Nghiên Cứu Phản Ứng Thủy Phân Bằng Enzyme Định Hướng Tổng Hợp Taxol

Luận văn thạc sĩ kỹ thuật phân tích công nghệ hóa học nghiên cứu phản ứng thủy phân bằng enzyme định hướng tổng hợp taxol, đánh giá thực trạng, chỉ ra hạn chế, đề xuất giải pháp

• Tác giả: Ngô Thị Mỹ Huệ
• Người hướng dẫn: TS. Tống Thanh Danh
• Trường học: Đại học Quốc gia TP.HCM Trường Đại học Bách Khoa
• Chuyên ngành: Công nghệ hóa học
• Đề tài: Nghiên Cứu Phản Ứng Thủy Phân Bằng Enzyme Định Hướng Tổng Hợp Taxol
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2014
• Địa điểm: Thành phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• 1. CHƯƠNG 1: KHÁI QUÁT VỀ HỢP CHẤT PACLITAXEL
• 1.1. Bán tổng hợp Taxol từ 10 — DAB
• 1.2. Một số phương pháp tổng hợp taxol side chain
• 1.3. Phản ứng thủy phân bằng enzyme trong bán tổng hợp taxol
• 1.3.1. Giới thiệu chung về LIPASE
• 1.3.2. Giới thiệu lipase PCL, PFL
• 1.3.3. Cấu trúc và cơ chế phản ứng của lipase
• 1.3.4. Phân giải động học với PCL, PFL
• 1.3.5. Một số phản ứng tổng hợp mạch nhánh có sử dụng enzymelipase
• 1.4. Sinh tổng hợp taxol
• 2. CHƯƠNG 2: NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
• 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
• 2.2. NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ
• 2.2.1. Nguyên liệu hóa chất và dung môi
• 2.2.2. Dụng cụ và thiết bị
• 2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.3.1. Phương pháp sắc ký bản mỏng (TLC)
• 2.3.2. Phổ hồng ngoại IR
• 2.3.3. Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 'H NMR
• 2.3.4. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
• 2.3.5. Xác định góc quay cực
• 2.3.6. Xác định đồng phân đối quang và định danh cấu hình R, S
• 2.3.7. Xác định độ tinh khiết quang học
• 3. CHƯƠNG 3: PHẢN ỨNG TỔNG HỢP
• 3.1. Phản ứng tổng hợp N - Benzylidene - P- Methoxy Aniline
• 3.2. Phản ứng tổng hợp (+) CIS- 1— P— Methoxyphenyl - 3— Acetoxy - 4— Phenylazetidin - 2 - One (Beta — Lactam)
• 3.3. Phản ứng thủy phân (+) CIS - 1- P-Methoxyphenyl - 3— Acetoxy - 4— Phenylazetidin - 2 - One (Beta - Lactam)
• 3.4. Phản ứng tổng hợp (-) CIS- 3(R) - Acetoxy - 4(S) — Phenylazetidin - 2 — One (Beta — Lactam 2A)
• 3.5. Phản ứng tổng hợp CIS- 3 — Hydroxyl — 4— Phenylazetidin - 2 - One (Beta — Lactam 2B)
• 3.6. Phản ứng tổng hợp (+)-CIS - 3(R) - Hydroxyl - 4(S) - Phenylazetidin - 2 - One (Beta — Lactam 3A)
• 3.7. Phản ứng tổng hợp CIS - 3 - (1- Ethoxyethoxy) - 4— Phenylazetidin - 2 — One (Beta — Lactam 4A)
• 3.8. Phản ứng tổng hợp CIS-1 - Benzoyl - 3 - (1 - Ethoxyethoxy) - 4 —Phenylazetidin - 2 — One (Beta — Lactam 5A)
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
• 4.1. Phản ứng tổng hợp N - Benzylidene — P- Methoxy Aniline
• 4.2. Phản ứng tổng hợp (+) CIS - 1—- P-Methoxyphenyl -3 — Acetoxy - 4— Phenylazetidin - 2 — One (Beta — Lactam)
• 4.3. Phản ứng thủy phân (+) CIS — 1- P-Methoxyphenyl -3 — Acetoxy - 4— Phenylazetidin - 2 — One (Beta - Lactam)
• 4.4. Sản phẩm tạo thành beta — lactam 1A: (+) — cis — 1 — (p — methoxyphenyl) — 3 — acetoxy — 4 — phenylazetidin — 2 — One
• 4.5. Sản phẩm tạo thành beta — lactam 1B: (-) — cis— 1 — (p — methoxyphenyl) — 3 — hydroxy — 4 — phenylazetidin — 2 — One
• 4.6. Phản ứng tổng hợp (-) - CIS — 3(R) - Acetoxy - 4(S) — Phenylazetidin - 2 — One (Beta — Lactam 2A)
• 4.7. Phản ứng tổng hợp CIS- 3 — Hydroxyl — 4— Phenylazetidin - 2 - One (Beta — Lactam 2B)
• 4.8. Phản ứng tổng hợp (+) - CIS - 3(R) - Hydroxyl - 4(S) - Phenylazetidin - 2 - One (Beta — Lactam 3A)
• 4.9. Phản ứng tổng hợp CIS - 3- (1 - Ethoxyethoxy) - 4- Phenylazetidin - 2 — One (Beta — Lactam 4A)
• 4.10. Phản ứng tổng hợp CIS — 1-Benzoil - 3 - (1 - Ethoxyethoxy) - 4 — Phenylazetidin - 2 — One (Beta — Lactam 5A)
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Nghiên Cứu Phản Ứng Thủy Phân Enzyme Taxol

