HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ VĂN HÙNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VI KHUẨN Ornithobacterium rhinotracheale-ORT VÀ MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA BỆNH TRÊN GÀ ISA BROWN Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.01 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Nguyen Hữu Nam NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác và chưa từng sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam đoan mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện đề tài nghiên cứu và hoàn thành luận văn đều đã được cảm ơn, các thông tin trích dẫn chính xác và đã được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Lê Văn Hùng i LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình thực hiện đề tài và hoàn thành bản luận văn, tôi luôn nhận được sự giúp đỡ của nhiều tổ chức và cá nhân.
Nhân dịp này tôi xin trân trọng cám ơn Ban giám đốc, Ban quản lý Đào tạo sau Đại học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tạo điều kiện cho tôi được theo học chương trình đào tạo Thạc sĩ tại trường. Tôi xin trân trọng cám ơn tập thể cán bộ khoa Thú y, Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Sinh học Thú y, Bộ môn Bệnh lý Thú y, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi nhất để tôi hoàn thành đề tài nghiên cứu. Đặc biệt, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy hướng dẫn khoa học là PGS. Nguyễn Hữu Nam, Bộ môn Bệnh lý Thú y, Khoa Thú y Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn.
Tôi xin gửi lời cám ơn đến TS. Makoto OSAKI, Viện Thú y Quốc Gia Nhật Bản đã giúp đỡ, chia sẻ những ý kiến quý báu, hướng dẫn tôi thực hiện thí nghiệm để hoàn thiện đề tài nghiên cứu. Xin gửi lời cám ơn đến PGS. Võ Thị Trà An, trường Đại học Nông lâm Thành phố Hồ Chí Minh đã cung cấp chủng chuẩn để giúp tôi hoàn thiện luận văn này.
Tôi luôn biết ơn gia đình, bạn bè và các học viên cao học, các em sinh viên đã đóng góp công sức, động viên và giúp đỡ tôi hoàn thành luận án này. Tôi xin trân trọng cám ơn. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Lê Văn Hùng ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN. ii MỤC LỤC.
iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT. vi DANH MỤC BẢNG BIỂU. vii DANH MỤC HÌNH MINH HỌA. viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN.
ix THESIS ABSTRACT. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI. GIẢ THUYẾT KHOA HỌC. MỤC TIÊU CỦA NGHIÊN CỨU.
PHẠM VI NGHIÊN CỨU. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI. TỔNG QUAN TÀI LIỆU. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC.
Tình hình nghiên cứu trên thế giới. Tình hình nghiên cứu tại Việt Nam. BỆNH DO VI KHUẨN Ornithobacterium rhinotracheale - ORT GÂY RA. Dịch tễ học.
Vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale - ORT. Triệu chứng lâm sàng. Phòng và trị bệnh. CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN.
Phương pháp nuôi cấy và phân lập vi khuẩn. Phát hiện kháng nguyên. Huyết thanh học. Chẩn đoán phân biệt.
Chẩn đoán bằng phương pháp Bệnh lý. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU. THỜI GIAN NGHIÊN CỨU.
ĐỐI TƯỢNG/VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU. Đối tượng nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU.
Nghiên cứu xây dựng quy trình phân lập vi khuẩn gây bệnh ORT. Xác định một số đặc điểm bệnh lý của gà ISA Brown mắc bệnh ORT. Xác định tính mẫn cảm của vi khuẩn ORT với một số loại kháng sinh trong phòng thí nghiệm. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.
Phương pháp quan sát các triệu chứng lâm sàng. Phương pháp mổ khám. Phương pháp lấy mẫu và bảo quản mẫu. Phương pháp nuôi cấy và phân lập vi khuẩn.
Phương pháp PCR. Phương pháp ELISA. Phương pháp làm tiêu bản bệnh lý. Phương pháp xác định các chỉ tiêu huyết học.
Phương pháp thử kháng sinh đồ. Phương pháp xử lý số liệu. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN LẬP VI KHUẨN GÂY BỆNH Ornithobacterium rhinotracheale - ORT.
Kết quả thu thập mẫu bệnh phẩm. Kết quả nghiên cứu xây dựng quy trình chẩn đoán vi khuẩn bằng phương pháp nuôi cấy và phân lập vi khuẩn. Kết quả chẩn đoán vi khuẩn bằng phương pháp PCR. Kết quả chẩn đoán vi khuẩn bằng phương pháp ELISA.
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA GÀ ISA BROWN MẮC BỆNH Ornithobacterium rhinotracheale - ORT. Kết quả nghiên cứu triệu chứng lâm sàng của gà mắc ORT. Kết quả nghiên cứu một số biến đổi bệnh tích đại thể của gà mắc ORT. Kết quả nghiên cứu một số biến đổi bệnh tích vi thể của gà mắc ORT.
Kết quả nghiên cứu chỉ tiêu huyết học của gà mắc bệnh ORT. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TÍNH MẪN CẢM CỦA VI KHUẨN Ornithobacterium rhinotracheale - ORT VỚI MỘT SỐ LOẠI KHÁNG SINH TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ. 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO.
