Luận văn sản xuất quy mô công nghiệp vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng PRRS tại AVAC Việt Nam

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn tại Avac Việt Nam.

• Tác giả: Lê Thị Xiêm
• Người hướng dẫn: PGS. Nguyễn Bá Hiên
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Hoàn thiện quy trình sản xuất quy mô công nghiệp vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• MỤC LỤC
• DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 1. MỞ ĐẦU
• 1.1. Tính cấp thiết của đề tài
• 1.2. Mục tiêu nghiên cứu
• 1.3. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài
• 1.3.1. Ý nghĩa khoa học
• 1.3.2. Ý nghĩa thực tiễn
• 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH SẢN VÀ HÔ HẤP Ở LỢN
• 2.1.1. Lịch sử hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp
• 2.1.2. Tình hình phân bố và lưu hành hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp tại Việt Nam
• 2.1.3. Virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• 2.1.3.1. Hình thái và cấu trúc virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• 2.1.3.2. Sức đề kháng của virus và đặc tính nuôi cấy
• 2.1.4. Bệnh học hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• 2.1.4.1. Triệu chứng lâm sàng và bệnh lý
• 2.1.4.2. Bệnh do virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn Type II thể độc lực cao
• 2.1.5. Miễn dịch đối với virus hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• 2.2. Vắc xin phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp
• 2.2.1. Hiểu biết chung về vắc xin
• 2.2.2. Những nguyên tắc chính để đảm bảo chất lượng trong sản xuất vắc xin, chế phẩm sinh học ở quy mô công nghiệp
• 2.2.3. Sản xuất vắc xin bằng phương pháp vô hoạt virus
• 2.2.4. Sản xuất vắc xin bằng phương pháp nhược độc virus trên môi trường tế bào
• 2.2.5. Phương pháp sản xuất vắc xin thế hệ mới
• 2.2.6. Chất bổ trợ
• 2.3. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
• 2.3.1. Thời gian nghiên cứu
• 2.3.2. Địa điểm nghiên cứu
• 2.3.3. Nguyên vật liệu, đối tượng sử dụng trong nghiên cứu
• 2.3.3.1. Đối tượng, vật liệu
• 2.3.3.2. Hóa chất bất hoạt
• 2.3.3.3. Chất bổ trợ
• 2.3.3.4. Các loại dung dịch, môi trường
• 2.3.4. Trang thiết bị, dụng cụ
• 2.4. Nội dung nghiên cứu
• 2.4.1. Nghiên cứu sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn quy mô công nghiệp
• 2.4.2. Kiểm nghiệm vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn ở quy mô công nghiệp
• 2.5. Phương pháp nghiên cứu
• 2.5.1. Quy trình tóm tắt sản xuất vắc xin PRRS trên quy mô công nghiệp
• 2.5.2. Phương pháp nuôi cấy tế bào
• 2.5.3. Phương pháp gây nhiễm, thu hoạch và chuẩn độ virus PRRS
• 2.5.4. Phương pháp cô đặc, vô hoạt, nhũ hóa và kiểm tra sau nhũ hóa vắc xin
• 2.6. Kiểm tra thành phẩm vắc xin
• 2.6.1. Phương pháp IPMA (Immunoperoxidase monolayer assay): Phương pháp miễn dịch có gắn enzyme trên thảm tế bào một lớp
• 2.6.2. Phương pháp Elisa phát hiện kháng thể hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (theo TCVN 8400-21:2014)
• 2.6.3. Phương pháp phân lập virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (theo TCVN 8400-21:2014)
• 2.7. Xử lý số liệu
• 2.8. Kết quả và thảo luận
• 2.8.1. Tối ưu quá trình sản xuất kháng nguyên VIRUS PRRS trên hệ thống chai roller
• 2.8.2. Tối ưu hóa quy trình nuôi tế bào Marc – 145 trên chai roller
• 2.8.3. Tối ưu hóa quy trình gây nhiễm, thu hoạch virus PRRS trên hệ thống chai roller
• 2.8.4. Tối ưu quá trình bất hoạt kháng nguyên sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu
• 2.8.5. Nghiên cứu quá trình cô đặc kháng nguyên
• 2.8.6. Nghiên cứu quá trình bất hoạt kháng nguyên
• 2.8.7. Xác nhận quá trình nhũ hóa, bổ sung chất bổ trợ vắc xin
• 2.8.8. Kiểm soát trong quá trình sản xuất vắc xin PRRS vô hoạt
• 2.9. Kiểm nghiệm thành phẩm vắc xin
• 2.9.1. Kiểm tra cảm quan
• 2.9.2. Kiểm tra vô trùng
• 2.9.3. Kiểm tra an toàn
• 2.9.4. Kiểm tra hiệu lực
• 3. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nghiên Cứu Vắc Xin Vô Hoạt Nhũ Dầu PRRS

Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (PRRS) là một trong những bệnh gây thiệt hại kinh tế lớn nhất cho ngành chăn nuôi lợn trên toàn thế giới. Bệnh gây ra các vấn đề về sinh sản ở lợn nái, các vấn đề về hô hấp ở lợn con và lợn thịt, làm giảm năng suất và tăng chi phí điều trị. Việc phát triển vắc xin PRRS hiệu quả là một ưu tiên hàng đầu. Vắc xin vô hoạt nhũ dầu là một trong những loại vắc xin được sử dụng phổ biến để phòng bệnh PRRS. Loại vắc xin này có ưu điểm là an toàn, dễ sử dụng và có thể tạo ra miễn dịch kéo dài. Nghiên cứu này tập trung vào việc hoàn thiện quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu PRRS quy mô công nghiệp, nhằm cung cấp một sản phẩm vắc xin chất lượng cao, giá thành hợp lý cho người chăn nuôi.

