Phân Lập Isorhamnetin, Kaempferol và Quercetin Từ Lá Bạch Quả (Ginkgo Biloba)

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu kỹ thuật hóa học phân lập isorhamnetin kaempferol và quercetin từ lá bạch quả ginkgo biloba, đánh giá hiện trạng, phân tích vấn đề, đề xuất biện pháp

• Tác giả: Lê Đoàn Quỳnh Như
• Người hướng dẫn: Tiến Sĩ Huỳnh Khánh Duy
• Trường học: Đại học Quốc gia TP. HCM Trường Đại học Bách Khoa
• Chuyên ngành: Kỹ thuật Hóa học
• Đề tài: Phân Lập Isorhamnetin, Kaempferol Và Quercetin Từ Lá Bạch Quả (Ginkgo Biloba)
• Loại tài liệu: Luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: TP. Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• LỜI CAM ĐOAN
• DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT
• 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1.1. Tính cấp thiết của đề tài
• 1.2. Yêu cầu thực tiễn
• 1.3. Các cách tiếp cận đã công bố để giải quyết vấn đề
• 1.4. Định hướng nghiên cứu
• 1.5. Đối tượng nghiên cứu
• 1.6. Nguyên liệu và thiết bị
• 1.7. Phương pháp thực hiện
• 1.8. Phương pháp kiểm định sản phẩm
• 2. KẾT QUẢ - BÀN LUẬN
• 2.1. Định danh dược liệu lá bạch quả
• 2.2. Khảo sát khả năng phân lập các flavonoid trong cao lá bạch quả qua phương thức chiết- thủy phân một bước
• 2.2.1. Thủy phân không có sự hỗ trợ của vi sóng
• 2.2.2. Thủy phân có sự hỗ trợ của vi sóng
• 2.3. Khảo sát khả năng phân lập các flavonoid trong cao lá bạch quả qua các phương thức chiết- thủy phân một bước
• 2.3.1. Phương pháp chiết Soxhlet one-pot
• 2.3.2. Phương pháp chiết với sự hỗ trợ của siêu âm
• 3. KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Phân Lập Flavonoid Từ Lá Bạch Quả Ginkgo Biloba

Bạch quả (Ginkgo biloba) là một dược liệu quý, được sử dụng rộng rãi trên thế giới. Lá bạch quả chứa nhiều hoạt chất, trong đó flavonoid là một nhóm quan trọng. Isorhamnetin, kaempferol và quercetin là ba flavonoid chính được quan tâm vì các hoạt tính sinh học tiềm năng. Việc phân lập và tinh chế các hợp chất này là cần thiết để nghiên cứu sâu hơn về tác dụng dược lý và ứng dụng của chúng. Các nghiên cứu ứng dụng bạch quả đã được công bố như điều trị hen suyễn, viêm phế quản, bệnh tim mạch, tăng cường lưu lượng máu ngoại vi, điều trị suy giảm chức năng não. Cao chiết từ lá bạch quả đứng thứ 37 trong danh sách thực phẩm chức năng bán chạy nhất tại Mỹ năm 2012. Vì vậy, việc nghiên cứu sâu về thành phần flavonoid trong lá bạch quả là vô cùng cấp thiết.

1.1. Vai trò của Isorhamnetin Kaempferol và Quercetin

Isorhamnetin, Kaempferol và Quercetin là những flavonoid có hoạt tính chống oxy hóa mạnh, bảo vệ tế bào khỏi tổn thương do các gốc tự do. Chúng cũng có tác dụng chống viêm, kháng khuẩn và có thể có tiềm năng trong điều trị một số bệnh ung thư. Nghiên cứu sâu hơn về cơ chế tác dụng của các hợp chất này có thể mở ra những ứng dụng mới trong y học. Cao chuẩn (chiết xuất từ lá bạch quả) (như EGb76® và LI 1370® ) có thể xem là đại diện cho dược tính của Ginkgo biloba với thành phần Ginkgolide A, B, C, J và bilobalide hàm lượng từ (5÷7) % và flavonoids chiếm khoảng (22÷27) % cao chiết, gồm chủ yếu ba loại là quercetin, kaempferol và isorhamnetin gắn với ít nhất một nửa phân tử đường.

1.2. Ứng Dụng của Cao Bạch Quả trong Y Học Hiện Đại

Cao bạch quả được sử dụng trong nhiều chế phẩm giúp cải thiện trí nhớ, tăng cường tuần hoàn máu não, và hỗ trợ điều trị các bệnh liên quan đến thần kinh. Tuy nhiên, chất lượng của các sản phẩm này có thể khác nhau, do đó, việc kiểm soát chất lượng và đảm bảo hàm lượng các flavonoid chính là rất quan trọng. Tổ chức y tế thế giới và ủy ban E của Đức đã thêm vào ứng dụng của bạch quả đối với bệnh tắc nghẽn động mạch ngoại biên. Các nghiên cứu trước đó được thực hiện bằng phương pháp chiết xuất cao bạch quả chuẩn cũng đã cho thấy được những hiệu quả trong việc điều trị ở các thời kỳ đầu của chứng mất trí, bệnh tắc động mạch ngoại biên, suy não do thiếu lưu lượng máu đầy đủ và các bệnh liên quan khác.

II. Thách Thức Phân Lập Flavonoid Từ Lá Bạch Quả Vấn Đề

Việc phân lập isorhamnetin, kaempferol và quercetin từ lá bạch quả không phải là một quá trình đơn giản. Các flavonoid này thường tồn tại dưới dạng glycoside, gắn với các phân tử đường, gây khó khăn cho việc chiết xuất và tinh chế. Ngoài ra, trong lá bạch quả còn chứa nhiều hợp chất khác có thể gây nhiễu, ảnh hưởng đến độ tinh khiết của sản phẩm cuối cùng. Sự tiêu thụ ngày càng cao cùng với thị trường mỗi lúc một mở rộng là nguồn động lực to lớn không ngừng thôi thúc các nhà khoa học nghiên cứu về cao chiết từ lá của loại dược thảo kỳ diệu này. Việc sử dụng bạch quả dùng để chữa bệnh đã từ lâu ở Trung Quốc. Nhưng những chế phẩm hiện đại từ bạch quả lại không bắt nguồn từ y học cổ truyền.

