Nghiên Cứu Đặc Tính Sinh Học và Gây Bệnh của Virus Gây Dịch Tiêu Chảy Trên Lợn (PEDV)

Nghiên cứu đặc tính sinh học và gây bệnh của virus PEDV từ lợn Yorkshire tại Hà Nội, cung cấp thông tin quan trọng cho ngành chăn nuôi.

• Tác giả: Dương Thị Hồng
• Người hướng dẫn: PGS. Bùi Trần Anh Đào
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên Cứu Đặc Tính Sinh Học và Gây Bệnh của Virus PEDV trên Lợn Yorkshire
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2016
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• MỤC LỤC
• DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 1. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 2. MỤC TIÊU ĐỀ TÀI
• 3. PHẠM VI NGHIÊN CỨU
• 4. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI
• 5. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 5.1. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ DỊCH TIÊU CHẢY Ở LỢN YORKSHIRE (PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA VIRUS – PEDV) TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM
• 5.1.1. Một số nghiên cứu bệnh do Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDV) trên thế giới
• 6. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 6.1. Đối tượng nghiên cứu
• 6.2. Nội dung nghiên cứu
• 6.3. Địa điểm, thời gian nghiên cứu
• 6.4. Nguyên liệu, hóa chất, máy móc
• 6.5. Phương pháp nghiên cứu
• 6.5.1. Phương pháp chẩn đoán lâm sàng
• 6.5.2. Phương pháp mổ khám
• 6.5.3. Phương pháp lấy mẫu và bảo quản mẫu làm tiêu bản
• 6.5.4. Phương pháp tiến hành phản ứng RT-PCR
• 6.5.5. Phương pháp xử lý mẫu cho phân lập virus
• 6.5.6. Phương pháp nuôi cấy tế bào
• 6.5.7. Phương pháp xác định hiệu giá virus TCID50
• 6.5.8. Phương pháp làm và nhuộm tiêu bản vi thể
• 6.5.9. Phương pháp thống kê, xử lý số liệu
• 7. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 7.1. Đặc tính sinh học
• 7.1.1. Xác định các mẫu lợn Yorkshire dương tính với virus PEDV
• 7.1.2. Kết quả phân lập và giám định virus PEDV trên môi trường tế bào
• 7.1.3. Xác định hiệu giá của chủng virus phân lập được
• 7.1.4. Khả năng gây bệnh tích tế bào của virus PEDV
• 7.2. Đặc điểm gây bệnh
• 7.2.1. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc PEDV
• 7.2.2. Bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn Yorkshire mắc PEDV
• 7.2.3. Bệnh tích vi thể chủ yếu của lợn Yorkshire mắc PEDV
• 8. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nghiên Cứu Virus PEDV Gây Bệnh Tiêu Chảy Lợn

Bệnh tiêu chảy cấp ở lợn do Virus PEDV gây ra là một thách thức lớn cho ngành chăn nuôi lợn trên toàn thế giới, bao gồm cả Việt Nam. Bệnh gây thiệt hại kinh tế đáng kể do tỷ lệ mắc bệnh và tử vong cao, đặc biệt ở lợn con. Nghiên cứu về đặc tính sinh học virus và cơ chế gây bệnh của PEDV là rất quan trọng để phát triển các biện pháp phòng ngừa và kiểm soát hiệu quả. Các nghiên cứu trước đây đã tập trung vào việc phân lập, xác định và mô tả đặc điểm di truyền của virus PEDV. Tuy nhiên, vẫn còn nhiều điều chưa biết về sự tương tác giữa virus và tế bào vật chủ, cũng như các yếu tố ảnh hưởng đến độc lực của virus. Nghiên cứu này nhằm mục đích làm sáng tỏ thêm về đặc tính sinh học và khả năng gây bệnh của virus PEDV phân lập từ lợn Yorkshire tại vùng phụ cận Hà Nội.

1.1. Lịch Sử Phát Hiện và Lây Lan của Virus PEDV

Bệnh tiêu chảy cấp do PEDV lần đầu tiên được ghi nhận ở châu Âu vào những năm 1970. Sau đó, bệnh lan rộng sang các nước châu Á như Trung Quốc, Hàn Quốc và Nhật Bản vào những năm 1980. Tại Việt Nam, PEDV được phát hiện lần đầu tiên vào năm 2008. Sự lây lan nhanh chóng của virus này đã gây ra những thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi lợn. Theo Pensaert và cộng sự (1982), PEDV được phân loại vào nhóm 1 của giống Coronavirus, cùng với TGEV.

