Nghiên Cứu Đặc Tính Sinh Học Của Canine Parvovirus Phân Lập Tại Bắc Việt Nam

Luận văn thạc sĩ phân tích nghiên cứu đặc tính sinh học của canine parvovirus phân lập được ở phía bắc việt nam, đánh giá thực trạng, chỉ ra hạn chế, đề xuất giải pháp khả thi cho

• Tác giả: Kham Ning Bun Pha Xay
• Người hướng dẫn: GS. Nguyễn Thị Lan
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên Cứu Đặc Tính Sinh Học Của Canine Parvovirus Tại Bắc Việt Nam
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 2. DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• 3. DANH MỤC BẢNG
• 4. DANH MỤC HÌNH
• 5. DANH MỤC BIỂU ĐỒ
• 6. TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 7. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 8. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI
• 8.1. Mục tiêu chung
• 8.2. Mục tiêu cụ thể
• 9. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI
• 9.1. Ý nghĩa khoa học
• 9.2. Ý nghĩa thực tiễn
• 10. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 10.1. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU BỆNH DO PARVOVIRUS GÂY RA TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM
• 10.1.1. Tình hình nghiên cứu bệnh do Parvovirus gây ra trên thế giới
• 10.1.2. Tình hình dịch bệnh do Parvovirus gây ra tại Việt Nam
• 10.2. Ðặc điểm sinh học của parvovirus
• 10.2.1. Đặc điểm hình thái, cấu trúc hệ gen của Parvovirus
• 10.2.2. Phân loại và phân bố các type Parvovirus
• 10.2.3. Sức đề kháng của Parvovirus
• 10.2.4. Đặc tính nuôi cấy
• 10.2.5. Đặc tính kháng nguyên
• 10.2.6. Khả năng miễn dịch
• 10.2.7. Đường xâm nhập và cách truyền bệnh
• 10.2.8. Các phương pháp chẩn đoán
• 10.3. Tổng quan về nuôi cấy tế bào
• 10.3.1. Một số đặc điểm của tế bào động vật
• 10.3.2. Thành phần dinh dưỡng của môi trường nuôi cấy tế bào
• 10.3.3. Điều kiện nuôi cấy
• 10.3.4. Sự tạp nhiễm và cách hạn chế
• 10.4. Phân lập virus
• 10.4.1. Khái quát về phân lập virus
• 10.4.2. Phân lập Parvovirus phục vụ nghiên cứu sản xuất vacxin vô hoạt
• 11. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 11.1. Ðịa Ðiểm nghiên cứu
• 11.2. Thời gian nghiên cứu
• 11.3. Ðối tượng/vật liệu nghiên cứu
• 11.3.1. Ðối tượng nghiên cứu
• 11.3.2. Vật liệu nghiên cứu
• 11.4. Nội dung nghiên cứu
• 11.4.1. Thu thập mẫu chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus
• 11.4.2. Nghiên cứu phân lập Parvovirus trên môi trường tế bào CRFK
• 11.4.3. Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của những chủng parvovirus phân lập được
• 11.5. Phương pháp nghiên cứu
• 11.5.1. Phương pháp mổ khám
• 11.5.2. Phương pháp tách chiết DNA
• 11.5.3. Phương pháp PCR
• 11.5.4. Phương pháp phân lập Parvovirus
• 11.5.5. Phương pháp xác định hiệu giá virus
• 11.5.6. Xử lý số liệu
• 11.5.7. Phương pháp test kit xét nghiệm nhanh bệnh parvovirus trên chó
• 12. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 12.1. Kết quả thu thập mẫu chó mắc parvovirus
• 12.2. Kết quả phân lập virus trên môi trường tế bào CRFK
• 12.3. Kết quả phân lập Parvovirus
• 12.4. Kết quả kiểm tra sự có mặt của virus trong mẫu phân lập bằng phương pháp PCR
• 12.5. Xác định một số đặc tính sinh học vủa parvovirus
• 12.6. Kết quả nghiên cứu khả năng gây bệnh tích tế bào của Parvovirus
• 12.7. Kết quả xác định hiệu giá của các chủng Parvovirus nghiên cứu
• 12.8. Xác định quy luật nhân lên của virus Parvo trên môi trường tế bào CRFK
• 13. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nghiên Cứu Canine Parvovirus Tại Bắc Việt

Nghiên cứu về Canine Parvovirus (CPV) ở Bắc Việt Nam là vô cùng quan trọng. Chó là loài vật nuôi phổ biến, và bệnh do CPV gây ra có tỷ lệ tử vong cao, đặc biệt ở chó con. Bệnh gây thiệt hại kinh tế cho người nuôi. CPV được phát hiện từ năm 1978 và nhanh chóng lan rộng trên toàn thế giới. Hiện nay, các nghiên cứu chuyên sâu về đặc tính sinh học của các chủng CPV gây bệnh tại Việt Nam còn hạn chế. Việc nghiên cứu và phát triển các chế phẩm điều trị và vaccine phòng bệnh từ các chủng virus thực địa là cần thiết. Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập CPV, làm rõ đặc tính gây bệnh tích tế bào và thời gian sinh trưởng của virus trên môi trường tế bào thích hợp. Kết quả sẽ là cơ sở cho việc phát triển kit chẩn đoán, kháng nguyên chẩn đoán và vaccine phòng bệnh hiệu quả.

1.1. Tầm Quan Trọng Của Nghiên Cứu Parvovirus Ở Chó

Nghiên cứu về Parvovirus ở chó có ý nghĩa quan trọng trong việc bảo vệ sức khỏe vật nuôi và giảm thiểu thiệt hại kinh tế cho người nuôi. Bệnh do Parvovirus gây ra có tỷ lệ tử vong cao, đặc biệt ở chó con. Việc hiểu rõ về đặc tính sinh học của virus giúp phát triển các biện pháp phòng ngừa và điều trị hiệu quả hơn. Theo tài liệu gốc, bệnh viêm ruột tiêu chảy do Canine Parvovirus (CPV) là bệnh truyền nhiễm cao và thường gây tử vong cao ở chó, đặc biệt chó con dưới 1 năm tuổi.