2.1. Khó Khăn Trong Chiết Xuất Flavonoid Glycoside

Flavonoid glycoside có độ phân cực cao, khó hòa tan trong các dung môi hữu cơ thông thường. Việc sử dụng các phương pháp chiết xuất truyền thống có thể không hiệu quả, dẫn đến hiệu suất thu hồi thấp. Cần phải lựa chọn các dung môi và kỹ thuật chiết xuất phù hợp để tối ưu hóa quá trình phân lập. Để cải thiện tăng độ chọn lọc của phép phân tích, HPLC kết hợp với đầu dò DAD được sử dụng để phân tích cả các flavonoid glycoside và aglycone.

2.2. Loại Bỏ Tạp Chất và Các Hợp Chất Gây Nhiễu

Trong lá bạch quả chứa nhiều hợp chất khác như terpene, ginkgolic acid, và các sắc tố có thể lẫn vào trong quá trình chiết xuất. Các tạp chất này cần được loại bỏ để đảm bảo độ tinh khiết của isorhamnetin, kaempferol và quercetin. Các phương pháp sắc ký như sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng có thể được sử dụng để tách các hợp chất này. Schennen và các cộng sự đã sử dụng cột LiChroCart RP-18 với cột bảo vệ RP- 8 cùng hệ dung môi methanol-water-formic acid (55:41:4). Nội chuẩn được sử dụng là rutin.

III. Phương Pháp Chiết Xuất và Thủy Phân Flavonoid Lá Bạch Quả

Một phương pháp hiệu quả để phân lập isorhamnetin, kaempferol và quercetin là kết hợp chiết xuất và thủy phân. Đầu tiên, lá bạch quả được chiết xuất bằng dung môi phù hợp để thu hồi các flavonoid glycoside. Sau đó, quá trình thủy phân được thực hiện để cắt đứt liên kết glycoside, giải phóng các flavonoid aglycone (isorhamnetin, kaempferol, quercetin). Quá trình thủy phân có thể được thực hiện bằng acid hoặc enzyme.Fengxia Deng và S. William Zito [26] đã phát triển phương pháp và thẩm định bằng GC-MS để định tính cũng như định lượng các hợp chất flavonoid cũng như các terpenoid trong cao bạch quả và những chế phẩm trên thị trường.

3.1. Lựa Chọn Dung Môi Chiết Xuất Tối Ưu

Việc lựa chọn dung môi chiết xuất phù hợp là rất quan trọng để đạt được hiệu suất thu hồi cao. Các dung môi thường được sử dụng bao gồm ethanol, methanol, acetone, và ethyl acetate. Mỗi dung môi có ưu và nhược điểm riêng, và cần phải được lựa chọn dựa trên độ phân cực của các flavonoid glycoside và các tạp chất có trong lá bạch quả. Quá trình chiết thường được thực hiện bằng các phương pháp như chiết ngâm, chiết Soxhlet, hoặc chiết siêu âm. Kết quả cho thấy độ thu hồi của quá trình chiết cao trên 95 %, độ lệch chuẩn tương đối (RSD) thấp (5 ÷ 8) %.

3.2. Thủy Phân Bằng Acid Hoặc Enzyme Ưu Nhược Điểm

Thủy phân bằng acid là một phương pháp phổ biến để cắt đứt liên kết glycoside. Tuy nhiên, quá trình này có thể gây phá hủy các flavonoid. Thủy phân bằng enzyme là một phương pháp nhẹ nhàng hơn, nhưng có thể tốn thời gian hơn. Cần phải kiểm soát chặt chẽ các điều kiện thủy phân để tối ưu hóa hiệu suất và giảm thiểu sự phá hủy các flavonoid. Y. Zhang et al. [28] tiến hành thủy phân cao bạch quả với sự hỗ trợ của vi sóng. Kết quả sau khi tiến hành tối ưu, dung môi n-propanol, nồng độ HCl là 36% với thể tích 7,5 mL, công suất vi sóng là 300 MW trong thời gian 2 phút.

3.3. Phương pháp chiết Soxhlet one pot

Soxhlet là một kỹ thuật chiết truyền thống sử dụng một thiết bị Soxhlet để liên tục chiết một mẫu rắn bằng dung môi. Trong quy trình one-pot, quá trình chiết và phản ứng (ví dụ: thủy phân) được thực hiện trong cùng một bình, giảm các bước chuyển và có thể tăng hiệu quả. Điều này có thể hữu ích cho các phản ứng tuần tự mà dung môi chiết cũng có thể đóng vai trò là dung môi phản ứng.

IV. Tinh Chế Isorhamnetin Kaempferol Quercetin Bằng Sắc Ký

Sau khi chiết xuất và thủy phân, hỗn hợp chứa isorhamnetin, kaempferol, quercetin và các tạp chất khác. Các phương pháp sắc ký như sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng, và sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) được sử dụng để tách các flavonoid này khỏi nhau và loại bỏ các tạp chất. Việc lựa chọn pha tĩnh và pha động phù hợp là rất quan trọng để đạt được độ phân giải cao. Nhóm Jing Zhang [29] cũng tiến hành nghiên cứu phương pháp tinh chế flavonoid từ dịch chiết lá bạch quả (EGb) bằng phương pháp tạo phức với ion kẽm. Do khuynh hướng tạo chelat với ion kim loại của flavonoid, nhóm nghiên cứu đã tiến hành tổng hợp phức flavonoid- kẽm.

4.1. Sắc Ký Cột Ưu Điểm và Ứng Dụng Thực Tế

Sắc ký cột là một phương pháp phổ biến để tách các hợp chất hữu cơ. Pha tĩnh thường là silica gel hoặc alumina, và pha động là một dung môi hoặc hỗn hợp dung môi. Các hợp chất sẽ di chuyển qua cột với tốc độ khác nhau tùy thuộc vào ái lực của chúng với pha tĩnh và pha động. Sắc ký cột có thể được sử dụng để tinh chế một lượng lớn các flavonoid. Các flavonid trong dịch chiết lá bạch quả sẽ tạo phức với ion kẽm tạo kết tủa vàng.