1.2. Tầm Quan Trọng của Nghiên Cứu PEDV Trên Lợn Yorkshire

Nghiên cứu về PEDV trên lợn Yorkshire có ý nghĩa quan trọng vì đây là một giống lợn phổ biến tại Việt Nam. Việc hiểu rõ hơn về cách virus này ảnh hưởng đến lợn Yorkshire sẽ giúp phát triển các chiến lược phòng ngừa và điều trị hiệu quả hơn. Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và mô tả đặc điểm của virus PEDV từ lợn Yorkshire tại vùng phụ cận Hà Nội.

II. Thách Thức Trong Nghiên Cứu và Kiểm Soát Bệnh PEDV ở Lợn

Nghiên cứu và kiểm soát bệnh tiêu chảy cấp do PEDV gây ra đối mặt với nhiều thách thức. Một trong những thách thức lớn nhất là sự biến đổi di truyền của virus, dẫn đến sự xuất hiện của các biến chủng mới có khả năng trốn tránh hệ miễn dịch. Việc phát triển vaccine hiệu quả chống lại tất cả các biến chủng PEDV là một nhiệm vụ khó khăn. Bên cạnh đó, việc nuôi cấy virus PEDV trong phòng thí nghiệm cũng gặp nhiều khó khăn, gây trở ngại cho việc nghiên cứu đặc tính sinh học và phát triển các phương pháp chẩn đoán. Theo Hofmann and Wyler (1988, 1989), Lee and Yeo (2003) đã chỉ ra việc sử dụng dòng tế bào Vero là thích hợp cho việc phân lập virus PEDV.

2.1. Khó Khăn Trong Nuôi Cấy và Phân Lập Virus PEDV

Việc nuôi cấy và phân lập virus PEDV trong phòng thí nghiệm là một thách thức lớn. Nhiều loại tế bào đã được thử nghiệm, nhưng không phải tất cả đều cho kết quả thành công. Tế bào Vero (thận khỉ xanh châu Phi) đã được chứng minh là phù hợp cho việc phân lập virus PEDV, nhưng vẫn cần có các điều kiện nuôi cấy đặc biệt.

2.2. Biến Đổi Di Truyền và Sự Xuất Hiện Biến Chủng PEDV

Sự biến đổi di truyền của virus PEDV là một thách thức lớn trong việc phát triển vaccine và các phương pháp kiểm soát bệnh. Các biến chủng mới có thể có khả năng trốn tránh hệ miễn dịch, làm giảm hiệu quả của vaccine hiện có. Việc theo dõi và phân tích sự biến đổi di truyền của virus là rất quan trọng để phát triển các biện pháp phòng ngừa hiệu quả.

2.3. Ảnh Hưởng của PEDV Đến Năng Suất Chăn Nuôi Lợn

Bệnh PEDV gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến năng suất chăn nuôi lợn. Tỷ lệ tử vong cao ở lợn con, chậm lớn, giảm năng suất sinh sản ở lợn nái là những hậu quả thường thấy. Thiệt hại kinh tế do PEDV gây ra là rất lớn, ảnh hưởng đến thu nhập của người chăn nuôi.

III. Phương Pháp Nghiên Cứu Đặc Tính Sinh Học Virus PEDV Phân Lập

Nghiên cứu này sử dụng các phương pháp phân lập virus PEDV từ mẫu bệnh phẩm của lợn Yorkshire mắc bệnh tiêu chảy. Các mẫu virus phân lập được sẽ được nuôi cấy trên tế bào Vero để đánh giá khả năng gây bệnh tích tế bào. Hiệu giá virus sẽ được xác định bằng phương pháp TCID50. Các triệu chứng lâm sàng và bệnh tích đại thể, vi thể trên lợn bệnh sẽ được ghi nhận và mô tả chi tiết. Phản ứng RT-PCR sẽ được sử dụng để xác định sự hiện diện của virus PEDV trong mẫu bệnh phẩm.

3.1. Quy Trình Phân Lập và Nuôi Cấy Virus PEDV Trên Tế Bào Vero

Quy trình phân lập virus PEDV bao gồm các bước xử lý mẫu bệnh phẩm, nuôi cấy trên tế bào Vero và theo dõi sự phát triển của virus. Môi trường nuôi cấy tế bào được bổ sung trypsin để hỗ trợ sự nhân lên của virus. Bệnh tích tế bào (CPE) được quan sát dưới kính hiển vi để đánh giá khả năng gây bệnh của virus.

