Phân Lập và Tinh Chế Hợp Chất Kháng Staphylococcus aureus ATCC 43300 Từ Diệp Hạ Châu Đắng

Nghiên cứu phân lập và tinh chế hợp chất kháng Staphylococcus aureus kháng methicillin từ cao chiết diệp hạ châu đắng Phyllanthus amarus.

• Tác giả: Lê Thị Trúc Linh
• Người hướng dẫn: ThS. Dương Nhật Linh
• Trường học: Trường Đại Học Mở Thành Phố Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học - Y Dược
• Đề tài: Nghiên Cứu Hợp Chất Kháng Staphylococcus Aureus Từ Diệp Hạ Châu Đắng
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2020
• Địa điểm: Thành Phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• DANH MỤC VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• DANH MỤC BIỂU ĐỒ
• ĐẶT VẤN ĐỀ. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1.1. Tổng quan về vi khuẩn Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA)
• 1.1.1. Phân loại Staphylococcus aureus
• 1.1.2. Tình hình nghiên cứu MRSA trên thế giới và Việt Nam
• 1.2. Tổng quan về cây diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus)
• 1.2.1. Phân loại khoa học
• 1.2.2. Đặc điểm hình thái và phân bố
• 1.2.3. Thành phần hóa học
• 1.2.4. Tình hình nghiên cứu trên thế giới và trong nước
• 1.3. Khái quát về phương pháp phân lập và tinh chế các hợp chất
• 1.3.1. Kỹ thuật chiết (Maceration)
• 1.3.2. Phương pháp chiết lỏng - lỏng
• 1.3.3. Cô đặc và sấy khô
• 1.3.4. Phương pháp sắc ký bản mỏng
• 1.3.5. Phương pháp sắc ký cột
• 1.3.6. Khái quát về phương pháp thử hoạt tính kháng khuẩn
• 1.3.6.1. Phương pháp khuếch tán
• 1.3.6.2. Phương pháp pha loãng liên tiếp
• 1.3.7. Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất
• 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
• 2.2. Vật liệu nghiên cứu
• 2.3. Đối tượng nghiên cứu
• 2.4. Thiết bị, dụng cụ, hóa chất và môi trường
• 2.5. Phương pháp nghiên cứu
• 2.5.1. Bố trí thí nghiệm
• 2.5.2. Quy trình thu nhận và xử lý mẫu
• 2.5.3. Khảo sát ảnh hưởng của dung môi chiết đến khối lượng cao chiết
• 2.5.4. Xác định giới hạn nhiễm khuẩn của cao chiết
• 2.5.5. Khảo sát hoạt tính kháng Staphylocuccus aureus ATCC 43300 kháng methicillin (MRSA) của các loại cao chiết
• 2.5.5.1. Phương pháp sắc ký bản mỏng
• 2.5.5.2. Phương pháp sắc ký cột
• 2.5.5.3. Khảo sát khả năng kháng khuẩn bằng phương pháp tự sinh đồ
• 2.5.6. Tinh sạch và xác định cấu trúc hợp chất thu được
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 3.1. Kết quả giám định tên khoa học của cây
• 3.2. Khảo sát ảnh hưởng của dung môi chiết đến khối lượng cao chiết thu được từ cây diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus)
• 3.3. Kết quả thử giới hạn nhiễm khuẩn của cao chiết
• 3.4. Khảo sát hoạt tính kháng MRSA của các loại cao chiết
• 3.5. Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của cao chiết với vi khuẩn MRSA
• 3.6. Điều chế các phân đoạn từ cao ethyl acetate
• 3.7. Khảo sát hoạt tính kháng MRSA của các cao phân đoạn ethyl acetate
• 3.8. Khảo sát khả năng kháng MRSA bằng phương pháp tự sinh đồ
• 3.9. Khảo sát các phân đoạn của cao PA-E3
• 3.10. Xác định cấu trúc hóa học của hợp chất PA02
• KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu hợp chất kháng Staphylococcus aureus từ diệp hạ châu đắng