1.2. Các Thách Thức Trong Nghiên Cứu CPV Tại Việt Nam

Một trong những thách thức lớn nhất trong nghiên cứu CPV tại Việt Nam là sự hạn chế về thông tin và dữ liệu về các chủng virus đang lưu hành. Các nghiên cứu chuyên sâu về đặc tính sinh học của các chủng Parvovirus gây bệnh tại thực địa trên môi trường tế bào còn rất hạn chế. Điều này gây khó khăn cho việc phát triển các biện pháp phòng ngừa và điều trị phù hợp với tình hình thực tế tại Việt Nam.

II. Vấn Đề Cấp Bách Canine Parvovirus Gây Bệnh Cho Chó

Bệnh viêm ruột tiêu chảy do Canine Parvovirus (CPV) là một vấn đề nghiêm trọng trong ngành thú y. Bệnh có tỷ lệ lây nhiễm và tử vong cao, đặc biệt ở chó con. CPV gây ra các triệu chứng như sốt cao, nôn mửa, tiêu chảy ra máu và viêm cơ tim. Bệnh lây lan nhanh chóng và có thể gây ra các ổ dịch lớn. Hiện nay, chưa có thuốc đặc trị cho bệnh do CPV gây ra. Biện pháp phòng ngừa chính là sử dụng vaccine. Tuy nhiên, hiệu quả của vaccine có thể bị ảnh hưởng bởi sự biến đổi của virus. Do đó, việc nghiên cứu và giám sát các chủng CPV đang lưu hành là rất quan trọng.

2.1. Triệu Chứng Lâm Sàng Của Bệnh Parvovirus Ở Chó

Các triệu chứng lâm sàng của bệnh Parvovirus ở chó bao gồm sốt cao, nôn mửa, tiêu chảy ra máu, mất nước và suy nhược. Chó con thường bị bệnh nặng hơn chó trưởng thành. Bệnh có thể dẫn đến tử vong nếu không được điều trị kịp thời. Theo tài liệu gốc, giai đoạn phát bệnh sau 3-10 ngày nhiễm virus, các dấu hiệu: mệt mỏi, ủ rũ, nôn khan ra bọt dãi nhớt màu vàng xanh, sốt và tiêu chảy thường có máu.

2.2. Tỷ Lệ Mắc Bệnh Và Tử Vong Do CPV

Tỷ lệ mắc bệnh và tử vong do CPV có thể rất cao, đặc biệt ở chó con. Tỷ lệ mắc bệnh có thể lên đến 50%, và tỷ lệ tử vong có thể lên đến 80% nếu không được điều trị kịp thời. Tỷ lệ này có thể thay đổi tùy thuộc vào chủng virus, độ tuổi của chó và tình trạng sức khỏe tổng thể của chó. Theo tài liệu gốc, tỷ lệ nhiễm bệnh cao, khoảng 45% (Trần Ngọc Bích và cs.). Chó bị nhiễm bệnh, không được điều trị kịp thời, tỷ lệ tử vong rất cao trên 80%.

III. Phương Pháp Phân Lập Và Nghiên Cứu Parvovirus Hiệu Quả

Nghiên cứu này sử dụng phương pháp phân lập Parvovirus trên môi trường tế bào CRFK. Đây là một phương pháp hiệu quả để thu được các chủng virus thuần khiết. Sau khi phân lập, các chủng virus được xác định bằng phương pháp PCR và được nghiên cứu về đặc tính sinh học, bao gồm khả năng gây bệnh tích tế bào, hiệu giá virus và đường cong sinh trưởng. Các kết quả này sẽ cung cấp thông tin quan trọng về đặc tính của các chủng Parvovirus đang lưu hành tại Bắc Việt Nam. Phương pháp PCR với cặp mồi đặc hiệu (555forc/555revc) được sử dụng để xác định sự có mặt của Parvovirus trong các mẫu thu thập được.

3.1. Sử Dụng Môi Trường Tế Bào CRFK Để Phân Lập CPV

Môi trường tế bào CRFK (Crandell Rees Feline Kidney) là một môi trường thích hợp cho sự nhân lên của Parvovirus. Việc sử dụng môi trường này giúp phân lập và thu được các chủng virus thuần khiết. Theo tài liệu gốc, đây là dòng tế bào thích hợp cho sự nhân lên của Parvovirus. Mẫu dương tính được xử lý và gây nhiễm vào tế bào CRFK, sau đó quan sát bệnh tích trong vòng 96h.

3.2. Kỹ Thuật PCR Trong Xác Định Parvovirus

Kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) là một phương pháp nhạy và đặc hiệu để xác định sự có mặt của Parvovirus trong các mẫu bệnh phẩm. Kỹ thuật này giúp xác định nhanh chóng và chính xác các mẫu dương tính với Parvovirus. Theo tài liệu gốc, sử dụng phương pháp PCR với cặp mồi đặc hiệu (555forc/555revc) để xác định sự có mặt của Parvovirus trong các mẫu thu thập được.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Đặc Tính Sinh Học Của CPV Phân Lập

Nghiên cứu đã phân lập được các chủng Parvovirus từ các mẫu bệnh phẩm của chó mắc bệnh tại Bắc Việt Nam. Các chủng virus này đã được xác định và nghiên cứu về đặc tính sinh học. Kết quả cho thấy các chủng Parvovirus này có khả năng gây bệnh tích tế bào trên môi trường CRFK và có hiệu giá virus cao. Đường cong sinh trưởng của các chủng virus này cũng đã được xác định. Các kết quả này cung cấp thông tin quan trọng về đặc tính của các chủng Parvovirus đang lưu hành tại Bắc Việt Nam.

4.1. Khả Năng Gây Bệnh Tích Tế Bào Của Parvovirus

Các chủng Parvovirus phân lập được có khả năng gây bệnh tích tế bào trên môi trường CRFK. Bệnh tích tế bào được quan sát thấy sau khi gây nhiễm virus vào tế bào CRFK. Mức độ bệnh tích tế bào có thể khác nhau tùy thuộc vào chủng virus. Theo tài liệu gốc, kết quả sau khi gây nhiễm đời thứ 2 có 04 mẫu virus đã gây bệnh tích tế bào.