1.1. Tầm quan trọng của vắc xin PRRS trong chăn nuôi lợn

Bệnh PRRS gây ra những thiệt hại đáng kể cho ngành chăn nuôi lợn, bao gồm giảm năng suất sinh sản, tăng tỷ lệ chết ở lợn con và lợn thịt, cũng như tăng chi phí điều trị và phòng bệnh. Việc sử dụng vắc xin PRRS là một biện pháp quan trọng để kiểm soát và phòng ngừa bệnh, giúp giảm thiểu thiệt hại kinh tế cho người chăn nuôi. Vắc xin giúp kích thích hệ miễn dịch của lợn, tạo ra kháng thể chống lại virus PRRS, từ đó bảo vệ lợn khỏi bệnh.

1.2. Ưu điểm của vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng PRRS

Vắc xin vô hoạt có tính an toàn cao hơn so với vắc xin sống giảm độc lực, vì virus đã bị bất hoạt và không có khả năng gây bệnh. Vắc xin nhũ dầu giúp tăng cường đáp ứng miễn dịch và kéo dài thời gian bảo vệ. Vắc xin vô hoạt nhũ dầu dễ dàng bảo quản và sử dụng, phù hợp với điều kiện chăn nuôi ở Việt Nam.

II. Thách Thức Trong Sản Xuất Vắc Xin Vô Hoạt Nhũ Dầu PRRS

Mặc dù vắc xin vô hoạt nhũ dầu PRRS có nhiều ưu điểm, nhưng việc sản xuất loại vắc xin này cũng gặp phải một số thách thức. Một trong những thách thức lớn nhất là việc lựa chọn chủng virus phù hợp để sản xuất vắc xin. Chủng virus được sử dụng phải có khả năng sinh trưởng tốt trong môi trường nuôi cấy tế bào, có độc lực vừa phải và có khả năng tạo ra miễn dịch chéo rộng rãi đối với các chủng virus PRRS khác nhau. Ngoài ra, quy trình sản xuất vắc xin phải đảm bảo tính ổn định và hiệu quả của vắc xin trong quá trình bảo quản và sử dụng. Cần có các biện pháp kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt để đảm bảo vắc xin an toàn và hiệu quả.

2.1. Lựa chọn chủng virus PRRS phù hợp cho sản xuất vắc xin

Việc lựa chọn chủng virus PRRS phù hợp là yếu tố then chốt để sản xuất vắc xin hiệu quả. Chủng virus cần có khả năng sinh trưởng tốt trong môi trường nuôi cấy tế bào, có độc lực vừa phải để kích thích hệ miễn dịch mà không gây bệnh, và có khả năng tạo ra miễn dịch chéo rộng rãi đối với các chủng virus PRRS khác nhau đang lưu hành trên thị trường.

2.2. Đảm bảo tính ổn định và hiệu quả của vắc xin PRRS

Tính ổn định và hiệu quả của vắc xin PRRS cần được đảm bảo trong suốt quá trình sản xuất, bảo quản và sử dụng. Các yếu tố như nhiệt độ, ánh sáng và thời gian bảo quản có thể ảnh hưởng đến chất lượng của vắc xin. Cần có các biện pháp kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt để đảm bảo vắc xin đáp ứng các tiêu chuẩn về an toàn và hiệu quả.

2.3. Kiểm soát chất lượng vắc xin vô hoạt nhũ dầu PRRS

Kiểm soát chất lượng là một phần không thể thiếu trong quy trình sản xuất vắc xin. Các thử nghiệm cần được thực hiện để đảm bảo vắc xin vô trùng, an toàn và có hiệu lực bảo vệ. Các thử nghiệm này bao gồm kiểm tra cảm quan, kiểm tra vô trùng, kiểm tra an toàn trên động vật thí nghiệm và kiểm tra hiệu lực bảo vệ bằng cách tiêm phòng cho lợn và sau đó thử thách với virus PRRS.

III. Cách Tối Ưu Hóa Quy Trình Sản Xuất Kháng Nguyên Virus PRRS

Nghiên cứu này tập trung vào việc tối ưu hóa quy trình sản xuất kháng nguyên virus PRRS trên hệ thống chai roller. Hệ thống chai roller là một phương pháp nuôi cấy tế bào quy mô lớn, cho phép sản xuất một lượng lớn kháng nguyên virus trong thời gian ngắn. Các yếu tố được tối ưu hóa bao gồm mật độ tế bào ban đầu, tốc độ lăn của chai, thời gian nuôi cấy và thời điểm thu hoạch virus. Mục tiêu là đạt được hiệu suất sản xuất kháng nguyên cao nhất với chi phí thấp nhất.

3.1. Tối ưu hóa nuôi cấy tế bào Marc 145 trên chai roller

Tế bào Marc-145 là một dòng tế bào thường được sử dụng để nuôi cấy virus PRRS. Việc tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy tế bào Marc-145 trên chai roller là rất quan trọng để đạt được hiệu suất sản xuất kháng nguyên cao. Các yếu tố cần được tối ưu hóa bao gồm mật độ tế bào ban đầu, môi trường nuôi cấy, nhiệt độ, độ ẩm và tốc độ lăn của chai.

3.2. Tối ưu hóa gây nhiễm và thu hoạch virus PRRS

Sau khi tế bào Marc-145 đã phát triển đủ, chúng được gây nhiễm với virus PRRS. Việc tối ưu hóa liều lượng virus gây nhiễm và thời gian thu hoạch virus là rất quan trọng để đạt được hiệu suất sản xuất kháng nguyên cao. Liều lượng virus gây nhiễm quá cao có thể gây chết tế bào, trong khi liều lượng quá thấp có thể không đủ để lây nhiễm cho tất cả các tế bào. Thời gian thu hoạch virus quá sớm có thể dẫn đến hiệu giá virus thấp, trong khi thời gian thu hoạch quá muộn có thể dẫn đến virus bị phân hủy.

3.3. Nghiên cứu quá trình cô đặc kháng nguyên virus PRRS

Quá trình cô đặc kháng nguyên là một bước quan trọng trong quy trình sản xuất vắc xin. Cô đặc kháng nguyên giúp tăng nồng độ virus trong vắc xin, từ đó tăng hiệu quả bảo vệ. Có nhiều phương pháp cô đặc kháng nguyên khác nhau, bao gồm siêu ly tâm, lọc tiếp tuyến và kết tủa hóa học. Nghiên cứu này tập trung vào việc đánh giá hiệu quả của các phương pháp cô đặc kháng nguyên khác nhau để lựa chọn phương pháp phù hợp nhất.