Nghiên cứu hợp chất kháng Staphylococcus aureus từ diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus) đang thu hút sự chú ý trong lĩnh vực y học. Vi khuẩn Staphylococcus aureus, đặc biệt là các chủng kháng methicillin (MRSA), đã trở thành một thách thức lớn trong điều trị nhiễm khuẩn. Diệp hạ châu đắng được biết đến với nhiều tác dụng dược lý, bao gồm khả năng kháng khuẩn. Nghiên cứu này nhằm mục đích phân lập và tinh chế các hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn từ cây này.

1.1. Tình hình nghiên cứu Staphylococcus aureus kháng methicillin

Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) là một trong những nguyên nhân chính gây nhiễm trùng trong bệnh viện. Tình hình kháng thuốc ngày càng nghiêm trọng, với nhiều chủng vi khuẩn kháng lại hầu hết các loại kháng sinh hiện có. Việc tìm kiếm các hợp chất kháng khuẩn mới từ thiên nhiên là rất cần thiết.

1.2. Đặc điểm và thành phần hóa học của diệp hạ châu đắng

Diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus) là một loại thảo dược có nhiều thành phần hóa học có lợi. Các nghiên cứu cho thấy cây này chứa lignans, flavonoids và tannins, có khả năng kháng khuẩn và chống viêm. Những hợp chất này có thể là nguồn tiềm năng cho việc phát triển thuốc kháng khuẩn.

II. Vấn đề kháng thuốc và thách thức trong điều trị nhiễm khuẩn

Kháng thuốc là một trong những vấn đề lớn trong y tế hiện đại. Việc sử dụng kháng sinh không hợp lý đã dẫn đến sự phát triển của các chủng vi khuẩn kháng thuốc, đặc biệt là MRSA. Điều này gây khó khăn trong việc điều trị các bệnh nhiễm khuẩn thông thường. Cần có các biện pháp hiệu quả để kiểm soát tình trạng này.

2.1. Nguyên nhân dẫn đến kháng thuốc

Sự lạm dụng và sử dụng kháng sinh không đúng cách là nguyên nhân chính dẫn đến kháng thuốc. Việc sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi cũng góp phần làm gia tăng tình trạng kháng thuốc ở vi khuẩn.

2.2. Hệ quả của kháng thuốc đối với sức khỏe cộng đồng

Kháng thuốc dẫn đến việc điều trị nhiễm khuẩn trở nên khó khăn hơn, làm tăng tỷ lệ tử vong và chi phí điều trị. Các bệnh viện phải đối mặt với tình trạng gia tăng nhiễm trùng do vi khuẩn kháng thuốc, gây áp lực lên hệ thống y tế.

III. Phương pháp nghiên cứu hợp chất kháng khuẩn từ diệp hạ châu đắng

Nghiên cứu này sử dụng các phương pháp chiết xuất và phân lập hợp chất từ diệp hạ châu đắng. Các phương pháp như chiết lỏng-lỏng và sắc ký bản mỏng được áp dụng để tách biệt các hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn. Mục tiêu là xác định các hợp chất có khả năng ức chế sự phát triển của Staphylococcus aureus.

3.1. Quy trình chiết xuất hợp chất từ diệp hạ châu đắng

Quy trình chiết xuất bao gồm việc sử dụng dung môi phù hợp để thu nhận các hợp chất từ cây. Các dung môi như ethanol và methanol thường được sử dụng để tối ưu hóa hiệu suất chiết xuất.

3.2. Phương pháp thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn

Hoạt tính kháng khuẩn của các hợp chất được thử nghiệm bằng phương pháp khuếch tán và pha loãng liên tiếp. Các chỉ số như nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) sẽ được xác định để đánh giá hiệu quả của các hợp chất.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn

Kết quả nghiên cứu cho thấy diệp hạ châu đắng có khả năng kháng Staphylococcus aureus. Các hợp chất phân lập từ cây này đã thể hiện hoạt tính kháng khuẩn đáng kể. Những phát hiện này mở ra hướng đi mới trong việc phát triển thuốc kháng sinh từ thiên nhiên.

