Luận án tiến sĩ: Đặc tính sinh học phân tử của virus PRRS HUA 01 và HUA 02 tại miền Bắc Việt Nam

Luận án tiến sĩ nghiên cứu đặc tính sinh học phân tử của chủng virus PRRS HUA 01 và HUA 02 phân lập tại các tỉnh phía Bắc Việt Nam.

• Tác giả: Lê Thị Toan
• Người hướng dẫn: Nguyễn Thị Lan
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Bệnh lý học và chữa bệnh vật nuôi
• Đề tài: Nghiên cứu đặc tính sinh học, sinh học phân tử chủ yếu của chủng virus PRRS HUA 01 và PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam
• Loại tài liệu: luận án
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. PHẦN 1: TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 1.1. Mục tiêu của đề tài
• 1.1.1. Mục tiêu chung
• 1.1.2. Mục tiêu cụ thể
• 1.2. Phạm vi nghiên cứu
• 1.2.1. Đối tượng nghiên cứu
• 1.2.2. Phạm vi nghiên cứu
• 1.3. Những đóng góp mới của đề tài
• 1.4. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài
• 1.4.1. Ý nghĩa khoa học của đề tài
• 1.4.2. Ý nghĩa thực tiễn của đề tài
• 2. PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Tình hình về PRRS trên thế giới và Việt Nam
• 2.1.1. Lịch sử và tình hình dịch PRRS trên thế giới
• 2.1.2. Lịch sử và tình hình dịch PRRS tại Việt Nam
• 2.2. Một số hiểu biết về virus PRRS
• 2.2.1. Cấu trúc virus PRRS
• 2.2.2. Phân loại virus PRRS
• 2.2.3. Sức đề kháng của virus PRRS
• 2.2.4. Một số nghiên cứu về đặc tính sinh học của virus PRRS
• 2.2.5. Một số nghiên cứu về đặc tính sinh học phân tử của virus PRRS
• 2.3. Một số hiểu biết về hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (PRRS)
• 2.3.1. Truyền nhiễm học
• 2.3.2. Triệu chứng và bệnh tích
• 2.3.3. Chẩn đoán và phòng trị bệnh
• 3. PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Địa điểm nghiên cứu
• 3.2. Thời gian nghiên cứu
• 3.3. Vật liệu nghiên cứu
• 3.4. Nội dung nghiên cứu
• 3.4.1. Nghiên cứu đặc tính sinh học chủ yếu của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam
• 3.4.2. Nghiên cứu đặc tính sinh học phân tử của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam
• 3.5. Phương pháp nghiên cứu
• 3.5.1. Phương pháp nuôi cấy tế bào
• 3.5.2. Phương pháp gây nhiễm virus PRRS trên tế bào
• 3.5.3. Phương pháp xác định TCID50
• 3.5.4. Phương pháp xác định đường biểu diễn sự nhân lên của virus
• 3.5.5. Phương pháp RT – PCR
• 3.5.6. Phương pháp giải trình tự gene
• 3.5.7. Phương pháp Realtime RT-PCR
• 3.5.8. Phương pháp gây bệnh thực nghiệm
• 3.5.9. Phương pháp khám lâm sàng
• 3.5.10. Phương pháp mổ khám
• 3.5.11. Phương pháp làm tiêu bản bệnh lý
• 3.5.12. Phương pháp hóa mô miễn dịch
• 3.5.13. Phương pháp ELISA
• 3.5.14. Phương pháp phân tích và xử lý số liệu bằng phần mềm
• 4. PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Nghiên cứu đặc tính sinh học của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam
• 4.1.1. Kết quả nghiên cứu xác định hiệu giá (TCID50) của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02
• 4.1.2. Kết quả nghiên cứu xác định khả năng gây bệnh tích tế bào của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02
• 4.1.3. Kết quả nghiên cứu xác định sự ổn định của các đời virus qua các đời cấy chuyển
• 4.1.4. Kết quả nghiên cứu xác định đường biểu diễn sự nhân lên của 02 chủng virus PRRS HUA 01 và PRRS HUA 02
• 4.1.5. Nghiên cứu khả năng gây bệnh của 02 chủng virus PRRS HUA 01 và PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam
• 4.2. Nghiên cứu đặc tính sinh học phân tử của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam
• 4.2.1. Kết quả phản ứng RT-PCR
• 4.2.2. Kết quả giải trình tự gene của các chủng virus PRRS nghiên cứu
• 4.2.3. Kết quả truy cập ngân hàng gene
• 4.2.4. So sánh mức độ tương đồng về trình tự nucleotide giữa các chủng virus nghiên cứu
• 4.2.5. So sánh mức độ tương đồng về trình tự amino acid giữa các chủng virus nghiên cứu
• 4.2.6. Kết quả xây dựng cây sinh học phân tử của các chủng virus nghiên cứu
• 5. PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• 5.1. Kiến nghị
• Danh mục công trình đã công bố
• Tài liệu tham khảo
• Phụ lục