4.2. Hiệu Giá Virus Và Đường Cong Sinh Trưởng Của CPV

Hiệu giá virus và đường cong sinh trưởng là các thông số quan trọng để đánh giá khả năng nhân lên và phát triển của Parvovirus. Nghiên cứu đã xác định hiệu giá virus và đường cong sinh trưởng của các chủng Parvovirus phân lập được. Các kết quả này cho thấy các chủng virus này có khả năng nhân lên nhanh chóng trong tế bào. Theo tài liệu gốc, các chủng virus nghiên cứu xâm nhập và nhân lên nhanh trong tế bào, đạt mức cao nhất tại thời điểm 60-72 giờ sau khi gây nhiễm.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn Phát Triển Kit Chẩn Đoán CPV

Kết quả nghiên cứu này có thể được sử dụng để phát triển kit chẩn đoán Canine Parvovirus (CPV). Kit chẩn đoán nhanh và chính xác sẽ giúp phát hiện sớm bệnh CPV ở chó, từ đó giúp điều trị kịp thời và giảm thiểu tỷ lệ tử vong. Các chủng Parvovirus phân lập được có thể được sử dụng để sản xuất kháng nguyên cho kit chẩn đoán. Ngoài ra, các chủng virus này cũng có thể được sử dụng để phát triển vaccine phòng bệnh CPV hiệu quả hơn.

5.1. Tiềm Năng Phát Triển Vaccine Từ Chủng Parvovirus Phân Lập

Các chủng Parvovirus phân lập được có tiềm năng lớn trong việc phát triển vaccine phòng bệnh CPV. Việc sử dụng các chủng virus đang lưu hành tại Việt Nam để sản xuất vaccine có thể giúp tăng hiệu quả bảo vệ của vaccine. Theo tài liệu gốc, chủng Parvovirus phân lập được có tiềm năng cho chọn giống để sản xuất vaccine hoặc chế tạo Kit, làm kháng nguyên cho chẩn đoán hoặc làm giống để công cường độc đánh giá hiệu quả bảo hộ và kiểm nghiệm vaccine.

5.2. Ứng Dụng Trong Chẩn Đoán Nhanh Bệnh CPV Ở Chó

Việc phát triển kit chẩn đoán nhanh bệnh CPV ở chó sẽ giúp các bác sĩ thú y chẩn đoán bệnh một cách nhanh chóng và chính xác. Điều này sẽ giúp điều trị bệnh kịp thời và giảm thiểu tỷ lệ tử vong. Kit chẩn đoán nhanh có thể được sử dụng tại các phòng khám thú y và tại nhà.

VI. Kết Luận Hướng Nghiên Cứu Tương Lai Của CPV

Nghiên cứu về Canine Parvovirus (CPV) tại Bắc Việt Nam đã đạt được những kết quả quan trọng. Các chủng Parvovirus đã được phân lập và nghiên cứu về đặc tính sinh học. Các kết quả này cung cấp thông tin quan trọng về đặc tính của các chủng Parvovirus đang lưu hành tại Bắc Việt Nam. Trong tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu về sự biến đổi của virus và phát triển các biện pháp phòng ngừa và điều trị hiệu quả hơn. Cần có những nghiên cứu chuyên sâu xác định đặc tính sinh học của các chủng Parvovirus gây bệnh tại thực địa trên môi trường tế bào.

6.1. Đánh Giá Tổng Quan Về Nghiên Cứu Parvovirus

Nghiên cứu về Parvovirus đã cung cấp những thông tin quan trọng về đặc tính sinh học của virus và tiềm năng ứng dụng trong chẩn đoán và phòng ngừa bệnh. Tuy nhiên, cần tiếp tục nghiên cứu để hiểu rõ hơn về sự biến đổi của virus và phát triển các biện pháp phòng ngừa và điều trị hiệu quả hơn.

6.2. Hướng Nghiên Cứu Tiếp Theo Về CPV Tại Việt Nam

Trong tương lai, cần tập trung vào việc nghiên cứu sự biến đổi của CPV và phát triển các vaccine phòng bệnh hiệu quả hơn. Cần có những nghiên cứu chuyên sâu xác định đặc tính sinh học của các chủng Parvovirus gây bệnh tại thực địa trên môi trường tế bào. Ngoài ra, cần tăng cường giám sát dịch bệnh và nâng cao nhận thức của người dân về bệnh CPV.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Bệnh viêm ruột tiêu chảy do Canine Parvovirus là một trong những mối đe dọa hàng đầu đối với ngành thú y và người nuôi thú cảnh, với tỷ lệ tử vong trên chó con chưa có miễn dịch có thể lên tới 80% đến 100%. Tại nhiều địa phương, tỷ lệ mắc bệnh trong quần thể đàn chó dao động ở mức 45% đến 50%, gây thiệt hại nặng nề về kinh tế và tinh thần. Mặc dù virus đã được phát hiện từ năm 1978, sự tiến hóa liên tục của các biến chủng kháng nguyên như CPV-2a, CPV-2b và CPV-2c đòi hỏi các nhà khoa học phải liên tục cập nhật dữ liệu về đặc tính sinh học của các chủng virus thực địa để nâng cao hiệu quả phòng và trị bệnh.

Nghiên cứu này được tiến hành nhằm phân lập các chủng Canine Parvovirus đang lưu hành trên đàn chó tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam trên môi trường tế bào, đồng thời xác định các đặc tính sinh học quan trọng bao gồm khả năng gây bệnh tích tế bào, hiệu giá virus và đường cong sinh trưởng. Đề tài được triển khai trong mốc thời gian từ tháng 9/2018 đến tháng 9/2019, tập trung thu thập 40 mẫu bệnh phẩm tại 3 địa bàn trọng điểm gồm Hà Nội, Bắc Ninh và Hải Dương.

Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của công trình thể hiện rõ qua việc cung cấp các thông số định lượng chuẩn xác về động học nhân lên của virus, đóng góp nguồn mẫu giống gốc cho ngân hàng bảo tồn nguồn gen vi sinh vật quốc gia. Nghiên cứu tạo tiền đề vững chắc giúp các nhà sản xuất dược phẩm thú y trong nước định hướng phát triển bộ kit chẩn đoán nhanh đạt độ nhạy trên 99% và sản xuất vắc xin vô hoạt đạt tỷ lệ bảo hộ thực địa trên 90%, giảm thiểu tỷ lệ tử vong ở đàn chó xuống dưới 15%.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên nền tảng lý thuyết bệnh sinh học vi sinh vật của họ Parvoviridae, cấu trúc di truyền của virus DNA đơn không vỏ bọc và cơ chế tương tác kháng nguyên - thụ thể trên tế bào cảm thụ. Về cấu trúc, Canine Parvovirus có kích thước hạt siêu vi từ 18 đến 24 nm, đối xứng hình khối 20 nm, chứa bộ gen DNA sợi đơn dạng thẳng dài khoảng 5323 nucleotide. Bộ gen mã hóa hai protein phi cấu trúc NS1, NS2 và hai protein cấu trúc vỏ capsid VP1, VP2, trong đó tiểu đơn vị protein VP2 chiếm khoảng 90% thành phần vỏ và quyết định tính đặc hiệu kháng nguyên cũng như độc lực của virus.

Khung phân tích áp dụng mô hình nuôi cấy mô liên tục và động học tế bào học động vật, trong đó chu kỳ nhân đôi của tế bào chủ trung bình khoảng 30 giờ. Bốn khái niệm chính được vận dụng xuyên suốt đề tài bao gồm: hiệu ứng hủy hoại tế bào (Cytopathogenic Effect - CPE), liều gây nhiễm 50% mô nuôi cấy (TCID50), phản ứng khuếch đại chuỗi polymerase (PCR) phát hiện gen VP2 và quy luật thích ứng qua các đời cấy truyền trên dòng tế bào liên tục.

Phương pháp nghiên cứu

Nguồn dữ liệu của nghiên cứu bao gồm 40 mẫu bệnh phẩm phân và dịch trực tràng thu thập từ 40 cá thể chó có biểu hiện viêm ruột tiêu chảy cấp tại các phòng khám thú y thuộc 3 tỉnh thành phía Bắc: Hà Nội 14 mẫu, Bắc Ninh 15 mẫu và Hải Dương 11 mẫu. Phương pháp chọn mẫu là chọn mẫu có chủ đích dựa trên tiêu chuẩn lâm sàng điển hình và kết quả phản ứng dương tính qua bộ kít thử nhanh sắc ký miễn dịch kháng nguyên.

Phương pháp phân tích được thiết kế chặt chẽ qua các giai đoạn kỹ thuật cao:

• Chẩn đoán phân tử: Sử dụng quy trình tách chiết DNA bằng bộ kít QIAamp của Qiagen và phản ứng PCR với cặp mồi đặc hiệu 555forc/555revc khuếch đại đoạn gen VP2 kích thước 550 bp. Lý do lựa chọn PCR nhằm khẳng định tuyệt đối sự có mặt của virus trước khi phân lập.
• Phân lập và cấy truyền: Sử dụng dòng tế bào thận mèo CRFK nuôi cấy trong môi trường dinh dưỡng DMEM bổ sung 10% huyết thanh thai bò FBS, duy trì bằng môi trường chứa 2% FBS ở điều kiện 37 độ C và 5% CO2 qua 3 đời cấy truyền 96 giờ. Tế bào CRFK được lựa chọn vì tính cảm thụ cao nhất với Parvovirus.
• Định lượng hiệu giá: Đánh giá liều gây nhiễm 50% mô nuôi cấy (log TCID50) theo phương pháp Reed-Muench trên khay 96 giếng với mật độ 2,0 x 10^4 tế bào mỗi giếng, theo dõi tại các mốc 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84 và 96 giờ.
• Bệnh lý học: Mổ khám 10 cá thể chó bệnh chết để khảo sát tổn thương đại thể tại các cơ quan nội tạng.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Thứ nhất, 100% mẫu bệnh phẩm thu thập (40/40 mẫu) đều cho kết quả dương tính với Canine Parvovirus qua xét nghiệm PCR với vạch điện di đặc hiệu ở kích thước 550 bp. Khảo sát triệu chứng lâm sàng trên 40 cá thể cho thấy: triệu chứng ủ rũ mệt mỏi xuất hiện ở 100% số ca (40/40 con), ỉa chảy phân lẫn máu chiếm 90,0% (36/40 con), nôn mửa và sốt trên 39 độ C cùng chiếm 80,0% (32/40 con) với thân nhiệt trung bình là 39,75 độ C, cao hơn mức bình thường 1,35 độ C; triệu chứng bỏ ăn chiếm 75,0% (30/40 con) và da mất đàn tính chiếm 62,5% (25/40 con).

Thứ hai, kết quả mổ khám 10 ca bệnh chết ghi nhận 100% cá thể (10/10 con) bị tổn thương nghiêm trọng tại đường tiêu hóa với thành ruột mỏng, niêm mạc ruột và dạ dày sung huyết, xuất huyết diện rộng cùng hạch màng treo ruột sưng to. Ngoài ra, 80,0% cá thể (8/10 con) bị biến dạng hoại tử vùng rìa lách và gan sưng vàng; 60,0% (6/10 con) có biểu hiện dãn cơ tim và xuất huyết cơ tim.

Thứ ba, nghiên cứu phân lập thành công 4 chủng virus gây bệnh tích tế bào đặc trưng trên dòng tế bào CRFK sau 3 đời cấy truyền, đạt tỷ lệ phân lập thành công 10,0% (4/40 mẫu). Bốn chủng phân lập gồm: VNUA-C17 (chó Becgie Bỉ, 5 tháng tuổi tại Hà Nội), VNUA-C31 (chó Bắc Kinh lai Nhật, 4 tháng tuổi tại Hải Dương), VNUA-C32 (chó Ta, 4 tháng tuổi tại Hải Dương) và VNUA-C35 (chó Poodle, 9 tháng tuổi tại Bắc Ninh).