IV. Nghiên Cứu Quá Trình Bất Hoạt Kháng Nguyên Vắc Xin PRRS

Quá trình bất hoạt là một bước quan trọng để đảm bảo an toàn của vắc xin. Virus phải được bất hoạt hoàn toàn để không còn khả năng gây bệnh. Tuy nhiên, quá trình bất hoạt cũng không được làm ảnh hưởng đến tính kháng nguyên của virus, để vắc xin vẫn có thể kích thích hệ miễn dịch tạo ra kháng thể bảo vệ. Nghiên cứu này tập trung vào việc đánh giá hiệu quả của các chất bất hoạt khác nhau, bao gồm formaldehyde và BEI (Binary Ethylenimine).

4.1. Đánh giá hiệu quả của formaldehyde trong bất hoạt virus PRRS

Formaldehyde là một chất bất hoạt virus được sử dụng rộng rãi trong sản xuất vắc xin. Nghiên cứu này đánh giá hiệu quả của formaldehyde trong việc bất hoạt virus PRRS ở các nồng độ và thời gian khác nhau. Mục tiêu là tìm ra nồng độ và thời gian bất hoạt tối ưu để đảm bảo virus bị bất hoạt hoàn toàn mà không làm ảnh hưởng đến tính kháng nguyên.

4.2. Đánh giá hiệu quả của BEI trong bất hoạt virus PRRS

BEI (Binary Ethylenimine) là một chất bất hoạt virus khác cũng được sử dụng trong sản xuất vắc xin. BEI có ưu điểm là ít gây ảnh hưởng đến tính kháng nguyên của virus hơn so với formaldehyde. Nghiên cứu này đánh giá hiệu quả của BEI trong việc bất hoạt virus PRRS ở các nồng độ và thời gian khác nhau.

4.3. Xác nhận quy trình nhũ hóa và bổ sung chất bổ trợ

Sau khi virus đã được bất hoạt, nó được nhũ hóa với dầu khoáng để tạo thành vắc xin nhũ dầu. Chất bổ trợ (adjuvant) được thêm vào để tăng cường đáp ứng miễn dịch. Nghiên cứu này tập trung vào việc xác nhận quy trình nhũ hóa và lựa chọn chất bổ trợ phù hợp để đảm bảo vắc xin có hiệu quả bảo vệ cao.

V. Kiểm Nghiệm Vắc Xin Vô Hoạt Nhũ Dầu Phòng Bệnh PRRS

Sau khi vắc xin được sản xuất, nó phải được kiểm nghiệm để đảm bảo đáp ứng các tiêu chuẩn về an toàn và hiệu quả. Các thử nghiệm bao gồm kiểm tra cảm quan, kiểm tra vô trùng, kiểm tra an toàn trên động vật thí nghiệm và kiểm tra hiệu lực bảo vệ bằng cách tiêm phòng cho lợn và sau đó thử thách với virus PRRS. Vắc xin chỉ được phép lưu hành trên thị trường nếu đáp ứng tất cả các tiêu chuẩn này.

5.1. Kiểm tra cảm quan và vô trùng vắc xin PRRS

Kiểm tra cảm quan bao gồm kiểm tra màu sắc, độ trong và độ đồng nhất của vắc xin. Kiểm tra vô trùng được thực hiện để đảm bảo vắc xin không bị nhiễm vi khuẩn hoặc nấm. Các thử nghiệm này được thực hiện theo các quy trình chuẩn được quy định bởi các cơ quan quản lý.

5.2. Kiểm tra an toàn vắc xin PRRS trên lợn thí nghiệm

Kiểm tra an toàn được thực hiện bằng cách tiêm vắc xin cho lợn thí nghiệm và theo dõi các dấu hiệu bất thường. Vắc xin được coi là an toàn nếu không gây ra bất kỳ tác dụng phụ nghiêm trọng nào cho lợn thí nghiệm.

5.3. Đánh giá hiệu quả vắc xin PRRS bằng phương pháp ELISA và IPMA

Hiệu quả của vắc xin được đánh giá bằng cách đo nồng độ kháng thể trong máu của lợn sau khi tiêm phòng. Các phương pháp ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) và IPMA (Immunoperoxidase Monolayer Assay) được sử dụng để đo nồng độ kháng thể. Vắc xin được coi là hiệu quả nếu tạo ra nồng độ kháng thể cao và có khả năng bảo vệ lợn khỏi bệnh khi bị thử thách với virus PRRS.

VI. Kết Luận Về Nghiên Cứu Vắc Xin Vô Hoạt Nhũ Dầu PRRS

Nghiên cứu này đã thành công trong việc hoàn thiện quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu PRRS quy mô công nghiệp. Vắc xin được sản xuất ra đáp ứng các tiêu chuẩn về an toàn và hiệu quả, và có tiềm năng lớn để được sử dụng trong phòng chống bệnh PRRS ở lợn. Cần có thêm các nghiên cứu để đánh giá hiệu quả của vắc xin trong điều kiện thực địa và để phát triển các loại vắc xin PRRS thế hệ mới có hiệu quả bảo vệ cao hơn.

6.1. Ưu điểm của quy trình sản xuất vắc xin PRRS đã hoàn thiện

Quy trình sản xuất vắc xin PRRS đã hoàn thiện có nhiều ưu điểm, bao gồm hiệu suất sản xuất cao, chi phí thấp và khả năng tạo ra vắc xin an toàn và hiệu quả. Quy trình này có thể được áp dụng để sản xuất vắc xin PRRS ở quy mô lớn, đáp ứng nhu cầu của thị trường.