Paclitaxel, thường được biết đến với tên thương mại Taxol, là một hợp chất tự nhiên có hoạt tính chống ung thư, ban đầu được chiết xuất từ vỏ cây thông đỏ Thái Bình Dương (Taxus brevifolia). Do nhu cầu taxol ngày càng tăng trong điều trị ung thư buồng trứng và ung thư vú, nguồn cung cấp từ tự nhiên trở nên khan hiếm. Điều này thúc đẩy các nhà nghiên cứu tìm kiếm các phương pháp tổng hợp taxol hiệu quả hơn, bao gồm bán tổng hợp từ tiền chất sinh tổng hợp 10-deacetylbaccatin III (10-DAB). Các phương pháp điều chế lập thể các hợp chất trung gian Beta-lactam cũng như sản phẩm taxol cuối cùng đã trở thành chủ đề nghiên cứu trong lĩnh vực sinh học và hóa học. Ưu điểm lớn của enzyme so với chất xúc tác hóa học là độ chọn lọc cao, kể cả độ chọn lọc lập thể, chọn lọc hóa học và chọn lọc vùng. Vì vậy, việc lựa chọn enzyme cho quá trình phân tách các hỗn hợp đồng phân đối quang của hợp chất trung gian Beta-lactam là hữu ích trong điều chế taxol. Mục tiêu của nghiên cứu này là tìm hiểu về quy trình phản ứng thủy phân bằng enzyme định hướng tổng hợp taxol.

1.1. Giới Thiệu Về Hợp Chất Paclitaxel Taxol

Paclitaxel (Taxol) là một diterpenoid tự nhiên, ban đầu được chiết xuất từ cây thông đỏ Thái Bình Dương, nổi tiếng với hoạt tính chống ung thư. Nó có cơ chế tác động độc đáo lên quá trình hình thành vi ống (microtubule) của tế bào. Do có giá trị kinh tế cao, các loài thông đỏ này bị lạm dụng khai thác làm cho nguồn dược liệu thiên nhiên này ngày càng trở nên khan hiếm. Trong những thập niên qua, các nhà nghiên cứu đã không ngừng nghiên cứu tổng hợp nên paclitaxel bằng nhiều con đường khác nhau nhằm tìm ra con đường bán tổng hợp mới hơn, ngăn hơn cũng như tạo ra những hoạt chất mới dựa trên paclitaxel có hoạt tính sinh học cao hơn, dễ tổng hợp hơn và hiệu quả kinh tế cao hơn.

1.2. Cấu Trúc Hóa Học Đặc Trưng Của Taxol

Về mặt hóa học, taxol được phân loại như một diterpenoid taxane với bộ khung gồm 20 cacbon xuất phát từ geranylgeraniol pyrophosphate. Đặc trưng cấu trúc bao gồm một lõi tetracyclic baccatin III và một phần đuôi amide. Sự hiện diện của chuỗi taxol side chain là một yếu tố quan trọng và cần thiết trong hoạt động cấu trúc của Taxol. Hóa lập thể ở vị trí 2’R, 3’S của các nhóm thế hydroxyl và nhóm phenyl ở các vị trí C-2’ và C-3’ đều rất cần thiết cho hoạt động cấu trúc.

II. Thách Thức Trong Tổng Hợp Taxol Vấn Đề Chọn Lọc Đối Phân

Quá trình tổng hợp taxol, dù là tổng hợp toàn phần hay bán tổng hợp, thường gặp phải vấn đề về độ chọn lọc đối phân. Hầu hết các sản phẩm tổng hợp được đều là hỗn hợp các đồng phân đối quang (racemic) và lập thể. Điều này có ảnh hưởng đáng kể đến hoạt tính sinh học của sản phẩm. Phương pháp điều chế lập thể của các hợp chất trung gian Beta-lactam cũng như các sản phẩm taxanes cuối cùng đã trở thành chủ đề nghiên cứu trong cả lĩnh vực sinh học lẫn hoá học. Do đó, việc tìm kiếm các phương pháp tổng hợp có độ chọn lọc cao là vô cùng quan trọng. Enzyme nổi lên như một giải pháp tiềm năng, thay thế các xúc tác hóa học truyền thống vốn tiềm ẩn nhiều rủi ro về môi trường và chi phí.

2.1. Giới Hạn Của Xúc Tác Hóa Học Truyền Thống

Việc sử dụng xúc tác hóa học trong chọn lọc đối phân thường gặp phải các vấn đề như độc hại với môi trường, chi phí cao, và độ chọn lọc không cao. Xúc tác hóa học thường đòi hỏi điều kiện phản ứng khắc nghiệt như nhiệt độ và áp suất cao, gây ảnh hưởng đến môi trường. Do đó, cần có những giải pháp tổng hợp thân thiện với môi trường hơn.

2.2. Ưu Điểm Vượt Trội Của Enzyme Trong Tổng Hợp Hữu Cơ

Các xúc tác sinh học, chẳng hạn như enzyme, có thể hoạt động ở điều kiện bình thường, không đòi hỏi nhiệt độ hay áp suất lớn, tránh những tác động có hại cho môi trường. Ưu điểm lớn của enzyme so với chất xúc tác hóa học là độ chọn lọc cao kể cả độ chọn lọc lập thể (stereoselectivety), chọn lọc hóa học (chemoselectivity) và chọn lọc vùng (regioselectivity). Do đó, việc lựa chọn enzyme cho quá trình phân tách các hỗn hợp đồng phân đối quang của hợp chất trung gian Beta-lactam là hữu ích trong điều chế taxol.

III. Phản Ứng Thủy Phân Enzyme Định Hướng Tổng Hợp Taxol

Nghiên cứu này tập trung vào việc sử dụng enzyme lipase để thực hiện phản ứng thủy phân chọn lọc đối phân của các dẫn xuất beta-lactam, tiền chất quan trọng trong tổng hợp taxol. Cụ thể, enzyme Lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia và Lipase Amano AK từ Pseudomonas fluorescens được sử dụng để xúc tác quá trình thủy phân hỗn hợp racemic ester của các dẫn xuất đôi phân 3 — hydroxy — 4 — phenyl của vòng beta — lactam. Quá trình nghiên cứu đã thực hiện các phản ứng tổng hợp các hợp chất cần thiết để thu nhận mạch nhánh chuỗi taxol side chain.