Thứ tư, xác định động học nhân lên của 4 chủng virus trên tế bào CRFK cho thấy virus nhân lên nhanh chóng và đạt đỉnh hiệu giá nội bào tại thời điểm 60 đến 72 giờ sau gây nhiễm. Chủng VNUA-C32 đạt hiệu giá cao nhất với log TCID50 là 4,16; tiếp theo là VNUA-C17 và VNUA-C35 cùng đạt 3,83 log TCID50; chủng VNUA-C31 đạt 3,50 log TCID50. Đến mốc 96 giờ, hiệu giá virus trong tế bào giảm xuống khoảng 2,50 đến 3,83 log TCID50 khi phần lớn tế bào bị hoại tử hoàn toàn.

Thảo luận kết quả

Tỷ lệ phân lập thành công 10% (4/40 mẫu) trên môi trường nuôi cấy tế bào phản ánh sự phức tạp của quá trình thích ứng virus thực địa. Hiện tượng ở đời cấy truyền thứ nhất không xuất hiện bệnh tích tế bào nhưng bắt đầu xuất hiện rõ ở đời thứ hai (tế bào co tròn, thoái hóa, bong tróc khỏi bề mặt nuôi cấy đạt 80% đến 90%) là hoàn toàn phù hợp với quy luật thích nghi sinh học của virus trên dòng tế bào mới.

Tổn thương xuất huyết nặng nề ở ruột non được giải thích là do Parvovirus có ái lực đặc biệt với các tế bào biểu mô mầm crypt tại nhung mao ruột đang phân chia mạnh. Khi các tế bào này bị phá hủy, niêm mạc ruột bị bong tróc gây tiêu chảy mất máu cấp tính, tạo điều kiện cho vi khuẩn kế phát xâm nhập gây sốc nhiễm độc. Hiện tượng sốt cao trung bình 39,75 độ C là phản ứng giải phóng cytokine nội sinh khi các mô lympho bị tấn công.

Số liệu về động học sinh trưởng có thể được trực quan hóa sinh động thông qua biểu đồ đường thể hiện sự gia tăng log TCID50 từ mốc 12 giờ đến khi đạt đỉnh ở 60-72 giờ và suy thoái ở 96 giờ. Đồng thời, bảng thống kê tần suất biến đổi bệnh lý đại thể tại 8 cơ quan đích giúp minh chứng rõ nét mức độ tàn phá của virus, đóng vai trò là cơ sở đối sánh quan trọng với các nghiên cứu dịch tễ học thú y trong khu vực Đông Nam Á.

Đề xuất và khuyến nghị

Thứ nhất, tuyển chọn và nhân giống chủng virus VNUA-C32 có hiệu giá cao đạt 4,16 log TCID50 làm chủng giống gốc chuẩn (Master Seed Virus) để phục vụ quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt thế hệ mới. Mục tiêu hướng tới là đạt tỷ lệ bảo hộ miễn dịch trên 95% cho đàn chó tiêm phòng trong giai đoạn 2020-2023, do các Viện nghiên cứu Thú y và các doanh nghiệp dược phẩm thú y chủ trì thực hiện.

Thứ hai, ứng dụng kháng nguyên tinh khiết thu hoạch từ 4 chủng phân lập để phát triển bộ kit chẩn đoán nhanh kháng nguyên CPV đạt độ nhạy trên 99% và độ đặc hiệu trên 98%. Giải pháp này giúp rút ngắn thời gian chẩn đoán tại phòng khám thú y xuống còn 5 đến 10 phút, hỗ trợ bác sĩ lâm sàng phát hiện sớm ca bệnh trước khi xuất hiện triệu chứng mất nước nặng, dự kiến hoàn thành thương mại hóa trong vòng 18 tháng.

Thứ ba, chuẩn hóa quy trình nuôi cấy thu hoạch kháng nguyên ở mốc thời gian tối ưu từ 60 đến 72 giờ trên dòng tế bào CRFK. Việc thu hoạch đúng thời điểm đỉnh sinh trưởng giúp tăng sản lượng kháng nguyên thu được lên từ 25% đến 35%, từ đó tối ưu hóa chi phí sản xuất và giảm giá thành vắc xin thương mại từ 30% đến 40% so với các dòng vắc xin nhập khẩu, giao các phòng thí nghiệm trọng điểm công nghệ sinh học thực hiện trong 12 tháng.

Thứ tư, thiết lập mạng lưới giám sát dịch tễ học phân tử định kỳ 6 tháng một lần tại các tỉnh phía Bắc nhằm theo dõi sự xuất hiện của các biến chủng mới trên quy mô tối thiểu 500 mẫu mỗi năm. Hoạt động này do Chi cục Thú y các địa phương phối hợp cùng Học viện Nông nghiệp Việt Nam triển khai nhằm kịp thời cập nhật chủng giống vắc xin phù hợp với tình hình thực địa.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Thứ nhất, các nhà khoa học, nghiên cứu viên và giảng viên tại các trường đại học, viện nghiên cứu chuyên ngành Thú y và Công nghệ sinh học. Luận văn cung cấp quy trình phân lập chuẩn xác trên tế bào CRFK, kỹ thuật chạy PCR nhân đoạn gen 550 bp và phương pháp tính log TCID50 theo Reed-Muench làm tài liệu tham khảo giảng dạy và nghiên cứu chuyên sâu.

Thứ hai, các bác sĩ thú y lâm sàng tại các bệnh viện, phòng khám thú cưng. Số liệu khảo sát về các triệu chứng điển hình (ủ rũ 100%, ỉa chảy lẫn máu 90%, sốt cao 80%) và bệnh tích đại thể (100% viêm loét dạ dày ruột) giúp bác sĩ nâng cao độ chính xác trong chẩn đoán phân biệt với bệnh Care hay bệnh do Coronavirus, từ đó xây dựng phác đồ truyền dịch chống sốc hiệu quả.

Thứ ba, các chuyên gia phát triển sản phẩm tại các công ty sản xuất vắc xin và sinh phẩm thú y. Thông tin chi tiết về 4 chủng virus phân lập (VNUA-C17, VNUA-C31, VNUA-C32, VNUA-C35) với hiệu giá đạt tới 4,16 log TCID50 là nguồn dữ liệu quý báu để lựa chọn chủng công cường độc và tối ưu hóa quy trình sản xuất vắc xin phòng bệnh.

