Nghiên cứu biểu hiện protein E2 của virus dịch tả lợn cổ điển (Classical Swine Fever) bằng hệ thống baculovirus

• Tác giả: Xengphavone Khonmany
• Người hướng dẫn: Ts. Bùi Thị Tố Nga
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên cứu biểu hiện protein E2 của vi rút dịch tả lợn cổ điển (Classical Swine Fever) bằng hệ thống Baculovirus
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 1.1. Lời cam đoan
• 1.2. Mục lục
• 1.3. Danh mục chữ viết tắt
• 1.4. Danh mục bảng
• 1.5. Danh mục hình
• 1.6. Trích yếu luận văn
• 1.7. Tính cấp thiết của đề tài
• 1.8. Mục tiêu của đề tài
• 1.9. Phạm vi nghiên cứu
• 1.10. Ý nghĩa khoa học
• 1.11. Ý nghĩa thực tiễn
• 1.12. Tổng quan tài liệu
• 1.12.1. Hiểu biết về vi rút dịch tả lợn (DTL)
• 1.12.2. Lịch sử căn bệnh DTL ở thế giới
• 1.12.3. Lịch sử căn bệnh DTL tại Việt Nam
• 1.12.4. Cấu trúc của vi rút DTL
• 1.12.5. Sức đề kháng của vi rút DTL
• 1.13. Bệnh dịch tả lợn
• 1.13.1. Nguyên nhân gây bệnh DTL
• 1.13.2. Phương thức truyền lây
• 1.13.3. Lứa tuổi mắc bệnh
• 1.13.4. Chất chứa của và độc lực của vi rút
• 1.13.5. Phương pháp chẩn đoán bệnh DTL
• 1.13.6. Phòng chống bệnh DTL
• 1.14. Vắc xin phòng dịch tả lợn
• 1.14.1. Vắc xin sản xuất trong nước và đang lưu hành tại Việt Nam
• 1.14.2. Vắc xin được phép nhập khẩu và đang lưu hành tại Việt Nam
• 1.15. Ứng dụng hệ thống biểu hiện baculovirus trong sản xuất protein tái tổ hợp của vi rút
• 1.16. Đối tượng, nội dung, nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu
• 1.16.1. Đối tượng nghiên cứu
• 1.16.2. Nội dung nghiên cứu
• 1.16.3. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
• 1.16.4. Nguyên liệu nghiên cứu
• 1.16.4.1. Các loại tế bào
• 1.16.4.2. Môi trường cho nuôi cấy tế bào
• 1.16.4.3. Vật liệu, hóa chất, sinh phẩm dùng trong phản ứng RT-PCR
• 1.16.4.4. Hóa chất dùng trong điện di
• 1.16.4.5. Vật liệu dùng để tách dòng và biểu hiện protein tái tổ hợp bằng hệ thống Baculovirus
• 1.16.4.6. Môi trường, sinh phẩm, máy móc, dụng cụ dùng trong phản ứng Western blot
• 1.16.4.7. Các vật liệu khác
• 1.16.5. Phương pháp nghiên cứu
• 1.16.5.1. Phương pháp nhân chủng vi rút DTL theo phương pháp thường quy của Viện Thú y
• 1.16.5.2. Kiểm tra đặc tính chủng gốc, xác định sự có mặt của vi rút bằng RT– PCR, xác định TCID50 của vi rút theo phương pháp thường quy của Viện Thú y
• 1.16.5.3. Thiết kế mồi đặc hiệu gen E2 và nhân gen và tinh sạch DNA bằng phương pháp thường quy
• 1.16.5.4. Tạo dòng protein mã hóa E2 bằng kít thương mại theo hướng dẫn của nhà sản xuất
• 1.16.5.5. Giải trình tự gen bằng phương pháp Sanger
• 1.16.5.6. Tạo bacmid và chuyển nạp vào tế bào côn trùng SF21AE tạo Baculovirus tái tổ hợp theo quy trình chỉ dẫn của nhà sản xuất (bac-to -bac Expression System), quy trình công nghệ của Viện Thú y Nhật Bản
• 1.16.5.7. Phương pháp PCR phát hiện nhanh Baculovirus tái tổ hợp mang Protein E2 trên tế bào côn trùng (theo công bố của Barbara Malitscheck et al
• 1.16.5.8. Phương pháp IPMA sử dụng tế bào côn trùng phát hiện protein E2 tái tổ hợp
• 1.16.5.9. Phương pháp Western Blot phát hiện protein E2 tái tổ hợp
• 1.17. Kết quả và thảo luận
• 1.17.1. Kết quả nhân chủng vi rút dtl, kiểm tra các đặc tính vi rút của chủng gốc
• 1.17.2. Kết quả nuôi cấy tế bào
• 1.17.3. Kết quả gây nhiễm vi rút DTL trên dòng tế bào PK15a
• 1.17.4. Kiểm tra đặc tính củng gốc, xác định sự có mặt của vi rút DTL bằng phản ứng RT-PCR phát hiện đoạn gene noncoding E2 của vi rút DTL phân lập trên tế bào PK15a
• 1.17.5. Thiết kế mồi đặc hiệu và khuếch đại protein E2 của vi rút dịch tả lợn bằng phương pháp rt-pcr
• 1.17.6. Tạo dòng protein mã hóa E2 trong vector tách dòng pfastbac, kiểm tra trình tự khung protein biểu hiện
• 1.17.7. Tạo dòng gen E2 của vi rút dịch tả lợn trong véc tơ tách dòng pFastBac1/NT- TOPO
• 1.17.8. Tạo Baculovirus tái tổ hợp sử dụng tế bào côn trùng
• 1.17.9. Kiểm tra khả năng biểu hiện của protein tái tổ hợp bằng phương pháp Immuno Peroxidase Monolayer Assay (IPMA) trên tế bào côn trùng và Western Blot
• 1.17.10. Đánh giá hoạt tính sinh học của protein E2 tái tổ hợp bằng hệ thống baculovirus
• 1.17.11. Kết quả thực hiện phương pháp Immuno - Peroxidase Monolayer Assay (IPMA) đối với mẫu huyết thanh thực địa
• 1.18. Kết luận và kiến nghị
• Tài liệu tham khảo
• Một số hình ảnh thực hiện đề tài
• 2. DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• 3. DANH MỤC BẢNG
• 4. DANH MỤC HÌNH
• 5. TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 5.1. Tên tác giả: Xengphavone KHONMANY
• 5.2. Tên Luận văn: Nghiên cứu biểu hiện Protein E2 của vi rút Dịch tả lợn cổ điển (Classical Swine Fever) bằng hệ thống Baculovirus
• 5.3. Chuyên ngành: Thú y
• 5.4. Mã số: 8640101
• 5.5. Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• 5.6. Mục đích nghiên cứu
• 5.7. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
• 5.8. Nội dung nghiên cứu
• 5.9. Phương pháp nghiên cứu
• 5.10. Kết quả chính và kết luận

