Nghiên cứu quy trình phát hiện streptococcus agalactiae bằng kỹ thuật real time pcr trên phụ nữ thai sản

Nghiên cứu quy trình phát hiện Streptococcus Agalactiae ở phụ nữ mang thai bằng kỹ thuật Real-time PCR. Tối ưu hóa phương pháp phát hiện bệnh hiệu quả, nhanh chóng.

• Tác giả: Nguyễn Thị Thanh Thảo
• Người hướng dẫn: TS. Lương Thị Mỹ Ngân
• Trường học: Trường Đại Học Mở Thành Phố Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
• Đề tài: Nghiên Cứu Quy Trình Phát Hiện Streptococcus Agalactiae Bằng Kỹ Thuật Real - Time Pcr Trên Phụ Nữ Thai Sản
• Loại tài liệu: Luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2021
• Địa điểm: Thành phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• TÓM TẮT

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nhiễm Streptococcus Agalactiae Nghiên Cứu GBS

Nhiễm trùng huyết sơ sinh (NTHSS) là một thách thức lớn trong y học hiện đại. Bệnh gây ra những biến chứng nguy hiểm như viêm phổi, viêm màng não, đe dọa tính mạng trẻ sơ sinh. Streptococcus agalactiae (GBS), hay liên cầu khuẩn nhóm B, là tác nhân hàng đầu gây NTHSS giai đoạn sớm. Theo nghiên cứu của Kim và cộng sự (2020), NTHSS là nguyên nhân gây tử vong thứ ba ở trẻ sơ sinh, ảnh hưởng đến khoảng 3 triệu trẻ em trên toàn thế giới. Điều này nhấn mạnh tầm quan trọng của việc phát hiện sớm và phòng ngừa GBS ở phụ nữ mang thai. Việc sàng lọc GBS và sử dụng kháng sinh dự phòng có thể giảm đáng kể tỷ lệ NTHSS. Hiện nay, phương pháp nuôi cấy truyền thống vẫn được sử dụng để phát hiện GBS. Tuy nhiên, phương pháp này tốn nhiều thời gian, công sức và có độ nhạy thấp. Vì vậy, việc nghiên cứu và phát triển các phương pháp phát hiện GBS nhanh chóng và chính xác hơn là vô cùng cần thiết.

1.1. Định Nghĩa và Tầm Quan Trọng Của Streptococcus Agalactiae

Streptococcus agalactiae, hay còn gọi là GBS (Group B Streptococcus), là một loại vi khuẩn thường trú trong đường tiêu hóa và sinh dục của phụ nữ. Mặc dù không gây hại cho người lớn, nhưng GBS có thể gây nhiễm trùng nghiêm trọng ở trẻ sơ sinh. Việc sàng lọc GBS ở phụ nữ mang thai là vô cùng quan trọng để ngăn ngừa NTHSS. Nhiễm GBS có thể dẫn đến nhiều biến chứng nguy hiểm cho trẻ, bao gồm viêm phổi, viêm màng não và nhiễm trùng huyết. Do đó, việc phát hiện và điều trị GBS kịp thời là yếu tố then chốt để bảo vệ sức khỏe của trẻ sơ sinh.

1.2. Tại Sao Cần Sàng Lọc GBS Cho Phụ Nữ Mang Thai

Sàng lọc GBS cho phụ nữ mang thai đóng vai trò then chốt trong việc ngăn ngừa NTHSS. GBS có thể lây truyền từ mẹ sang con trong quá trình sinh nở, gây ra những biến chứng nghiêm trọng cho trẻ. Theo các nghiên cứu, việc sàng lọc GBS và sử dụng kháng sinh dự phòng có thể giảm tới 80% nguy cơ NTHSS. Việc sàng lọc thường được thực hiện vào tuần thứ 35-37 của thai kỳ bằng cách lấy mẫu dịch âm đạo và trực tràng. Kết quả xét nghiệm sẽ giúp bác sĩ đưa ra quyết định về việc sử dụng kháng sinh dự phòng trong quá trình chuyển dạ.

II. Thách Thức Phát Hiện GBS Giải Pháp Real time PCR Hiện Đại

Phương pháp nuôi cấy truyền thống để phát hiện GBS còn nhiều hạn chế. Quá trình nuôi cấy mất từ 36-72 giờ, đòi hỏi môi trường chọn lọc phức tạp và có độ nhạy thấp. Điều này có thể dẫn đến chậm trễ trong việc điều trị và tăng nguy cơ nhiễm trùng cho trẻ sơ sinh. Để giải quyết vấn đề này, phương pháp Real-time PCR đã được nghiên cứu và ứng dụng. Real-time PCR là một kỹ thuật khuếch đại gen nhanh chóng và chính xác, cho phép phát hiện GBS chỉ trong vài giờ. Phương pháp này có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn so với nuôi cấy truyền thống, giúp bác sĩ đưa ra quyết định điều trị kịp thời và hiệu quả hơn.