4.2. HPLC Phân Tích Định Lượng và Định Tính

HPLC là một phương pháp sắc ký mạnh mẽ, có thể được sử dụng để phân tích định lượng và định tính các flavonoid. Pha tĩnh thường là một cột pha đảo, và pha động là một dung môi hoặc hỗn hợp dung môi có độ phân cực khác nhau. HPLC có thể được sử dụng để xác định độ tinh khiết và hàm lượng của isorhamnetin, kaempferol và quercetin trong mẫu. HPLC được sử dụng để định lượng các aglycone chính gồm quercetin, keampferol, isorhamnetin và những aglycone hàm lượng rất ít như myricetin và luteolin thay thế cho hơn 20 hợp chất flavanol glycoside [24].

V. Ứng Dụng Đánh Giá Chất Lượng Cao Bạch Quả Trên Thị Trường

Các flavonoid isorhamnetin, kaempferol và quercetin được coi là các thành phần chính quyết định chất lượng của cao bạch quả. Việc phân lập và định lượng các hợp chất này có thể được sử dụng để đánh giá chất lượng của các sản phẩm cao bạch quả trên thị trường. Điều này giúp bảo vệ người tiêu dùng khỏi các sản phẩm kém chất lượng và đảm bảo hiệu quả điều trị. Tổ chức y tế thế giới và ủy ban E của Đức đã thêm vào ứng dụng của bạch quả đối với bệnh tắc nghẽn động mạch ngoại biên.

5.1. Xây Dựng Quy Trình Kiểm Nghiệm Cao Bạch Quả

Kết quả nghiên cứu về phân lập flavonoid có thể được sử dụng để xây dựng quy trình kiểm nghiệm cao bạch quả. Quy trình này bao gồm các bước như chuẩn bị mẫu, chiết xuất, thủy phân, tinh chế, và định lượng isorhamnetin, kaempferol và quercetin. Quy trình này cần được thẩm định để đảm bảo độ chính xác và độ tin cậy. Đề tài “Phân lập isorhamnetin, kaempferol và quercetin từ lá bạch quả (Ginkgo biloba)” đã phân lập được ba flavonoid chính trong cao bạch quả là isorhamnetin, kaempferol và quercetin thông qua việc thực hiện khảo sát trên một số phương pháp tìm ra điều kiện tốt trong việc phân lập, tạo tiền đề cho việc tiến hành xây dựng quy trình đánh giá chất lượng cao bạch quả

5.2. Kiểm Soát Chất Lượng Sản Phẩm Cao Bạch Quả

Quy trình kiểm nghiệm cao bạch quả có thể được sử dụng để kiểm soát chất lượng các sản phẩm cao bạch quả trên thị trường. Các sản phẩm không đạt tiêu chuẩn về hàm lượng isorhamnetin, kaempferol và quercetin cần bị loại bỏ. Điều này giúp bảo vệ quyền lợi của người tiêu dùng và đảm bảo hiệu quả điều trị. Theo báo cáo thường niên của Nutrition Business Journal năm 2012, cao chiết từ lá bạch quả đứng thứ 37 trong danh sách thực phẩm chức năng bán chạy nhất tại Mỹ, và đứng thứ 13 về doanh số bán khi cán mốc 90 triệu USD.

VI. Kết Luận Triển Vọng Nghiên Cứu Về Flavonoid Bạch Quả

Việc phân lập isorhamnetin, kaempferol và quercetin từ lá bạch quả là một quá trình quan trọng để nghiên cứu sâu hơn về tác dụng dược lý và ứng dụng của các flavonoid này. Các phương pháp chiết xuất, thủy phân, và tinh chế cần được tối ưu hóa để đạt được hiệu suất cao và độ tinh khiết cao. Nghiên cứu về các phương pháp phân lập flavonoid từ lá bạch quả còn nhiều tiềm năng phát triển. Việc tìm kiếm các phương pháp chiết xuất xanh, sử dụng dung môi thân thiện với môi trường, và phát triển các phương pháp phân tích nhanh chóng và chính xác là những hướng đi quan trọng. Có rất nhiều phòng nghiên cứu tiến hành nghiên cứu về các thành phần trong lá bạch quả.

6.1. Phát Triển Các Phương Pháp Chiết Xuất Xanh

Các phương pháp chiết xuất truyền thống thường sử dụng các dung môi hữu cơ độc hại. Việc phát triển các phương pháp chiết xuất xanh, sử dụng dung môi thân thiện với môi trường như nước, ethanol, hoặc carbon dioxide siêu tới hạn, là một xu hướng quan trọng. Các phương pháp chiết xuất xanh có thể giảm thiểu tác động đến môi trường và đảm bảo an toàn cho người sử dụng. Gần đây, một số thử nghiệm lâm sàng để đánh giá khả năng nhận thức của bệnh Alzheimer [14], bệnh đa xơ cứng và bệnh động mạch ngoại biên đã được tiến hành với kết quả hỗn hợp [15] [16] [17] [18] [19] [20]

6.2. Nghiên Cứu Cơ Chế Tác Dụng Sinh Học Của Flavonoid

Nghiên cứu sâu hơn về cơ chế tác dụng sinh học của isorhamnetin, kaempferol và quercetin có thể mở ra những ứng dụng mới trong y học. Các nghiên cứu in vitro và in vivo cần được thực hiện để đánh giá tác dụng của các flavonoid này đối với các bệnh khác nhau. Điều này có thể dẫn đến việc phát triển các loại thuốc mới từ cao bạch quả. Việc phân lập các flavonoid này là bước quan trọng để thực hiện các nghiên cứu này.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Thị trường thực phẩm chức năng và dược phẩm chiết xuất từ lá bạch quả (Ginkgo biloba) ghi nhận mức tăng trưởng vượt bậc với tổng doanh số toàn cầu đạt 1,26 tỷ USD vào năm 2012. Riêng tại thị trường Hoa Kỳ, số lượng người tiêu dùng sản phẩm bạch quả đã tăng nhanh chóng từ 3 triệu người vào năm 2007 lên 7,7 triệu người vào năm 2012, đưa doanh số bán hàng chạm mốc 151 triệu USD. Theo các tiêu chuẩn dược dụng quốc tế như EGb761 và LI 1370, cao chiết chuẩn từ lá bạch quả phải đảm bảo chứa từ 22% đến 27% flavonoid glycoside và từ 5% đến 7% terpene trilactone. Tuy nhiên, sự bùng nổ nhu cầu thị trường đã kéo theo vấn nạn làm giả dược liệu và gian lận thương mại nghiêm trọng, đặc biệt là hành vi pha trộn các nguồn flavonoid rẻ tiền như rutin từ hoa hòe nhằm đánh lừa các phép đo định lượng thông thường.