Thứ tư, học viên cao học và sinh viên đại học ngành Thú y. Công trình là bài học mẫu mực về thiết kế thí nghiệm sinh học phân tử, kỹ năng xử lý mô bệnh phẩm vô trùng và phương pháp xử lý số liệu thống kê sinh học bằng phần mềm chuyên dụng phục vụ làm khóa luận và đề tài nghiên cứu khoa học.

Câu hỏi thường gặp

Dòng tế bào nào thích hợp nhất để phân lập Canine Parvovirus từ các mẫu bệnh phẩm thực địa? Dòng tế bào thận mèo CRFK là môi trường tối ưu nhất cho sự nhân lên của virus. Kết quả thực nghiệm trên 40 mẫu bệnh phẩm cho thấy tế bào CRFK tạo điều kiện thuận lợi giúp 4 chủng virus thích ứng, phá hủy từ 80% đến 90% diện tích bề mặt nuôi cấy và đạt hiệu giá virus nội bào rất cao lên đến 4,16 log TCID50.

Triệu chứng lâm sàng nào có giá trị nhận biết cao nhất ở chó mắc Canine Parvovirus? Dấu hiệu mệt mỏi ủ rũ xuất hiện ở 100% cá thể bệnh, kết hợp với triệu chứng tiêu chảy phân loãng lẫn máu có mùi tanh khắm đặc trưng chiếm 90% số ca bệnh và sốt cao trên 39 độ C chiếm 80% ca bệnh với thân nhiệt trung bình 39,75 độ C. Đây là những chỉ dấu quan trọng giúp phát hiện bệnh nhanh chóng trên thực địa.

Thời điểm nào thích hợp nhất để thu hoạch kháng nguyên virus phục vụ sản xuất sinh phẩm? Thời điểm thu hoạch lý tưởng nhất là từ 60 đến 72 giờ sau khi gây nhiễm vào tế bào CRFK. Tại thời điểm này, hiệu giá virus trong tế bào đạt đỉnh cực đại với giá trị từ 3,50 đến 4,16 log TCID50. Sau mốc 72 giờ, tế bào bị ly giải hoàn toàn khiến hàm lượng virus bắt đầu suy giảm rõ rệt.

Kỹ thuật sinh học phân tử nào được áp dụng để khẳng định sự có mặt của virus trong nghiên cứu? Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu 555forc và 555revc để khuếch đại đoạn gen VP2 có kích thước 550 bp. Kỹ thuật này đã phát hiện chính xác 100% mẫu bệnh phẩm thu thập từ 40 con chó nghi mắc bệnh đều mang DNA của Canine Parvovirus.

Tại sao cần thiết phải phân lập các chủng Canine Parvovirus lưu hành tại chính các tỉnh miền Bắc? Do Parvovirus có tính biến dị kháng nguyên cao, việc phân lập các chủng thực địa như VNUA-C32 giúp đánh giá chính xác độc lực của virus đang lưu hành. Đây là cơ sở cốt lõi để sản xuất vắc xin tương thích hoàn toàn, nâng tỷ lệ bảo hộ đàn chó lên trên 90% thay vì phụ thuộc vào nguồn vắc xin ngoại nhập.

Kết luận

• Đã thu thập 40 mẫu bệnh phẩm tại Hà Nội, Bắc Ninh, Hải Dương và xác định 100% mẫu dương tính với Canine Parvovirus qua xét nghiệm PCR với kích thước sản phẩm 550 bp.
• Phân lập thành công 4 chủng virus thực địa trên dòng tế bào CRFK qua 3 đời cấy truyền gồm VNUA-C17, VNUA-C31, VNUA-C32 và VNUA-C35 với tỷ lệ đạt 10,0%.
• Xác định quy luật động học nhân lên của virus đạt đỉnh cực đại tại mốc 60 đến 72 giờ sau gây nhiễm, trong đó chủng VNUA-C32 đạt hiệu giá cao nhất là 4,16 log TCID50.
• Khẳng định bức tranh bệnh lý lâm sàng đặc trưng với 100% ca ủ rũ, 90% tiêu chảy ra máu và 100% tổn thương hoại tử xuất huyết đường tiêu hóa qua mổ khám.
• Đóng góp nguồn chủng giống virus thực địa chuẩn cho ngân hàng gen quốc gia, tạo nền tảng vững chắc để sản xuất vắc xin vô hoạt và chế tạo kít chẩn đoán nhanh trong nước.

Về lộ trình tiếp theo trong 12 đến 24 tháng tới, đề tài khuyến nghị tiếp tục giải trình tự toàn bộ hệ gen của 4 chủng virus phân lập được và triển khai thử nghiệm công cường độc trên động vật thí nghiệm. Các đơn vị nghiên cứu, cơ sở sản xuất vắc xin và phòng khám thú y hãy chủ động kết nối để ứng dụng ngay những phát hiện khoa học giá trị này vào thực tiễn bảo vệ sức khỏe đàn thú cảnh.

Trích đoạn nội dung tài liệu

đặt vấn đề thực hiện đề tài: “Nghiên cứu đặc tính sinh học canine parvovirus (CPV) phân lập được ở phía bắc Việt Nam”. Nhằm nghiên cứu quy trình phân lập Parvovirus; làm rõ đặc tính gây bệnh tích tế bào, thời gian sinh trưởng của các chủng Parvovirus phân lập từ thực địa trên môi trường tế bào thích hợp. Kết quả nghiên cứu sẽ góp phần làm cơ sở cho việc chọn chủng Parvovirus có đặc tính sinh học phù hợp dùng để chế tạo kit chẩn đoán, chế tạo kháng nguyên dùng trong chẩn đoán, chế phẩm sinh học ứng dụng trong điều trị và phát triển vacxin phòng bệnh hiệu quả. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI 1.

Mục tiêu chung - Phân lập được các chủng Parvovirus gây bệnh cho chó tại một số tỉnh phía Bắc trên môi trường tế bào, xác định được các đặc tính sinh học của các chủng Parvovirus. Mục tiêu cụ thể - Phân lập được các chủng Parvovirus trên môi trường tế bào CRFK. - Xác định được đặc tính sinh học (khả năng gây bệnh tích tế bào, hiệu giá virus và đường cong sinh trưởng) của các chủng Parvovirus gây bệnh cho chó. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 1.