Tóm tắt

I. Giới thiệu về virus PRRS và nghiên cứu tại miền Bắc Việt Nam

Nghiên cứu tập trung vào virus PRRS, một loại virus động vật gây hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (bệnh PRRS). Hai chủng virus được nghiên cứu là HUA 01 và HUA 02, phân lập từ các tỉnh phía Bắc Việt Nam. Mục tiêu chính là phân tích đặc tính sinh học và sinh học phân tử của các chủng này để phục vụ cho việc phát triển vắc-xin và các biện pháp phòng trị hiệu quả.

1.1. Tổng quan về virus PRRS

Virus PRRS thuộc họ Arteriviridae, gây bệnh nghiêm trọng trong ngành chăn nuôi lợn. Nghiên cứu này nhấn mạnh vào đặc điểm virus như cấu trúc, khả năng gây bệnh và sự biến đổi di truyền. Các chủng HUA 01 và HUA 02 được phân lập từ các ổ dịch tại miền Bắc Việt Nam, nơi bệnh PRRS đang gây thiệt hại lớn.

1.2. Mục tiêu nghiên cứu

Nghiên cứu nhằm xác định đặc tính sinh học và sinh học phân tử của hai chủng virus, bao gồm khả năng gây bệnh, sự ổn định di truyền và mối quan hệ với các chủng virus khác. Kết quả sẽ góp phần vào việc phát triển các biện pháp phòng trị hiệu quả, đặc biệt là trong bối cảnh dịch bệnh đang lan rộng.

II. Phương pháp nghiên cứu đặc tính sinh học của virus PRRS

Nghiên cứu sử dụng các phương pháp hiện đại để phân tích đặc tính sinh học của virus PRRS, bao gồm nuôi cấy tế bào, gây nhiễm virus và xác định hiệu giá virus. Các kỹ thuật như RT-PCR và Realtime RT-PCR được áp dụng để xác định sự hiện diện và lượng virus trong mẫu.

2.1. Nuôi cấy tế bào và gây nhiễm virus

Các chủng HUA 01 và HUA 02 được nuôi cấy trên tế bào Marc 145 để quan sát bệnh tích tế bào (CPE). Kết quả cho thấy, HUA 01 gây CPE sau 24 giờ, trong khi HUA 02 gây CPE sau 36 giờ. Hiệu giá virus được xác định bằng phương pháp TCID50, cho thấy HUA 01 có hiệu giá cao hơn so với HUA 02.

2.2. Phân tích khả năng gây bệnh

Nghiên cứu thực nghiệm trên lợn cho thấy cả hai chủng virus đều gây ra các triệu chứng điển hình của bệnh PRRS, bao gồm sốt, ho, khó thở và xuất huyết. Virus được phát hiện trong máu và dịch mũi sau 3-5 ngày gây nhiễm, tồn tại đến 21 ngày. Bệnh tích đại thể và vi thể cũng được ghi nhận, đặc biệt là ở phổi và hạch lympho.

III. Phân tích đặc tính sinh học phân tử của virus PRRS

Nghiên cứu tập trung vào phân tích sinh học phân tử của hai chủng HUA 01 và HUA 02 thông qua giải trình tự gene và so sánh với các chủng virus tham chiếu. Các đoạn gene ORF5 và ORF7 được chọn để phân tích do vai trò quan trọng trong mã hóa protein cấu trúc của virus.

3.1. Giải trình tự gene và so sánh

Kết quả giải trình tự cho thấy, đoạn gene ORF5 của HUA 01 và HUA 02 có kích thước 603 bp, mã hóa cho 200 amino acid. Đoạn gene ORF7 có kích thước 372 bp, mã hóa cho 123 amino acid. Mức độ tương đồng nucleotide giữa hai chủng đạt 98.64% (ORF7) và 97.29% (ORF5). So sánh với các chủng tham chiếu, mức độ tương đồng dao động từ 87.41% đến 99.73%.