Trước thực trạng đó, đề tài luận văn thạc sĩ tập trung giải quyết vấn đề phân lập, tinh chế và xác định cấu trúc ba hợp chất flavonoid aglycone chủ yếu gồm isorhamnetin, kaempferol và quercetin từ nguồn lá bạch quả khô. Mục tiêu cốt lõi của nghiên cứu là xây dựng hệ dung môi sắc ký tối ưu, phân tách thành công các hợp chất tinh khiết có độ sạch cao để làm chất chuẩn đối chiếu, đồng thời khảo sát các phương pháp thủy phân và chiết xuất hiện đại nhằm nâng cao hiệu suất thu hồi hoạt chất.

Nghiên cứu được triển khai tại phòng thí nghiệm chuyên ngành Kỹ thuật Hóa học thuộc Trường Đại học Bách Khoa – Đại học Quốc gia TP.HCM trong khoảng thời gian từ tháng 7 năm 2016 đến tháng 12 năm 2016. Từ 432 g dược liệu lá khô ban đầu, quy trình đã chiết tách và thu hồi được 60,8 g cao thô (đạt hiệu suất 14,07%), từ đó tạo tiền đề thực nghiệm vững chắc cho việc kiểm định chất lượng các chế phẩm lưu hành trên thị trường.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng dựa trên nền tảng lý thuyết hóa học hợp chất tự nhiên và nguyên lý động học quá trình chiết tách - thủy phân các hợp chất phenolic thực vật. Các hoạt chất sinh học nhóm flavonoid trong lá bạch quả tồn tại chủ yếu dưới dạng flavonol glycoside phức tạp với hơn 20 dẫn xuất liên kết với các gốc đường khác nhau. Dưới tác dụng của acid vô cơ và nhiệt độ, liên kết glycosidic bị cắt đứt thông qua phản ứng thủy phân acid, giải phóng các aglycone tự do tương ứng có độ bền cao hơn và dễ dàng phân tách bằng phương pháp sắc ký.

Ba khái niệm cấu trúc nền tảng được tập trung nghiên cứu bao gồm: quercetin (khung flavonol mang 5 nhóm hydroxyl tự do tại các vị trí C-3, C-5, C-7, C-3', C-4'), kaempferol (khung flavonol mang 4 nhóm hydroxyl tại vị trí C-3, C-5, C-7, C-4') và isorhamnetin (dẫn xuất mang nhóm methoxy tại vị trí C-3' và 4 nhóm hydroxyl). Mối quan hệ giữa cấu trúc hóa học và độ phân cực của các phân tử quyết định trực tiếp đến hệ số lưu giữ Rf trên pha tĩnh silica gel cũng như khả năng hấp phụ và rửa giải trong sắc ký cột cổ điển.

Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu sử dụng mẫu nguyên liệu là 432 g lá bạch quả khô được lấy mẫu theo phương pháp đại diện ngẫu nhiên và nghiền mịn thành dạng bột đồng nhất nhằm tối đa hóa diện tích bề mặt tiếp xúc pha. Quá trình chiết thô được thực hiện bằng hệ thống chiết Soxhlet cổ điển với hỗn hợp dung môi ethanol và nước theo tỷ lệ thể tích 7:3 ở nhiệt độ 70°C trong thời gian 3,5 giờ. Dịch chiết sau đó được xử lý tách béo bằng dung môi n-hexane và cô quay dưới áp suất giảm để thu hồi 60,8 g cao thô.

Giai đoạn thủy phân chuyển hóa glycoside thành aglycone được tiến hành bằng acid hydrochloric nồng độ 36% trong môi trường methanol ở nhiệt độ hoàn lưu 80°C trong 75 phút, thu được 6,4 g cao flavonoid phân đoạn sạch (cao FL). Song song đó, đề tài triển khai khảo sát so sánh với các kỹ thuật hiện đại gồm: phương pháp chiết Soxhlet một bước (one-pot), phương pháp thủy phân có hỗ trợ vi sóng ở công suất 800W và phương pháp chiết có hỗ trợ siêu âm ở công suất 1000W.

Hệ dung môi sắc ký bản mỏng (TLC) được khảo sát qua 8 hệ khác nhau để lựa chọn hệ tối ưu cho sắc ký cột hấp phụ pha thường trên silica gel 60. Cấu trúc hóa học và độ tinh khiết của các phân đoạn phân lập được kiểm định toàn diện bằng các phương pháp phổ nghiệm hiện đại: phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR và 13C-NMR trên thiết bị Bruker Avance II, phổ khối lượng phân giải cao HR-MS trên hệ thống micrOTOF-QII Bruker, và đo nhiệt độ nóng chảy bằng phương pháp phân tích nhiệt vi sai DSC trên máy Seetaram DSC 131. Việc lựa chọn tổ hợp các phương pháp này đảm bảo xác định chính xác tuyệt đối cấu trúc không gian của hoạt chất mà không phụ thuộc vào chất chuẩn thương mại.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Nghiên cứu đã đạt được các phát hiện thực nghiệm quan trọng, làm sáng tỏ các thông số kỹ thuật chiết tách và đặc tính hóa lý của từng hợp chất:

Thứ nhất, quá trình chiết thô từ 432 g nguyên liệu bột lá khô mang lại 60,8 g cao thô, đạt hiệu suất chiết 14,07%. Sau phản ứng thủy phân acid và xử lý phân đoạn, lượng cao flavonoid (cao FL) thu được là 6,4 g, chiếm tỷ lệ chuyển hóa khoảng 10,53% từ cao thô ban đầu.

Thứ hai, trong số 8 hệ dung môi được khảo sát trên sắc ký bản mỏng, hệ dung môi bậc bốn gồm n-hexane - ethyl acetate - chloroform - acid formic với tỷ lệ thể tích 70:30:5:1 cho khả năng phân giải vượt trội nhất. Hệ này tách biệt hoàn toàn 3 vết flavonoid với hệ số lưu giữ tương ứng: quercetin có Rf = 0,145, kaempferol có Rf = 0,24 và isorhamnetin có Rf = 0,36.

