Luận văn thạc sĩ: Hoàn thiện quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu cho lợn tại AVAC Việt Nam

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu vnua hoàn thiện quy trình sản xuất quy mô công nghiệp vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối, đánh giá hiện trạng, phân tích vấn đề, đề xuất biện

• Tác giả: Lê Thị Xiêm
• Người hướng dẫn: PGS. Nguyễn Bá Hiên
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Hoàn thiện quy trình sản xuất quy mô công nghiệp vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn tại công ty TNHH MTV Avac Việt Nam
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• MỤC LỤC
• DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 1. MỞ ĐẦU
• 1.1. Tính cấp thiết của đề tài
• 1.2. Mục tiêu nghiên cứu
• 1.3. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài
• 1.3.1. Ý nghĩa khoa học
• 1.3.2. Ý nghĩa thực tiễn
• 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• 2.1.1. Lịch sử hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp
• 2.1.2. Tình hình phân bố và lưu hành hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp tại Việt Nam
• 2.1.3. Virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• 2.1.3.1. Hình thái và cấu trúc virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• 2.1.3.2. Sức đề kháng của virus và đặc tính nuôi cấy
• 2.1.4. Bệnh học hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• 2.1.4.1. Triệu chứng lâm sàng và bệnh lý
• 2.1.4.2. Bệnh do virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn Type II thể độc lực cao
• 2.1.5. Miễn dịch đối với virus hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn
• 2.2. Vắc xin phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp
• 2.2.1. Hiểu biết chung về vắc xin
• 2.2.2. Những nguyên tắc chính để đảm bảo chất lượng trong sản xuất vắc xin, chế phẩm sinh học ở quy mô công nghiệp
• 2.2.3. Sản xuất vắc xin bằng phương pháp vô hoạt virus
• 2.2.4. Sản xuất vắc xin bằng phương pháp nhược độc virus trên môi trường tế bào
• 2.2.5. Phương pháp sản xuất vắc xin thế hệ mới
• 2.2.6. Chất bổ trợ
• 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Thời gian nghiên cứu
• 3.2. Địa điểm nghiên cứu
• 3.3. Nguyên vật liệu, đối tượng sử dụng trong nghiên cứu
• 3.3.1. Đối tượng, vật liệu
• 3.3.2. Hóa chất bất hoạt
• 3.3.3. Chất bổ trợ
• 3.3.4. Các loại dung dịch, môi trường
• 3.3.5. Trang thiết bị, dụng cụ
• 3.4. Nội dung nghiên cứu
• 3.4.1. Nghiên cứu sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn quy mô công nghiệp
• 3.4.2. Kiểm nghiệm vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn ở quy mô công nghiệp
• 4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 4.1. Quy trình tóm tắt sản xuất vắc xin PRRS trên quy mô công nghiệp
• 4.2. Phương pháp nuôi cấy tế bào
• 4.3. Phương pháp gây nhiễm, thu hoạch và chuẩn độ virus PRRS
• 4.4. Phương pháp cô đặc, vô hoạt, nhũ hóa và kiểm tra sau nhũ hóa vắc xin
• 4.5. Kiểm tra thành phẩm vắc xin
• 4.5.1. Phương pháp IPMA (Immunoperoxidase monolayer assay): Phương pháp miễn dịch có gắn enzyme trên thảm tế bào một lớp
• 4.5.2. Phương pháp Elisa phát hiện kháng thể hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (theo TCVN 8400-21:2014)
• 4.5.3. Phương pháp phân lập virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (theo TCVN 8400-21:2014)
• 4.6. Xử lý số liệu
• 5. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 5.1. Tối ưu quá trình sản xuất kháng nguyên VIRUS PRRS trên hệ thống chai roller
• 5.1.1. Tối ưu hóa quy trình nuôi tế bào Marc – 145 trên chai roller
• 5.1.2. Tối ưu hóa quy trình gây nhiễm, thu hoạch virus PRRS trên hệ thống chai roller
• 5.2. Tối ưu quá trình bất hoạt kháng nguyên sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu
• 5.2.1. Nghiên cứu quá trình cô đặc kháng nguyên
• 5.2.2. Nghiên cứu quá trình bất hoạt kháng nguyên
• 5.2.3. Xác nhận quá trình nhũ hóa, bổ sung chất bổ trợ vắc xin
• 5.3. Kiểm soát trong quá trình sản xuất vắc xin PRRS vô hoạt
• 5.3.1. Kiểm nghiệm thành phẩm vắc xin
• 5.3.1.1. Kiểm tra cảm quan
• 5.3.1.2. Kiểm tra vô trùng
• 5.3.1.3. Kiểm tra an toàn
• 5.3.1.4. Kiểm tra hiệu lực
• 6. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu tại AVAC Việt Nam

Quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng bệnh cho lợn tại AVAC Việt Nam là một trong những bước tiến quan trọng trong ngành thú y. Vắc xin này được phát triển nhằm phòng ngừa hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn, một bệnh lý nghiêm trọng gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi. Quy trình sản xuất này không chỉ đảm bảo chất lượng mà còn đáp ứng nhu cầu ngày càng cao của thị trường.

1.1. Lịch sử và sự phát triển của vắc xin vô hoạt nhũ dầu

Vắc xin vô hoạt nhũ dầu đã được nghiên cứu và phát triển từ những năm 1980, với mục tiêu chính là giảm thiểu thiệt hại do hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn. Tại Việt Nam, AVAC đã tiên phong trong việc áp dụng công nghệ sản xuất hiện đại để tạo ra sản phẩm chất lượng cao.

1.2. Tầm quan trọng của vắc xin trong chăn nuôi lợn

Vắc xin đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ sức khỏe đàn lợn, giúp giảm thiểu tỷ lệ mắc bệnh và thiệt hại kinh tế cho người chăn nuôi. Việc sử dụng vắc xin vô hoạt nhũ dầu đã chứng minh hiệu quả trong việc kiểm soát dịch bệnh.

II. Thách thức trong quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu

Mặc dù quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu tại AVAC đã đạt được nhiều thành tựu, nhưng vẫn còn nhiều thách thức cần phải vượt qua. Các vấn đề như chất lượng nguyên liệu, quy trình kiểm nghiệm và tiêu chuẩn an toàn là những yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hiệu quả của vắc xin.

2.1. Vấn đề về chất lượng nguyên liệu trong sản xuất

Chất lượng nguyên liệu đầu vào là yếu tố quyết định đến chất lượng vắc xin. Việc lựa chọn và kiểm tra nguyên liệu cần được thực hiện nghiêm ngặt để đảm bảo sản phẩm cuối cùng đạt tiêu chuẩn.

2.2. Quy trình kiểm nghiệm và tiêu chuẩn an toàn

Quy trình kiểm nghiệm vắc xin cần tuân thủ các tiêu chuẩn nghiêm ngặt để đảm bảo an toàn cho động vật. Các phương pháp kiểm nghiệm như kiểm tra vô trùng, an toàn và hiệu lực là rất cần thiết.

III. Phương pháp sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu tại AVAC

Quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu tại AVAC được thực hiện theo các bước khoa học và công nghệ hiện đại. Các phương pháp này không chỉ đảm bảo chất lượng sản phẩm mà còn tối ưu hóa quy trình sản xuất.

3.1. Quy trình nuôi cấy tế bào và thu hoạch virus

Quy trình nuôi cấy tế bào Marc-145 trên hệ thống chai roller là bước đầu tiên trong sản xuất vắc xin. Sau khi nuôi cấy, virus được thu hoạch và chuẩn độ để đảm bảo hiệu quả.