6.2. Hướng nghiên cứu phát triển vắc xin PRRS thế hệ mới

Các hướng nghiên cứu phát triển vắc xin PRRS thế hệ mới bao gồm phát triển vắc xin sống giảm độc lực có độ an toàn cao hơn, vắc xin vector và vắc xin DNA. Các loại vắc xin này có tiềm năng tạo ra miễn dịch mạnh mẽ hơn và bảo vệ lợn khỏi bệnh trong thời gian dài hơn.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Ngành chăn nuôi lợn giữ vai trò trụ cột trong cơ cấu nông nghiệp Việt Nam, với tổng đàn năm 2018 đạt khoảng 28,95 triệu con và cung cấp hơn 3,41 triệu tấn thịt ra thị trường. Tuy nhiên, rủi ro dịch bệnh luôn là thách thức sống còn, điển hình là hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (PRRS) hay bệnh tai xanh. Kể từ đợt bùng phát đầu tiên vào tháng 3 năm 2007 khiến hơn 70.577 con lợn chết và 20.366 con bị tiêu hủy, dịch bệnh liên tục tái diễn trên diện rộng tại 49 tỉnh thành. Mặc dù thị trường có khoảng 10 loại vắc xin lưu hành, trong đó có 7 loại vắc xin nhập ngoại và 3 loại sản xuất trong nước, phần lớn đều là vắc xin nhược độc với nguy cơ tiềm ẩn về phân tán virus sống và tái tổ hợp độc lực. Tại thời điểm nghiên cứu, thị trường Việt Nam hoàn toàn phụ thuộc vào nguồn vắc xin vô hoạt nhập khẩu từ nước ngoài mà chưa có đơn vị nội địa nào làm chủ công nghệ sản xuất công nghiệp.

Trước thực trạng cấp bách đó, đề tài tập trung giải quyết bài toán hoàn thiện quy trình công nghệ sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng bệnh PRRS ở quy mô công nghiệp tại Công ty Trách nhiệm hữu hạn Một thành viên AVAC Việt Nam, kế thừa kết quả từ đề tài khoa học cấp Nhà nước. Nghiên cứu được triển khai từ tháng 10 năm 2018 đến tháng 5 năm 2019, hướng tới mục tiêu tối ưu hóa quy trình nuôi cấy virus chủng KTY-PRRS-01 trên hệ thống chai lăn roller, chuẩn hóa công đoạn bất hoạt và nhũ hóa tạo chế phẩm đạt quy mô 100 lít kháng nguyên mỗi mẻ (tương đương 20.000 liều mỗi lô). Kết quả của công trình mang ý nghĩa thực tiễn to lớn khi tạo ra sản phẩm vắc xin thương mại nội địa đạt tỷ lệ bảo hộ 100% trước thử thách cường độc, giúp người chăn nuôi chủ động kiểm soát dịch bệnh và tiết kiệm hơn 30% chi phí phòng dịch so với chế phẩm nhập khẩu.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng dựa trên nền tảng miễn dịch học virus học thú y hiện đại và các nguyên tắc thực hành tốt sản xuất thuốc của Tổ chức Y tế Thế giới (GMP-WHO) đối với chế phẩm sinh học vô trùng. Hội chứng PRRS do virus thuộc họ Arteriviridae, bộ Nidovirales gây ra, sở hữu hệ gen ARN sợi đơn dương kích thước khoảng 15 đến 15,5 kilobase với 8 khung đọc mở (ORF1a, ORF1b, ORF2-7). Cấu trúc virus gồm các protein cấu trúc chủ đạo như glycoprotein màng GP5 (mã hóa bởi ORF5) và protein nucleocapsid N, cùng các protein phi cấu trúc như Nsp2 có tính biến dị cao quyết định độc lực.

Lý thuyết về vô hoạt sinh học chỉ rõ rằng việc sử dụng hợp chất alkyl hóa nhị phân Binary Ethylenimine (BEI) ở nồng độ thích hợp có khả năng phá hủy có chọn lọc chuỗi polynucleotide của hệ gen virus mà không làm biến tính các kháng nguyên bề mặt GP5 và M, khắc phục nhược điểm gây kết tủa protein của formaldehyde truyền thống. Đồng thời, công nghệ bào chế chất bổ trợ nhũ dầu khoáng kép Montanide ISA 201 VG tạo dạng nhũ tương nước trong dầu trong nước (W/O/W) giúp cố định kháng nguyên, giải phóng kích thích miễn dịch hai pha chậm rãi, gia tăng độ bền sinh học và kích hoạt đồng thời đáp ứng miễn dịch dịch thể lẫn tế bào kéo dài trên động vật chủ.

Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu sử dụng nguồn giống virus KTY-PRRS-01 phân lập tại thực địa có hiệu giá ban đầu đạt khoảng 3,03 x 10^6 TCID50/ml, nuôi cấy trên dòng tế bào biểu mô thận khỉ Marc-145. Cỡ mẫu nghiên cứu được thiết kế chuẩn mực theo tiêu chuẩn công nghiệp với 3 lô sản xuất thử nghiệm độc lập liên tiếp, mỗi lô có dung tích tối thiểu 100 lít kháng nguyên. Đối với quy trình kiểm định in vivo, cỡ mẫu gồm 5 lợn khỏe mạnh mẫn cảm không có kháng thể PRRS được tuyển chọn để kiểm tra độ an toàn (tiêm gấp đôi liều khuyến cáo) và 5 lợn thí nghiệm theo dõi hiệu lực bảo hộ thông qua phác đồ tiêm 2 mũi tại các mốc 21 ngày tuổi và 42 ngày tuổi.