Thứ ba, phân lập thành công ba chất tinh khiết qua sắc ký cột cổ điển với dữ liệu định danh cấu trúc rõ ràng:

• Kaempferol (Chất K): dạng bột màu vàng xanh, nhiệt độ nóng chảy xác định qua DSC là 294,38°C; phổ HR-MS ghi nhận ion phân tử pic proton hóa ở 287,0557 m/z tương ứng với khối lượng phân tử 286,23 g/mol của công thức phân tử C15H10O6; các pic dịch chuyển hóa học 1H-NMR tại 6,16 ppm và 6,38 ppm tương ứng với các proton trên vòng A.
• Quercetin (Chất Q): dạng bột màu vàng nhạt sáng, nhiệt độ nóng chảy đạt 311,66°C; phổ HR-MS cho pic ion natri hóa ở 325,0313 m/z tương ứng với khối lượng 302,24 g/mol và công thức C15H10O7.
• Isorhamnetin (Chất I): dạng bột màu vàng nhạt sạm, nhiệt độ nóng chảy đạt 324,25°C; phổ 1H-NMR ghi nhận pic đơn sắc nét của nhóm methoxy (-OCH3) tại độ dịch chuyển 3,83 ppm và phổ 13C-NMR cho tín hiệu carbon methoxy đặc trưng tại 56,29 ppm.

Thứ tư, phương pháp thủy phân có sự hỗ trợ của vi sóng giúp rút ngắn thời gian phản ứng từ 75 phút xuống chỉ còn khoảng 2 phút, giúp tiết kiệm hơn 95% thời gian và giảm thiểu đáng kể lượng dung môi tiêu hao so với đun hoàn lưu truyền thống.

Thảo luận kết quả

Quy luật phân tách của ba hợp chất trên bản mỏng silica gel và cột sắc ký hoàn toàn tương thích với mức độ phân cực của các nhóm thế trên khung phân tử. Quercetin do sở hữu 5 nhóm hydroxyl tự do nên có độ phân cực mạnh nhất, tương tác hấp phụ mạnh nhất với pha tĩnh silica gel và di chuyển chậm nhất (Rf thấp nhất 0,145). Ngược lại, isorhamnetin do có sự hiện diện của nhóm methoxy kỵ nước tại vị trí C-3' làm giảm mật độ điện tích cục bộ, dẫn đến độ phân cực thấp nhất và tốc độ rửa giải nhanh nhất (Rf cao nhất 0,36).

Các dữ liệu thực nghiệm này có thể được biểu diễn trực quan thông qua biểu đồ cột so sánh hiệu suất thu hồi hoạt chất giữa các phương pháp chiết (Soxhlet, vi sóng, siêu âm), kết hợp với bảng tổng hợp độ dịch chuyển hóa học trên phổ 1H-NMR và 13C-NMR để phục vụ việc đối chiếu chuẩn. So với các nghiên cứu công bố của Viện Tiêu chuẩn và Công nghệ Quốc gia Hoa Kỳ (NIST) và phương pháp kiểm nghiệm của Dược điển Châu Âu, quy trình phân lập này mang lại độ tinh khiết tương đương các chất chuẩn thương mại, chứng minh tiềm năng tự chủ nguồn chuẩn kiểm nghiệm flavonoid tại Việt Nam.

Đề xuất và khuyến nghị

Nhằm hoàn thiện quy trình công nghệ và đưa kết quả nghiên cứu vào ứng dụng thực tiễn trong ngành công nghiệp dược, bốn giải pháp trọng tâm được đề xuất:

Thứ nhất, chuẩn hóa và nâng quy mô quy trình chiết xuất kết hợp thủy phân hỗ trợ vi sóng lên mức pilot bán công nghiệp. Mục tiêu hướng tới là rút ngắn 90% thời gian xử lý mẫu (duy trì phản ứng dưới 3 phút), giảm 35% lượng dung môi hữu cơ và nâng hiệu suất thu hồi flavonoid tổng số lên trên 15%. Thời gian thực hiện dự kiến trong 6 đến 9 tháng bởi các nhóm nghiên cứu tại các trường đại học khối kỹ thuật và viện nghiên cứu hóa dược.

Thứ hai, thiết lập ngân hàng chất chuẩn đối chiếu phân tích đạt độ tinh khiết hóa học trên 98,5% cho ba hoạt chất Quercetin, Kaempferol và Isorhamnetin. Động thái này nhằm cung cấp chất chuẩn giá thành hợp lý cho các trung tâm kiểm nghiệm trong nước. Thời gian hoàn thiện trong vòng 12 tháng dưới sự chủ trì của Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương và các viện đầu ngành.

Thứ ba, áp dụng quy trình kiểm tra sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép đầu dò dãy diod quang và khối phổ (HPLC-DAD/MS) để đánh giá phổ vân tay dược liệu bạch quả. Giải pháp này giúp các cơ quan quản lý phát hiện chính xác 100% các sản phẩm giả mạo hoặc có pha trộn flavonoid ngoại lai từ nụ hoa hòe hay các phụ phẩm nông nghiệp. Thời gian triển khai từ 3 đến 6 tháng bởi các đơn vị kiểm nghiệm dược phẩm và thực phẩm chức năng.

Thứ tư, đẩy mạnh nghiên cứu kết hợp công nghệ màng siêu lọc với kích thước lỗ lọc phân tử 10 kDa nhằm làm giàu hàm lượng flavonoid trong cao thành phẩm từ mức 24% lên trên 55%. Thời gian thực hiện trong 18 tháng thông qua sự hợp tác giữa các nhà khoa học hóa học và các doanh nghiệp sản xuất dược phẩm đạt chuẩn GMP-WHO.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Công trình nghiên cứu cung cấp khối lượng dữ liệu thực nghiệm phong phú và phương pháp luận rõ ràng, mang lại giá trị thiết thực cho bốn nhóm đối tượng chính:

Thứ nhất, các chuyên viên nghiên cứu và phát triển sản phẩm (R&D) tại các công ty dược phẩm và thực phẩm bảo vệ sức khỏe. Luận văn cung cấp quy trình công nghệ chi tiết từ khâu xử lý nguyên liệu, chiết xuất, thủy phân đến tinh chế các hợp chất tự nhiên, giúp các kỹ sư tối ưu hóa dây chuyền sản xuất cao lá bạch quả đạt hàm lượng hoạt chất cao và ổn định.