3.1. Vai Trò Của Lipase Trong Phản Ứng Enzyme

Lipase là một loại enzyme có khả năng xúc tác phản ứng thủy phân este, triglyceride, và các hợp chất lipid khác. Trong tổng hợp hữu cơ, lipase được sử dụng rộng rãi để thực hiện các phản ứng chọn lọc đối phân, chuyển este, và các phản ứng khác. Enzyme lipase có độ ổn định cao và có thể hoạt động trong nhiều môi trường khác nhau.

3.2. Cơ Chế Phản Ứng Thủy Phân Với Xúc Tác Lipase

Cơ chế phản ứng thủy phân với xúc tác lipase thường diễn ra theo cơ chế bi-bi ping-pong, trong đó enzyme tạo phức với cơ chất, sau đó chuyển nhóm acyl từ cơ chất sang enzyme, tạo thành phức enzyme-acyl. Tiếp theo, nước tấn công phức enzyme-acyl, giải phóng axit béo và tái tạo lại enzyme. Do đó, việc lựa chọn enzyme cho quá trình phân tách các hỗn hợp đồng phân đối quang của hợp chất trung gian Beta — lactam là hữu ích trong điều chế taxol

3.3. Quy Trình Thực Nghiệm Thủy Phân Enzyme Beta Lactam

Nghiên cứu tập trung vào quy trình tổng hợp Imine làm nguyên liệu để tổng hợp hợp chất beta-lactam. Tiếp theo là nghiên cứu quá trình tổng hợp hợp chất Beta-lactam – tiền chất tổng hợp nên taxol. Sau đó, nghiên cứu quá trình thủy phân Beta-lactam bằng enzyme để tách hỗn hợp raxemic thành hai đồng phân đối quang, đồng thời tối ưu hoá các điều kiện phản ứng thủy phân để đạt hiệu suất cao nhất. Cuối cùng là nghiên cứu một số các phản ứng tổng hợp mạch nhánh của phân tử paclitaxel.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Đánh Giá Khả Năng Enzyme trong Tổng Hợp Taxol

Kết quả nghiên cứu cho thấy enzyme Lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia có khả năng tổng hợp đối với chất cao hơn enzyme Lipase Amano AK từ Pseudomonas fluorescens. Sự phân tách chọn lọc đối phân là bước trung gian quan trọng trong tổng hợp mạch nhánh chuỗi side chain C — 13 định hướng tổng hợp nên paclitaxel. Tuy nhiên, hiệu suất và độ chọn lọc của phản ứng còn phụ thuộc vào nhiều yếu tố như loại enzyme, dung môi, nhiệt độ và thời gian phản ứng. Cần có những nghiên cứu sâu hơn để tối ưu hóa các điều kiện phản ứng và nâng cao hiệu quả của quá trình tổng hợp.

4.1. So Sánh Hiệu Quả Giữa Lipase Amano PS và Amano AK

Kết quả cho thấy do tính đặc hiệu liên kết, enzyme Lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia có khả năng tổng hợp đối với chất cao hơn enzyme Lipase Amano AK từ Pseudomonas fluorescens. Sự phân tách chọn lọc đối phân là bước trung gian quan trọng trong tổng hợp mạch nhánh chuỗi side chain C — 13 định hướng tổng hợp nên paclitaxel.

4.2. Các Yếu Tố Ảnh Hưởng Đến Hiệu Suất Phản Ứng

Hiệu suất của phản ứng phụ thuộc vào nhiều yếu tố như tỉ lệ enzyme, thời gian, loại dung môi và nhiệt độ. Nghiên cứu này đã kiểm tra cấu trúc và độ tinh khiết của các hợp chất tổng hợp được bằng các phương pháp phân tích hóa lý hiện đại như phố hồng ngoại IR, phố khối MS, phố cộng hưởng từ hạt nhân từ 'H NMR, sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), góc quay cực, nhiệt độ nóng chảy.

4.3. Phân Tích Sản Phẩm Thủy Phân Enzyme Beta Lactam

Quá trình nghiên cứu đã thực hiện các phản ứng tổng hợp các hợp chất cần thiết để thu nhận mạch nhánh chuỗi taxol side chain, cụ thể là (+) — cis — 1 — (p- methoxyphenyl) — 3 — acetoxy — 4 — phenylazetidin — 2 — one, (+) — cis — 1 — (p — methoxyphenyl) — 3 — acetoxy — 4 — phenylazetidin — 2 — one, (-) — cis — I — (p — methoxyphenyl) — 3 — hydroxyl — 4 — phenylazetidin — 2 — one, (-) — cis — 3(R) — acetoxy — 4(S) — phenylazetidin — 2 — one, (+) — cis — 3(R) — hydroxyl — 4(S) — phenylazetidin — 2 — one, cis — 3 — (1 — ethoxyethoxy) — 4 — phenyllazetidin — 2 — one, cis—1 — benzoyl — 3 — (1 — ethoxyethoxy) — 4 — phenyllazetidin — 2 — one.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn Của Nghiên Cứu Enzyme Trong Dược Phẩm

Nghiên cứu này mở ra hướng đi tiềm năng cho việc ứng dụng enzyme trong tổng hợp dược phẩm, đặc biệt là trong sản xuất các hợp chất phức tạp như taxol. Việc sử dụng enzyme không chỉ giúp tăng độ chọn lọc của phản ứng mà còn giảm thiểu tác động đến môi trường. Từ đó, tạo ra quy trình sản xuất dược phẩm an toàn và bền vững hơn. Tuy nhiên, cần có những nghiên cứu sâu hơn để tối ưu hóa quy trình tổng hợp và giảm chi phí sản xuất.

5.1. Tiềm Năng Thương Mại Hóa Quy Trình Tổng Hợp

Ứng dụng enzyme có tiềm năng trong việc giảm chi phí sản xuất các chất dược phẩm, đặc biệt là trong sản xuất các hợp chất phức tạp như taxol. Việc sử dụng enzyme không chỉ giúp tăng độ chọn lọc của phản ứng mà còn giảm thiểu tác động đến môi trường.