4.1. Kết quả thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn

Các mẫu chiết xuất từ diệp hạ châu đắng cho thấy khả năng ức chế sự phát triển của MRSA. Đường kính vòng kháng khuẩn được ghi nhận cho thấy hiệu quả rõ rệt của các hợp chất.

4.2. Ứng dụng trong y học và phát triển thuốc

Các hợp chất kháng khuẩn từ diệp hạ châu đắng có thể được phát triển thành thuốc điều trị nhiễm khuẩn. Nghiên cứu này góp phần vào việc tìm kiếm các giải pháp thay thế cho kháng sinh hiện tại.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu

Nghiên cứu về hợp chất kháng Staphylococcus aureus từ diệp hạ châu đắng đã chỉ ra tiềm năng lớn trong việc phát triển thuốc kháng sinh mới. Cần tiếp tục nghiên cứu để xác định rõ hơn về cơ chế hoạt động và hiệu quả của các hợp chất này. Tương lai của nghiên cứu này hứa hẹn sẽ mang lại những giải pháp mới cho vấn đề kháng thuốc.

5.1. Tầm quan trọng của nghiên cứu hợp chất tự nhiên

Nghiên cứu hợp chất tự nhiên không chỉ giúp phát hiện ra các loại thuốc mới mà còn góp phần bảo tồn và phát huy giá trị của các loại thảo dược truyền thống.

5.2. Hướng đi mới trong nghiên cứu và phát triển thuốc

Cần có sự hợp tác giữa các nhà khoa học, nhà nghiên cứu và ngành công nghiệp dược phẩm để phát triển các sản phẩm từ thiên nhiên, đáp ứng nhu cầu điều trị trong bối cảnh kháng thuốc ngày càng gia tăng.

Trích đoạn nội dung tài liệu

CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU SVTH: LÊ THỊ TRÚC LINH Trang 4 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD 1: ThS. DƯƠNG NHẬT LINH GVHD 2: TS. NGUYỄN TẤN PHÁT 1.

Tổng quan về vi khuẩn Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) 1. Phân loại Staphylococcus aureus. Theo Buchanan và Gibbons (1994), Staphylococcus aureus được phân loại như sau: Giới Eubacteria Ngành Fimicute Lớp Bacilli Bộ Bacillales Họ Staphylococcaceae Chi Staphylococcus Loài Staphylococcus aureus Hình 1. Hình vi thể của S.aureus (https://www.com/jesslyn08/micro/) 1.

Tình hình nghiên cứu MRSA trên thế giới và Việt Nam ❖ Tình hình thế giới Trong số các loài Staphylococcus thì Staphylococcus aureus là loài thường gặp nhất, chúng thuộc nhóm cho phản ứng coagulase dương tính. Staphylococcus là những tế bào hình cầu Gram (+), đường kính 0,5-1,5 µm, có thể đứng riêng rẽ, từng đôi, bốn con, chuỗi ngắn (3-4 tế bào) hoặc chùm không theo một trật tự nào cả. Sự SVTH: LÊ THỊ TRÚC LINH Trang 5 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD 1: ThS. DƯƠNG NHẬT LINH GVHD 2: TS.

NGUYỄN TẤN PHÁT hình thành chùm thường xảy ra trong quá trình vi khuẩn phát triển trên môi trường đặc, do kết quả của sự phân chia tế bào quá nhiều. Staphylococci không di động, không sinh nha bào, nang thì có mặt trong những tế bào còn non, nhưng biến mất khi tế bào ở giai đoạn pha ổn định. aureus kháng với nhiều loại kháng sinh khác nhau. Một vài loài kháng với tất cả các loại kháng sinh ngoại trừ vancomycin, và những loài này ngày càng tăng.