3.2. Xác Định Hiệu Giá Virus PEDV Bằng Phương Pháp TCID50

Phương pháp TCID50 (50% Tissue Culture Infective Dose) được sử dụng để xác định hiệu giá virus PEDV. Hiệu giá virus là thước đo số lượng virus có khả năng gây nhiễm trên tế bào. Kết quả TCID50 được sử dụng để so sánh độc lực của các chủng virus khác nhau.

3.3. Phân Tích Bệnh Tích Đại Thể và Vi Thể Trên Lợn Mắc PEDV

Bệnh tích đại thể và vi thể trên lợn mắc PEDV được phân tích để hiểu rõ hơn về cơ chế gây bệnh của virus. Các cơ quan như ruột, dạ dày, hạch mạc treo được kiểm tra và mô tả chi tiết. Mẫu bệnh phẩm được cố định, cắt lát và nhuộm để quan sát dưới kính hiển vi.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Đặc Tính Gây Bệnh Của Virus PEDV Phân Lập

Nghiên cứu đã phân lập thành công các chủng virus PEDV từ lợn Yorkshire mắc bệnh tiêu chảy tại vùng phụ cận Hà Nội. Các chủng virus phân lập được có khả năng gây bệnh tích tế bào trên tế bào Vero. Hiệu giá virus của các chủng phân lập được dao động trong khoảng 10^4 TCID50/ml. Các triệu chứng lâm sàng và bệnh tích đại thể, vi thể trên lợn bệnh phù hợp với các báo cáo trước đây về bệnh PEDV.

4.1. Phân Lập Thành Công Các Chủng Virus PEDV Từ Lợn Yorkshire

Nghiên cứu đã thành công trong việc phân lập các chủng virus PEDV từ lợn Yorkshire mắc bệnh tiêu chảy. Việc phân lập thành công virus là tiền đề quan trọng cho các nghiên cứu tiếp theo về đặc tính sinh học và phát triển vaccine.

4.2. Đánh Giá Khả Năng Gây Bệnh Tích Tế Bào Của Virus PEDV

Các chủng virus PEDV phân lập được có khả năng gây bệnh tích tế bào trên tế bào Vero. Bệnh tích tế bào đặc trưng bao gồm sự hình thành các thể hợp bào, tế bào bị co rút và bong tróc khỏi bề mặt nuôi cấy. Mức độ gây bệnh tích tế bào khác nhau giữa các chủng virus.

4.3. Mô Tả Triệu Chứng Lâm Sàng và Bệnh Tích Trên Lợn Mắc PEDV

Các triệu chứng lâm sàng trên lợn mắc PEDV bao gồm tiêu chảy, nôn mửa, bỏ ăn và mất nước. Bệnh tích đại thể thường thấy là ruột non bị viêm, chứa đầy dịch lỏng. Bệnh tích vi thể bao gồm sự phá hủy tế bào biểu mô ruột và thâm nhiễm tế bào viêm.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn và Hướng Nghiên Cứu Phát Triển Vaccine PEDV

Kết quả nghiên cứu này có thể được sử dụng để phát triển các phương pháp chẩn đoán nhanh và chính xác bệnh PEDV. Các chủng virus phân lập được có thể được sử dụng để sản xuất vaccine phòng bệnh. Nghiên cứu sâu hơn về cơ chế gây bệnh của virus PEDV sẽ giúp phát triển các biện pháp điều trị hiệu quả hơn. Việc theo dõi sự biến đổi di truyền của virus là rất quan trọng để đảm bảo hiệu quả của vaccine.

5.1. Phát Triển Phương Pháp Chẩn Đoán Nhanh Bệnh PEDV

Kết quả nghiên cứu có thể được sử dụng để phát triển các phương pháp chẩn đoán nhanh và chính xác bệnh PEDV. Các phương pháp chẩn đoán nhanh sẽ giúp phát hiện sớm bệnh và ngăn chặn sự lây lan của virus.

5.2. Sản Xuất Vaccine Phòng Bệnh PEDV Từ Chủng Virus Phân Lập

Các chủng virus PEDV phân lập được có thể được sử dụng để sản xuất vaccine phòng bệnh. Vaccine sẽ giúp bảo vệ lợn khỏi bệnh PEDV và giảm thiểu thiệt hại kinh tế cho người chăn nuôi.