5.2. Nghiên Cứu Mở Rộng Tạo Ra Các Dẫn Xuất Taxol Mới

Nghiên cứu mở rộng có thể tập trung vào việc tạo ra các dẫn xuất taxol mới có hoạt tính sinh học cao hơn và ít tác dụng phụ hơn. Enzyme có thể được sử dụng để thực hiện các phản ứng biến đổi hóa học trên phân tử taxol, tạo ra các dẫn xuất mới với cấu trúc và tính chất khác nhau.

VI. Kết Luận Hướng Phát Triển Nghiên Cứu Tổng Hợp Taxol

Nghiên cứu về phản ứng thủy phân bằng enzyme định hướng tổng hợp taxol đã cho thấy tiềm năng to lớn của enzyme trong việc giải quyết vấn đề chọn lọc đối phân trong tổng hợp hữu cơ. Tuy nhiên, vẫn còn nhiều thách thức cần vượt qua trước khi có thể ứng dụng quy trình này vào sản xuất công nghiệp. Các nghiên cứu trong tương lai nên tập trung vào việc tìm kiếm các enzyme có hoạt tính và độ chọn lọc cao hơn, cũng như tối ưu hóa các điều kiện phản ứng để giảm chi phí sản xuất.

6.1. Tổng Kết Các Kết Quả Đạt Được Trong Nghiên Cứu

Nghiên cứu này đã thành công trong việc sử dụng enzyme lipase để thực hiện phản ứng thủy phân chọn lọc đối phân của các dẫn xuất beta-lactam, tiền chất quan trọng trong tổng hợp taxol. Kết quả cho thấy enzyme Lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia có khả năng tổng hợp đối với chất cao hơn enzyme Lipase Amano AK từ Pseudomonas fluorescens.

6.2. Đề Xuất Các Hướng Nghiên Cứu Tiềm Năng Trong Tương Lai

Các nghiên cứu trong tương lai nên tập trung vào việc tìm kiếm các enzyme có hoạt tính và độ chọn lọc cao hơn, cũng như tối ưu hóa các điều kiện phản ứng để giảm chi phí sản xuất. Ngoài ra, cần có những nghiên cứu về cơ chế phản ứng của enzyme để hiểu rõ hơn về quá trình xúc tác và từ đó cải thiện hiệu quả của phản ứng.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Paclitaxel (Taxol) là một trong những thuốc chống ung thư quan trọng, được chiết xuất chủ yếu từ vỏ cây thông đỏ Thái Bình Dương (Taxus spp.). Tuy nhiên, hàm lượng paclitaxel trong tự nhiên rất thấp, khoảng 0,01% trong vỏ cây khô, dẫn đến nguồn nguyên liệu thiên nhiên ngày càng khan hiếm và đe dọa nguy cơ tuyệt chủng. Do đó, việc phát triển các phương pháp tổng hợp paclitaxel, đặc biệt là bán tổng hợp từ tiền chất 10-deacetylbaccatin III (10-DAB), trở thành hướng nghiên cứu thiết yếu nhằm đáp ứng nhu cầu điều trị ung thư ngày càng tăng.

Luận văn tập trung nghiên cứu phản ứng thủy phân chọn lọc đối phân bằng enzyme lipase định hướng tổng hợp chuỗi side chain C-13 của paclitaxel. Mục tiêu chính là tổng hợp các dẫn xuất beta-lactam làm tiền chất cho chuỗi side chain, đồng thời tối ưu hóa điều kiện thủy phân bằng enzyme để tách hỗn hợp racemic thành các đồng phân đối quang có độ tinh khiết quang học cao. Nghiên cứu được thực hiện tại Trường Đại học Bách Khoa, Đại học Quốc gia TP. Hồ Chí Minh trong giai đoạn 2012-2014, với ứng dụng quan trọng trong công nghiệp dược phẩm và phát triển thuốc chống ung thư.

Việc sử dụng enzyme lipase trong quá trình thủy phân mang lại ưu điểm vượt trội về độ chọn lọc lập thể, chọn lọc hóa học và chọn lọc vùng, đồng thời giảm thiểu tác động môi trường so với xúc tác hóa học truyền thống. Kết quả nghiên cứu góp phần nâng cao hiệu quả tổng hợp paclitaxel, giảm chi phí sản xuất và mở rộng khả năng ứng dụng enzyme trong công nghệ hóa học dược phẩm.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên các lý thuyết và mô hình sau:

• Lý thuyết xúc tác enzyme lipase: Lipase là enzyme hydrolase có khả năng xúc tác thủy phân ester với độ chọn lọc cao, đặc biệt trong môi trường hữu cơ. Cơ chế xúc tác theo mô hình bi-bi ping-pong, trong đó enzyme trải qua hai trạng thái trung gian acyl hóa và deacyl hóa, tạo điều kiện thuận lợi cho phản ứng thủy phân chọn lọc đối phân.

• Mô hình chọn lọc đối phân Kazlauskas: Quy tắc thực nghiệm dự đoán lipase ưu tiên xúc tác đồng phân R của ester nhờ sự khác biệt kích thước nhóm thế tại tâm bất đối xứng, giúp dự đoán và tối ưu hóa quá trình phân giải racemic.

• Khái niệm beta-lactam và tổng hợp chuỗi side chain paclitaxel: Beta-lactam là hợp chất vòng bốn thành viên có vai trò trung gian quan trọng trong tổng hợp chuỗi side chain C-13 của paclitaxel. Việc tổng hợp và phân giải beta-lactam racemic thành đồng phân đối quang tinh khiết là bước then chốt trong quy trình bán tổng hợp paclitaxel.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Nghiên cứu sử dụng các nguyên liệu hóa chất tổng hợp, enzyme lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia và Amano AK từ Pseudomonas fluorescens. Dữ liệu thu thập từ các phản ứng tổng hợp, thủy phân và phân tích hóa lý.

• Phương pháp phân tích: Sử dụng các kỹ thuật sắc ký lớp mỏng (TLC), sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), phổ hồng ngoại (IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton ('H NMR), phổ khối (MS), đo góc quay cực riêng và xác định cấu hình đồng phân R, S theo quy tắc Kazlauskas.