Thứ hai, các kiểm nghiệm viên tại các trung tâm kiểm nghiệm thuốc, mỹ phẩm và viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm. Tài liệu cung cấp trọn bộ thông số sắc ký TLC, quy trình chuẩn bị mẫu và dữ liệu phổ định danh 1H/13C-NMR, hỗ trợ trực tiếp cho việc xây dựng tiêu chuẩn cơ sở, xác minh tính xác thực của nguồn nguyên liệu và ngăn chặn gian lận thương mại.

Thứ ba, các giảng viên, nghiên cứu sinh, học viên cao học và sinh viên chuyên ngành Kỹ thuật Hóa học, Hóa dược và Dược học. Đây là tài liệu tham khảo giá trị về kỹ thuật tách chiết hợp chất thiên nhiên, so sánh các công nghệ chiết xanh hiện đại (vi sóng, siêu âm) và phương pháp luận biện giải phổ cấu trúc hóa học.

Thứ tư, các nhà quản lý chất lượng và hoạch định chính sách y tế. Nội dung nghiên cứu là cơ sở khoa học quan trọng để hoàn thiện các chuyên luận trong Dược điển Quốc gia về kiểm soát chất lượng các chế phẩm từ dược liệu Ginkgo biloba lưu hành trên thị trường.

Câu hỏi thường gặp

Tại sao cần thực hiện phản ứng thủy phân cao lá bạch quả trước khi tiến hành phân lập các flavonoid aglycone? Trong lá bạch quả tự nhiên, các flavonoid tồn tại chủ yếu ở dạng liên kết glycoside phức tạp với hơn 20 loại phân tử đường khác nhau, gây khó khăn cho việc phân tách từng chất riêng lẻ. Quá trình thủy phân bằng dung dịch acid hydrochloric 36% ở nhiệt độ 80°C giúp cắt đứt các cầu nối glycosidic, chuyển hóa toàn bộ về 3 dạng aglycone tự do chính là quercetin, kaempferol và isorhamnetin, từ đó làm tăng độ chọn lọc và độ sắc nét của các pic sắc ký.

Hệ dung môi nào mang lại hiệu quả phân tách tối ưu nhất trên sắc ký bản mỏng cho ba hợp chất này? Qua quá trình sàng lọc 8 hệ dung môi khác nhau, hệ bốn thành phần gồm n-hexane - ethyl acetate - chloroform - acid formic theo tỷ lệ thể tích 70:30:5:1 cho khả năng phân tách tốt nhất. Hệ dung môi này tạo ra 3 vết sắc ký tách rời rõ rệt trên bản mỏng silica gel với hệ số lưu giữ Rf lần lượt là 0,145 đối với quercetin, 0,24 đối với kaempferol và 0,36 đối với isorhamnetin.

Kỹ thuật thủy phân có sự hỗ trợ của vi sóng đem lại lợi thế gì so với phương pháp đun hoàn lưu thông thường? Công nghệ vi sóng cung cấp khả năng gia nhiệt thể tích đồng đều và trực tiếp lên các liên kết phân tử, đẩy nhanh tốc độ phản ứng thủy phân. Thời gian phản ứng được cắt giảm từ 75 phút ở phương pháp truyền thống xuống chỉ còn khoảng 2 phút, giúp giảm tiêu thụ điện năng, hạn chế hiện tượng phân hủy nhiệt của các flavonoid quý và nâng cao hiệu suất làm việc trong phòng thí nghiệm.

Cấu trúc phân tử của ba hợp chất phân lập được chứng minh dựa trên những bằng chứng khoa học nào? Cấu trúc hóa học được khẳng định thông qua tổ hợp các dữ liệu phổ nghiệm: phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR và 13C-NMR xác định chính xác số lượng proton và carbon (tiêu biểu như pic carbon methoxy tại 56,29 ppm của isorhamnetin), phổ khối lượng phân giải cao HR-MS xác nhận khối lượng phân tử chính xác (286,23 g/mol cho kaempferol và 302,24 g/mol cho quercetin), kết hợp phép đo điểm nóng chảy bằng nhiệt vi sai DSC.

Nghiên cứu này đóng góp giải pháp gì cho việc giải quyết tình trạng làm giả cao bạch quả trên thị trường? Doanh số tiêu thụ các sản phẩm Ginkgo biloba toàn cầu lên tới 1,26 tỷ USD dẫn đến tình trạng nhiều cơ sở gian lận bằng cách pha dịch chiết hoa hòe giàu rutin để làm giả hàm lượng flavonoid tổng. Việc phân lập và xác lập thành công bộ ba chất chuẩn quercetin, kaempferol và isorhamnetin tinh khiết giúp các đơn vị kiểm nghiệm thiết lập tỷ lệ diện tích pic đặc trưng, phân biệt chính xác dược liệu chuẩn với các chất làm giả.

Kết luận

• Đã xây dựng thành công quy trình chiết tách và phân lập 3 hợp chất flavonoid aglycone chủ chốt gồm isorhamnetin, kaempferol và quercetin từ 432 g bột lá bạch quả khô với hiệu suất chiết thô đạt 14,07%.
• Xác định hệ dung môi sắc ký tối ưu n-hexane - ethyl acetate - chloroform - acid formic (70:30:5:1 v/v/v/v), mang lại độ phân giải vượt trội trên cả sắc ký bản mỏng và sắc ký cột cổ điển.
• Xác lập toàn diện dữ liệu phổ nghiệm 1H-NMR, 13C-NMR, HR-MS và nhiệt độ nóng chảy DSC cho từng hợp chất phân lập, khẳng định độ tinh khiết cao đáp ứng tiêu chuẩn làm chất chuẩn đối chiếu phân tích.
• Chứng minh tính ưu việt của công nghệ thủy phân hỗ trợ vi sóng giúp rút ngắn thời gian xử lý từ 75 phút xuống 2 phút, mở ra hướng ứng dụng công nghệ chiết xuất xanh và hiệu quả cao.
• Đóng góp luận cứ khoa học thực tiễn vững chắc phục vụ công tác kiểm nghiệm, chuẩn hóa chất lượng và phòng chống gian lận thương mại cho các chế phẩm Ginkgo biloba tại Việt Nam.

Kế hoạch tiếp theo trong 6 đến 12 tháng tới sẽ tập trung tối ưu hóa quy trình phân lập trên hệ thống sắc ký điều chế tự động và mở rộng kiểm nghiệm trên các lô chế phẩm thương mại diện rộng. Các đơn vị sản xuất và viện nghiên cứu quan tâm có thể khai thác chi tiết quy trình công nghệ này để ứng dụng trực tiếp vào hoạt động kiểm soát chất lượng và phát triển sản phẩm dược liệu chất lượng cao.