3.2. Phương pháp vô hoạt và nhũ hóa vắc xin

Vắc xin được vô hoạt bằng phương pháp hóa học và nhũ hóa bằng dầu khoáng, giúp tăng cường hiệu quả phòng bệnh. Quy trình này được thực hiện dưới sự giám sát chặt chẽ để đảm bảo an toàn.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn của vắc xin

Kết quả nghiên cứu cho thấy vắc xin vô hoạt nhũ dầu sản xuất tại AVAC đạt tiêu chuẩn về an toàn và hiệu lực. Việc áp dụng vắc xin này trong thực tiễn đã giúp giảm thiểu thiệt hại do hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn.

4.1. Đánh giá hiệu quả của vắc xin trong thực tiễn

Các thử nghiệm thực địa cho thấy vắc xin vô hoạt nhũ dầu có khả năng bảo vệ cao, giúp giảm tỷ lệ mắc bệnh và thiệt hại cho người chăn nuôi.

4.2. Tương lai của vắc xin vô hoạt nhũ dầu tại AVAC

AVAC dự kiến sẽ tiếp tục nghiên cứu và phát triển các sản phẩm vắc xin mới, nhằm đáp ứng nhu cầu ngày càng cao của thị trường và nâng cao hiệu quả phòng bệnh cho đàn lợn.

V. Kết luận về quy trình sản xuất vắc xin tại AVAC Việt Nam

Quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu tại AVAC Việt Nam đã được hoàn thiện và chứng minh hiệu quả trong việc phòng bệnh cho lợn. Đây là một bước tiến quan trọng trong ngành thú y, góp phần bảo vệ sức khỏe động vật và nâng cao hiệu quả chăn nuôi.

5.1. Tầm quan trọng của nghiên cứu và phát triển vắc xin

Nghiên cứu và phát triển vắc xin là cần thiết để đối phó với các bệnh lý mới và biến thể của virus. Điều này giúp đảm bảo an toàn cho ngành chăn nuôi.

5.2. Định hướng phát triển trong tương lai

AVAC sẽ tiếp tục đầu tư vào nghiên cứu và phát triển công nghệ sản xuất vắc xin, nhằm tạo ra các sản phẩm chất lượng cao, đáp ứng nhu cầu của thị trường trong nước và quốc tế.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Chăn nuôi lợn đóng vai trò trụ cột trong ngành nông nghiệp Việt Nam, với tổng đàn năm 2018 đạt 28,948 triệu con cung cấp 3,414 triệu tấn thịt cho thị trường. Tuy nhiên, rủi ro dịch bệnh luôn là thách thức hàng đầu, đặc biệt là hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (PRRS - bệnh tai xanh). Kể từ khi bùng phát lần đầu tiên vào ngày 12/03/2007 khiến 70.577 con lợn mắc bệnh và tiêu hủy 20.366 con, dịch bệnh đã lan rộng khắp cả nước, đỉnh điểm năm 2010 bao phủ 49 tỉnh thành. Mặc dù thị trường lưu hành 10 loại vắc xin nhưng chỉ có 01 sản phẩm vắc xin vô hoạt nhập khẩu từ Trung Quốc, trong khi chưa có đơn vị nào trong nước làm chủ công nghệ sản xuất vắc xin vô hoạt PRRS ở quy mô công nghiệp từ chủng virus thực địa Việt Nam.

Kế thừa thành công từ đề tài cấp Nhà nước KC.15/11-15 do PGS.TS Nguyễn Bá Hiên chủ nhiệm, nghiên cứu của tác giả Lê Thị Xiêm thực hiện tại Học viện Nông nghiệp Việt Nam phối hợp cùng Công ty TNHH MTV AVAC Việt Nam đã hoàn thiện quy trình công nghệ sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng PRRS ở quy mô công nghiệp 100 lít kháng nguyên/mẻ. Đề tài được triển khai từ tháng 10/2018 đến tháng 05/2019, giải quyết bài toán nâng cấp quy trình từ phòng thí nghiệm sang quy mô thương mại với sản lượng 20.000 liều/lô. Ý nghĩa thực tiễn của công trình thể hiện ở việc tạo ra dòng vắc xin đạt tỷ lệ bảo hộ 100% khi công cường độc, đáp ứng tiêu chuẩn TCVN 8685-13:2014, giúp ngành chăn nuôi chủ động nguồn vắc xin an toàn, giảm chi phí phòng dịch và kiểm soát hiệu quả biến chủng PRRS tại thực địa.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng trên nền tảng virus học phân tử và miễn dịch học thú y chuyên sâu:

• Đặc tính sinh học và cấu trúc bộ gen virus PRRS: Virus thuộc họ Arteriviridae, bộ Nidovirales, cấu trúc hạt virion hình cầu 20 mặt đối xứng với đường kính 45-55 nm và bộ gen ARN sợi đơn dương kích thước 15-15,5 Kb gồm 8 khung đọc mở (ORF1a, ORF1b, ORF2-7). Trong 20 loại protein được mã hóa, glycoprotein GP5 (mã hóa bởi ORF5) và protein phi cấu trúc Nsp2 đóng vai trò quyết định độc lực và tính biến dị kháng nguyên giữa dòng Bắc Mỹ và dòng châu Âu.
• Cơ chế đáp ứng miễn dịch và nguyên lý vắc xin vô hoạt: Khác với cơ chế ức chế interferon loại 1 bẩm sinh của virus sống, vắc xin vô hoạt sử dụng kháng nguyên virus đã bị bất hoạt chuỗi ARN bằng hóa chất Binary Ethylenimine (BEI) nhưng vẫn bảo tồn toàn vẹn cấu trúc epitope kháng nguyên bề mặt. Khi kết hợp với chất bổ trợ dầu khoáng kép Montanide ISA 201 VG tạo dạng nhũ tương nước trong dầu trong nước (W/O/W), phức hợp giúp lưu giữ và phóng thích chậm kháng nguyên, kích thích hạch lympho sản sinh nồng độ kháng thể trung hòa bền vững mà không có nguy cơ hồi lưu độc lực.
• Quy chuẩn sản xuất và kiểm soát chất lượng sinh phẩm GMP-WHO: Hệ thống thiết kế nhà xưởng tuân thủ vùng sạch phân cấp A/B, vận hành hệ thống thông khí HVAC với màng lọc vô khuẩn H13 và duy trì áp suất âm tại khu vực nuôi cấy mầm bệnh để chống lây nhiễm chéo.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn giống và vật liệu sinh học: Sử dụng chủng virus giống gốc KTY-PRRS-01 phân lập tại Việt Nam đạt hiệu giá ban đầu 3,03 x 10^6 TCID50/ml; dòng tế bào mầm thận khỉ xanh Marc-145; hóa chất bất hoạt BEI 1 mM; chất bổ trợ Montanide ISA 201 VG (Seppic, Pháp); động vật kiểm nghiệm gồm các lô 5 lợn khỏe mạnh không có kháng thể PRRS ban đầu.
• Phương pháp nuôi cấy và sản xuất sinh khối: Nhân sinh khối tế bào Marc-145 trên hệ thống chai roller 2X không sử dụng khí CO2, nuôi trong môi trường DMEM bổ sung 5% FBS ở 37°C. Thu hoạch dịch virus sau khi xuất hiện hiệu ứng biến đổi tế bào (CPE) trên 90%, cô đặc kháng nguyên qua hệ thống lọc tiếp tuyến dòng chảy ngang (TFF), tiến hành vô hoạt bằng BEI trong 24 giờ ở 37°C và trung hòa bằng Natri thiosunfat (Na2S2O3) trong 2 giờ.
• Phương pháp phân tích và kiểm nghiệm thành phẩm: Xác định chuẩn độ virus bằng công thức Spearman-Karber trên khay 96 giếng để tính chỉ số TCID50. Kiểm tra vô trùng vi khuẩn hiếu khí, kỵ khí, nấm mốc, Salmonella và Mycoplasma theo TCVN 8684:2011. Đánh giá an toàn bằng tiêm liều gấp đôi (2 liều/con) theo dõi trong 21 ngày. Đánh giá hiệu lực bằng phản ứng ELISA (TCVN 8400-21:2014) với ngưỡng dương tính S/P ≥ 0,4, phản ứng IPMA trên tế bào một lớp với ngưỡng bảo hộ ≥ 1/640, và thử thách công cường độc liều 100 TCID50 chủng KTY-PRRS-01 ở ngày thứ 70 sau mũi tiêm đầu tiên.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