• Thiết kế nghiên cứu: Thực hiện tổng hợp các dẫn xuất beta-lactam racemic, sau đó tiến hành phản ứng thủy phân chọn lọc bằng enzyme lipase trong điều kiện pH 7-8, nhiệt độ 30-50°C, thời gian phản ứng từ 24 đến 72 giờ. Cỡ mẫu khoảng 1 gam beta-lactam trong dung môi hữu cơ kết hợp dung dịch đệm phosphate. Phân tích sản phẩm thu được để đánh giá hiệu suất và độ tinh khiết quang học.

• Timeline nghiên cứu: Quá trình nghiên cứu kéo dài trong 24 tháng, bao gồm tổng hợp hóa chất, tối ưu hóa điều kiện phản ứng enzyme, phân tích sản phẩm và đánh giá kết quả.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Hiệu quả xúc tác của enzyme lipase Amano PS vượt trội: Enzyme lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia cho hiệu suất tổng hợp và phân giải beta-lactam cao hơn so với lipase Amano AK từ Pseudomonas fluorescens. Cụ thể, độ tinh khiết quang học (ee) của đồng phân thu được từ Amano PS đạt trên 98%, trong khi Amano AK chỉ đạt khoảng 90%.

2. Tối ưu hóa điều kiện phản ứng thủy phân: Ở pH 7.5 và nhiệt độ 40°C, thời gian phản ứng 24 giờ cho hiệu suất thủy phân đạt khoảng 85%, tăng lên 95% khi kéo dài thời gian đến 48 giờ. Tỷ lệ pha hữu cơ và pha nước tối ưu là 10-90% theo thể tích, giúp duy trì hoạt tính enzyme và tăng độ hòa tan chất nền.

3. Phân giải racemic beta-lactam thành đồng phân đối quang: Phản ứng thủy phân chọn lọc đã tách được hỗn hợp racemic thành đồng phân (+) và (-) với tỷ lệ phân giải trên 90%, phù hợp với quy tắc Kazlauskas về ưu tiên xúc tác đồng phân R.

4. Xác định cấu trúc và độ tinh khiết sản phẩm: Phân tích IR, 'H NMR và MS xác nhận cấu trúc beta-lactam và các dẫn xuất tổng hợp. Góc quay cực riêng đo được phù hợp với cấu hình R, S dự đoán, chứng minh tính chính xác của phương pháp.

Thảo luận kết quả

Kết quả cho thấy enzyme lipase Amano PS có tính chọn lọc cao hơn do đặc điểm cấu trúc trung tâm hoạt động và khả năng tương tác với nhóm thế lớn tại tâm bất đối xứng. Điều này phù hợp với các nghiên cứu trước đây về tính chọn lọc của lipase trong phản ứng thủy phân ester racemic. Việc tối ưu hóa điều kiện pH, nhiệt độ và tỷ lệ pha dung môi giúp duy trì hoạt tính enzyme và tăng hiệu suất phản ứng, đồng thời giảm thiểu sự phân hủy sản phẩm.

So sánh với các phương pháp xúc tác hóa học truyền thống, sử dụng enzyme lipase không chỉ nâng cao độ chọn lọc lập thể mà còn giảm thiểu tác động môi trường và chi phí xử lý. Các biểu đồ thể hiện sự thay đổi hiệu suất theo thời gian và điều kiện phản ứng có thể minh họa rõ ràng quá trình tối ưu hóa.

Độ tinh khiết quang học cao của đồng phân thu được là tiền đề quan trọng cho bước tổng hợp tiếp theo của chuỗi side chain paclitaxel, góp phần nâng cao hiệu quả và chất lượng sản phẩm cuối cùng. Kết quả này cũng mở rộng ứng dụng enzyme lipase trong tổng hợp các hợp chất dược phẩm có cấu trúc phức tạp.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Ứng dụng enzyme lipase Amano PS trong quy trình sản xuất công nghiệp: Khuyến nghị sử dụng lipase Amano PS làm xúc tác chính trong quá trình phân giải racemic beta-lactam để nâng cao hiệu suất và độ tinh khiết sản phẩm, giảm chi phí và tác động môi trường. Thời gian thực hiện đề xuất trong vòng 24-48 giờ.

2. Tối ưu hóa quy trình thủy phân enzyme: Đề xuất duy trì pH 7-8 và nhiệt độ 35-40°C trong môi trường dung môi pha hữu cơ và nước với tỷ lệ 10-90% để đảm bảo hoạt tính enzyme ổn định và hiệu quả phản ứng cao. Chủ thể thực hiện là các phòng thí nghiệm nghiên cứu và nhà máy sản xuất dược phẩm.

3. Phát triển quy trình bán tổng hợp paclitaxel từ beta-lactam tinh khiết: Khuyến khích nghiên cứu tiếp tục mở rộng quy mô tổng hợp chuỗi side chain C-13 từ đồng phân beta-lactam thu được, nhằm hoàn thiện quy trình bán tổng hợp paclitaxel với hiệu suất và độ tinh khiết cao.

4. Đào tạo và chuyển giao công nghệ enzyme trong tổng hợp dược phẩm: Đề xuất tổ chức các khóa đào tạo chuyên sâu về ứng dụng enzyme lipase trong tổng hợp hữu cơ cho cán bộ kỹ thuật và nhà nghiên cứu, đồng thời xây dựng quy trình chuẩn để chuyển giao công nghệ cho các doanh nghiệp dược phẩm.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Nhà nghiên cứu và sinh viên ngành công nghệ hóa học, hóa dược: Luận văn cung cấp kiến thức chuyên sâu về tổng hợp và phân giải beta-lactam bằng enzyme lipase, giúp nâng cao hiểu biết về kỹ thuật tổng hợp thuốc chống ung thư.

2. Doanh nghiệp sản xuất dược phẩm và công nghệ sinh học: Thông tin về quy trình xúc tác enzyme hiệu quả và thân thiện môi trường hỗ trợ cải tiến công nghệ sản xuất paclitaxel và các hợp chất tương tự.

3. Cơ quan quản lý và phát triển chính sách y dược: Nghiên cứu cung cấp cơ sở khoa học cho việc khuyến khích ứng dụng công nghệ enzyme trong sản xuất dược phẩm, góp phần phát triển ngành công nghiệp xanh.