Trích đoạn nội dung tài liệu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP. HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA -------------------- LÊ ĐOÀN QUỲNH NHƯ PHÂN LẬP ISORHAMNETIN, KAEMPFEROL VÀ QUERCETIN TỪ LÁ BẠCH QUẢ (GINKGO BILOBA) Chuyên ngành: Kỹ thuật Hóa học Mã số: 60520301 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP. HỒ CHÍ MINH, 2017 2/ 100 CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA –ĐHQG -HCM Cán bộ hướng dẫn khoa học: Tiến sĩ Huỳnh Khánh Duy và Tiến sĩ Tống Thanh Danh Cán bộ chấm nhận xét 1 : PGS.TS NGUYỄN THỊ LAN PHI Cán bộ chấm nhận xét 2 : TS TRẦN NGỌC QUYỂN Luận văn thạc sĩ được bảo vệ tại Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp. HCM ngày 12 tháng 01 năm 2017 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: 1.

Chủ tịch hội đồng: PGS.TS PHẠM THÀNH QUÂN 2. Thư ký hội đồng: TS. PHAN THỊ HOÀNG ANH 3. Ủy viên Phản biện 1: PGS.TS NGUYỄN THỊ LAN PHI 4.

Ủy viên Phản biện 2: TS TRẦN NGỌC QUYỂN 5. Ủy viện Hội đồng: TS. LÊ XUÂN TIẾN Xác nhận của Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV và Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau khi luận văn đã được sửa chữa. CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA 3/ 100 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập - Tự do - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Lê Đoàn Quỳnh Như MSHV: 1570176 Ngày, tháng, năm sinh: 21/03/1992 Nơi sinh: TP.HCM Chuyên ngành: Kỹ thuật Hóa học Mã số: 60 52 03 01 I.

TÊN ĐỀ TÀI: PHÂN LẬP ISORHAMNETIN, KAEMPFEROL VÀ QUERCETIN TỪ LÁ BẠCH QUẢ (GINKGO BILOBA) II. NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Khảo sát hệ dung môi định tính cao bạch quả bằng phương pháp TLC - Phân lập và tinh chế isorhamnetin, kaempferol và quercetin có trong cao lá bạch quả - Khảo sát điều kiện thủy phân cao bạch quả (cao FL) trên các phương pháp chiết Soxhlet one- pot, phương pháp có sử dụng hỗ trợ vi sóng, siêu âm; từ đó tìm điều kiện tốt hơn cả đối với từng phương pháp III. NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: 04/07/2016 IV. NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 04/12/2106 V.

CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: Tiến sĩ Huỳnh Khánh Duy- Tiến sĩ Tống Thanh Danh Tp. năm 2017 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC 4/ 100 LỜI CẢM ƠN  Trong quá trình thực hiện luận văn này, tôi đã nhận được sự giúp đỡ vô cùng quý báu của quý thầy cô, các anh chị, các bạn trường Đại học Bách khoa Tp.HCM, gia đình và bạn bè về sự động viên, giúp đỡ trong suốt quá trình thực hiện luận văn. Tôi xin tỏ lòng biết ơn chân thành đến: - TS. Huỳnh Khánh Duy, TS.

Tống Thanh Danh đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình nghiên cứu và thực hiện đề tài. - Quý thầy cô trường Đại học Bách khoa Tp.HCM đã tận tình giảng dạy và giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và thực hiện đề tài. - Chị Nguyễn Lê Mỹ Tiên và bạn Trần Đỗ Anh Khoa và bạn Lâm Quốc Hoàng đã tạo mọi điều kiện và hỗ trợ cho tôi trong suốt khóa học và thời gian thực hiện đề tài. - Gia đình và bạn bè đã luôn động viên và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu.

Xin chân thành cảm ơn. 6/ 100 TÓM TẮT LUẬN VĂN Đề tài “Phân lập isorhamnetin, kaempferol và quercetin từ lá bạch quả (Ginkgo biloba)” đã phân lập được ba flavonoid chính trong cao bạch quả là isorhamnetin, kaempferol và quercetin thông qua việc thực hiện khảo sát trên một số phương pháp tìm ra điều kiện tốt trong việc phân lập, tạo tiền đề cho việc tiến hành xây dựng quy trình đánh giá chất lượng cao bạch quả nhằm phục vụ cho công tác kiểm tra chất lượng các chế phẩm có thành phần cao lá bạch quả trên thị trường. 5/ 100 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được công bố trong bất kì công trình nào khác.

7/ 100 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT EtOAc Ethyl acetate CTPT Công thức phân tử CTCT Công thức cấu tạo KLPT Khối lượng phân tử DCM Dicloromethan DMSO Dimethylsulfoxid CAN Acetonitrile DNA Acid deoxyribonucleoic Et Ethyl h Giờ TLC Sắc ký bản mỏng HPLC Sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography) MS Khối phổ Me Methyl [M+H] Phân tử bị proton hóa (Protonated molecules) Ph Phenyl Pr Propyl Phổ 1H NMR Phổ cộng hưởng từ proton (1H) s Đỉnh đơn d Đỉnh đôi dd Đỉnh đôi của đỉnh đôi brs Đỉnh đơn rộng TES Triethylsilyl Cao FL Cao flavanoid EGb Cao bạch quả 8/ 100 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN. 4 LỜI CAM ĐOAN. 5 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT. Tổng quan tài liệu .1 Tính cấp thiết của đề tài.2 Yêu cầu thực tiễn .3 Các cách tiếp cận đã công bố để giải quyết vấn đề .4 Định hướng nghiên cứu .1 Đối tượng nghiên cứu .2 Nguyên liệu và thiết bị .5 Phương pháp thực hiện .6 Phương pháp kiểm định sản phẩm.

KẾT QUẢ - BÀN LUẬN .1 Định danh dược liệu lá bạch quả .2 Khảo sát khả năng phân lập các flavonoid trong cao lá bạch quả qua phương thức chiết- thủy phân một bước .1 Thủy phân không có sự hỗ trợ của vi sóng .2 Thủy phân có sự hỗ trợ của vi sóng .3 Khảo sát khả năng phân lập các flavonoid trong cao lá bạch quả qua các phương thức chiết- thủy phân một bước .1 Phương pháp chiết Soxhlet one-pot .2 Phương pháp chiết với sự hỗ trợ của siêu âm. KẾT LUẬN- KIẾN NGHỊ. TÀI LIỆU THAM KHẢO. 70 9/ 100 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình I-1.