3.2. Xây dựng cây phả hệ phân tử

Cây phả hệ phân tử dựa trên trình tự gene ORF5 và ORF7 cho thấy HUA 01 và HUA 02 thuộc nhóm PRRS type 2 (Bắc Mỹ) và có mối quan hệ gần với các chủng độc lực cao từ Trung Quốc. Điều này khẳng định tính ổn định và khả năng gây bệnh cao của hai chủng virus này.

IV. Kết luận và ứng dụng thực tiễn

Nghiên cứu đã xác định được đặc tính sinh học và sinh học phân tử của hai chủng HUA 01 và HUA 02, cho thấy chúng có khả năng gây bệnh cao và ổn định về mặt di truyền. Kết quả này có ý nghĩa quan trọng trong việc phát triển vắc-xin, chế phẩm sinh học và các biện pháp phòng trị bệnh PRRS tại miền Bắc Việt Nam.

4.1. Ứng dụng trong sản xuất vắc xin

Hai chủng virus này có thể được sử dụng làm chủng gốc để sản xuất vắc-xin, nhờ vào tính ổn định và khả năng gây bệnh cao. Ngoài ra, chúng cũng có thể được dùng để đánh giá hiệu quả của các loại vắc-xin hiện có.

4.2. Ứng dụng trong chẩn đoán và dịch tễ học

Kết quả giải trình tự gene và xây dựng cây phả hệ phân tử giúp xác định nguồn gốc và sự biến đổi của virus, hỗ trợ công tác chẩn đoán và nghiên cứu dịch tễ học phân tử. Điều này đặc biệt quan trọng trong việc kiểm soát và phòng ngừa bệnh PRRS tại các trang trại chăn nuôi.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ THỊ TOAN NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC, SINH HỌC PHÂN TỬ CHỦ YẾU CỦA CHỦNG VIRUS PRRS HUA 01 VÀ PRRS HUA 02 PHÂN LẬP TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC VIỆT NAM NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ THỊ TOAN NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC, SINH HỌC PHÂN TỬ CHỦ YẾU CỦA CHỦNG VIRUS PRRS HUA 01 VÀ PRRS HUA 02 PHÂN LẬP TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC VIỆT NAM Chuyên ngành: Bệnh lý học và chữa bệnh vật nuôi Mã số: 62.02 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: 1. Nguyễn Thị Lan 2. Phạm Công Hoạt HÀ NỘI - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu riêng của bản thân. Các kết quả nghiên cứu đƣợc trình bày trong luận án là trung thực, khách quan và chƣa từng dùng bảo vệ để lấy bất kỳ học vị nào.

Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận án đã đƣợc cám ơn và các thông tin trích dẫn trong luận án này đều đƣợc chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận án Lê Thị Toan i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án tác giả đã nhận đƣợc sự giúp đỡ và tạo điều kiện của rất nhiều ngƣời, sau đây là lời cảm ơn chân thành của tác giả: Trƣớc hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS. Nguyễn Thị Lan và PGS. Phạm Công Hoạt ngƣời đã trực tiếp hƣớng dẫn tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận án.

Nhờ có sự hƣớng dẫn nhiệt tình và những ý kiến đóng góp quý báu của thầy, cô mà luận án của tôi đã đƣợc hoàn thành. Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám đốc Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Ban Quản lý đào tạo, Chủ nhiệm khoa Thú y, Bộ môn Bệnh lý học Thú y, Phòng Thí nghiệm trọng điểm công nghệ sinh học Thú y, cùng toàn thể các thầy, cô giáo và cán bộ của Khoa Thú y – Học viện Nông nghiệp Việt Nam, đã trang bị cho tôi những kiến thức quý báu và giúp đỡ tôi hoàn thành công trình nghiên cứu luận án. Cuối cùng, tôi xin chân thành cảm ơn tới bạn bè, đồng nghiệp, ngƣời thân trong gia đình và cơ quan đang công tác đã tạo điều kiện về thời gian, động viên, chia sẻ tinh thần, giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận án. Tác giả luận án ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng viii Danh mục hình x Trích yếu luận án xiii Thesis abstract xv PHẦN 1.

Tính cấp thiết của đề tài 1 1. Mục tiêu của đề tài 4 1. Mục tiêu chung 4 1. Mục tiêu cụ thể 4 1.