4. Các tổ chức đào tạo và phát triển nguồn nhân lực: Tài liệu tham khảo hữu ích cho việc xây dựng chương trình đào tạo chuyên ngành công nghệ hóa học và công nghệ enzyme.

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao chọn enzyme lipase thay vì xúc tác hóa học trong tổng hợp paclitaxel?
   Enzyme lipase có độ chọn lọc cao về lập thể và hóa học, hoạt động trong điều kiện nhẹ, thân thiện môi trường, giảm thiểu độc hại và chi phí xử lý so với xúc tác hóa học truyền thống.

2. Enzyme lipase Amano PS và Amano AK khác nhau như thế nào?
   Amano PS từ Pseudomonas cepacia có khả năng xúc tác hiệu quả hơn, đặc biệt trong phân giải racemic beta-lactam, cho độ tinh khiết quang học cao hơn so với Amano AK từ Pseudomonas fluorescens.

3. Điều kiện phản ứng thủy phân enzyme tối ưu là gì?
   Phản ứng đạt hiệu quả cao nhất ở pH 7-8, nhiệt độ 35-40°C, thời gian 24-48 giờ, với tỷ lệ pha hữu cơ và nước khoảng 10-90% thể tích, giúp duy trì hoạt tính enzyme và tăng độ hòa tan chất nền.

4. Làm thế nào xác định cấu hình đồng phân R, S sau phản ứng?
   Sử dụng các phương pháp phân tích hóa lý như góc quay cực riêng, phổ 'H NMR và quy tắc Kazlauskas để dự đoán và xác định cấu hình đồng phân đối quang.

5. Ứng dụng thực tiễn của nghiên cứu này trong sản xuất dược phẩm?
   Nghiên cứu giúp phát triển quy trình bán tổng hợp paclitaxel hiệu quả, giảm chi phí và tác động môi trường, đồng thời nâng cao chất lượng sản phẩm cuối cùng trong công nghiệp dược phẩm.

Kết luận

• Enzyme lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia là xúc tác hiệu quả cho phản ứng thủy phân chọn lọc beta-lactam, đạt độ tinh khiết quang học trên 98%.
• Điều kiện phản ứng tối ưu gồm pH 7-8, nhiệt độ 35-40°C, thời gian 24-48 giờ và tỷ lệ pha hữu cơ/nước 10-90%.
• Phân giải racemic beta-lactam thành đồng phân đối quang tinh khiết là bước then chốt trong tổng hợp chuỗi side chain C-13 của paclitaxel.
• Kết quả nghiên cứu góp phần nâng cao hiệu quả và tính bền vững của quy trình bán tổng hợp paclitaxel, giảm thiểu tác động môi trường.
• Đề xuất tiếp tục mở rộng nghiên cứu quy mô công nghiệp và đào tạo chuyển giao công nghệ ứng dụng enzyme lipase trong tổng hợp dược phẩm.

Hành động tiếp theo là triển khai quy trình tối ưu vào sản xuất thử nghiệm quy mô lớn và phát triển các hợp chất tương tự có hoạt tính sinh học cao hơn. Các nhà nghiên cứu và doanh nghiệp được khuyến khích áp dụng kết quả để nâng cao hiệu quả sản xuất thuốc chống ung thư.

Trích đoạn nội dung tài liệu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA p NGO THI MY HUE NGHIEN CUU PHAN UNG THUY PHAN BANG ENZYME DINH HUONG TONG HOP TAXOL Chuyén nganh: Cong nghé hoa hoc Mã số: 60 52 75 LUẬN VĂN THẠC SĨ Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 08 năm 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA p NGO THI MY HUE NGHIEN CUU PHAN UNG THUY PHAN BANG ENZYME DINH HUONG TONG HOP TAXOL Chuyên ngành: Công nghệ hoa học Mã số: 60 52 75 LUẬN VĂN THẠC SĨ Hướng dẫn chính: TS. TONG THANH DANH Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 08 năm 2014 Công trình được hoàn thành tại: Trường Dai học Bách Khoa - ĐHỌG-HCM Cán bộ hướng dân khoa học :.S Tong Thanh Danh,.- 5c 55s cess2 Cán bộ cham nhận xét 1: .TS Phạm Thành Qua n.ccccccccccccccseeseecececeneeneees Cán bộ cham nhận xét 2: .S Phan Ngọc HOQ.icccccccccccssessscssccsscsscccccecesceeseesseeeeeeees Luận văn thạc sĩ được bao vệ tại Trường Đại hoc Bách Khoa, ĐHỌU Tp. Thành phan Hội đông đánh giá luận văn thạc sĩ gom: (Ghi rõ họ, tên, hoc hàm, học vị của Hội đông cham bao vệ luận văn thạc si) 2.TS Phạm Thành Quân — GV Phản biện Ï.S Phan Ngoc Hòa — GV Phan biện 2.S Tong Thanh Danh - Ủy viên hội dong 5.S Trương Vũ Thanh — Thư kỷ hội dong Xác nhận của Chủ tịch Hội đông đánh giá LV và Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau khi luận văn đã được sua chữa (nêu có). CHỦ TỊCH HỘI ĐÔNG TRUONG KHOA.

ĐẠI HỌC QUOC GIA TPHCM CỘNG HÒA XA HOI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập — Tu do — Hạnh phúc NHIEM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: NGÔ THỊ MY HUE MSHV: 12924381 Ngày, thang, năm sinh: 26/05/1984 Noi sinh: Phu Yén Chuyên ngành: công nghệ hóa học Mã số: 605275 I. TEN ĐÈ TÀI:---------- NGHIÊN CUU PHAN UNG THUY PHAN BẰNG ENZYME ĐỊNH HUONG TONG HỢP TA XOLL-----=============================m==mm NHIỆM VU VA NỘI DUNG::-------------==~======================rm==r=m=rm==rmm==rmme Il. NGAY GIAO NHIỆM VỤU:--------~---~~--=~-~===~====================e====emm==rmmm=eem Ill. NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤU:---------------~--=-~============================m Iv.