2.1. Hạn Chế Của Phương Pháp Nuôi Cấy Truyền Thống GBS

Mặc dù vẫn là tiêu chuẩn vàng, phương pháp nuôi cấy truyền thống để phát hiện GBS có nhiều hạn chế. Thời gian nuôi cấy kéo dài (36-72 giờ) làm chậm trễ quá trình điều trị. Môi trường nuôi cấy chọn lọc phức tạp đòi hỏi kỹ thuật viên có tay nghề cao. Độ nhạy thấp có thể dẫn đến âm tính giả, bỏ sót những trường hợp nhiễm GBS. Những hạn chế này thúc đẩy việc tìm kiếm các phương pháp phát hiện GBS nhanh chóng và chính xác hơn.

2.2. Ưu Điểm Vượt Trội Của Kỹ Thuật Real time PCR Trong Xét Nghiệm

Real-time PCR mang lại nhiều ưu điểm vượt trội so với nuôi cấy truyền thống. Thời gian xét nghiệm được rút ngắn đáng kể, chỉ còn vài giờ. Độ nhạy và độ đặc hiệu cao giúp phát hiện GBS chính xác hơn. Quy trình xét nghiệm đơn giản và dễ thực hiện, ít phụ thuộc vào kỹ năng của kỹ thuật viên. Real-time PCR là công cụ hiệu quả để phát hiện GBS nhanh chóng và chính xác, giúp cải thiện việc chăm sóc sức khỏe cho phụ nữ mang thai và trẻ sơ sinh.

III. Nghiên Cứu Quy Trình Real time PCR Tối Ưu Hóa Phát Hiện GBS

Nghiên cứu này tập trung vào việc tối ưu hóa quy trình Real-time PCR để phát hiện Streptococcus agalactiae một cách nhanh chóng và chính xác. Các thí nghiệm được thực hiện để tối ưu hóa các thông số như nồng độ mồi, nhiệt độ ủ và thời gian kéo dài. Mục tiêu là tạo ra một quy trình PCR có độ nhạy và độ đặc hiệu cao nhất, đồng thời giảm thiểu thời gian xét nghiệm. Kết quả nghiên cứu sẽ cung cấp cơ sở khoa học cho việc ứng dụng Real-time PCR trong sàng lọc GBS ở phụ nữ mang thai.

3.1. Thiết Kế Mồi và Mẫu Dò Đặc Hiệu Cho Vi Khuẩn GBS

Thiết kế mồi và mẫu dò là bước quan trọng trong quy trình Real-time PCR. Mồi và mẫu dò phải đặc hiệu cho gen cfb của GBS, tránh khuếch đại các gen của vi khuẩn khác. Trình tự mồi và mẫu dò được lựa chọn dựa trên các phân tích tin sinh học để đảm bảo độ đặc hiệu và hiệu quả khuếch đại cao nhất. Các thí nghiệm kiểm tra độ đặc hiệu được thực hiện để đảm bảo rằng mồi và mẫu dò chỉ khuếch đại gen cfb của GBS.

3.2. Tối Ưu Hóa Các Thông Số Phản Ứng Real time PCR Nhiệt Độ Nồng Độ

Tối ưu hóa các thông số phản ứng Real-time PCR là cần thiết để đạt được độ nhạy và độ đặc hiệu cao nhất. Các thông số cần tối ưu hóa bao gồm: nồng độ mồi và mẫu dò, nhiệt độ ủ, thời gian kéo dài và nồng độ MgCl2. Các thí nghiệm được thực hiện để xác định các giá trị tối ưu cho từng thông số. Kết quả tối ưu hóa sẽ giúp quy trình PCR hoạt động hiệu quả nhất.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Đánh Giá Độ Nhạy Đặc Hiệu Của PCR GBS

Nghiên cứu đã đánh giá độ nhạy và độ đặc hiệu của quy trình Real-time PCR tối ưu hóa. Kết quả cho thấy quy trình có độ nhạy cao, có thể phát hiện GBS với nồng độ thấp. Độ đặc hiệu cũng rất cao, không có phản ứng chéo với các vi khuẩn khác. Nghiên cứu cũng so sánh kết quả PCR với phương pháp nuôi cấy truyền thống. Kết quả cho thấy PCR có độ nhạy cao hơn so với nuôi cấy, giúp phát hiện nhiều trường hợp nhiễm GBS hơn.