Phương pháp cô đặc kháng nguyên áp dụng kỹ thuật lọc tiếp tuyến (TFF) với màng siêu lọc chuyên dụng, giúp tăng nồng độ kháng nguyên lên gấp 5 đến 10 lần mà vẫn duy trì độ tinh sạch cao. Hiệu giá virus được xác định thông qua phương pháp Spearman-Karber trên đĩa vi lượng 96 giếng nhằm tính toán chỉ số 50% liều gây nhiễm tế bào (TCID50). Hiệu lực sinh kháng thể được đo lường bằng phương pháp ELISA theo tiêu chuẩn TCVN 8400-21:2014 (xác định chỉ số tỷ lệ mẫu trên đối chứng dương S/P) và kỹ thuật nhuộm miễn dịch gắn enzyme trên thảm tế bào đơn lớp (IPMA). Đánh giá vô trùng được tiến hành nghiêm ngặt trên các môi trường TSB, TSA, FTM, thạch máu và PPLO theo tiêu chuẩn TCVN 8684:2011, cùng thử nghiệm công cường độc trực tiếp với liều 100 TCID50 theo TCVN 8685-13:2014.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Quá trình tối ưu hóa trên hệ thống chai lăn roller 2X đã xác lập các thông số nuôi cấy tế bào Marc-145 tối ưu trong điều kiện không cần bổ sung khí CO2 với mật độ tế bào ban đầu đạt mức 1 x 10^5 tế bào/ml, tốc độ lăn duy trì ổn định từ 0,2 đến 0,3 vòng/phút và chu kỳ cấy chuyển 72 giờ một lần. Khi gây nhiễm virus chủng KTY-PRRS-01 ở liều tối ưu 10^4 TCID50/ml, tế bào thể hiện bệnh lý tế bào (CPE) điển hình đạt trên 90% sau 72 giờ, cho phép thu hoạch huyễn dịch virus đạt hiệu giá sinh khối cao nhất.

Sau khi qua hệ thống lọc tiếp tuyến TFF, dịch kháng nguyên đạt hiệu giá virus trước bất hoạt lên tới 10^8 TCID50/liều, tăng gấp hơn 30 lần so với dịch thô ban đầu. Quá trình bất hoạt bằng hóa chất BEI nồng độ 1 mM ở nhiệt độ 37 độ C trong vòng 24 giờ cho thấy khả năng vô hoạt hoàn toàn 100% virus PRRS mà không để lại tồn dư độc tính sau khi được trung hòa bằng dung dịch Natri thiosulphate 2% trong 2 giờ. Công đoạn nhũ hóa cùng dầu khoáng kép Montanide ISA 201 VG theo tỷ lệ thể tích 1:1 ở tốc độ khuấy từ 600 đến 800 vòng/phút tạo ra hỗn dịch đồng nhất với kích thước hạt nhũ siêu mịn chỉ từ 1 đến 2 micromet, đạt độ ổn định tuyệt đối với tỷ lệ tách lớp bằng 0% sau 7 ngày ở 4 độ C và 24 giờ ở 37 độ C.

Thảo luận kết quả

Các kết quả thực nghiệm sản xuất 3 lô liên tiếp ở quy mô công nghiệp (mỗi lô trên 20.000 liều) chứng minh tính lặp lại và độ tin cậy cơ bản của dây chuyền sản xuất AVAC. Về chỉ tiêu kiểm tra an toàn theo dõi trong 21 ngày, toàn bộ lợn thí nghiệm được tiêm liều kép (2 liều/con) đều sinh trưởng hoàn toàn bình thường, không xảy ra bất kỳ phản ứng phụ cục bộ hay triệu chứng sốt toàn thân. Dữ liệu theo dõi thân nhiệt lợn sau khi tiêm chủng và công cường độc có thể được trực quan hóa qua biểu đồ đường biến thiên nhiệt độ: đàn lợn tiêm vắc xin luôn duy trì thân nhiệt sinh lý lý tưởng từ 38,5 đến 39,2 độ C, trong khi nhóm đối chứng không tiêm vắc xin xuất hiện cơn sốt cao trên 40,5 độ C kéo dài liên tục nhiều ngày.

Về hiệu lực sinh kháng thể, dữ liệu phân tích từ phương pháp ELISA và IPMA có thể được trình bày thông qua bảng đối sánh chỉ số kháng thể qua các mốc thời gian D0, D21, D49, D70 và D91. Sau mũi tiêm nhắc lại tại ngày thứ 42, 100% mẫu huyết thanh lợn ở ngày 70 đều có chỉ số S/P lớn hơn 0,4 (dương tính tuyệt đối với ELISA) và hiệu giá kháng thể qua thử nghiệm IPMA đạt mức rất cao, dao động từ 1/640 đến 1/2560, vượt xa ngưỡng bảo hộ tiêu chuẩn quy định tại TCVN 8685-13:2014. Khi tiến hành công cường độc ở 70 ngày tuổi với liều 100 TCID50 của virus KTY-PRRS-01 thực địa, 100% lợn được tiêm phòng đều đề kháng vững chắc, không phát bệnh và không có bệnh tích viêm phổi hoại tử đặc trưng, trong khi 100% lợn đối chứng đều phát bệnh nặng với các tổn thương phổi viêm chắc đặc màu xám nghiêm trọng.

Đề xuất và khuyến nghị

Nhằm phát huy tối đa giá trị thực tiễn của công trình nghiên cứu và đưa sản phẩm vào chuỗi phòng dịch quy mô lớn, các giải pháp cụ thể được đề xuất như sau:

Thứ nhất, nâng cấp tự động hóa dây chuyền sản xuất kháng nguyên trên hệ thống giàn quay chai roller từ quy mô 100 lít hiện tại lên 300 đến 500 lít mỗi mẻ. Mục tiêu là gia tăng năng suất cung ứng vắc xin thêm khoảng 200% trong vòng 12 tháng tới, do Ban Lãnh đạo và Phòng Sản xuất Công ty AVAC Việt Nam chủ trì thực hiện nhằm đáp ứng nhu cầu thị trường trong nước.

Thứ hai, hoàn thiện hồ sơ đăng ký lưu hành thuốc thú y thương mại cho sản phẩm vắc xin vô hoạt PRRS nhũ dầu chủng KTY-PRRS-01. Bộ phận Đảm bảo Chất lượng (QA) và Kiểm nghiệm (QC) của AVAC cần phối hợp chặt chẽ với Cục Thú y để hoàn tất thẩm định hồ sơ kỹ thuật và cấp phép lưu hành trong thời hạn 6 tháng kể từ khi nghiệm thu đề tài.