CÁN BỘ HƯỚNG DAN:------------- TS. TONG THANH DANH--------------~-==- Tp. CÁN BỘ HƯỚNG DÂN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên và chữ ký) (Họ tên và chữ ký) TRUONG KHOA KY THUẬT HÓA HOC (Họ tên va chữ ky) LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ và tên: NGO THỊ MY HUE Ngày, tháng, năm sinh: 26/05/1984 Nơi sinh: Phú Yên Địa chỉ liên lạc: A7/27/1A, tổ 11, Ấp 1A, xã Vĩnh Lộc B, Huyện Bình Chánh, Tp.HCM QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO: - Tw 2002 đến 2006: ĐẠI HỌC QUY NHƠN - 170 An Dương Vuong, Tp. Quy Nhơn, tỉnh Bình Định - Tir 2012 đến 2014: ĐẠI HOC BACH KHOA TP HCM - 268 Lý Thường Kiệt, Q.HCM QUÁ TRÌNH CÔNG TÁC: - Ti 2006 đến nay: CÔNG TY TNHH PHOT PHAT - Lô A4a, KCN Hiệp Phước, H.Nhà Bè, Tp.

HCM LỜI CẢM ƠN Con xin chân thành cảm ơn Cha, Mẹ, gia đình luôn luôn động viên, sát cánh bên con trong những lúc khó khăn, luôn tạo điều kiện thuận lợi cho con học tập. Với tình yêu thương, tôi xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến chồng tôi đã luôn là nguôn động lực hỗ trợ tinh than và kinh phí dé tôi hoàn thành nghiên cứu này. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành các Quý thầy cô bộ môn Kỹ thuật Hóa Hữu Cơ đã giúp tôi trang bị tri thức, tạo môi trường điều kiện thuận lợi nhất trong suốt quá trình học tập và thực hiện luận văn này. Với lòng kính trọng và biết ơn, tôi xin được bày tỏ lòng cảm ơn tới Tiến sĩ Tống Thanh Danh đã khuyến khích, chỉ dẫn tận tình, tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian thực hiện nghiên cứu này.

Tôi xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban Giám đốc và các đồng nghiệp Công ty TNHH Phốt Phát đã giúp đỡ tôi rất nhiều về thời gian để tôi có thể hoàn thành nghiên cứu này. Tôi xin gửi lời tri ân sâu sắc đến bạn Nguyễn Lê Mỹ Tiên đã động viên, hỗ trợ tôi rất nhiều trong suốt quá trình làm việc và hoàn thành luận văn. Trân trọng! ABSTRACT Lipases Amano PS from Pseudomonas cepacia and Lipase Amano AK from Pseudomonas fluorescens have been catalyzed enantioselective hydrolyses and transesterifications of racemic esters 3 — hydroxy — 4 — phenyl — beta — lactam derivatives of the taxol side chain. We have performed synthesized reactions to obtain taxol side chain e.

The results show that enzymes lipase Amano PS from Pseudomonas cepacia are more capable of synthesis in enantiomeric excess than the others lipase Amano AK from Pseudomonas fluorescens due to its associated specificities. The resolved enantiomera are important intermediates in the synthesis of the C — 13 side chain of taxol. TÓM TAT Xúc tác sinh học Lipase Amano PS từ Pseudomonas cepacia va Lipase Amano AK từ Pseudomonas fluorescens được chọn lam xúc tac chon lọc đối phân trong sự phân giải hỗn hợp racemic ester của các dẫn xuất đôi phân 3 — hydroxy — 4 — phenyl của vòng beta — lactam qua quá trình thủy phân chọn lọc đối phân. Quá trình nghiên cứu đã thực hiện các phản ứng tong hợp các hợp chat cần thiết dé thu nhận mạch nhánh chuỗi taxol side chain, cụ thể là (+) — cis — 1 — (p- methoxyphenyl) — 3 — acetoxy — 4 — phenylazetidin — 2 — one, (+) — cis — 1 — (p — methoxyphenyl) — 3 — acetoxy — 4 — phenylazetidin — 2 — one, (-) — cis — I — (p — methoxyphenyl) — 3 — hydroxyl — 4 — phenylazetidin — 2 — one, (-) — cis — 3(R) — acetoxy — 4(S) — phenylazetidin — 2 — one, (+) — cis — 3(R) — hydroxyl — 4(S) — phenylazetidin — 2 — one, cis — 3 — (1 — ethoxyethoxy) — 4 — phenyllazetidin — 2 — one, cis—1 — benzoyl — 3 — (1 — ethoxyethoxy) — 4 — phenyllazetidin — 2 — one.

Kết qua cho thay do tinh đặc hiệu liên kết, enzyme Lipase Amano PS tir Pseudomonas cepacia có khả năng tong hợp đối với chất cao hon enzyme Lipase Amano AK từ Pseudomonas fluorescens. Sự phân tách chọn lọc đối phân là bước trung gian quan trọng trong tông hợp mạch nhánh chuỗi side chain C — 13 định hướng tổng hợp nên paclitaxel. LƠI CAM ĐOAN Tôi cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bồ trong bất kỳ công trình nào khác.

Ngô Thị Mỹ Huệ MỤC LỤC 0099. iii LOT CAM DOAN 07 ._ôÔ V DANH MỤC BANG BI .2 5° < se xe xe øese eexemesersesore viii DANH MỤC HINH ANH MINH HỌA.2--< 5-2 5 se sex eeseeseesesesee ix DANH MỤC SƠ ĐỎ PHAN UNG .sscssscssssssssssssscsssssscsessssssssesscssssssssssssessssssssessssssssesessees X DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ TU VIET 'TẮTT. 5-2 so 2s ces se se se xi 9)0)89211)003a.1 ˆ KHÁI QUÁT VE HỢP CHAT PACLITAXEL .-5° 5 5< se s5 se =<eses<e 3 1.2 MỘT SÓ PHƯƠNG PHAP TONG HỢP TAXOL TỪ 10 — DAB.1 Tổng hợp toàn phan. 2 s- << s° sms sex eexveseeseeeseeese 5 1.1 Bán tổng hợp Taxol từ 10 — DAB .2 Một số phương pháp bán tổng hợp mạch nhánh taxol side chaïn.3 Phan ứng thuỷ phân băng enzyme trong bán tong hợp taxol .1 Giới thiệu chung về LIPASE: .2 Giới thiệu lipase PCL, PFL.-- ¿2 ++k+EE+E£EE+EE+E£EEEEEEEEEEEErkrrerkrrxee 15 1.3 Cấu trúc và cơ chế phản ứng của lipase:.4 Phân giải động học với PCL, PFL .5 Một số phan ứng tổng hợp mạch nhánh có sử dung enzymelipase .4 Sinh tổng hop taxol:.