Cây bạch quả (Gingko Bibola). Lá cây bạch quả (Gingko Bibola). Quả bạch quả (Gingko Bibola). Cấu trúc phức vòng càng aluminium chloride của quercetin.

Quy trình phân tích theo Hasler .18 Hình II-1. Vi phẫu của lá bạch quả .42 Hình II-2. TLC hệ dung môi đã khảo sát .44 10/ 100 DANH MỤC BẢNG SỬ DỤNG Bảng I-1. Cấu trúc hóa học của Ginkgo Bibola flavonoids.

Quy trình phân lập và phân tích các flavonoid trong lá bạch quả. Hàm lượng các aglycone (mg/g) thu được. Kết quả khảo sát giữa kết hợp với vi sóng (MAH) và đun hoàn lưu thông thường (CRH). Kết quả nghiên cứu của nhóm tác giả Jing Zhang.

Chương trình pha động rửa giải xác định phổ vân tay dịch chiết cao bạch quả trong nghiên cứu của tác giả A. Chương trình pha động rửa giải xác định phổ vân tay dịch chiết cao bạch quả trong nghiên cứu của tác giả Amitabh. Chương trình pha động rửa giải xác định phổ vân tay dịch chiết cao bạch quả trong nghiên cứu của tác giả Jiun-Lung Luo. Nghiên cứu khả năng hấp phụ của màng lọc kỵ nước và màng trao đổi ion 27 Bảng I-10.

Đối chiếu điều kiện chạy HPLC của hai phương pháp của dược điển Anh (EP) và NSF – INA. Hàm lượng flavonoid tổng chiết ra được qua hai phương pháp. Hàm lượng flavone aglycone tổng của 13 loại lá bạch quả ở 13 môi trường sống khác nhau theo Dược điển Trung Quốc. Hóa chất dùng trong chiết tách và thủy phân hóa học.

Dung môi dùng trong tinh chế và sắc ký .33 Bảng II-1. Kết quả khảo sát hệ dung môi phân tích cao FL.43 Bảng II-2. Dữ liệu phổ 1H NMR của chất K .45 Bảng II-3. Dữ liệu phổ 13C NMR của chất K .45 Bảng II-4.

Dữ liệu phổ 1H NMR của chất Q .47 Bảng II-5. Dữ liệu phổ 13C NMR của chất Q .48 Bảng II-6. Dữ liệu phổ 1H NMR của chất I .49 Bảng II-7. Dữ liệu phổ 13C NMR của chất I .50 Bảng II-8.

Điều kiện phản ứng của phương pháp chiết thủy phân có sự hỗ trợ của vi sóng .52 Bảng II-9. Điều kiện phản ứng của phương pháp chiết Soxhlet one-pot .56 Bảng II-10. Điều kiện phản ứng của phương pháp chiết với sự hỗ trợ của siêu âm .59 11/ 100 DANH MỤC BIỂU ĐỒ SỬ DỤNG Biểu đồ II-1. Hàm lượng chất I trong cao FL của phương pháp thủy phân có sự hỗ trợ của vi sóng.

Hàm lượng chất Q trong cao FL của phương pháp thủy phân có sự hỗ trợ của vi sóng. Hàm lượng chất K trong cao FL của phương pháp thủy phân có sự hỗ trợ của vi sóng. Hàm lượng trong cao FL của chất Q của phương pháp chiết Soxhlet one-pot. Hàm lượng trong cao FL của chất K của phương pháp chiết Soxhlet one-pot.

Hàm lượng trong cao FL của chất I của phương pháp chiết với sự hỗ trợ của siêu âm. Hàm lượng trong cao FL của chất Q của phương pháp chiết với sự hỗ trợ của siêu âm. Hàm lượng trong cao FL của chất K của phương pháp chiết với sự hỗ trợ của siêu âm. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tính cấp thiết của đề tài - Bạch quả (Ginkgo biloba) là loài cây thân gỗ duy nhất còn sinh tồn trong chi Ginkgo, họ Ginkgoaceae.

Đây được xem là loại dược thảo được kê toa nhiều nhất ở Đức và là một trong những liệu pháp điều trị thông dụng nhất ở Mỹ[1]. Lượng thực phẩm chức năng chứa bạch quả được sử dụng tăng đáng kể ở Mỹ trong những năm gần đây. Theo báo cáo thường niên của Nutrition Business Journal năm 2012, cao chiết từ lá bạch quả đứng thứ 37 trong danh sách thực phẩm chức năng bán chạy nhất tại Mỹ, và đứng thứ 13 về doanh số bán khi cán mốc 90 triệu USD. Ước tính cho thấy khoảng 3 triệu người trên đất Mỹ sử dụng sản phẩm chứa bạch quả vào năm 2007, và chỉ 5 năm sau đó con số này gia tăng đều đến 7,7 triệu người sử dụng và doanh số đạt mức 151 triệu USD [2].

Dữ liệu của IMS Health MIDAS [3] cho thấy tổng doanh số bán trên toàn thế giới năm 2012 của sản phẩm Ginkgo bibola đặt 1,26 tỷ USD. Tuy vậy, vẫn có những báo cáo thường xuyên về việc làm giả sản phẩm Ginkgo biloba hay sản phẩm kém chất lượng [4]. Cây bạch quả (Gingko Bibola) 13/ 100 Hình I-2. Lá cây bạch quả (Gingko Bibola) - Lá và quả bạch quả được sử dụng nhiều trong y học.

Những nghiên cứu ứng dụng bạch quả đã được công bố như điều trị hen suyễn, viêm phế quản, bệnh tim mạch, tăng cường lưu lượng máu ngoại vi, điều trị suy giảm chức năng não [5] [6]. Ngoài ra, bạch quả còn được sử dụng trong điều trị dị ứng, chứng ù tai, loạn trí, và các vấn đề về trí nhớ [7], [8], [9]. Tổ chức y tế thế giới và ủy ban E của Đức đã thêm vào ứng dụng của bạch quả đối với bệnh tắc nghẽn động mạch ngoại biên.