Methicilin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) rất phổ biến và hầu hết các dòng này cũng kháng với nhiều kháng sinh khác. Trong phòng thí nghiệm, người ta đã tìm thấy plasmid kháng vancomycin ở Enterococcus faecalis có thể chuyển sang S. aureus, và người ta nghĩ rằng việc chuyển này có thể xảy ra ngoài tự nhiên, trong đường tiêu hóa chẳng hạn. aureus còn kháng với chất khử trùng và chất tẩy uế (Kenneth Todar.

Các chủng MRSA mang gen mã hóa protein làm cho vi khuẩn kháng với hầu hết các kháng sinh nhóm β-lactam (như methicillin) ( Lee và cs. Tại Hà Lan, một quốc gia áp dụng chính sách 'tìm kiếm và tiêu diệt', một nghiên cứu gần đây cho thấy chỉ 0,03% bệnh nhân là người mang MRSA. Hơn nữa, kiểu gen tiết lộ rằng hầu hết các chủng MRSA ở Hà Lan không liên quan đến nhau, và do đó việc nhiễm bệnh có lẽ không phải là kết quả của lây nhiễm (Wertheim và cs. MRSA là nguyên nhân chính gây nhiễm trùng da và mô mềm trong bệnh viện và cộng động ở những người khỏe mạnh khác.

Tần xuất tử vong hàng năm từ MRSA đang gia tăng nhanh chóng và vượt qua những bệnh nhây gây ra bởi virus suy giảm miễn dịch ở người/ hội chứng suy giảm miễn dịch mẵ phải (HIV/AIDS) (Bancroft và cs., 2007), từ năm 1995 đến 2005, số ca nhập viện liên quan đến nhiễm trùng MRSA tăng 119% hay 14% mỗi năm (Klein và cs., 2007), khoảng 1650 trường hợp nhiễm trùng dòng máu và 500 trường hợp tử vong hàng năm ở Úc (Turnidge và cs.000 người chết mỗi năm tại Hoa Kỳ (Dantes và cs., 2013) và một chi phí vượt quá hàng năm cho hệ thống chăm sóc sức khỏe của châu Âu là 380 triệu euro (Köck và cs. Các tình trạng liên quan đến việc nhiễm SVTH: LÊ THỊ TRÚC LINH Trang 6 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD 1: ThS. DƯƠNG NHẬT LINH GVHD 2: TS. NGUYỄN TẤN PHÁT MRSA thường được báo cáo bao gồm: sốc nhiễm trùng (56%), viêm phổi (32%), viêm nội tâm mạc (19%), nhiễm khuẩn huyết (10%) và viêm mô tế bào (6%) (Carrol và cs.

Tỷ lệ nhiễm MRSA đã tăng lên trong 10 năm qua, với số lần xuất viện của bệnh nhân nhiễm trùng da và mô mềm do MRSA gây ra tăng gấp ba lần kể từ năm 2004 (Mera và cs. Methicillin, giống như tất cả các penicillin. Cơ chế đề kháng của S. aureus đối với methicillin là biến đổi protein bám penicillin (PBP), chịu trách nhiệm duy trì và hình thành vách tế bào vi khuẩn.

Các chủng MRSA đã thu được một loại protein mới, được gọi là PBP2a, không bị ảnh hưởng bởi methicillin và có thể thay thế các PBP khác, do đó cho phép S. aureus sống sót với sự hiện diện của methicillin. PBP2a được mã hóa bởi gen mec A, đây là dấu hiệu đặc trưng của MRSA. Trái ngược với gen penicillinase, mecA không cư trú trên một plasmid mà trên nhiễm sắc thể, được nhúng vào một yếu tố di truyền lớn có tên là Staphylococcal Chromosome Cassette mec hoặc SCC mec.