I. Tổng quan về nghiên cứu protein E2 của virus dịch tả lợn cổ điển

Nghiên cứu protein E2 của virus dịch tả lợn cổ điển (CSFV) là một lĩnh vực quan trọng trong việc phát triển vắc xin và các phương pháp chẩn đoán bệnh. Virus dịch tả lợn cổ điển gây ra thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi lợn, ảnh hưởng đến kinh tế và an toàn thực phẩm. Việc hiểu rõ về protein E2, một trong những protein chính của virus, sẽ giúp cải thiện các biện pháp phòng ngừa và điều trị.

1.1. Đặc điểm của virus dịch tả lợn cổ điển

Virus dịch tả lợn cổ điển thuộc họ Flaviviridae, có cấu trúc gen RNA. Đặc điểm sinh học của virus này bao gồm khả năng lây lan nhanh chóng và gây ra các triệu chứng nghiêm trọng ở lợn. Việc nghiên cứu cấu trúc và chức năng của protein E2 là cần thiết để phát triển các phương pháp chẩn đoán và điều trị hiệu quả.

1.2. Vai trò của protein E2 trong virus dịch tả lợn

Protein E2 đóng vai trò quan trọng trong việc tạo ra phản ứng miễn dịch của lợn đối với virus dịch tả lợn cổ điển. Nó là một kháng nguyên chính, giúp cơ thể nhận diện và tạo ra kháng thể chống lại virus. Nghiên cứu về protein E2 sẽ cung cấp thông tin quý giá cho việc phát triển vắc xin.