Thứ ba, thiết lập chương trình giám sát dịch tễ học phân tử định kỳ 6 tháng một lần đối với các ổ dịch PRRS tại các vùng chăn nuôi trọng điểm miền Bắc và miền Nam. Hoạt động này do Viện Thú y kết hợp cùng Học viện Nông nghiệp Việt Nam triển khai nhằm giải trình tự đoạn gen ORF5 và Nsp2, bảo đảm kịp thời cập nhật kháng nguyên vắc xin nếu xuất hiện biến chủng né miễn dịch mới ngoài thực địa.

Thứ tư, triển khai các mô hình tiêm phòng điểm tại ít nhất 20 trang trại chăn nuôi lợn tập trung quy mô trên 1.000 nái tại các tỉnh Thái Bình, Hà Nam và Đồng Nai trong vòng 9 tháng. Chi cục Chăn nuôi và Thú y các địa phương phối hợp cùng đội ngũ kỹ thuật AVAC hướng dẫn phác đồ tiêm 2 mũi cách nhau 21 ngày, hướng tới mục tiêu giảm thiểu trên 85% tổn thất kinh tế do hội chứng sảy thai và bệnh hô hấp phức hợp gây ra.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Nội dung và kết quả của luận văn mang lại giá trị học thuật và ứng dụng chuyên sâu cho 4 nhóm đối tượng chính:

Nhóm thứ nhất là các kỹ sư công nghệ sinh học và chuyên viên nghiên cứu phát triển (R&D) tại các nhà máy sản xuất sinh phẩm y tế và thú y. Tài liệu cung cấp chi tiết các thông số kỹ thuật nuôi cấy tế bào Marc-145 không phụ thuộc tủ ấm CO2 và quy trình siêu lọc TFF, giúp tối ưu hóa chi phí sản xuất sinh khối virus ở quy mô lớn.

Nhóm thứ hai là cán bộ quản lý chất lượng (QA/QC) và chuyên viên kiểm nghiệm dược phẩm thú y. Luận văn là tài liệu tham khảo thực tế về việc thiết lập hệ thống kiểm soát trong quá trình (IPC) và quy trình kiểm định cảm quan, vô trùng, an toàn, hiệu lực sinh học theo tiêu chuẩn GMP-WHO và các quy chuẩn TCVN hiện hành.

Nhóm thứ ba là các bác sĩ thú y thực địa, chủ trang trại chăn nuôi lợn quy mô công nghiệp và các nhà quản lý trang trại giống. Nghiên cứu cung cấp cơ sở khoa học tin cậy về tính an toàn tuyệt đối của vắc xin vô hoạt, giúp người chăn nuôi xây dựng lịch tiêm phòng chuẩn cho đàn nái hậu bị, nái mang thai và lợn con mà không lo ngại nguy cơ bài thải mầm bệnh sống.

Nhóm thứ tư là giảng viên, nghiên cứu sinh và học viên cao học chuyên ngành Thú y, Vi sinh vật học và Miễn dịch học. Luận văn đóng vai trò như một tài liệu học thuật toàn diện về kỹ thuật chẩn đoán huyết thanh học IPMA, phản ứng ELISA phát hiện kháng thể và công nghệ bào chế chất bổ trợ nhũ dầu kép trong phòng chống bệnh truyền nhiễm nguy hiểm.

Câu hỏi thường gặp

Việc nuôi cấy tế bào Marc-145 trong điều kiện không có khí CO2 mang lại lợi ích gì trong quy mô công nghiệp? Quy trình tối ưu hóa việc bổ sung hệ đệm ổn định pH vào môi trường DMEM giúp tế bào sinh trưởng bình thường trên giàn quay chai roller mà không cần hệ thống cấp khí CO2 đắt tiền. Cải tiến này giúp cơ sở sản xuất tiết kiệm hơn 40% chi phí đầu tư thiết bị phòng ủ ấm và giảm thiểu rủi ro biến động môi trường khi vận hành hàng trăm chai nuôi cấy đồng thời.

Vì sao hóa chất BEI lại được ưu tiên lựa chọn để vô hoạt virus PRRS thay vì Formaldehyde? Formaldehyde nồng độ 0,3% thường gây liên kết chéo và đông tụ protein, dễ làm tổn hại các epitope kháng nguyên quan trọng trên bề mặt virus. Ngược lại, BEI ở nồng độ 1 mM chỉ tấn công đặc hiệu vào liên kết nucleic acid của bộ gen ARN, giúp bất hoạt hoàn toàn khả năng nhân lên của virus nhưng bảo tồn nguyên vẹn 100% cấu trúc kháng nguyên bề mặt, kích thích đáp ứng miễn dịch cao hơn.

Chất bổ trợ Montanide ISA 201 VG đóng vai trò gì trong việc nâng cao chất lượng vắc xin? Montanide ISA 201 VG là loại dầu khoáng kép tạo cấu trúc nhũ tương nước trong dầu trong nước (W/O/W). Hệ nhũ này giúp hạt nhũ đạt kích thước siêu nhỏ từ 1 đến 2 micromet, giảm tối đa độ nhớt để không gây rít kim khi tiêm, tránh gây áp xe tại vị trí tiêm và giải phóng kháng nguyên chậm rãi nhằm duy trì kháng thể bảo hộ kéo dài trên 6 tháng.

Hiệu lực bảo hộ của vắc xin vô hoạt nhũ dầu trong nghiên cứu này được đánh giá qua những tiêu chí nào? Hiệu lực được kiểm định đồng thời qua 3 tiêu chuẩn khắt khe theo TCVN 8685-13:2014 gồm: tỷ lệ chuyển đổi kháng thể bằng ELISA đạt chỉ số S/P lớn hơn 0,4; hiệu giá kháng thể trung hòa qua phương pháp IPMA đạt từ 1/640 trở lên; và tỷ lệ bảo hộ sống khỏe mạnh đạt 100% khi thử thách công cường độc trực tiếp với 100 TCID50 virus KTY-PRRS-01.