Sự hiện diện của PBP2a có nghĩa là MRSA không chỉ kháng với methicillin mà còn với tất cả các loại kháng sinh β-Lactam, bao gồm cả penicillin tổng hợp, cephalosporin và carbapenem (Katayama và cs. Hơn 50% các chủng MRSA kháng với các loại thuốc như macrolide, lincosamide, fluoroquinolones và aminoglycoside; và 30% kháng với trimethoprim-sulfamethoxazole (Archer, 1998). Harbarth và cộng sự (2001) đã nghiên cứu sự khác biệt trong dịch tễ học của vi khuẩn đa kháng tại Hoa Kỳ và Đức. Tỷ lệ kháng kháng sinh nói chung ở Đức thấp hơn ở Mỹ, nhưng không thấp hơn một số quốc gia châu Âu khác như Hà Lan.

Lý do cho sự khác biệt giữa Hoa Kỳ và Đức không rõ ràng, nhưng có thể liên quan đến sự khác biệt trong việc sử dụng phòng thí nghiệm để chẩn đoán nhiễm trùng và các quy trình thí nghiệm chính xác được sử dụng, cũng như sự khác biệt về dòng vô tính giữa các vi khuẩn lưu hành, thực hành kê đơn kháng sinh, sự khác biệt trong dân số bệnh nhân và các yếu tố văn hóa. Để nhấn mạnh về mối đe dọa tiềm tàng của MRSA gây ra cho hệ thống chăm sóc sức khỏe ở Châu Phi, một báo cáo toàn cầu đầu tiên của SVTH: LÊ THỊ TRÚC LINH Trang 7 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD 1: ThS. DƯƠNG NHẬT LINH GVHD 2: TS. NGUYỄN TẤN PHÁT WHO về kháng kháng sinh được công bố năm 2014 đã ghi nhận rằng, ở một số vùng của Châu Phi có đến 80% trường hợp nhiếm MRSA khiến việc điều trị bằng kháng sinh tiêu chuẩn không còn hiệu quả.

Điều này cho thấy tình hình kháng kháng sinh của vi khuẩn ngày càng diễn biến phức tạp. Để đối phó với tình hình kháng kháng sinh, nhiều nhà nghiên cứu đã nghiên cứu các sản phẩm tự nhiên có nguồn gốc từ thực vật cho các loại thuốc kháng sinh và phương pháp điều trị thay thế (Wang và cs.Vancomycin là kháng sinh được lựa chọn để điều trị nhiễm trùng MRSA. Tuy nhiên sự xuất hiện của S. aureus kháng vancomycin (VRSA) và vancomycin-trung gian S.aureus (VISA) đã khiến việc điều trị kháng khuẩn trở nên khó khăn.

Do đó, các hợp chất mới được điều chế để điều trị và kiểm soát nhiễm trùng bởi các vi sinh vật này đã được phát triển và nghiên cứu rộng rãi (Lora-Tamayo và cs. ❖ Tình hình ở Việt Nam Sự lây nhiễm MRSA dẫn đến nhiều ca tử vong ở các bệnh viện tại Việt Nam. MRSA là nguyên nhân chính gây ra nhiễm trùng da và mô mềm trong bệnh viện và cộng động ở những người khỏe mạnh khác. Các vi khuẩn này có thể sống ký sinh ở vùng da hoặc vùng tai - mũi - họng mà không gây ra bệnh.

Những người nhiễm MRSA được gọi là vật chủ. MRSA thường kéo theo sự đề kháng các kháng sinh khác là vì cơ chế đề kháng của S. aureus đối với methicillin là biến đổi protein bám penicillin (PBP) chỉ do một gen quy định (mecA) và kháng thuốc kiểu này là kháng thuốc một cấp, nghĩa là một khi đã đề kháng được methicillin thì vi khuẩn đề kháng được tất cả các kháng sinh - lactam và có thể kháng các kháng sinh khác nữa (Phạm Hùng Vân, 2005). Khảo sát tính chất chống đối kháng sinh tại Thành phố Hồ Chí Minh năm 2005 cho thấy các chủng S.aureus phân lập từ bệnh phẩm cho thấy có đến 94,1% chủng kháng Penicillin, 52,9% kháng Ciprofloxacin, 52% kháng Amoxillin và 12,5% kháng Getamicin (Nguyễn Thị Kê và cs.