4.1. So Sánh PCR Và Nuôi Cấy Ưu Thế Vượt Trội Của Kỹ Thuật Mới

So sánh Real-time PCR và nuôi cấy truyền thống cho thấy PCR có nhiều ưu thế vượt trội. PCR nhanh hơn, nhạy hơn và đặc hiệu hơn so với nuôi cấy. PCR cũng ít phụ thuộc vào kỹ năng của kỹ thuật viên. Những ưu điểm này làm cho PCR trở thành lựa chọn ưu việt để phát hiện GBS trong sàng lọc và chẩn đoán.

4.2. Tỷ Lệ Phát Hiện GBS Bằng Real time PCR Kết Quả Thực Tế

Nghiên cứu cho thấy tỷ lệ phát hiện GBS bằng Real-time PCR cao hơn so với nuôi cấy truyền thống. Điều này có nghĩa là PCR có thể phát hiện nhiều trường hợp nhiễm GBS hơn, giúp ngăn ngừa NTHSS hiệu quả hơn. Tỷ lệ phát hiện GBS bằng PCR trong nghiên cứu này là [điền số liệu], cao hơn so với tỷ lệ [điền số liệu] khi sử dụng nuôi cấy.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn Real time PCR Trong Sàng Lọc GBS Thai Kỳ

Real-time PCR có tiềm năng lớn trong việc cải thiện sàng lọc GBS ở phụ nữ mang thai. Việc sử dụng PCR sẽ giúp phát hiện GBS nhanh chóng và chính xác hơn, cho phép điều trị kịp thời và giảm nguy cơ NTHSS. Các bệnh viện và phòng khám nên xem xét áp dụng Real-time PCR như một xét nghiệm thường quy trong sàng lọc GBS.

5.1. Lợi Ích Kinh Tế Giảm Chi Phí Điều Trị Nhiễm Trùng Sơ Sinh

Mặc dù chi phí xét nghiệm Real-time PCR có thể cao hơn so với nuôi cấy, nhưng lợi ích kinh tế lâu dài là rất lớn. Việc phát hiện sớm và điều trị GBS sẽ giảm chi phí điều trị NTHSS, giảm số ngày nằm viện và giảm nguy cơ tử vong ở trẻ sơ sinh. Phân tích chi phí-hiệu quả cần được thực hiện để đánh giá đầy đủ lợi ích kinh tế của việc sử dụng PCR trong sàng lọc GBS.

5.2. Hướng Dẫn Sử Dụng Real time PCR Qui Trình Chuẩn Trong Xét Nghiệm

Để đảm bảo chất lượng xét nghiệm, cần có hướng dẫn sử dụng Real-time PCR chuẩn trong sàng lọc GBS. Hướng dẫn này cần bao gồm các bước: lấy mẫu, xử lý mẫu, chạy PCR, phân tích kết quả và báo cáo kết quả. Cần có đào tạo chuyên sâu cho kỹ thuật viên để đảm bảo họ có đủ kiến thức và kỹ năng để thực hiện xét nghiệm PCR một cách chính xác và hiệu quả.

VI. Kết Luận Hướng Nghiên Cứu Phát Triển Xét Nghiệm PCR GBS

Nghiên cứu này đã chứng minh tính hiệu quả của Real-time PCR trong việc phát hiện Streptococcus agalactiae. Kỹ thuật PCR có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn so với phương pháp nuôi cấy truyền thống. Real-time PCR có tiềm năng lớn trong việc cải thiện sàng lọc GBS ở phụ nữ mang thai. Các nghiên cứu trong tương lai cần tập trung vào việc tối ưu hóa quy trình PCR, đánh giá chi phí-hiệu quả và xây dựng hướng dẫn sử dụng PCR chuẩn trong sàng lọc GBS.

6.1. Tiếp Tục Nghiên Cứu Đánh Giá Ảnh Hưởng Của Các Yếu Tố

Nghiên cứu tiếp theo cần đánh giá ảnh hưởng của các yếu tố khác nhau đến độ nhạy và độ đặc hiệu của Real-time PCR. Các yếu tố cần xem xét bao gồm: kỹ thuật lấy mẫu, phương pháp xử lý mẫu, loại thiết bị PCR và trình độ của kỹ thuật viên. Việc hiểu rõ các yếu tố này sẽ giúp tối ưu hóa quy trình PCR và đảm bảo chất lượng xét nghiệm.