• Tối ưu hóa quy trình nuôi tế bào và nhân giống virus PRRS: Mật độ tế bào Marc-145 thích hợp nhất khi ra chai roller là 1 x 10^5 cells/ml, tốc độ lăn ổn định từ 0,2 đến 0,3 rpm trong điều kiện không cấp CO2, cho phép thảm tế bào phủ kín 100% đáy chai sau 72 giờ nuôi cấy. Liều gây nhiễm tối ưu của chủng KTY-PRRS-01 là 10^4 TCID50/ml, thời điểm thu hoạch kháng nguyên đạt đỉnh cao nhất là 72 giờ sau gây nhiễm khi tỷ lệ tế bào tổn thương CPE đạt trên 90%.
• Hiệu quả cô đặc và vô hoạt kháng nguyên: Công nghệ lọc tiếp tuyến TFF giúp cô đặc dịch virus đạt hiệu giá trước bất hoạt ở mức 10^8 TCID50/liều. Quy trình bất hoạt bằng BEI nồng độ 1 mM tại 37°C trong 24 giờ tiêu diệt hoàn toàn khả năng nhân lên của virus, đạt độ vô trùng 100% và không ghi nhận tái phát hạt virus sống khi cấy truyền kiểm tra trên tế bào Marc-145 qua 3 đời liên tiếp.
• Xác nhận thông số nhũ hóa và độ ổn định hạt nhũ: Phối trộn kháng nguyên với nhũ dầu khoáng kép Montanide ISA 201 VG theo tỷ lệ thể tích 1:1 bằng máy khuấy chuyên dụng ở tốc độ 600 - 800 vòng/phút trong 20 - 30 phút tạo ra hệ nhũ tương đồng nhất màu trắng sữa, pH ổn định 6,8 - 7,2. Hạt nhũ có kích thước siêu mịn từ 1 đến 2 µm, đạt tiêu chuẩn ly tâm 3.500 vòng/phút trong 35 phút với độ phân lớp dưới 30%, giữ nguyên cấu trúc nhũ sau 24 giờ ở 37°C và 7 ngày ở 4°C.
• Kết quả kiểm nghiệm an toàn và hiệu lực bảo hộ: Thử nghiệm sản xuất thành công 03 lô vắc xin liên tiếp quy mô 20.000 liều/lô. Kiểm tra an toàn trên 5 lợn thí nghiệm với liều tiêm gấp đôi (2 liều/con) cho thấy 100% lợn sống khỏe mạnh, thân nhiệt duy trì bình thường dưới 39,5°C suốt 21 ngày theo dõi. Đánh giá miễn dịch sau 2 mũi tiêm (ngày 21 và ngày 42) ghi nhận 100% mẫu huyết thanh dương tính ELISA với chỉ số S/P ≥ 0,4 và hiệu giá kháng thể IPMA đạt mức cao ≥ 1/640. Khi tiến hành công cường độc liều 100 TCID50 ở ngày 70, 100% lợn nhóm tiêm phòng được bảo hộ hoàn toàn không phát bệnh, trong khi 100% lợn nhóm đối chứng sốt cao trên 40,5°C và xuất hiện tổn thương phổi nghiêm trọng.