Điều này cho thấy tình hình kháng kháng sinh của vi khuẩn ngày càng diễn biến phức tạp. SVTH: LÊ THỊ TRÚC LINH Trang 8 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD 1: ThS. DƯƠNG NHẬT LINH GVHD 2: TS. NGUYỄN TẤN PHÁT 1.

Tổng quan về cây diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus) 1. Phân loại khoa học Theo Đỗ Huy Bích và cộng sự (2004), Phyllanthus thuộc họ thầu dầu. Tên khoa học: Phyllanthus amarus. Tên thường gọi: cây chó đẻ, diệp hạ châu, rút đất, cam kiềm, trân châu thảo, diệp hòe thái, lào nha châu.

Theo Hemant Dhongade (1999), diệp hạ châu đắng được phân loại như sau Giới Plantae Ngành Angiospermae Lớp Dicotyledoneae Bộ Tubiflorae Họ Euphorbiaceae Chi Phyllanthus Loài Amarus Schum.et Thom Hình 1. Cây diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus) (http://tropical.php?id=Phyllanthus+amarus) 1. Đặc điểm hình thái và phân bố Diệp hạ châu đắng là một loại cây thảo, sống quanh năm, cao 20-30 cm, có thể lên đến 60-70 cm, thân nhẵn, có màu xanh. Lá đơn, mọc so le, xếp thành 2 dãy, mỗi cành giống như một lá kép lông chim gồm nhiều lá.

Phiến lá hình bầu dục đầu tròn có mũi nhọn, màu xanh lục, đậm ở mặt trên, nhạt ở mặt dưới. Hoa mọc ở kẽ lá, SVTH: LÊ THỊ TRÚC LINH Trang 9 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD 1: ThS. DƯƠNG NHẬT LINH GVHD 2: TS. NGUYỄN TẤN PHÁT quả nang, hình cầu, hơi dẹt, mọc rủ xuống ở dưới lá, mùa hoa: tháng 4-6, mùa quả: tháng 7-9.

có nhiều loài phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới. Ở Việt Nam, chi này có khoảng 40 loài, trong đó đáng chú ý là hai loài P.amarus có hình dáng gần giống nhau nhưng P.amarus thân có màu xanh, quả nang nhẵn, có tên gọi là diệp hạ châu đắng, còn P. urinaria thân có màu đỏ, quả nang có gai, có tên gọi là diệp hạ châu ngọt hay cây chó đẻ răng cưa. Cả hai loài này mọc rải rác ở khắp nơi,phân bố khắp các vùng nhiệt đới.

Ở Việt Nam, cây mọc hoang trên đất ẩm, ở khắp các địa phương trừ vùng núi cao, lạnh. Diệp hạ châu đắng là cây ưa ẩm, ưa sáng và hơi chịu bóng, thường mọc lẫn trong các bầu cỏ, ruộng cao, nương rẫy và vườn nhà,.Cây non mọc từ hạt vào cuối mùa xuân, sinh trưởng nhanh vào mùa hè và tàn lụi vào giữa mùa thu nêncây thường được thu hái vào cuối mùa hè vì trong thời gian này cây đã sinh trưởng, phát triển đầy đủ và chứa lượng hoạt chất cao nhất (Đỗ Huy Bích và cs. Lá và hoa diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus) 1. Thành phần hóa học Theo Đỗ Huy Bích và cộng sự (2004), Phyllanthus chứa nhiều chất thuộc các nhóm hóa học: - Triterpen (stigmasterol, stigmasterol-3-0-β glucosid, β-sitosterol, β- sitosterol glucosid, lup-20-en-3 β-ol), flavonoid (kaempferol, quercetin, SVTH: LÊ THỊ TRÚC LINH Trang 10 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP GVHD 1: ThS.

DƯƠNG NHẬT LINH GVHD 2: TS.