II. Thách thức trong nghiên cứu virus dịch tả lợn cổ điển

Mặc dù đã có nhiều tiến bộ trong nghiên cứu virus dịch tả lợn cổ điển, nhưng vẫn còn nhiều thách thức cần phải vượt qua. Các chủng virus mới xuất hiện và khả năng kháng thuốc của chúng đang làm cho việc kiểm soát dịch bệnh trở nên khó khăn hơn.

2.1. Khó khăn trong việc phát hiện virus

Việc phát hiện virus dịch tả lợn cổ điển gặp khó khăn do sự biến đổi gen của virus. Các phương pháp chẩn đoán hiện tại cần được cải thiện để phát hiện nhanh chóng và chính xác hơn các chủng virus mới.

2.2. Tính kháng thuốc của virus

Sự xuất hiện của các chủng virus kháng thuốc đã làm giảm hiệu quả của các phương pháp điều trị hiện tại. Cần có các nghiên cứu sâu hơn để tìm ra các phương pháp điều trị mới và hiệu quả hơn.

III. Phương pháp nghiên cứu protein E2 bằng hệ thống baculovirus

Hệ thống baculovirus là một công cụ mạnh mẽ trong việc sản xuất protein tái tổ hợp. Nghiên cứu protein E2 của virus dịch tả lợn cổ điển bằng hệ thống này cho phép tạo ra lượng lớn protein E2 với hoạt tính sinh học cao.

3.1. Nguyên lý hoạt động của hệ thống baculovirus

Hệ thống baculovirus sử dụng tế bào côn trùng để sản xuất protein tái tổ hợp. Quá trình này bao gồm việc chuyển nạp gen mã hóa protein E2 vào tế bào côn trùng, sau đó tế bào sẽ sản xuất protein E2.

3.2. Quy trình sản xuất protein E2

Quy trình sản xuất protein E2 bao gồm các bước như thiết kế mồi gen, khuếch đại gen E2, tạo bacmid và chuyển nạp vào tế bào côn trùng. Các bước này cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo chất lượng protein thu được.

IV. Ứng dụng thực tiễn của protein E2 trong nghiên cứu

Protein E2 không chỉ có giá trị trong nghiên cứu mà còn có ứng dụng thực tiễn trong việc phát triển vắc xin và các phương pháp chẩn đoán bệnh. Việc sử dụng protein E2 tái tổ hợp có thể giúp nâng cao hiệu quả của các vắc xin hiện có.

4.1. Phát triển vắc xin mới

Protein E2 tái tổ hợp có thể được sử dụng để phát triển các vắc xin mới, giúp tăng cường khả năng miễn dịch cho lợn. Các nghiên cứu cho thấy rằng vắc xin dựa trên protein E2 có thể tạo ra phản ứng miễn dịch mạnh mẽ.

4.2. Chẩn đoán bệnh hiệu quả hơn

Sử dụng protein E2 trong các phương pháp chẩn đoán có thể giúp phát hiện virus dịch tả lợn cổ điển một cách nhanh chóng và chính xác hơn. Điều này rất quan trọng trong việc kiểm soát dịch bệnh.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu

Nghiên cứu protein E2 của virus dịch tả lợn cổ điển bằng hệ thống baculovirus đã mở ra nhiều cơ hội mới trong việc phát triển vắc xin và các phương pháp chẩn đoán. Tương lai của nghiên cứu này hứa hẹn sẽ mang lại nhiều tiến bộ trong việc kiểm soát dịch bệnh.

5.1. Tiềm năng phát triển vắc xin

Với những kết quả đạt được từ nghiên cứu protein E2, có thể phát triển các vắc xin thế hệ mới có hiệu quả cao hơn trong việc phòng ngừa dịch tả lợn cổ điển.

5.2. Hướng nghiên cứu tiếp theo

Cần tiếp tục nghiên cứu sâu hơn về protein E2 và các kháng nguyên khác của virus dịch tả lợn cổ điển để phát triển các phương pháp phòng ngừa và điều trị hiệu quả hơn.