6.2. Tương Lai Của PCR GBS Phát Triển Các Phương Pháp Tiên Tiến

Tương lai của PCR GBS nằm ở việc phát triển các phương pháp tiên tiến hơn. Các phương pháp như PCR đa mồi (multiplex PCR) và PCR kỹ thuật số (digital PCR) có thể giúp phát hiện GBS nhanh chóng và chính xác hơn. Nghiên cứu cần tập trung vào việc phát triển và ứng dụng các phương pháp PCR tiên tiến này để cải thiện sàng lọc GBS và bảo vệ sức khỏe của trẻ sơ sinh.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Nhiễm trùng huyết sơ sinh (NTHSS) là nguyên nhân tử vong hàng đầu ở trẻ sơ sinh, chiếm tỷ lệ từ 11% đến 19% và ảnh hưởng đến khoảng 3 triệu trẻ em trên toàn thế giới. Vi khuẩn Streptococcus agalactiae (GBS) là tác nhân chính gây NTHSS giai đoạn sớm, có thể dẫn đến các biến chứng nghiêm trọng như viêm phổi, viêm màng não, thậm chí tử vong hoặc di chứng thần kinh lâu dài. Tại Việt Nam, tỷ lệ nhiễm GBS ở phụ nữ mang thai dao động khoảng 17-18%, tương đương với các nước trong khu vực Đông Nam Á. Việc phát hiện sớm và chính xác GBS ở phụ nữ thai sản là rất cần thiết để phòng ngừa NTHSS hiệu quả.

Mục tiêu nghiên cứu là xây dựng quy trình phát hiện nhanh và chính xác vi khuẩn GBS bằng kỹ thuật real-time PCR trên mẫu dịch phết âm đạo - trực tràng của phụ nữ mang thai từ 35-37 tuần, so sánh với phương pháp nuôi cấy truyền thống nhằm đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu và tính ứng dụng trong thực tiễn. Nghiên cứu được thực hiện tại TP. Hồ Chí Minh trong năm 2021 với 30 mẫu thử nghiệm, nhằm góp phần nâng cao hiệu quả sàng lọc GBS, giảm thiểu biến chứng nhiễm trùng sơ sinh và cải thiện sức khỏe cộng đồng.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

NTHSS là bệnh nhiễm trùng toàn thân ở trẻ sơ sinh, phân thành hai giai đoạn: khởi phát sớm (trong 72 giờ sau sinh) và khởi phát muộn (sau 72 giờ đến 90 ngày). GBS là vi khuẩn Gram dương, thuộc nhóm beta-hemolytic, có khả năng gây bệnh nghiêm trọng ở trẻ sơ sinh và phụ nữ mang thai. Việc phát hiện GBS truyền thống dựa trên nuôi cấy mất nhiều thời gian (36-72 giờ) và độ nhạy thấp. Kỹ thuật real-time PCR dựa trên khuếch đại gen đặc hiệu cfb của GBS cho phép phát hiện nhanh, chính xác và định lượng vi khuẩn.

Ba khái niệm chính trong nghiên cứu gồm:

• Real-time PCR: kỹ thuật khuếch đại DNA theo thời gian thực, sử dụng thuốc nhuộm hoặc mẫu dò huỳnh quang để phát hiện sản phẩm khuếch đại.
• Gen cfb: mã hóa yếu tố CAMP, đặc hiệu cho GBS, là mục tiêu phân tử trong xét nghiệm.
• Độ nhạy và độ đặc hiệu: các chỉ số đánh giá hiệu quả của phương pháp xét nghiệm.

Phương pháp nghiên cứu

Nguồn dữ liệu gồm 30 mẫu dịch phết âm đạo - trực tràng của phụ nữ mang thai 35-37 tuần thu thập tại Trung tâm xét nghiệm Y khoa Hanhphuclab, TP. Hồ Chí Minh. Các chủng vi khuẩn chuẩn (GBS ATCC 13813, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Gardnerella vaginalis, Chlamydia trachomatis) được sử dụng để kiểm tra độ đặc hiệu.

Phương pháp phân tích gồm:

• Tách chiết DNA từ mẫu và chủng vi khuẩn chuẩn.
• Thiết kế và tối ưu hóa bộ mồi và mẫu dò đặc hiệu gen cfb cho real-time PCR.
• Thực hiện phản ứng real-time PCR với SensiMix™ II Probe Kit trên máy LineGene 9600 Plus.
• So sánh kết quả real-time PCR với phương pháp nuôi cấy truyền thống trên môi trường thạch máu.
• Thời gian nghiên cứu: từ tháng 1 đến tháng 12 năm 2021.

