Nghiên Cứu Phân Giải Paclobutrazol Bằng Vi Khuẩn Tại An Giang Và Tiền Giang

Khóa luận nghiên cứu phân lập và tuyển chọn vi khuẩn phân giải pacloputrazol tại An Giang và Tiền Giang, phục vụ trồng cây ăn quả.

• Tác giả: Nguyen Thi Tuong Vy
• Người hướng dẫn: TS. Truong Phuoc Thien Hoang
• Trường học: Trường Đại Học Nông Lâm
• Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học
• Đề tài: Nghiên Cứu Phân Giải Paclobutrazol Bằng Vi Khuẩn Tại An Giang Và Tiền Giang
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2023
• Địa điểm: Thủ Đức

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• XÁC NHẬN VÀ CAM ĐOAN
• TÓM TẮT
• 1. CHƯƠNG 1: MỤC TIÊU ĐỀ TÀI
• 2. CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Tổng quan về xoài
• 2.2. Tổng quan về sầu riêng
• 2.3. Phương pháp kích thích ra hoa trái vụ bằng Paclobutrazol ở xoài và sầu riêng
• 2.4. Tổng quan về paclobutrazol, vai trò và tác hại của paclobutrazol
• 3. CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
• 3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
• 3.2. Mẫu thí nghiệm, dụng cụ và thiết bị
• 3.3. Phương pháp nghiên cứu
• 3.3.1. Phương pháp phân lập các dòng vi khuẩn có khả năng phân giải PBZ
• 3.3.2. Khảo sát các điều kiện phân giải PBZ trên thạch đĩa
• 3.3.3. Khảo sát đặc điểm hình thái chủng được chọn
• 3.3.4. Phương pháp đánh giá và khảo sát khả năng chuyển hóa PBZ
• 3.3.5. Phương pháp định danh bằng sinh học phân tử
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Kết quả định tính khả năng phân giải PBZ
• 4.2. Kết quả khảo sát vòng phân giải PBZ trên thạch đĩa
• 4.3. Kết quả khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ PBZ đến vòng phân giải
• 4.4. Khảo sát sự ảnh hưởng của nhiệt độ đến vòng phân giải
• 4.5. Kết quả làm thuần giữ giống và các đặc điểm hình thái của chủng được chọn
• 4.6. Kết quả đánh giá và khảo sát khả năng chuyển hóa PBZ
• 4.7. Sự phát triển của các chủng vi khuẩn trong môi trường khoáng
• 4.8. Nồng độ PBZ trong môi trường nuôi cấy lỏng vào ngày 0 và ngày 15
• 5. CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nghiên Cứu Phân Giải Paclobutrazol Tại An Giang

Nghiên cứu phân giải Paclobutrazol (PBZ) bằng vi khuẩn tại An Giang và Tiền Giang là một chủ đề quan trọng trong lĩnh vực nông nghiệp. PBZ là một loại hóa chất nông nghiệp được sử dụng rộng rãi để kích thích ra hoa trái vụ. Tuy nhiên, việc sử dụng quá mức có thể dẫn đến tồn dư trong đất, ảnh hưởng đến môi trường và sức khỏe con người. Nghiên cứu này nhằm tìm ra các dòng vi khuẩn có khả năng phân giải PBZ, từ đó giúp giảm thiểu tác động tiêu cực của hóa chất này.

1.1. Tầm Quan Trọng Của Paclobutrazol Trong Nông Nghiệp

Paclobutrazol được sử dụng để điều chỉnh sự phát triển của cây trồng, đặc biệt là trong việc kích thích ra hoa. Việc hiểu rõ vai trò của PBZ giúp nông dân áp dụng hiệu quả hơn trong sản xuất.

1.2. Tình Hình Sử Dụng Paclobutrazol Tại An Giang Và Tiền Giang

Tại An Giang và Tiền Giang, nông dân thường sử dụng PBZ với nồng độ cao để tăng năng suất cây ăn trái. Tuy nhiên, việc này cũng dẫn đến nhiều vấn đề về môi trường và sức khỏe.

II. Vấn Đề Tồn Đọng Paclobutrazol Trong Đất Và Môi Trường

Sự tồn đọng của Paclobutrazol trong đất là một vấn đề nghiêm trọng. Thời gian bán hủy của PBZ có thể kéo dài từ 43 đến 618 ngày, tùy thuộc vào điều kiện môi trường. Điều này dẫn đến việc tích tụ hóa chất trong đất, gây hại cho cây trồng và môi trường sinh thái. Nghiên cứu chỉ ra rằng việc sử dụng PBZ không kiểm soát có thể làm giảm sức khỏe của đất và ảnh hưởng đến sự phát triển của cây trồng.

2.1. Tác Động Của Paclobutrazol Đến Đất Và Cây Trồng

Việc sử dụng PBZ kéo dài có thể làm giảm độ phì nhiêu của đất, ảnh hưởng đến sự phát triển của cây trồng. Nghiên cứu cho thấy rằng nồng độ PBZ cao có thể gây ra tình trạng cây còi cọc.