Phạm vi nghiên cứu 4 1. Đối tƣợng nghiên cứu 4 1. Phạm vi nghiên cứu 4 1. Những đóng góp mới của đề tài 4 1.

Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài 5 1. Ý nghĩa khoa học của đề tài 5 1. Ý nghĩa thực tiễn của đề tài 5 PHẦN 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 7 2.

Tình hình về PRRS trên thế giới và Việt Nam 7 2. Lịch sử và tình hình dịch PRRS trên thế giới 7 2. Lịch sử và tình hình dịch PRRS tại Việt Nam 10 2. Một số hiểu biết về virus PRRS 14 2.

Cấu trúc virus PRRS 15 2. Phân loại virus PRRS 16 2. Sức đề kháng của virus PRRS 17 2. Một số nghiên cứu về đặc tính sinh học của virus PRRS 17 2.

Một số nghiên cứu về đặc tính sinh học phân tử của virus PRRS 23 iii 2. Một số hiểu biết về hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (PRRS) 27 2. Truyền nhiễm học 27 2. Triệu chứng và bệnh tích 32 2.

Chẩn đoán và phòng trị bệnh 35 PHẦN 3. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 3. Địa điểm nghiên cứu 40 3. Thời gian nghiên cứu 40 3.

Vật liệu nghiên cứu 40 3. Nội dung nghiên cứu 41 3. Nghiên cứu đặc tính sinh học chủ yếu của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam 41 3. Nghiên cứu đặc tính sinh học phân tử của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam 42 3.

Phƣơng pháp nghiên cứu 42 3. Phƣơng pháp nuôi cấy tế bào 42 3. Phƣơng pháp gây nhiễm virus PRRS trên tế bào 43 3. Phƣơng pháp xác định TCID50 44 3.

Phƣơng pháp xác định đƣờng biểu biễn sự nhân lên của virus 45 3. Phƣơng pháp RT – PCR 45 3. Phƣơng pháp giải trình tự gene 47 3. Phƣơng pháp Realtime RT-PCR 48 3.

Phƣơng pháp gây bệnh thực nghiệm 49 3. Phƣơng pháp khám lâm sàng 51 3. Phƣơng pháp mổ khám 51 3. Phƣơng pháp làm tiêu bản bệnh lý 51 3.

Phƣơng pháp hóa mô miễn dịch 52 3. Phƣơng pháp ELISA 52 3. Phƣơng pháp phân tích và xử lý số liệu bằng phần mềm 52 PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 54 4.

Nghiên cứu đặc tính sinh học của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía bắc việt nam 54 iv 4. Kết quả nghiên cứu xác định hiệu giá (TCID50) của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 54 4. Kết quả nghiên cứu xác định khả năng gây bệnh tích tế bào của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 55 4. Kết quả nghiên cứu xác định sự ổn định của các đời virus qua các đời cấy chuyển 59 4.

Kết quả nghiên cứu xác định đƣờng biểu diễn sự nhân lên của 02 chủng virus PRRS HUA 01 và PRRS HUA 02 61 4. Nghiên cứu khả năng gây bệnh của 02 chủng virus PRRS HUA 01 và PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam 64 4. Nghiên cứu đặc tính sinh học phân tử của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 phân lập tại một số tỉnh phía bắc việt nam 91 4. Kết quả phản ứng RT-PCR 91 4.

Kết quả giải trình tự gene của các chủng virus PRRS nghiên cứu 92 4. Kết quả truy cập ngân hàng gene 93 4. So sánh mức độ tƣơng đồng về trình tự nucleotide giữa các chủng virus nghiên cứu 105 4. So sánh mức độ tƣơng đồng về trình tự amino acid giữa các chủng virus nghiên cứu 107 4.