Vắc xin vô hoạt sản xuất từ chủng KTY-PRRS-01 có khả năng bảo hộ chéo đối với các chủng virus tai xanh khác không? Chủng giống KTY-PRRS-01 thuộc dòng Bắc Mỹ độc lực cao phân lập trực tiếp từ các ổ dịch thực địa tại Việt Nam. Nhờ hàm lượng kháng nguyên đậm đặc 10^8 TCID50/liều kết hợp cùng tá dược nhũ dầu kép kích thích miễn dịch phổ rộng, vắc xin tạo ra nồng độ kháng thể trung hòa cao, mang lại khả năng bảo hộ chéo hiệu quả trước các chủng PRRS dòng Bắc Mỹ đang lưu hành phổ biến.

Kết luận

Công trình nghiên cứu đã mang lại những đóng góp khoa học và thực tiễn mang tính then chốt cho ngành thú y Việt Nam thông qua 5 kết quả nổi bật:

• Xây dựng và chuẩn hóa thành công quy trình nhân giống virus PRRS chủng KTY-PRRS-01 trên tế bào Marc-145 bằng hệ thống chai lăn roller dung tích 100 lít mỗi mẻ trong điều kiện không phụ thuộc khí CO2.
• Xác định chính xác các thông số công nghệ cốt lõi: liều gây nhiễm 10^4 TCID50/ml, thu hoạch sau 72 giờ, bất hoạt triệt để bằng BEI 1 mM trong 24 giờ ở 37 độ C và nhũ hóa với Montanide ISA 201 VG tỷ lệ 1:1.
• Sản xuất ổn định 3 lô thử nghiệm công nghiệp liên tiếp đạt quy mô trên 20.000 liều mỗi lô, tạo hạt nhũ kích thước siêu nhỏ 1 đến 2 micromet với độ bền vật lý hoàn hảo.
• Đáp ứng đầy đủ các tiêu chuẩn khắt khe về độ thuần khiết, tính vô trùng theo TCVN 8684:2011 và tính an toàn tuyệt đối khi thử nghiệm liều kép trên động vật cảm nhiễm.
• Đạt tỷ lệ bảo hộ tuyệt đối 100% trước thử thách công cường độc với hiệu giá kháng thể IPMA đạt từ 1/640 đến 1/2560 và chỉ số ELISA S/P dương tính vững chắc.

Đóng góp lớn nhất của luận văn là làm chủ hoàn toàn công nghệ sản xuất vắc xin vô hoạt PRRS nhũ dầu quy mô công nghiệp từ chủng phân lập nội địa, chấm dứt sự phụ thuộc vào nguồn vắc xin vô hoạt nhập khẩu. Kế hoạch tiếp theo trong 6 đến 12 tháng tới là hoàn tất chứng nhận lưu hành quốc gia và thương mại hóa sản phẩm rộng rãi. Các doanh nghiệp chăn nuôi và cơ sở thú y hãy chủ động tiếp cận, ứng dụng quy trình công nghệ này để nâng cao năng lực an toàn sinh học và bảo vệ đàn vật nuôi bền vững.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ THỊ XIÊM HOÀN THIỆN QUY TRÌNH SẢN XUẤT QUY MÔ CÔNG NGHIỆP VẮC XIN VÔ HOẠT NHŨ DẦU PHÒNG HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH SẢN VÀ HÔ HẤP Ở LỢN TẠI CÔNG TY TNHH MTV AVAC VIỆT NAM Chuyên Ngành: Thú Y Mã Số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Nguyễn Bá Hiên NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 c LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày … tháng.

năm 2019 Tác giả luận văn Lê Thị Xiêm i c LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Bá Hiên đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám Đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Vi sinh Vật – Truyền nhiễm, Khoa Thú y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán bộ công nhân viên tại công ty TNHH một thành viên Avac Việt Nam đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài.

Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày … tháng. năm 2019 Tác giả luận văn Lê Thị Xiêm ii c MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục.

iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng. vii Danh mục hình. viii Trích yếu luận văn.

ix Thesis abstract. Tính cấp thıết của đề tàı. Mục tıêu nghıên cứu. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài.

Ý nghĩa khoa học. Ý nghĩa thực tiễn. Tổng quan tài liệu. Hội chứng rối loạn sınh sản và hô hấp ở lợn.

Lịch sử hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp. Tình hình phân bố và lưu hành hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp tại tại Việt Nam. Vırus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn. Hình thái và cấu trúc virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn.

Sức đề kháng của virus và đặc tính nuôi cấy. Bệnh học hộı chứng rốı loạn sınh sản và hô hấp ở lợn. Triệu chứng lâm sàng và bệnh lý. Bệnh do virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn Type II thể độc lực cao.

Miễn dịch đối với virus hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn. Vắc xın phòng hộı chứng rốı loạn sınh sản và hô hấp. Hiểu biết chung về vắc xin. Những nguyên tắc chính để đảm bảo chất lượng trong sản xuất vắc xin, chế phẩm sinh học ở quy mô công nghiệp.

Sản xuất vắc xin bằng phương pháp vô hoạt virus. Sản xuất vắc xin bằng phương pháp nhược độc virus trên môi trường tế bào. Phương pháp sản xuất vắc xin thế hệ mới. Chất bổ trợ.

Vật liệu và phƣơng pháp nghiên cứu. Thời gian nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu. Nguyên vật liệu, đối tượng sử dụng trong nghiên cứu.

Đối tượng, vật liệu. Hóa chất bất hoạt. Chất bổ trợ. Các loại dung dịch, môi trường.

Trang thiết bị, dụng cụ. Nội dung nghiên cứu. Nghiên cứu sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn quy mô công nghiệp. Kiểm nghiệm vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn ở quy mô công nghiệp.

Phương pháp nghiên cứu. Quy trình tóm tắt sản xuất vắc xin PRRS trên quy mô công nghiệp. Phương pháp nuôi cấy tế bào. Phương pháp gây nhiễm, thu hoạch và chuẩn độ virus PRRS.

Phương pháp cô đặc, vô hoạt, nhũ hóa và kiểm tra sau nhũ hóa vắc xin. Kiểm tra thành phẩm vắc xin. Phương pháp IPMA (Immunoperoxidase monolayer assay): Phương pháp miễn dịch có gắn enzyme trên thảm tế bào một lớp. Phương pháp Elisa phát hiện kháng thể hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (theo TCVN 8400-21:2014).