Thảo luận kết quả

Cơ chế tạo đáp ứng miễn dịch vượt trội của vắc xin vô hoạt trong nghiên cứu bắt nguồn từ việc kết hợp đồng bộ giữa kháng nguyên sạch nồng độ cao (10^8 TCID50/liều) và hệ bổ trợ nhũ dầu kép Montanide ISA 201 VG. So với phương pháp bất hoạt truyền thống bằng formalin 0,3% thường làm biến tính cấu trúc không gian của glycoprotein vỏ ngoài, hóa chất BEI tác động chọn lọc lên liên kết alkyl hóa của chuỗi ARN, giữ nguyên vẹn tính sinh miễn dịch tự nhiên của protein GP5 và nucleocapsid N.

Động học miễn dịch của đàn lợn tiêm phòng có thể được biểu diễn rõ nét qua biểu đồ đường nồng độ kháng thể theo thời gian: chỉ số ELISA tăng dần từ sau mũi 1 (D21) và bứt phá mạnh mẽ sau mũi 2 (D42), đạt đỉnh ở ngày D70 trùng khớp với thời điểm thử thách công cường độc. Sự tương quan thuận giữa hiệu giá IPMA (≥ 1/640) và tỷ lệ bảo hộ sống sót 100% khẳng định tính chính xác của phương pháp đánh giá in vitro thay thế. So sánh với các nghiên cứu nuôi cấy tĩnh trong bình T-flask trước đây, việc áp dụng hệ thống chai roller 2X quy mô 100 lít/mẻ đã gia tăng năng suất sinh khối virus lên gấp 3,5 lần trên cùng một đơn vị diện tích bề mặt, giảm 40% chi phí môi trường huyết thanh và đảm bảo chất lượng đồng nhất giữa các lô sản xuất theo chuẩn GMP.

Đề xuất và khuyến nghị

• Ứng dụng quy trình chuẩn vào sản xuất công nghiệp: Công ty TNHH MTV AVAC Việt Nam và các cơ sở sản xuất vắc xin thú y cần áp dụng ngay bộ thông số vận hành chuẩn (tế bào Marc-145 mật độ 1 x 10^5 cells/ml, tốc độ quay chai roller 0,2 - 0,3 rpm, bất hoạt BEI 1 mM trong 24 giờ ở 37°C) để duy trì quy mô 20.000 - 50.000 liều/mẻ ổn định trong giai đoạn 2020-2022.
• Triển khai khảo nghiệm diện rộng trên thực địa: Cục Thú y phối hợp cùng nhóm nghiên cứu tổ chức thử nghiệm lâm sàng trên tối thiểu 10.000 lợn nái và lợn thịt tại các vùng chăn nuôi tập trung ở miền Bắc và miền Nam nhằm hoàn thiện hồ sơ đăng ký lưu hành vắc xin thương mại cấp quốc gia trong thời hạn 12 tháng.
• Khuyến nghị phác đồ tiêm chủng cho trang trại: Các bác sĩ thú y và chủ trại lợn cần áp dụng lịch tiêm phòng 2 mũi: mũi 1 cho lợn con lúc 21 ngày tuổi và mũi 2 nhắc lại lúc 42 ngày tuổi để đảm bảo lợn đạt hiệu giá kháng thể bảo hộ tối ưu trước giai đoạn 70 ngày tuổi - thời điểm đàn lợn dễ bị đe dọa bởi virus PRRS thực địa nhất.
• Kiểm soát nghiêm ngặt chỉ tiêu IPC trong sản xuất: Nhà máy sản xuất cần duy trì hệ thống kiểm soát chất lượng trong quá trình theo GMP-WHO, bắt buộc kiểm tra độ vô trùng trên 5 môi trường thạch vi sinh chuyên biệt và soi kích thước hạt nhũ 1 - 2 µm dưới kính hiển vi độ phóng đại 400 lần trước khi đóng chai chia liều.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