Ý nghĩa khoa học Kết quả nghiên cứu là tài liệu tham khảo dùng trong nghiên cứu về bệnh do Parvovirus ở chó trong viện nghiên cứu, các trường có chuyên ngành thú y. Đây cũng là tư liệu khoa học cần thiết cho những người làm công tác thú y cơ sở về bệnh do Parvovirus. Đồng thời, thông tin chi tiết của các chủng giống Parvo virus phân lập được có ý nghĩa trong việc xây dựng ngân hàng hồ sơ chủng giống gốc, phục vụ cho các bước đăng ký chủng giống với ngân hàng bảo tồn nguồn gen quốc gia. Ý nghĩa thực tiễn Đề tài đã thu thập, sàng lọc và đánh giá các đặc tính sinh học của chủng 2 c Parvovirus đang gây bệnh tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam.

Chủng Parvovirus phân lập được có tiềm năng cho chọn giống để sản xuất vacxin hoặc chế tạo Kit, làm kháng nguyên cho chẩn đoán hoặc làm giống để công cường độc đánh giá hiệu quả bảo hộ và kiểm nghiệm vacxin. Kết quả nghiên cứu tạo tiền đề giúp thúc đẩy các nghiên cứu phát triển sản xuất vacxin trong nước từ chính các chủng virus đang lưu hành tại thực địa, từ đó nâng cao hiệu quả phòng bệnh. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU BỆNH DO PARVOVIRUS GÂY RA TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM Bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus (Canine Parvovirus type 2 - CPV 2) là bệnh truyền nhiễm nguy hiểm của loài chó có tỉ lệ chết cao.

Biểu hiện lâm sàng đặc trưng là hiện tượng viêm dạ dày ruột có xuất huyết. Bệnh xảy ra khắp nơi trên thế giới trong đó có Việt Nam. Bệnh hay xảy ra với các giống chó: Bergie, Labrador, Rottweiler, Dorberman, Yorshire terriers,. Tình hình nghiên cứu bệnh do Parvovirus gây ra trên thế giới Đầu năm 1970, CPV 2 được phát hiện trên chó con với các triệu chứng bệnh tích như sốt cao, nôn mửa, tiêu chảy, phân lỏng lẫn máu, viêm dạ dày, viêm cơ tim,.

Bệnh thường xảy ra ở dạng dịch địa phương hoặc nhiều ổ dịch xảy ra cùng một lúc. Bệnh xuất hiện vào mùa thu năm 1977 ở Texas và đến mùa hè năm 1978 đã xảy ra nhiều vùng khác nhau ở Hoa Kỳ và Canada. Đầu năm 1979, bệnh đã xuất hiện ở Úc, Bỉ, Hà Lan, Anh và Pháp. Theo các kết quả nghiên cứu của nhiều tác giả, tỷ lệ chó nhiễm CPV 2 là khác nhau ở các quốc gia, như báo cáo về tình hình chó bị nhiễm Parvovirus tại Nigeria là 40,00% (Chollom et al., 2013), tại Hungary là 84,00% (Csagola et al.

Kết quả nghiên cứu gần đây của Kaur et al. (2015) về tỷ lệ nhiễm CPV 2 theo lứa tuổi chó, khi sử dụng kỹ thuật Nested PCR (Polymerase Chain Reaction) chẩn đoán bệnh CPV 2 cho thấy, tỷ lệ nhiễm CPV 2 trên chó từ 0 đến 3 tháng tuổi là 60,00%, 3 đến 6 tháng tuổi là 30,00%, 6 đến 9 tháng tuổi là 24,00%, trên 9 tháng tuổi là 6,00%. Theo các nghiên cứu cho thấy CPV-2 là một virus sợi đơn DNA, không có vỏ bọc, kích thước khoảng 5.2kp, bao gồm 2 khung đọc mở chính, một khung là mã hóa 2 capsid protein [VP1] và [VP2] và một khung là mã hóa 2 protein không cấu trúc [NS1] và [NS2]. Sau đó, một loại Parvovirus mới đã được phân lập trong nuôi cấy tế bào (Burtonboy et al.,1979; Johnson and Spradbrow, 1979;Kelly, 1978).

Loại virus này được đặt tên là Canine Parvovirus loại 2 (CPV-2), để phân biệt nó với mô tả trước Parvovirus Canine Munite Virus (CMV hoặc CPV-1), đó là kháng nguyên không liên quan đến CPV-2 (Carmichael and 4 c Binn, 1981). Trong năm 1979 và 1980, một biến thể kháng nguyên của CPV được xác định ở một vài quốc gia khác bằng việc sử dụng Monoclonal antibodies (MAbs) và biến thể được cho là CPV loại 2a (Parrish, 1991). Giữa năm 1980, virus thêm một biến đổi kháng nguyên, và biến thể mới này được gọi là CPV loại 2b (Parrish, 1991). Hiện nay, biến thể kháng nguyên của CPV đã thay thế hoàn toàn CPV-2 trước đó và được phân bố đa dạng ở khắp các loài chó trên toàn thế giới (Allen and 1998; D.

Buonavoglia et al., 2000; Mochizuki Harasawa, andNakatani, 1993; Steinel et al. Hai biến thể kháng nguyên, CPV-2a và CPV-2b, hiện đang được phân phối trên toàn thế giới (Truyen U. Biến thể CPV thứ ba, có vị trí axit amin Glu-426 đột biến và sau đó được đặt tên thành CPV-2c, đã được phát hiện tại Ý năm 2000 (C. Buonavoglia et al., 2001) và hiện đang lưu hành tại nước đó cùng với các loại 2a và 2b (Decaro et al., 2007; Martella et al.) Các biến thể mới 2c cũng đã được báo cáo trong Việt Nam bởi Nakamura et al.