Cỡ mẫu 30 mẫu được chọn theo tiêu chuẩn sàng lọc GBS ở phụ nữ mang thai, đủ để đánh giá bước đầu hiệu quả quy trình real-time PCR.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Độ đặc hiệu của quy trình real-time PCR được kiểm tra trên DNA của các chủng vi khuẩn khác nhau, chỉ phát hiện chính xác GBS, không có phản ứng chéo với Staphylococcus aureus, Gardnerella vaginalis và Chlamydia trachomatis.
2. Độ nhạy của real-time PCR đạt mức 50 bản sao/gen cfb trên mỗi phản ứng, với hiệu quả khuếch đại (EA%) là 94,5% và độ chính xác 99,94%.
3. Trong 30 mẫu dịch phết âm đạo - trực tràng, real-time PCR phát hiện 10 mẫu (33,3%) có GBS, trong khi phương pháp nuôi cấy truyền thống chỉ phát hiện 8 mẫu (26,7%).
4. Thời gian cho kết quả real-time PCR nhanh hơn nhiều so với nuôi cấy truyền thống (khoảng 4-6 giờ so với 36-72 giờ).

Thảo luận kết quả

Kết quả cho thấy quy trình real-time PCR tối ưu có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn phương pháp nuôi cấy truyền thống, phù hợp để phát hiện nhanh GBS ở phụ nữ mang thai. Việc phát hiện thêm 6,6% mẫu dương tính so với nuôi cấy cho thấy real-time PCR có thể phát hiện được các trường hợp vi khuẩn tồn tại với số lượng thấp hoặc không phát triển tốt trên môi trường nuôi cấy.

So sánh với các nghiên cứu quốc tế, tỷ lệ phát hiện GBS bằng real-time PCR dao động từ 20% đến 69,2%, độ nhạy khoảng 90% và độ đặc hiệu 96%, tương đồng với kết quả nghiên cứu này. Việc sử dụng gen cfb làm mục tiêu phân tử được chứng minh là hiệu quả và đặc hiệu trong nhiều nghiên cứu.

Dữ liệu có thể được trình bày qua biểu đồ so sánh tỷ lệ phát hiện GBS giữa real-time PCR và nuôi cấy truyền thống, cũng như bảng thống kê các chỉ số hiệu quả của phương pháp.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Áp dụng quy trình real-time PCR trong sàng lọc GBS cho phụ nữ mang thai từ 35-37 tuần nhằm phát hiện nhanh và chính xác, giảm thiểu nguy cơ NTHSS. Thời gian thực hiện: trong vòng 1 năm, chủ thể thực hiện là các phòng xét nghiệm y học.
2. Đào tạo nhân viên y tế và kỹ thuật viên xét nghiệm về kỹ thuật real-time PCR và quy trình lấy mẫu chuẩn để đảm bảo chất lượng kết quả. Thời gian: 6 tháng, chủ thể: bệnh viện và trung tâm xét nghiệm.
3. Mở rộng nghiên cứu với số lượng mẫu lớn hơn để đánh giá toàn diện hiệu quả và tính khả thi của phương pháp trong thực tế lâm sàng. Thời gian: 2 năm, chủ thể: các viện nghiên cứu và bệnh viện.
4. Xây dựng hướng dẫn chuẩn quốc gia về sàng lọc GBS bằng real-time PCR để đồng bộ quy trình và nâng cao chất lượng chăm sóc sức khỏe bà mẹ - trẻ em. Thời gian: 1 năm, chủ thể: Bộ Y tế và các cơ quan quản lý y tế.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Bác sĩ sản khoa và nhi khoa: Nắm bắt phương pháp phát hiện GBS nhanh, chính xác để tư vấn và điều trị kịp thời cho phụ nữ mang thai và trẻ sơ sinh.
2. Kỹ thuật viên xét nghiệm y học: Áp dụng kỹ thuật real-time PCR trong thực hành xét nghiệm, nâng cao năng lực chuyên môn và chất lượng kết quả.
3. Nhà quản lý y tế và chính sách: Đánh giá hiệu quả phương pháp để xây dựng chính sách sàng lọc GBS phù hợp, góp phần giảm tỷ lệ tử vong sơ sinh.
4. Nhà nghiên cứu trong lĩnh vực công nghệ sinh học và y học phân tử: Tham khảo quy trình tối ưu hóa real-time PCR và ứng dụng trong phát hiện vi khuẩn gây bệnh.

Câu hỏi thường gặp

1. Real-time PCR có ưu điểm gì so với phương pháp nuôi cấy truyền thống?
   Real-time PCR cho kết quả nhanh (4-6 giờ), độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn, phát hiện được vi khuẩn với số lượng thấp mà nuôi cấy có thể bỏ sót.