Kết quả xây dựng cây sinh học phân tử của các chủng virus nghiên cứu 109 PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 114 5. Kiến nghị 116 Danh mục công trình đã công bố 117 Tài liệu tham khảo 118 Phụ lục 127 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa Tiếng Việt BCĐNTT Bạch cầu đa nhân trung tính CPE Cytophathogenic Effect (Bệnh tích tế bào) DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium (Môi trƣờng nuôi cấy tế bào) DNA Deoxyribonucleic acid (gen sợi kép) EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid (Dung dịch đệm) ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (Phản ứng miễn dịch gắn enzym) FBS Fetal Bovine Serum (Huyết thanh thai bò) HE Haematoxylin – Eosin (Thuốc nhuộm tiêu bản bệnh lý) IHC Immuno Histochemistry (Hóa miễn dịch tổ chức) IPMA Immunoperoxidase monolayer Assay (Phản ứng miễn dịch có gắn men trên tế bào một lớp) KKT Kháng kháng thể MARC 145 Tế bào thận khỉ MLV Modifier Live Vacine (Vắc xin nhƣợc độc) MOI Multiplicity Of Infection (Tỷ lệ giữa số lƣợng virus và số lƣợng tế bào) NSP Non structural protein (Protein phi cấu trúc) OD Optical Density (Mật độ quang) ORF Open Reading Frame (Khung đọc mở trong hệ gen) PAM Porcine Alveolar Macrophage (đại thực bào phế nang lợn) PBS Photphat Buffer Saline (Dung dịch đệm) PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) PRRS Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome (Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn) PRRSV Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (Virus gây Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn) RNA Ribonucleic acid (gen sợi đơn) vi RT- PCR Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp có dùng enzym phiên mã ngƣợc) S/P Sample/Positive (giá trị tính toán trong phản ứng ELISA) SP Structural protein (Protein cấu trúc) TCID50 50% Tissue Culture Infective Dose (Liều gây nhiễm 50% mô nuôi cấy) TMB 3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine (Cơ chất bắt màu huỳnh quang) TPB Triptose phosphas broth (Dung dịch đệm) vii DANH MỤC BẢNG TT Tên bảng Trang 2. Protein cấu trúc của PRRSV 16 3.

Thông tin về nguồn gốc 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 40 4. Kết quả xác định hiệu giá của 03 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 và chủng virus vắc-xin 54 4. Khả năng gây bệnh tích tế bào của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 55 4. Khả năng gây bệnh tích tế bào của 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 qua các đời cấy chuyển 60 4.

Hiệu giá 02 chủng virus PRRS HUA 01 và PRRS HUA 02 qua các đời cấy chuyển 60 4. Kết quả kiểm tra hàm lƣợng kháng thể của lợn lô 1 trƣớc khi gây nhiễm thực nghiệm bằng phƣơng pháp ELISA 65 4. Kết quả kiểm tra hàm lƣợng kháng thể của lợn lô 2 trƣớc khi gây nhiễm thực nghiệm bằng phƣơng pháp ELISA 65 4. Kết quả xét nghiệm sự có mặt của virus PRRS và một số virus khác bằng phƣơng pháp RT – PCR 66 4.

Kết quả xét nghiệm PRRSV bằng phƣơng pháp RT-PCR 67 4. Kết quả xét nghiệm hàm lƣợng PRRSV bằng phƣơng pháp Realtime RT-PCR 70 4. Bảng tổng hợp triệu chứng lâm sàng chủ yếu của các lợn đƣợc gây bệnh thực nghiệm 02 chủng virus PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 75 4. Bệnh tích đại thể của lợn thí nghiệm gây nhiễm 2 chủng PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 78 4.

Bệnh tích đại thể của lợn thí nghiệm gây nhiễm 2 chủng PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 (tiếp) 79 4. Bệnh tích vi thể của lợn thí nghiệm gây nhiễm 2 chủng PRRS HUA 01, PRRS HUA 02 83 4. Kết quả xác định virus PRRS ở lợn gây bệnh thực nghiệm bằng phƣơng pháp hóa mô miễn dịch 87 viii 4. Các vị trí sai khác nucleotide đoạn gene ORF7 giữa các chủng virus nghiên cứu với chủng virus tham chiếu 95 4.

Các vị trí sai khác nucleotide đoạn gene ORF5 giữa các chủng virus nghiên cứu với chủng virus tham chiếu 98 4. Các vị trí sai khác amino acid mã hóa từ gene ORF7 giữa 2 chủng virus PRRS nghiên cứu và chủng virus tham chiếu 102 4. Các vị trí sai khác amino acid mã hóa từ gene ORF5 giữa 2 chủng virus PRRS nghiên cứu và chủng virus tham chiếu 103 4. Sự tƣơng đồng về trình tự nucleotide của gene ORF7 giữa các chủng virus PRRS nghiên cứu với mẫu virus tham chiếu 105 4.

Sự tƣơng đồng về trình tự nucleotide của gene ORF5 giữa các chủng virus PRRS nghiên cứu với mẫu virus tham chiếu 106 4.