5.3. Nghiên Cứu Cơ Chế Gây Bệnh và Phát Triển Biện Pháp Điều Trị

Nghiên cứu sâu hơn về cơ chế gây bệnh của virus PEDV sẽ giúp phát triển các biện pháp điều trị hiệu quả hơn. Các biện pháp điều trị có thể bao gồm sử dụng thuốc kháng virus, tăng cường hệ miễn dịch và bù nước điện giải.

VI. Kết Luận và Hướng Nghiên Cứu Tiếp Theo Về Virus PEDV

Nghiên cứu này đã góp phần làm sáng tỏ thêm về đặc tính sinh học và khả năng gây bệnh của virus PEDV phân lập từ lợn Yorkshire tại vùng phụ cận Hà Nội. Các kết quả nghiên cứu này có ý nghĩa quan trọng trong việc phát triển các biện pháp phòng ngừa và kiểm soát bệnh PEDV. Hướng nghiên cứu tiếp theo nên tập trung vào việc nghiên cứu sâu hơn về cơ chế gây bệnh của virus, phát triển vaccine hiệu quả và theo dõi sự biến đổi di truyền của virus.

6.1. Tóm Tắt Kết Quả Nghiên Cứu Về Đặc Tính Sinh Học PEDV

Nghiên cứu đã phân lập thành công các chủng virus PEDV, đánh giá khả năng gây bệnh tích tế bào và mô tả các triệu chứng lâm sàng, bệnh tích trên lợn bệnh. Các kết quả này cung cấp thông tin quan trọng về đặc tính sinh học của virus PEDV.

6.2. Đề Xuất Hướng Nghiên Cứu Tiếp Theo Về Bệnh PEDV

Hướng nghiên cứu tiếp theo nên tập trung vào việc nghiên cứu sâu hơn về cơ chế gây bệnh của virus, phát triển vaccine hiệu quả và theo dõi sự biến đổi di truyền của virus. Các nghiên cứu này sẽ giúp cải thiện hiệu quả phòng ngừa và kiểm soát bệnh PEDV.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM DƢƠNG THỊ HỒNG NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ GÂY BỆNH CỦA VIRUS GÂY DỊCH TIÊU CHẢY TRÊN LỢN ( PEDV - PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA VIRUS) PHÂN LẬP ĐƯỢC TỪ CÁC ĐÀN LỢN YORKSHIRE NUÔI TẠI VÙNG PHỤ CẬN HÀ NỘI Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Bùi Trần Anh Đào NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 c LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chƣa từng đƣợc ai công bố trong bất kì công trình nào khác. Tôi xin cam đoan các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã đƣợc chỉ rõ nguồn gốc.

Hà Nội, ngày 25 tháng 10 năm 2016 Tác giả luận văn Dƣơng Thị Hồng i c LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận đƣợc sự hƣớng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi đƣợc bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Bùi Trần Anh Đào đã tận tình hƣớng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Bệnh lý Thú y, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Xin chân thành cảm ơn gia đình, ngƣời thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn.

Hà Nội, ngày 25 tháng 10 năm 2016 Tác giả luận văn Dƣơng Thị Hồng ii c MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng.

vii Danh mục hình. viii Trích yếu luận văn. ix Thesis Abstract. Tính cấp thiết của đề tài.

Mục tiêu đề tài. Phạm vi nghiên cứu. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài. Tổng quan tài liệu.

Tình hình nghiên cứu về dịch tiêu chảy ở lợn Yorkshire (Porcine Epidemic Diarrhea Virus - PEDV) trên thế giới và việt nam. Một số nghiên cứu bệnh do Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDV) trên thế giới. Tình hình nghiên cứu bệnh do Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDV) ở Việt Nam. Hiểu biết về căn bệnh.

Hình thái cấu trúc. Tính chất nuôi cấy. Sức đề kháng. Hiểu biết về bệnh do Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDV).

Loài mắc bệnh. Lứa tuổi mắc bệnh. Đƣờng xâm nhập. Cơ chế sinh bệnh.

Triệu chứng lâm sàng. Phòng và kiểm soát bệnh. Phƣơng pháp nuôi cấy virus trên tế bào tổ chức. Định lƣợng virus.

Vật liệu và phƣơng pháp nghiên cứu. Đối tƣợng nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu. Đặc tính sinh học.

Đặc điểm gây bệnh. Địa điểm, thời gian nghiên cứu. Nguyên liệu, hóa chất, máy móc. Phƣơng pháp nghiên cứu.

Phƣơng pháp chẩn đoán lâm sàng. Phƣơng pháp mổ khám. Phƣơng pháp lấy mẫu và bảo quản mẫu làm tiêu bản. Phƣơng pháp tiến hành phản ứng RT- PCR.

