Nghiên cứu xây dựng quy trình phát hiện bệnh dịch tả lợn Châu Phi (ASF) trên đa dạng nền mẫu sử dụng kỹ thuật real-time PCR

Việc phát hiện ASF sớm là yếu tố then chốt để kiểm soát dịch bệnh. Chẩn đoán nhanh chóng giúp ngăn chặn sự lây lan sang các đàn lợn khỏe mạnh khác. Theo nghiên cứu, việc phát hiện sớm và áp dụng các biện pháp kiểm soát kịp thời có thể giảm thiểu thiệt hại kinh tế do ASF gây ra. Real-time PCR cho phép phát hiện virus ASF ngay cả khi tải lượng virus còn thấp, giúp phát hiện bệnh ở giai đoạn sớm, trước khi các triệu chứng lâm sàng rõ ràng xuất hiện.

Kỹ thuật Real-time PCR có nhiều ưu điểm so với các phương pháp chẩn đoán truyền thống. Nó có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, cho phép phát hiện chính xác virus ASF mà không gây nhầm lẫn với các bệnh khác. Real-time PCR cũng cho kết quả nhanh chóng, thường chỉ trong vài giờ, giúp các nhà nghiên cứu và chuyên gia thú y đưa ra quyết định nhanh chóng. Ngoài ra, Real-time PCR có thể định lượng DNA virus ASF, cung cấp thông tin quan trọng về tải lượng virus trong mẫu bệnh phẩm.

Sự đa dạng di truyền của virus ASF là một thách thức lớn trong việc phát triển các xét nghiệm PCR hiệu quả. Các biến chủng khác nhau của virus ASF có thể có trình tự gen khác nhau, đặc biệt là ở các vùng gen được sử dụng làm mục tiêu cho mồi (primer) PCR và thăm dò (probe) PCR. Điều này có thể dẫn đến kết quả âm tính giả nếu mồi (primer) PCR và thăm dò (probe) PCR không khớp hoàn toàn với trình tự gen của virus ASF trong mẫu bệnh phẩm.

Độ nhạy và độ đặc hiệu của xét nghiệm PCR có thể bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố, bao gồm chất lượng mẫu bệnh phẩm, quy trình tách chiết DNA virus ASF, và sự hiện diện của các chất ức chế PCR trong mẫu bệnh phẩm. Mẫu bệnh phẩm kém chất lượng có thể chứa ít DNA virus ASF, dẫn đến kết quả âm tính giả. Các chất ức chế PCR có thể làm giảm hiệu quả của phản ứng PCR, dẫn đến kết quả âm tính giả hoặc dương tính giả.

Việc thu thập và xử lý mẫu bệnh phẩm ASF đúng cách là rất quan trọng để đảm bảo độ tin cậy của xét nghiệm PCR. Mẫu bệnh phẩm nên được thu thập từ các cơ quan có tải lượng virus cao, chẳng hạn như hạch bạch huyết, lách, và máu. Mẫu bệnh phẩm nên được bảo quản đúng cách để ngăn chặn sự phân hủy của DNA virus ASF. Quy trình tách chiết DNA virus ASF nên được tối ưu hóa để loại bỏ các chất ức chế PCR và thu được DNA virus ASF tinh khiết.

Việc lựa chọn mồi (primer) PCR và thăm dò (probe) PCR đặc hiệu là rất quan trọng để đảm bảo độ đặc hiệu của xét nghiệm PCR. Mồi (primer) PCR và thăm dò (probe) PCR nên được thiết kế để khớp hoàn toàn với trình tự gen của virus ASF và không khớp với trình tự gen của các virus khác. Nghiên cứu này sử dụng mồi (primer) PCR và thăm dò (probe) PCR được khuyến cáo bởi Tổ chức Thú y Thế giới (OIE) để đảm bảo độ tin cậy của xét nghiệm PCR.

Điều kiện phản ứng Real-time PCR cần được tối ưu hóa để tăng độ nhạy của xét nghiệm PCR. Các yếu tố cần được tối ưu hóa bao gồm nồng độ mồi (primer) PCR và thăm dò (probe) PCR, nồng độ enzyme PCR, nhiệt độ ủ, và thời gian ủ. Nghiên cứu này sử dụng phương pháp thiết kế thí nghiệm để tối ưu hóa điều kiện phản ứng Real-time PCR.

Việc sử dụng kiểm soát dương tính PCR và kiểm soát âm tính PCR là rất quan trọng để đảm bảo tính chính xác của xét nghiệm PCR. Kiểm soát dương tính PCR chứa DNA virus ASF và được sử dụng để đảm bảo rằng phản ứng PCR hoạt động đúng cách. Kiểm soát âm tính PCR không chứa DNA virus ASF và được sử dụng để phát hiện sự nhiễm bẩn trong quá trình thực hiện xét nghiệm PCR.

Độ nhạy và độ đặc hiệu của xét nghiệm PCR được đánh giá trong phòng thí nghiệm bằng cách sử dụng các mẫu DNA virus ASF có nồng độ khác nhau và các mẫu DNA từ các virus khác. Kết quả cho thấy xét nghiệm PCR có độ nhạy cao, có thể phát hiện DNA virus ASF ở nồng độ thấp, và có độ đặc hiệu cao, không phát hiện DNA từ các virus khác.

Tỷ lệ lưu hành Dịch Tả Lợn Châu Phi được xác định bằng cách xét nghiệm các mẫu bệnh phẩm từ lợn nghi nhiễm ASF bằng xét nghiệm PCR. Kết quả cho thấy tỷ lệ lưu hành Dịch Tả Lợn Châu Phi trong khu vực là [tỷ lệ phần trăm], cho thấy ASF là một vấn đề nghiêm trọng trong khu vực.

Các yếu tố nguy cơ lây nhiễm ASF được phân tích bằng cách thu thập thông tin về các yếu tố như điều kiện chăn nuôi, nguồn gốc lợn, và biện pháp phòng ngừa dịch bệnh. Kết quả cho thấy các yếu tố nguy cơ lây nhiễm ASF bao gồm điều kiện chăn nuôi kém, mua lợn từ các nguồn không rõ ràng, và không thực hiện các biện pháp phòng ngừa dịch bệnh đầy đủ. Các biện pháp phòng ngừa ASF bao gồm cải thiện điều kiện chăn nuôi, mua lợn từ các nguồn đáng tin cậy, và thực hiện các biện pháp phòng ngừa dịch bệnh đầy đủ.

Để cải thiện quy trình xét nghiệm nhanh ASF trong tương lai, cần tập trung vào việc phát triển các xét nghiệm PCR có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn, đồng thời giảm thiểu thời gian thực hiện xét nghiệm. Các nghiên cứu trong tương lai cũng nên tập trung vào việc phát triển các phương pháp phát hiện virus ASF tại chỗ, giúp các nhà nghiên cứu và chuyên gia thú y đưa ra quyết định nhanh chóng.

Giải trình tự gen ASF có thể được sử dụng để giám sát dịch tễ học ASF, giúp các nhà nghiên cứu và chuyên gia thú y theo dõi sự lây lan của virus ASF và xác định nguồn gốc của các ổ dịch. Giải trình tự gen ASF cũng có thể được sử dụng để phát hiện các biến chủng mới của virus ASF, giúp các nhà nghiên cứu và chuyên gia thú y phát triển các biện pháp phòng chống dịch bệnh hiệu quả hơn.