Phương pháp phân lập virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (theo TCVN 8400-21:2014). Xử lý số liệu. Kết quả và thảo luận. Tối Ưu quá trình sản xuất kháng nguyên VIRUS PRRS trên hệ thống chai roller.

Tối ưu hóa quy trình nuôi tế bào Marc – 145 trên chai roller. Tối ưu hóa quy trình gây nhiễm, thu hoạch virus PRRS trên hệ thống chai roller. Tối ưu quá trình bất hoạt kháng nguyên sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu. Nghiên cứu quá trình cô đặc kháng nguyên.

Nghiên cứu quá trình bất hoạt kháng nguyên. Xác nhận quá trình nhũ hóa, bổ sung chất bổ trợ vắc xin. Kiểm soát trong quá trình sản xuất vắc xin PRRS vô hoạt. Kiểm nghiệm thành phẩm vắc xin.

Kiểm tra cảm quan. Kiểm tra vô trùng. Kiểm tra an toàn. Kiểm tra hiệu lực.

Kết luận và kiến nghị. 69 Tài liệu tham khảo. 70 v c DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BEI Binary Ethylenimine CPE Cytophathogenic Effect DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium DMSO Dimethyl sulfoxide DNA Deoxyribonucleic acid ĐC Đối chứng ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay FBS Fetal Bovine Serum FTM Fruit Thioglycolate Agar GMP Good Manufacturing Practices IPC In Process control IPMA Immunoperoxidase monolayer Assay NBCS Newborn Calf Serum NSP Non structural protein OD Optical Density OIE Office International des Epizooties PBS Photphat Buffer Saline PCR Polymerase Chain Reaction PRRS Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome S/P Sample/Positive SD Sabouraud dextrose agar SP Structural protein TCID50 50% Tissue Culture Infective Dose TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TN Thí nghiệm TRS Technical Report Series TSA Trypticase Soy Agar TSB Trypticase Soy Broth WHO World Health Organization XLD Xylose Lysine Deoxycholate vi c DANH MỤC BẢNG Bảng 2. Một số tên thường gặp trong các tài liệu.

Tổng hợp các ổ dịch PRRS xảy ra ở Việt Nam từ 2007-2016. Các vắc xin đã thử nghiệm sản xuất. Kết quả kiểm tra khả năng phát triển tế bào Marc – 145 trong điều kiện có 5% CO2 và không có CO2. Kết quả xác định lượng tế bào Marc-145 ra chai thích hợp.

Kết quả xác định tốc độ lăn phù hợp. Khả năng sinh trưởng tế bào Marc – 145 trên chai roller 2X. Kết quả xác định liều gây nhiễm thích hợp của virus PRRS chủng KTY-PRRS1 trên môi trường nuôi cấy tế bào. Kết quả xác định thời gian thu hoạch thích hợp của virus PRRS chủng KTY-PRRS-01 trên môi trường nuôi cấy tế bào.

Hiệu giá virus sau khi cô đặc bằng phương pháp lọc tiếp tuyến. Kiểm tra sản phẩm sau bất hoạt (bằng formaldehyde và BEI). Xác nhận quy trình bất hoạt bằng BEI. Kết quả nhũ hóa vắc xin bằng dầu khoáng ISA 201VG.

Kết quả kiểm tra vô trùng vắc xin trước khi bất hoạt. Kết quả kiểm tra hiệu giá virus trước khi bất hoạt. Kết quả kiểm tra quá trình vô hoạt virus vắc xin bằng BEI. Kết quả kiểm tra vô trùng virus vắc xin sau khi bất hoạt.

Kết quả kiểm tra vắc xin sau khi nhũ hóa. Kết quả kiểm tra vô trùng sau khi nhũ hóa. Kết quả sản xuất thử nghiệm vắc xin PRRS. Kết quả kiểm tra cảm quan vắc xin PRRS vô hoạt.

Kết quả kiểm tra vô trùng vắc xin. Kết quả kiểm tra an toàn vắc xin PRRS ở lợn thí nghiệm. Kết quả kiểm tra hàm lượng kháng thể bằng phương pháp ELISA. Kết quả kiểm tra hàm lượng kháng thể bằng phương pháp IPMA.

Kết quả đánh giá công cường độc. 66 vii c DANH MỤC HÌNH Hình 2. Bản đồ dịch tễ phân bố của PRRS tại Việt Nam từ 2007-2013. Hình ảnh về hình thái, cấu trúc của virus PRRS.

Hình ảnh về cấu trúc bộ gen của virus PRRS. Gen từ các chủng virus khác nhau. Sơ đồ sản xuất vắc xin vô hoạt phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp theo quy mô công nghiệp. Hình ảnh nuôi cấy tế bào trên chai roller 2X.

Tế bào Marc-145 qua các thời điểm. CPE virus PRRS và đối chứng. Hiệu giá kháng thể (bằng ELISA, chỉ số S/P, tiêm vắc xin thời điểm D0, D21 và thử thách cường độc thời điểm D49). Hiệu giá kháng thể (bằng phương pháp IPMA, tiêm vắc xin thời điểm D0, D21 và thử thách cường độc thời điểm D49).

Hình ảnh kiểm tra hạt nhũ hóa dưới kính hiển vi. Vắc xin PRRS vô hoạt sau chia liều. Một số hình ảnh kiểm tra vô trùng sản phẩm. Thân nhiệt lợn kiểm tra an toàn.

Kiểm tra an toàn vắc xin. Ảnh lấy máu kiểm tra kháng thể kháng VIRUS PRRS. Hình ảnh kiểm tra IPMA. Lợn trước và sau khi công cường độc.

Biến đổi thân nhiệt của lợn sau khi công cường độc. 68 viii c TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Lê Thị Xiêm Tên luận văn: Hoàn thiện quy trình sản xuất quy mô công nghiệp vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn tại công ty TNHH MTV Avac Việt Nam. Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Tên cơ sở đào tạo: Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Chúng tôi áp dụng các kết quả đã thu được từ đề tài cấp nhà nước KC.