• Doanh nghiệp sản xuất vắc xin và dược phẩm thú y: Tìm thấy cẩm nang công nghệ hoàn chỉnh để mở rộng quy mô sản xuất vắc xin nhũ dầu từ quy mô phòng thí nghiệm lên quy mô công nghiệp 100 lít/mẻ với các tiêu chuẩn thiết bị TFF, tank nhũ hóa và đóng lọ vô trùng.
• Giảng viên, nhà nghiên cứu và học viên sau đại học ngành Thú y: Sử dụng tài liệu như một công trình mẫu mực về phương pháp nghiên cứu virus học, kỹ thuật chuẩn độ Spearman-Karber, đánh giá kháng thể qua ELISA và IPMA theo tiêu chuẩn TCVN 8685-13:2014.
• Bác sĩ thú y và chuyên gia phòng chống dịch bệnh động vật: Nắm vững đặc tính dịch tễ của chủng PRRS dòng Bắc Mỹ biến chủng tại Việt Nam để xây dựng quy trình an toàn sinh học và phác đồ phối hợp vắc xin vô hoạt cho đàn lợn nái sinh sản.
• Chủ trang trại và nhà quản lý chăn nuôi lợn quy mô công nghiệp: Hiểu rõ cơ chế an toàn tuyệt đối của vắc xin vô hoạt nhũ dầu trong việc bảo vệ đàn lợn nái không bị sảy thai và nâng cao tỷ lệ sống của lợn con sau cai sữa.

Câu hỏi thường gặp

• Vắc xin vô hoạt nhũ dầu PRRS có ưu thế gì vượt trội so với vắc xin sống nhược độc? Vắc xin vô hoạt an toàn tuyệt đối 100% do virus đã bị tiêu diệt hoàn toàn bởi BEI 1 mM, không có nguy cơ bài thải mầm bệnh ra môi trường hay tái độc lực gây dịch. Nhờ chất bổ trợ dầu khoáng kép Montanide ISA 201 VG, vắc xin tạo miễn dịch kéo dài, rất an toàn khi tiêm cho lợn nái mang thai và đàn lợn giống hậu bị.

• Tại sao nghiên cứu sử dụng hóa chất bất hoạt BEI thay cho Formaldehyde truyền thống? BEI nồng độ 1 mM tác động chọn lọc vào chuỗi ARN của virus trong 24 giờ ở 37°C mà không làm biến tính các kháng nguyên bề mặt GP5 và M. Formaldehyde 0,3% dễ làm thay đổi cấu trúc không gian của epitope, làm giảm tính sinh miễn dịch đặc hiệu của hạt virion sau khi nhũ hóa.

• Nuôi cấy tế bào Marc-145 trên chai roller không dùng khí CO2 có ảnh hưởng đến chất lượng kháng nguyên không? Không ảnh hưởng. Bằng việc sử dụng hệ đệm Hepes và điều chỉnh môi trường DMEM 5% FBS thích hợp, tế bào Marc-145 phát triển đồng đều tạo lớp đơn bào kín 100% bề mặt ở tốc độ lăn 0,2 - 0,3 rpm, giúp tiết kiệm chi phí hệ thống cấp khí CO2 công nghiệp mà vẫn thu được hiệu giá virus cao 10^8 TCID50/liều.

• Quy chuẩn kiểm nghiệm độ vô trùng của vắc xin thành phẩm được tiến hành như thế nào? Theo TCVN 8684:2011, mẫu vắc xin được cấy trên 5 loại môi trường: TSB/TSA kiểm tra vi khuẩn hiếu khí, FTM kiểm tra vi khuẩn kỵ khí, Sabouraud kiểm tra nấm mốc, XLD/Selenit kiểm tra Salmonella, và canh thang PPLO kiểm tra Mycoplasma trong 14 - 28 ngày, bảo đảm không có bất kỳ vi sinh vật nào mọc.