Tình hình dịch bệnh do Parvovirus gây ra tại Việt Nam Bệnh viêm ruột tiêu chảy do Parvovirus đã được ghi nhận lần đầu tiên ở nước ta vào năm 1990 trên chó nghiệp vụ (Trần Ngọc Bích và cs. Ở Việt Nam, cũng như ở các quốc gia khác ở châu Á, các chủng CPV-2a và CPV-2b khá phổ biến từ những đợt bùng phát dịch đầu tiên. Bệnh được công bố lần đầu tiên ở Việt Nam vào năm 1994. Chó ở mọi lứa tuổi đều nhạy cảm với bệnh, thông thường hầu hết các con trưởng thành đều có kháng thể, tỷ lệ mắc bệnh và tỷ lệ tử vong trên chó con từ 6- 12 tuần tuổi rất đáng kể do có sự huỷ bỏ kháng thể mẹ truyền.

Bệnh có khả năng lây lan nhanh. Tỷ lệ mắc bệnh có thể lên đến 50%, tỷ lệ tử vong trên chó con từ 50-100% (Trần Ngọc Bích và cs. Theo kết quả nghiên cứu gần đây nhất của Nguyễn Thị Yến Mai và cs. (2018) cho thấy tỷ lệ chó tiêu chảy phân lẫn máu do Parvovirus ở Tiền Giang, Đồng Tháp và Thành phố Cần Thơ là 30,00%; 34,00% và 30,00%.

Chó từ ở độ tuổi từ 1 đến 3 tháng tuổi có tỷ lệ nhiễm bệnh cao ở cả ba tỉnh với tỷ lệ lần lượt là (60,00%; 58,82%; 60,00%) và khác biệt có ý nghĩa thống kê với chó ở độ tuổi >6 tháng tuổi ở cả 3 tỉnh Tiền Giang, Đồng Tháp và Thành phố Cần Thơ (6,67%; 5,88%; 0,00%). Chó được tiêm ngừa vacxin phòng bệnh thì tỷ lệ bệnh thấp hơn 5 c so với chó không được tiêm ngừa vacxin ở 3 tỉnh là (6,67% so với 93,33%; 5,88% so với 94,12%; 13,33% so với 86,67%;). Hiệu quả điều trị bệnh Parvovirus trên chó ở tỉnh Tiền Giang và Thành phố Cần Thơ là tương đương nhau với tỷ lệ là 86,67% và 58,82%. ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA PARVOVIRUS 2.

Đặc điểm hình thái, cấu trúc hệ gen của Parvovirus Parvovirus thuộc họ Parvoviridae, giống Parvovirus, loài Canine Parvovirus. Cấu tạo của Parvovirus  Hình thái và cấu trúc: + Theo Phạm Sỹ Lăng và cs. Parvovirus ở mỗi loài động vật khác nhau là khác nhau. Chúng có kích thước 18– 24nm, nhân chứa DNA sợi đơn, không có vỏ bọc, bộ gen 5323 nucleotide.

+ Capsid có kích thước rất nhỏ (20nm), dạng khối đa diện, gồm 32 capsome với 60 tiểu đơn vị VP (viral protein) là VP1, VP2 (chiếm 90% tiểu đơn vị protein) (Reed, Jones, & Miller, 1988) + Lõi: DNA đơn, dạng thẳng. Hầu hết là DNA (-), ở hai đầu có đoạn palindrom (đoạn DNA mạch kép có trình tự nucleotide trên mỗi sợi giống nhau nhưng 6 c trái chiều nhau) tạo thành các nút kẹp tóc, có một đầu 3’-OH thay cho mồi. Phân loại và phân bố các type Parvovirus Hình 2.2 Sự phân bố của CPV-2a\2b\2c trên thế giới https://www.gov/pmc/articles/PMC5376324/ Từ bản đồ sự phân bố của các chủng CPV-2a/2b/2c trên toàn thế giới ta có thể nhận thấy Parvovirus phân bố trên khắp thế giới với các chủng khác nhau. Cụ thể, chủng CPV-2a phân bố nhiều ở khu vực Châu Á và Nam Phi một phần ở vùng Nam Mỹ, chủng CPV-2b có thể thấy xuất hiện ở hầu hết các châu lục, riêng chủng CPV-2c thì tập trung nhiều ở châu Mỹ Latinh và Châu Âu.

7 c Đến năm 1984 trở đi thì có thêm sự xuất hiện của chủng CPV-2b. Trong khoảng thời gian 1986-1996 thì chủng CPV-2a lưu hành phổ biến. Từ sau năm 1996 có thêm sự xuất hiện của chủng CPV-2c, chủng CPV-2b có xu hướng giảm, các chủng CPV-2a và CPV-2c đang thịnh hành trên thế giới (Zhou P. Tỷ lệ phần trăm và sự xuất hiện của các chủng CPV-2/CPV-2-like, CPV-2a, CPV-2b, và CPV-2c https://www.gov/pmc/articles/PMC5376324/ 2.

Sức đề kháng của Parvovirus Parvovirus đề kháng mạnh với môi trường bên ngoài. Trong phân thì virus có 8 c thể tồn tại hơn 6 tháng ở nhiệt độ phòng. Nó đề kháng với tác động của ete, chloruaform, axit và nhiệt độ (56oC trong 30 phút). Dễ bị tiêu diệt bởi ánh sáng mặt trời, tồn tại kéo dài vào mùa đông (ôn đới).

Theo Tô Du và cs. (2006), virus có thể tồn tại 1 – 2 tuần ở nhiệt độ 15 – 25oC. Đặc tính nuôi cấy Virus chỉ nhân lên trong nhân tế bào và gây bệnh tích tế bào trên tế bào tim chó con còn bú hay trên tế bào ruột. Theo Tô Du và cs.

(2006), virus phát triển tốt trên môi trường tế bào thận chó, thận khỉ, chúng gây bệnh tích tế bào nên người ta thường phân lập virus từ nuôi cấy trên các môi trường này. Đặc tính kháng nguyên Sự nhân lên của Parvovirus ở chó làm xuất hiện kháng thể gây ức chế phản ứng ngưng kết hồng cầu và phản ứng trung hoà huyết thanh. Kháng thể ức chế phản ứng ngưng kết hồng cầu xuất hiện vào ngày thứ hai hoặc ngày thứ ba sau khi nhiễm. Phản ứng này được sử dụng trong chẩn đoán huyết thanh học.

Phản ứng trung hoà huyết thanh rất khó thực hiện trong phòng thí nghiệm (Nguyễn Như Pho, 2003).