 4. X©y dùng labo sinh häc ph©n tö (SHPT) thùc hiÖn ®−îc c¸c kü thuËt SHPT trong ®ã cã NAT phôc vô cho néi dung sµng läc 57 m¸u vµ ®µo t¹o KÕt luËn 60 KiÕn nghÞ 61 Tµi liÖu tham kh¶o Danh s¸ch mÉu huyÕt t−¬ng 1 ®Æt vÊn ®Ò M¸u rÊt quan träng vµ cÇn thiÕt cho sù sèng, nhê cã m¸u mµ nhiÒu ng−êi bÖnh ®· ®−îc cøu sèng.

M¸u vµ chÕ phÈm m¸u cã tÇm quan träng ®Æc biÖt trong ®iÒu trÞ c¸c bÖnh m¸u còng nh− cÇn ®Ó cÊp cøu c¸c tr−êng hîp ch¶y m¸u sau ®Î, ch¶y m¸u do chÊn th−¬ng, tai n¹n vµ th¶m häa. M¸u quan träng nh− vËy nh−ng truyÒn m¸u cã thÓ g©y tai biÕn cho ng−êi bÖnh [18]. An toµn truyÒn m¸u lµ néi dung xuyªn suèt trong chiÕn l−îc truyÒn m¸u cña Quèc gia, trong ®ã sµng läc c¸c t¸c nh©n l©y nhiÔm qua ®−êng truyÒn m¸u ®−îc xem lµ mét trong nh÷ng néi dung then chèt [18]. C¸c t¸c nh©n g©y bÖnh cã thÓ ®−îc truyÒn tõ m¸u vµ chÕ phÈm m¸u cña ng−êi cho m¸u (NCM) ®· nhiÔm bÖnh sang ng−êi th©n.

C¨n nguyªn g©y c¸c bÖnh nhiÔm trïng qua ®−êng m¸u cã rÊt nhiÒu [54], [55], tuy nhiªn theo khuyÕn c¸o cña Tæ chøc Y tÕ thÕ giíi th× 3 virus b¾t buéc ph¶i ®−îc sµng läc NCM lµ HIV, HBV, HCV [58], [102]. Trong sµng läc NCM hiÖn nay, ng−êi ta dïng ph−¬ng ph¸p ELISA ®Ó ph¸t hiÖn c¸c kh¸ng thÓ (KT) vµ c¸c kh¸ng nguyªn (KN) cña virus. Ph−¬ng ph¸p nµy cã ®é tin cËy kh¸ cao, tuy nhiªn nh−îc ®iÓm cña ph−¬ng ph¸p lµ phô thuéc rÊt nhiÒu vµo ®¸p øng miÔn dÞch cña mçi c¸ thÓ, giai ®o¹n cöa sæ cßn kh¸ dµi, nguån NCM ch−a thùc sù an toµn. Do vËy, ng−êi ta vÉn gÆp nh÷ng tr−êng hîp bÖnh nh©n (BN) bÞ l©y nhiÔm virus do truyÒn m¸u nhiÔm virus trong giai ®o¹n cöa sæ.

Tõ n¨m 1999, kü thuËt NAT ®· ph¸t triÓn cho phÐp x¸c ®Þnh trùc tiÕp HIV-RNA, HBV-DNA, HCV-RNA. Nhê sö dông ph−¬ng ph¸p nµy, ng−êi ta cã thÓ lo¹i trõ nh÷ng mÉu m¸u cã virus mµ kü thuËt huyÕt thanh häc kh«ng ph¸t hiÖn ®−îc, do ®ã lµm gi¶m nguy c¬ BN bÞ l©y nhiÔm virus do truyÒn m¸u trong giai ®o¹n cöa sæ. Cô thÓ rót ng¾n giai ®o¹n cöa sæ tõ 80-90 ngµy cßn 23 2 ngµy cho HCV; 22-30 ngµy cßn 11 ngµy cho HIV; 50-60 ngµy xuèng cßn 34 ngµy cho HBV [51]. HiÖn nay, mét sè n−íc tiªn tiÕn ®· ¸p dông th−êng quy kü thuËt NAT ®Ó sµng läc HIV, HBV, HCV cho NCM nh− Mü, NhËt, Hµ Lan, Thôy §iÓn, §øc… T¹i ViÖt Nam, sµng läc HIV, HBV, HCV cho NCM ®· ®−îc thùc hiÖn trªn ph¹m vi toµn quèc tõ cuèi n¨m 1994.

Tuy nhiªn do ®iÒu kiÖn kinh phÝ cßn h¹n hÑp nªn c¸c biÖn ph¸p kü thuËt sµng läc NCM cßn nhiÒu h¹n chÕ, v× vËy giai ®o¹n cöa sæ huyÕt thanh cßn kh¸ dµi nªn viÖc l©y nhiÔm c¸c bÖnh qua ®−êng truyÒn m¸u lµ khã tr¸nh khái do kh«ng ph¸t hiÖn ®−îc [19], [20], [30]. XuÊt ph¸t tõ thùc tr¹ng trªn chóng t«i tiÕn hµnh nghiªn cøu ®Ò tµi nµy nh»m môc tiªu: 1. Nghiªn cøu hiÖu qu¶ sö dông kü thuËt NAT trong viÖc n©ng cao tÝnh an toµn sinh häc cña c¸c chÕ phÈm m¸u. X©y dùng labo sinh häc ph©n tö (SHPT) thùc hiÖn ®−îc c¸c kü thuËt SHPT trong ®ã cã NAT phôc vô cho néi dung sµng läc m¸u vµ ®µo t¹o.