<< << sex eexveseeeveeseseeeesesosee 24 Chương 2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU.- 5° << se ss se escsessessee 27 2.1 DOT TƯỢNG NGHIÊN CUUS. 5-2 se se se sex øsseseeecsersee 27 2.2_ NGUYEN LIEU VA THIET BI: .- 2° se se sex seeseesee 28 2.1 Nguyên liệu hoá chất và dung môi .-2 5< 2 se se seessesssseses28 2.2 Dụng cu và thiét bị. me mg ven eveeeeeesessozee30 ,y/2/2wN9( 0o .3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CUUS .1 Phương pháp sắc ký bản mồng (TLC): .----- 2 se se se=ssesseees 3 2.2 Phố hồng ngoại IR .o- << << se eeEx ve ưeveeeeeesessozee32 2.3 Phố cộng hướng từ hạt nhân 'H NMR .2 s2 so < se scessssssesscse 32 'N N04 000 15.5 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC): .6 Xác định góc quay CUC TIEN? .7 Xác định đồng phân đối quang và định danh cấu hình R, S:.8 Xác định độ tỉnh khiết quang học (©€):.

2 s-e° << ses se seescsesesseees 34 Chương 3.1 PHAN UNG TONG HỢP N - BENZYLIDENE - P- METHOXY ANILINE 01000115.2 PHÁN UNG TONG HỢP (+) CIS- 1— P— METHOXYPHENYL - 3— ACETOXY - 4—- PHENYLAZETIDIN - 2 - ONE (BETA — LACTAMI. PHÁN UNG THUY PHAN (+) CIS- 1 - P- METHOXYPHENYL - 3— ACETOXY - 4—- PHENYLAZEDITIN - 2 - ONE (BETA - LACTAM!.4 PHÁN UNG TONG HỢP (-)- CIS- 3(R) - ACETOXY - 4(S) — PHENYLAZETIDIN - 2 — ONE (BETA — LACTAM 2A).5 PHÁN UNG TONG HỢP CIS- 3 —- HYDROXYL — 4—- PHENYLAZETIDIN - 2 - ONE (BETA — LACTAM 2B) .<5 <5 se sec tEseEseseseeseserseseseesesre 41 3.6 PHÁN UNG TONG HỢP (+)-CIS - 3(R) - HYDROXYL - 4(S) - PHENYLAZETIDIN - 2 - ONE (BETA — LACTAM 3A).7 PHAN UNG TONG HOP CIS - 3 - (1- ETHOXYETHOXY) - 4— PHENYLLAZETIDIN - 2 — ONE (BETA — LACTAM 4A) .8 PHÁN UNG TONG HOP CIS-1 - BENZOYL - 3 - (1 - ETHOXYETHOXY) - 4 —PHENYLLAZETIDIN - 2 — ONE (BETA — LACTAM 5A). KET QUA VA BAN LUẬN.- 5 s- << se sex eesseeseeecsesesesee 46 4.1 PHAN UNG TONG HỢP N - BENZYLIDENE — P- METHOXY ANILINE 01000115.2 PHÁN UNG TONG HOP (+) CIS - 1—- P-METHOXYPHENYL -3 — ACETOXY - 4— PHENYLAZETIDIN - 2 — ONE (BETA — LACTAM).3 PHAN UNG THUY PHAN (+) CIS — 1- P-METHOXYPHENYL -3 — ACETOXY - 4—- PHENYLAZETIDIN - 2 — ONE (BETA - LACTAM).1 Sản phẩm tạo thành beta — lactam 1A: (+) — cis — 1 — (p — methoxyhenyl) — 3 — acetoxy — 4 — phenylazefidin — 2 — Oone. co csss SsS99S55556656 5m50 4.2 San phẩm tạo thành beta — lactam 1B:(-) — cis— 1 — (p — methoxylphenyl) — 3 — hydroxy — 4 — phenylazefidin — 2 — OIn.4 PHAN UNG TONG HOP (-) - CIS — 3(R) - ACETOXY - 4(S) — PHENYLAZETIDIN - 2 — ONE (BETA — LACTAM 2A).5 PHÁN UNG TONG HỢP CIS- 3 —- HYDROXYL — 4—- PHENYLAZETIDIN - 2 - ONE (BETA — LACTAM 2B) .<5 <5 se sec tEseEseseseeseserseseseesesre 60 4.6 PHAN UNG TONG HOP (+) - CIS - 3(R) - HYDROXYL - 4(S) - PHENYLAZETIDIN - 2 - ONE (BETA — LACTAM 3A).7 PHAN UNG TONG HOP CIS - 3- (1 - ETHOX YETHOXY) -4-— PHENYLLAZETIDIN - 2 — ONE (BETA — LACTAM 4A) .8 PHAN UNG TONG HOP CIS —- 1-BENZOYL - 3 - (1 - ETHOXYETHOXY) - 4 —PHENYLAZETIDIN - 2 — ONE (BETA — LACTAM 5A).

KET LUẬN VÀ MOT SO HUONG MO RONG DE TÀI. 68 TÀI LIEU THAM KHAO.ÔỎ 76 vil DANH MỤC BANG BIEU Bang 2.1: Hóa chat dùng trong quá trình nghiên cứu tông hợp .2: Dung môi cần dùng trong quá trình tinh chế và sắc ký .3: Chương trình gradient cho test mẫu.