2. Tại sao chọn gen cfb làm mục tiêu phát hiện GBS?
   Gen cfb mã hóa yếu tố CAMP đặc hiệu cho GBS, có mặt ở hầu hết các chủng, giúp tăng tính đặc hiệu và độ nhạy của xét nghiệm.

3. Quy trình lấy mẫu như thế nào để đảm bảo kết quả chính xác?
   Lấy mẫu dịch phết âm đạo và trực tràng bằng hai miếng gạc riêng biệt, bảo quản trong môi trường vận chuyển không dinh dưỡng và giữ lạnh đến khi xét nghiệm.

4. Có thể áp dụng real-time PCR cho sàng lọc GBS ở tất cả các cơ sở y tế không?
   Phương pháp yêu cầu trang thiết bị hiện đại và kỹ thuật viên có trình độ, nên phù hợp với các phòng xét nghiệm lớn, bệnh viện tuyến tỉnh trở lên.

5. Kết quả real-time PCR có thể bị ảnh hưởng bởi yếu tố nào?
   Mẫu không được bảo quản đúng cách, nhiễm tạp DNA, hoặc thiết kế mồi/mẫu dò không đặc hiệu có thể làm sai lệch kết quả.

Kết luận

• Quy trình real-time PCR phát hiện GBS trên phụ nữ mang thai có độ nhạy 50 bản sao/gen, độ chính xác 99,94% và hiệu quả khuếch đại 94,5%.
• Tỷ lệ phát hiện GBS bằng real-time PCR (33,3%) cao hơn so với nuôi cấy truyền thống (26,7%).
• Phương pháp real-time PCR cho kết quả nhanh, phù hợp ứng dụng trong sàng lọc GBS trước sinh.
• Cần mở rộng nghiên cứu với số lượng mẫu lớn để khẳng định tính khả thi và hiệu quả trong thực tế.
• Khuyến nghị áp dụng real-time PCR trong sàng lọc GBS nhằm giảm thiểu biến chứng nhiễm trùng sơ sinh và nâng cao chất lượng chăm sóc sức khỏe bà mẹ - trẻ em.

Các cơ sở y tế nên đầu tư trang thiết bị và đào tạo nhân lực để triển khai kỹ thuật real-time PCR trong sàng lọc GBS, đồng thời phối hợp nghiên cứu mở rộng để hoàn thiện quy trình chuẩn.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Chương 1. 1 alactiae bang ky thuat1. RealCơtime sở hình PCR thành tren phu nuvăn luận thai. sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus2Agalactiae b 1.

Mục tiêu nghiên cứu. Câu hỏi nghiên cứu. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu. Phương pháp nghiên cứu.

4 alactiae bang ky thuat1. RealÝ time nghĩaPCR nghiên trencứu phu. nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus4Agalactiae b Chương 2. CƠ SỞ TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU.

5 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b 2. Tổng quan về nhiễm trùng huyết sơ sinh .time alactiae bang ky thuat Real Định nghĩa PCR trenbệnh phunhiễm nu thaitrùng huyết sơ sanNghien Streptococcus Agalactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu th sinh. cuu quy trinh phat hien Streptococcus6Agalactiae b 2.time alactiae bang ky thuat Real CácPCR giai tren đoạnphu của nu thai trùng nhiễm sơ sinh. sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus6Agalactiae b 2.

Biểu hiện lâm sàng của nhiễm trùng sơ sinh. Chẩn đoán nhiễm trùng sơ sinh. Điều trị nhiễm trùng sơ sinh. Tổng quan về vi khuẩn GBS.

Đặc điểm sinh học. Các bệnh gây ra bởi GBS. 14 alactiae bang ky thuat Real 2.time PCR Phòng trenvà ngừa điều phu nutrị thai cácsanNghien cuu. bệnh do GBS quy trinh phat hien Streptococcus 17Agalactiae b 2.

Phương pháp lấy mẫu lâm sàng để sàng lọc GBS ở phụ nữ thai sản. 17 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Nghien 2, 20246:29:21 PM6:29:21 cuu quy trinh phatJune PM112Wednesday, hien12, Streptococcus 20246:29:21Agalactiae PM6:29:21bang ky thuat Real time PM112Wednesday, PCR June 12,tren p 2024 vii alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b ren20246:29:25 2, phu nu thai sanNghien cuu quy PM6:29:25 trinh phat hien Streptococcus PM112Wednesday, June 12,Agalactiae bang kyPM6:29:25 20246:29:25 thuat Real time PCR tren phu nu thai san PM112Wednesday, June 12, 2024 1122412066:29:20 PM6:29:20 PM1122412066:29:20 PM6:29:20 PM1122412066:29:20 PM6:29:20 PM 2, 20246:29:27 PM6:29:27 PM112Wednesday, June 12, 20246:29:27 PM6:29:27 PM112Wednesday, June 12, 2024 2. Quy trình nuôi cấy mẫu GBS. Các phương pháp phát hiện GBS .time alactiae bang ky thuat Real Nuôi PCR và định cấytren phu danh truyền nu thai thống.

sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus 19Agalactiae b 2. Phương pháp miễn dịch. 20 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b 2. Phương pháp PCR.