• Phương pháp IPMA đánh giá kháng thể PRRS có độ tin cậy ra sao so với phương pháp ELISA? Cả hai phương pháp bổ trợ chặt chẽ cho nhau. ELISA phát hiện nhanh kháng thể gắn kết tổng số với ngưỡng dương tính S/P ≥ 0,4, trong khi IPMA nhuộm màu hóa mô miễn dịch trực tiếp trên tế bào một lớp cho biết chuẩn xác hiệu giá kháng thể trung hòa với mức bảo hộ thực địa đạt từ 1/640 trở lên.

Kết luận

• Hoàn thiện thành công quy trình công nghệ sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn quy mô công nghiệp 100 lít kháng nguyên/mẻ tại Công ty TNHH MTV AVAC Việt Nam.
• Xác lập chuẩn hóa các thông số kỹ thuật then chốt: mật độ gieo tế bào Marc-145 đạt 1 x 10^5 cells/ml trên chai roller 2X với tốc độ lăn 0,2 - 0,3 rpm không CO2; liều gây nhiễm chủng KTY-PRRS-01 đạt 10^4 TCID50/ml; thời gian thu hoạch chuẩn sau 72 giờ.
• Làm chủ quy trình cô đặc TFF đạt hiệu giá 10^8 TCID50/liều, vô hoạt hoàn toàn bằng BEI 1 mM trong 24 giờ ở 37°C và nhũ hóa tỷ lệ 1:1 bằng dầu khoáng kép Montanide ISA 201 VG cho hạt nhũ kích thước 1 - 2 µm bền vững.
• Sản xuất thử nghiệm thành công 03 lô vắc xin đạt 20.000 liều/lô, đáp ứng hoàn hảo các tiêu chuẩn TCVN 8685-13:2014 về cảm quan, vô trùng, an toàn tuyệt đối và bảo hộ 100% đàn lợn trước thử thách công cường độc.
• Kêu gọi các đơn vị quản lý nông nghiệp và doanh nghiệp thú y đẩy mạnh hoàn thiện thủ tục đăng ký lưu hành thương phẩm, đưa vắc xin vào mạng lưới thú y cơ sở nhằm bảo vệ bền vững ngành chăn nuôi lợn Việt Nam.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ THỊ XIÊM HOÀN THIỆN QUY TRÌNH SẢN XUẤT QUY MÔ CÔNG NGHIỆP VẮC XIN VÔ HOẠT NHŨ DẦU PHÒNG HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH SẢN VÀ HÔ HẤP Ở LỢN TẠI CÔNG TY TNHH MTV AVAC VIỆT NAM Chuyên Ngành: Thú Y Mã Số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Nguyễn Bá Hiên NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày … tháng.

năm 2019 Tác giả luận văn Lê Thị Xiêm i LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Bá Hiên đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám Đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Vi sinh Vật – Truyền nhiễm, Khoa Thú y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán bộ công nhân viên tại công ty TNHH một thành viên Avac Việt Nam đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài.

Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày … tháng. năm 2019 Tác giả luận văn Lê Thị Xiêm ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục.

iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng. vii Danh mục hình. viii Trích yếu luận văn.

ix Thesis abstract. Tính cấp thıết của đề tàı. Mục tıêu nghıên cứu. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài.

Ý nghĩa khoa học. Ý nghĩa thực tiễn. Tổng quan tài liệu. Hội chứng rối loạn sınh sản và hô hấp ở lợn.

Lịch sử hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp. Tình hình phân bố và lưu hành hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp tại tại Việt Nam. Vırus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn. Hình thái và cấu trúc virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn.

Sức đề kháng của virus và đặc tính nuôi cấy. Bệnh học hộı chứng rốı loạn sınh sản và hô hấp ở lợn. Triệu chứng lâm sàng và bệnh lý. Bệnh do virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn Type II thể độc lực cao.

Miễn dịch đối với virus hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn. Vắc xın phòng hộı chứng rốı loạn sınh sản và hô hấp. Hiểu biết chung về vắc xin. 12 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.