Phƣơng pháp xử lý mẫu cho phân lập virus. Phƣơng pháp nuôi cấy tế bào. Phƣơng pháp phân lập virus trên môi trƣờng tế bào. Phƣơng pháp xác định hiệu giá virus TCID50.

Phƣơng pháp làm và nhuộm tiêu bản vi thể. Phƣơng pháp thống kê, xử lý số liệu. Kết quả và thảo luận. Đặc tính sinh học.

Xác định các mẫu lợn Yorkshire dƣơng tính với virus PEDV. Kết quả phân lập và giám định virus PEDV trên môi trƣờng tế bào. Xác định hiệu giá của chủng virus phân lập đƣợc. Khả năng gây bệnh tích tế bào của virus PEDV.

Đặc điểm gây bệnh chủ yếu của lợn mắc PEDV. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc PEDV. Bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn yorkshine mắc PEDV. Bệnh tích vi thể chủ yếu của lợn Yorkshine mắc PEDV.

Kết luận và kiến nghị. 47 Tài liệu tham khảo. 48 v c DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Tên viết tắt Nghĩa tiếng Việt µl Micro lit CPE Cyto Pathogenic Effect DMEM Dulbecc’s Modified Eagle Medium ELISA Enzym Linked Immunosorbent Assay FBS Fetal bovine serum IFA Indirect Immunofluorescense Assay IPMA Indirect Immunoperoxidase Monolayer Assay MOI Multiplicity Of Infection PEDV Porcine Epidemic Diarrhea Virus TCID50 50% Tissue Culture Infective Dose TGEV Transmissible Gastro Enteritis Virus RNA Ribonucleoic acid vi c DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động gồm 12 bình. Kết quả của phản ứng RT-PCR ở các mẫu bệnh phẩm chẩn đoán bệnh PEDV.

Nguồn gốc của các mẫu lợn Yorkshire theo từng địa phƣơng đƣợc chẩn đoán dƣơng tính với PEDV. Kết quả phân lập virus PEDV trên môi trƣờng tế bào Vero. Kết quả giám định virus PEDV trong các mẫu phân lập đời thứ 4. Kết quả xác định hiệu giá virus của các chủng virus PEDV phân lập đƣợc.

Bệnh tích tế bào khi gây nhiễm các chủng virus PEDV phân lập. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc PEDV. Bảng kết quả biến đổi bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn Yorkshire mắc PEDV. Biến đổi bệnh tích vi thể ở một số cơ quan của lợn con theo mẹ mắc PEDV.

42 vii c DANH MỤC HÌNH Hình 2. Cấu trúc của Coronavirus (Kathryn V. Cơ chế gây bệnh của PEDV. Mô hình nguyên lý của phản ứng RT-PCR.

Gen đƣợc khuếch đại một phần gen S (651bp). Tế bào Vero bình thƣờng. Tế bào Vero khi bắt đầu có bệnh tích. Bệnh tích tế bào đang phát triển.

Tế bào bị phá hủy hoàn toàn. Bệnh tích tế bào ở 24h - PEDV – 03. Bệnh tích tế bào ở 48h – PEDV – 03. Bệnh tích tế bào ở 72h – PEDV – 03.

Bệnh tích tế bào ở 84h - PEDV - 03. Lợn Yorkshire gây sút cân, gầy còm. Lợn Yorkshire nôn mửa. Lợn Yorkshire nằm dồn đống.

Phân dính hậu môn, chân. Phân lỏng màu vàng. Phân màu xi măng. Ruột chứa dịch lỏng màu vàng.

Thành ruột mỏng chứa đầy hơi. Hạch bẹn nông sƣng to. Thận xuất huyết điểm. Phổi xuất huyết.

Gan sƣng, túi mật căng. Biểu mô dạ dày đứt nát (HEx10). Ruột non sung huyết, xuất huyết (HEx10). Phổi sung huyết và thâm nhiễm tế bào viêm (HE x 10).

Lông nhung ruột đứt nát (HE x 10). Thâm nhiễm tế bào viêm ở ruột (HE x 40). Thận sƣng huyết, thâm nhiễm tế bào (HE x 10). 45 viii c TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Dƣơng Thị Hồng Tên Luận văn: “Nghiên cứu đặc tính sinh học và gây bệnh của virus gây dịch tiêu chảy trên lợn (PEDV-Porcine Epidemic Diarrhea Virus) phân lập được từ các đàn lợn Yorkshire nuôi tại vùng phụ cận Hà Nội”.

Ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu đƣợc một số đặc tính sinh học và gây bệnh của các chủng virus PEDV phân lập từ lợn Yorkshire mắc PEDV tại vùng phụ cận Hà Nội phục vụ công tác chẩn đoán bệnh và điều chế vaccine phòng bệnh. Phƣơng pháp nghiên cứu  Nội dung : - Đặc tính sinh học + Xác định các mẫu lợn Yorkshire dƣơng tính với virus PEDV. + Phân lập các chủng PEDV trên môi trƣờng tế bào. + Xác định hiệu giá virus của các chủng PEDV phân lập.

+ Đánh giá khả năng gây bệnh tích tế bào (CPE) của chủng PEDV phân lập trên môi trƣờng nuôi cấy tế bào Vero. - Đặc điểm gây bệnh +Xác định triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn Yorkshire mắc PEDV (Porcine Epidemic Diarrhea Virus). +Xác định bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn Yorkshire mắc PEDV (Porcine Epidemic Diarrhea Virus). +Xác định bệnh tích vi thể chủ yếu của lợn Yorkshire mắc PEDV (Porcine Epidemic Diarrhea Virus ).

 Vật liệu và phƣơng pháp nghiên cứu : - Vật liệu + Nguyên liệu Các lợn Yorkshire mắc bệnh PEDV nuôi ở một số trang trại tại vùng phụ cận Hà Nội. Tế bào Vero đƣợc nuôi cấy trên khay nuôi tế bào hoặc đĩa lồng ix c + Hóa chất Hóa chất sử dụng trong làm tiêu bản vi thể: dung dịch focmon 10%, xylem, thuốc nhuộm HE, Baume Canada, NaHCO3 1%, focmon10%, cồn, Xylen, Ethanol (96-100°), paraffin, PBS, DAB… Hóa chất sử dụng trong nuôi cấy tế bào: môi trƣờng nuôi cấy DMEM (Dulbecc’s Modified Eagle Medium), FBS (Fetal bovine serum), kháng sinh ( penicillin (100 UI/ml), streptomycin (100 pg/ml)), … + Máy móc dụng cụ Máy móc: Kính hiển vi, máy ly tâm, máy votex, máy chạy điện di, máy PCR, máy đục khuôn mẫu, máy cắt tiêu bản (Microtom), máy chụp gel, cân điện, lò vi sóng, máy PCR , box vô trùng, tủ ấm 37°C/5% CO2, tủ sấy, tủ lạnh -20°C, tủ lạnh -80°C, bình nitơ lỏng, máy ly tâm lạnh, kính hiển vi soi nổi, máy chụp ảnh,… Dụng cụ sử dụng : Dao, kéo, panh kẹp, khay, eppendorf, bông cồn, lamen, lam kính, bộ dụng cụ nhuộm, panh, dao, kéo, cƣa, cốc đong hóa chất, đèn cồn, ống nghiệm, lọ đựng formol 10%, bình nuôi cấy tế bào, khay 96 giếng, khay 24 giếng, đĩa lồng, pipet,… - Phƣơng pháp nghiên cứu + Phƣơng pháp chẩn đoán lâm sàng + Phƣơng pháp mổ khám + Phƣơng pháp lấy mẫu và bảo quản tiêu bản + Phƣơng pháp tiến hành phản ứng RT-PCR + Phƣơng pháp xử lý mẫu và phân lập virus + Phƣơng pháp nuôi cấy tế bào + Phƣơng pháp xác định hiệu giá virus TCID50 + Phƣơng pháp làm và nhuộm tiêu bản vi thể + Phƣơng pháp thống kê và xử lý số liệu Kết quả chính và kết luận 1. Đặc tính sinh học - Phân lập thành công 4 chủng virus PEDV từ 15 mẫu lợn đƣợc chẩn đoán dƣơng tính bằng với bệnh. Bệnh tích tế bào đặc trƣng đƣợc với các đám tế bào bị dung giải màng tế bào, nhân tế bào co cụm lại với nhau hình thành các thể hợp bào, quan sát rõ bằng kính hiển vi soi ngƣợc.

- Các chủng virus PEDV phân lập đƣợc có hiệu giá từ 104. x c - Nghiên cứu khả năng gây bệnh tích tế bào bắt đầu xuất hiện sau 24 giờ gây nhiễm là sớm nhất. Tế bào sau gây nhiễm sẽ bị phá hủy hoàn toàn sau 84 giờ gây nhiễm.