20 2, 20246:29:22 PM6:29:22 PM112Wednesday, 2. JunePCR Phương pháp real-time 12, 20246:29:22 PM6:29:22 PM112Wednesday, June. 21 12, 2024 alactiae bang ky thuat2. RealCác nghiên time PCR cứu tren về phuGBS trong nu thai nước và cuu sanNghien ngoài nước quy trinh.

phat hien Streptococcus 27Agalactiae b 2. Tình hình nghiên cứu trong nước. 27 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b 2. Tình hình nghiên cứu ngoài nước.

29 alactiae bang ky thuat Real time Chương PCRLIỆU 3. VẬT tren phu VÀ nu thai sanNghien PHƯƠNG PHÁP cuu quy trinh NGHIÊN CỨUphat hien Streptococcus. Vật liệu, hóa chất, thiết bị và dụng cụ. 33 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b 3.

Thiết bị và dụng cụ. Phương pháp nghiên cứu. Thiết kế mồi và mẫu dò đặc hiệu cho GBS. 35 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b 3.

Phương pháp thu nhận mẫu và xử lý mẫu. 36 alactiae bang ky thuat Real 3.time ưu hóa TốiPCR trenphản phuứng nu thai sanNghien real-time cuu quy trinh phat hien Streptococcus PCR. Kiểm tra mẫu thực tế bằng real-time PCR và nuôi cấy truyền thống. 41 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Streptococcus Agalactiae 3.

Thời bang gian thực hiện ky thuat và địa điểm Real thí nghiệm time PCR tren phu. 42 nu th alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Chương 4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU. Thiết kế mồi và mẫu dò.

Kết quả tách chiết DNA từ các chủng vi khuẩn và mẫu dịch phết âm đạo-trực tràng của phụ nữ mang thai. Tối ưu hóa phản ứng real-time PCR. Khảo sát khả năng hoạt động của bộ mồi/mẫu dò. Tối ưu nhiệt độ bắt cặp, nồng độ mồi và mẫu dò.

48 alactiae bang ky thuat Real 4.time Độ PCR trencủa đặc hiệu phumồi/mẫu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus dò .time alactiae bang ky thuat Real Độ PCR nhạy tren của bộ phumồi/mẫu dò. nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus 51Agalactiae b Nghien 2, 20246:29:21 PM6:29:21 cuu quy trinh phatJune PM112Wednesday, hien12, Streptococcus 20246:29:21Agalactiae PM6:29:21bang ky thuat Real time PM112Wednesday, PCR June 12,tren p 2024 viii alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b ren20246:29:25 2, phu nu thai sanNghien cuu quy PM6:29:25 trinh phat hien Streptococcus PM112Wednesday, June 12,Agalactiae bang kyPM6:29:25 20246:29:25 thuat Real time PCR tren phu nu thai san PM112Wednesday, June 12, 2024 1122412066:29:20 PM6:29:20 PM1122412066:29:20 PM6:29:20 PM1122412066:29:20 PM6:29:20 PM 2, 20246:29:27 PM6:29:27 PM112Wednesday, June 12, 20246:29:27 PM6:29:27 PM112Wednesday, June 12, 2024 4. Thử nghiệm quy trình real-time PCR tối ưu trên các mẫu dịch phết âm đạo- trực tràng. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ.

57 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b 5. 58 alactiae bang ky thuat5. Real timenghị Kiến PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus. 58Agalactiae b TÀI LIỆU 2, 20246:29:22 PM6:29:22 THAM KHẢO.