64 PHỤ LỤC II. 67 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ. 68 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt AGP Accelerated Graphics PORT BHB Brain Heart Broth BHI Brain heart infusion broth CBA Columbia Blood Aagar Base CRD Chronic Respiratory Disease DIA Dot Immunobinding assay DNA Deoxyribonucleic acid ELISA Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations FBS Fetal bovine serum HE Haematoxilin - Eosin IB Infectious bronchitis IC Infectious Coryza ILT Infectious Laryngo Tracheitis NC Negative control ORT Ornithobacterium rhinotracheale PAP Peroxidase - anti peroxidase PB Pasteurella broth PC Positive control PCR Polymerase chain reaction rRNA Ribosomal ribonucleic acid TBE Tris-Borate electrophoresis buffer TSI Tryple Sugar Iron Agar USA United States of America vi DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 4. Kết quả thu thập mẫu bệnh phẩm gà ISA Brown mắc ORT.
Kết quả phân lập vi khuẩn ORT. Kết quả kiểm tra một số đặc tính sinh hóa của vi khuẩn ORT. Kết quả tổng hợp chẩn đoán ORT bằng kỹ thuật ELISA. Kết quả nghiên cứu một số triệu chứng lâm sàng của gà mắc ORT.
Kết quả nghiên cứu một số triệu chứng lâm sàng của gà mắc ORT. Kết quả kiểm tra bệnh tích đại thể của gà mắc ORT. Kết quả nghiên cứu một số chỉ tiêu hệ hồng cầu ở gà mắc bệnh ORT. Kết quả nghiên cứu một số chỉ tiêu hệ bạch cầu ở gà mắc bệnh ORT.
Kết quả thử nghiệm tính mẫn cảm của vi khuẩn ORT với kháng sinh. 51 vii DANH MỤC HÌNH MINH HỌA Hình 2. Hình thái vi khuẩn ORT dưới kính hiển vi điện tử với độ phóng đại 1000 lần (Pan et al. Kết quả phân lập vi khuẩn ORT trên môi trường không gentamycin.
Kết quả phân lập vi khuẩn ORT trên môi trường bổ sung 5µg/ml gentamycin và polymycin B. Kết quả nuôi cấy vi khuẩn ORT trên thạch máu bổ sung 10µg/ml gentamycin. Hình thái của vi khuẩn ORT (độ phóng đại 1000 lần). Kết quả kiểm tra phản ứng sinh hóa của ORT.
Kết quả kiểm tra tính chất mọc vủa vi khuẩn ORT trên môi trường MacConkey. Kết quả chẩn đoán ORT bằng phương pháp PCR. Triệu chứng lâm sàng của gà mắc ORT. Triệu chứng lâm sàng của gà mắc ORT.
Triệu chứng lâm sàng của gà mắc ORT. Bệnh tích đại thể của gà mắc ORT. Bệnh tích đại thể của gà mắc ORT. Bệnh tích vi thể ở phổi của gà mắc ORT.
Bệnh tích vi thể ở khí quản của gà mắc ORT. Bệnh tích vi thể ở thận và gan của gà mắc ORT. Bệnh tích vi thể ở não của gà mắc ORT. Kết quả thử nghiệm tính mẫn cảm của ORT với kháng sinh.
53 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Lê Văn Hùng Tên luận văn: “Nghiên cứu phân lập vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale - ORT và một số đặc điểm bệnh lý của bệnh trên gà ISA Brown” Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.01 Cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích của nghiên cứu: - Nghiên cứu, xây dựng được quy trình phân lập bệnh do vi khuẩn ORT; - Xác định biến đổi bệnh lý chủ yếu của bệnh do vi khuẩn ORT gây nên trên đàn gà ISA Brown. Phương pháp nghiên cứu: - Phương pháp quan sát các triệu chứng lâm sàng, mổ khám quan sát những biến đổi bệnh tích đại thể, lấy mẫu và bảo quản mẫu (tài liệu tiêu chuẩn ngành - Cục Thú Y, 2006); - Phương pháp nuô cấy, phân lập và giám định v khuẩn (Zahra et al., 2013); - Phương pháp chẩn đoán bệnh bằng kỹ thuật PCR (Van and Hafez, 1999); - Phương pháp xác định kháng thể ORT bằng kỹ thuật ELISA (Sử dụng bộ kít IDEXX ELISA); - Phương pháp xác định những biến đổi bệnh lý trên gà ISA Brown mắc ORT (quy trình thường quy Bộ môn Bệnh lý, khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam); - Phương pháp xác định các chỉ tiêu huyết học của gà ISA Brown mắc ORT (sử dụng máy Celldyn-3700, phòng thí nghiệm trọng điểm CNSH Thú y, khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam); - Phương pháp thử tính mẫn cảm của vi khuẩn với một số loại kháng sinh (dựa trên tiêu chuẩn của CLSI (2012) áp dụng đối với những vi khuẩn khó mọc); - Phương pháp xử lý số liệu (sử dụng phần mềm Excel, Microsoft Windows, phiên bản 7.