PM112Wednesday, June 12, 20246:29:22 PM6:29:22 PM112Wednesday, June 59 12, 2024 PHỤ LỤC. 63 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Streptococcus Agalactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu th alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Nghien 2, 20246:29:21 PM6:29:21 cuu quy trinh phatJune PM112Wednesday, hien12, Streptococcus 20246:29:21Agalactiae PM6:29:21bang ky thuat Real time PM112Wednesday, PCR June 12,tren p 2024 ix alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b ren20246:29:25 2, phu nu thai sanNghien cuu quy PM6:29:25 trinh phat hien Streptococcus PM112Wednesday, June 12,Agalactiae bang kyPM6:29:25 20246:29:25 thuat Real time PCR tren phu nu thai san PM112Wednesday, June 12, 2024 1122412066:29:20 PM6:29:20 PM1122412066:29:20 PM6:29:20 PM1122412066:29:20 PM6:29:20 PM 2, 20246:29:27 PM6:29:27 PM112Wednesday, June 12, 20246:29:27 PM6:29:27 PM112Wednesday, June 12, 2024 DANH MỤC HÌNH Hình 2. Hình dạng GBS dưới kính hiển vi. 12 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Hình 2.

Khuẩn lạc GBS trên đĩa thạch máu. 13 Hình alactiae bang ky thuat 2.time Real Kết PCR quả thử trennghiệm phu nuCAMP. thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus 14Agalactiae b Hình 2. Minh họa giá trị Ct trong real-time PCR.

22 2, 20246:29:22 PM6:29:22 PM112Wednesday, June 12, 20246:29:22 PM6:29:22 PM112Wednesday, June 12, 2024 Hình 2. Phản ứng real-time sử dụng thuốc nhuộm liên kết với DNA. 23 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Hình 2. Phản ứng real-time PCR sử dụng mẫu dò đặc hiệu trình tự.

25 Hình alactiae bang ky thuat 3.time Real Sơ đồ PCRnghiên tren cứu phu. nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus 35Agalactiae b Hình 4. Kết quả khảo sát khả năng hoạt động của bộ mồi/mẫu dò. 46 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Hình 4.

Kết quả điện di sản phẩm PCR. 48 alactiae bang ky thuat HìnhReal 4.time Kết PCR trentrình quả giải phu tự nusản thaiphẩm sanNghien cuuPCR real-time quy. trinh phat hien Streptococcus 48Agalactiae b Hình 4. Kết quả gradient nhiệt độ bắt cặp của bộ mồi/mẫu dò.

Kết quả khảo sát nồng độ mồi/mẫu dò. Kết quả kiểm tra độ đặc hiệu. Kết quả kiểm tra độ nhạy. 52 Hình alactiae bang ky thuat Real Đường 4.time PCRchuẩn độ nhạy tren phu củasanNghien nu thai bộ mồi/mẫu dòquy cuu.

trinh phat hien Streptococcus 52Agalactiae b Hình 4. Khuếch đại đoạn đặc hiệu cfb với plasmid GBS chuẩn ở nồng độ 50 bản sao/μL alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus. 53Agalactiae b Hình alactiae bang ky thuat 4. Real Kết time PCRquảtren real-time phu nuPCR thai nhận diện GBS sanNghien trên trinh cuu quy 30 mẫu phatdịch hienphết âm đạo-trựcAgalactiae b Streptococcus Streptococcus Agalactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu tràng.

54 nu th alactiae bang ky thuat HìnhReal time 4. KếtPCR quả tren nuôiphu cấy nu thai thống truyền sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus. 54Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Nghien 2, 20246:29:21 PM6:29:21 cuu quy trinh phatJune PM112Wednesday, hien12, Streptococcus 20246:29:21Agalactiae PM6:29:21bang ky thuat Real time PM112Wednesday, PCR June 12,tren p 2024 x alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b ren20246:29:25 2, phu nu thai sanNghien cuu quy PM6:29:25 trinh phat hien Streptococcus PM112Wednesday, June 12,Agalactiae bang kyPM6:29:25 20246:29:25 thuat Real time PCR tren phu nu thai san PM112Wednesday, June 12, 2024 1122412066:29:20 PM6:29:20 PM1122412066:29:20 PM6:29:20 PM1122412066:29:20 PM6:29:20 PM 2, 20246:29:27 PM6:29:27 PM112Wednesday, June 12, 20246:29:27 PM6:29:27 PM112Wednesday, June 12, 2024 DANH MỤC BẢNG Bảng 2. Các tác nhân gây bệnh NTHSS.

7 alactiae bang ky thuat Real time PCR tren phu nu thai sanNghien cuu quy trinh phat hien Streptococcus Agalactiae b Bảng 2. Các cặp chất phát và chất hấp thụ huỳnh quang thường được sử dụng. 25 Bảng alactiae bang ky thuat 2.time Real Tổng hợptren PCR kết phu quả nu nghiên cứu về nhậncuu thai sanNghien diện GBS quy bằng trinh phatreal-time PCR và nuôiAgalactiae b hien Streptococcus cấy truyền thống .