2.2. Ảnh Hưởng Đến Sức Khỏe Con Người

Paclobutrazol được biết đến là một chất độc hại, có thể ảnh hưởng đến sức khỏe con người. Việc tiếp xúc lâu dài với PBZ có thể gây ra các vấn đề về sức khỏe nghiêm trọng.

III. Phương Pháp Phân Lập Vi Khuẩn Phân Giải Paclobutrazol

Nghiên cứu đã áp dụng phương pháp nuôi cấy trong môi trường khoáng có bổ sung PBZ để phân lập các dòng vi khuẩn có khả năng phân giải PBZ. Các mẫu đất được thu thập từ các vùng trồng cây ăn quả tại An Giang và Tiền Giang. Kết quả cho thấy có nhiều chủng vi khuẩn có khả năng phân giải PBZ, mở ra hướng đi mới trong việc xử lý hóa chất này.

3.1. Quy Trình Phân Lập Vi Khuẩn

Quy trình phân lập bao gồm việc thu thập mẫu đất, nuôi cấy trong môi trường khoáng và xác định khả năng phân giải PBZ. Các chủng vi khuẩn được chọn lọc dựa trên khả năng phân giải tốt nhất.

3.2. Phương Pháp Sắc Ký HPLC PDA

Phương pháp sắc ký HPLC-PDA được sử dụng để xác định nồng độ PBZ trong môi trường nuôi cấy. Kết quả cho thấy sự giảm nồng độ PBZ sau 15 ngày nuôi cấy.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Về Vi Khuẩn Phân Giải Paclobutrazol

Kết quả nghiên cứu cho thấy đã phân lập được 20 chủng vi khuẩn từ 10 mẫu đất, trong đó có 7 chủng có khả năng phân giải PBZ. Chủng vi khuẩn 1.7 cho thấy khả năng phân giải tốt nhất với nồng độ PBZ giảm 15% sau 15 ngày. Điều này chứng tỏ tiềm năng của các dòng vi khuẩn trong việc xử lý hóa chất độc hại này.

4.1. Đặc Điểm Các Chủng Vi Khuẩn Phân Giải

Các chủng vi khuẩn được phân lập có đặc điểm sinh học khác nhau. Chủng 1.7 được xác định là Bacillus velezensis và Bacillus stercoris, cho thấy khả năng phân giải PBZ tốt.

4.2. Khả Năng Phân Giải Paclobutrazol Trong Môi Trường

Khả năng phân giải PBZ của các chủng vi khuẩn được khảo sát trong môi trường khoáng. Kết quả cho thấy sự phát triển của vi khuẩn trong môi trường có bổ sung PBZ.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn Của Nghiên Cứu Phân Giải Paclobutrazol

Nghiên cứu này không chỉ giúp giảm thiểu tác động của Paclobutrazol đến môi trường mà còn mở ra hướng đi mới trong việc xử lý hóa chất độc hại trong nông nghiệp. Việc ứng dụng các dòng vi khuẩn phân giải PBZ có thể giúp cải thiện chất lượng đất và sức khỏe cây trồng, từ đó nâng cao năng suất nông nghiệp.

5.1. Giải Pháp Bền Vững Trong Nông Nghiệp

Sử dụng vi khuẩn phân giải PBZ là một giải pháp bền vững, giúp giảm thiểu ô nhiễm môi trường và cải thiện sức khỏe đất. Điều này có thể mang lại lợi ích lâu dài cho nông dân.

5.2. Tương Lai Của Nghiên Cứu Phân Giải Paclobutrazol

Nghiên cứu mở ra nhiều cơ hội mới trong việc phát triển các sản phẩm sinh học giúp phân giải hóa chất độc hại. Tương lai có thể thấy sự kết hợp giữa công nghệ sinh học và nông nghiệp bền vững.

VI. Kết Luận Về Nghiên Cứu Phân Giải Paclobutrazol

Nghiên cứu phân giải Paclobutrazol bằng vi khuẩn tại An Giang và Tiền Giang đã chỉ ra rằng có nhiều chủng vi khuẩn có khả năng phân giải PBZ. Kết quả này không chỉ có ý nghĩa trong việc xử lý hóa chất độc hại mà còn góp phần bảo vệ môi trường và nâng cao năng suất nông nghiệp. Cần tiếp tục nghiên cứu để phát triển các ứng dụng thực tiễn từ các dòng vi khuẩn này.

6.1. Tầm Quan Trọng Của Nghiên Cứu

Nghiên cứu này có ý nghĩa quan trọng trong việc bảo vệ môi trường và sức khỏe con người. Việc tìm ra các dòng vi khuẩn phân giải PBZ là một bước tiến lớn trong nông nghiệp bền vững.

6.2. Đề Xuất Hướng Nghiên Cứu Tiếp Theo

Cần tiếp tục nghiên cứu để xác định thêm nhiều chủng vi khuẩn khác có khả năng phân giải PBZ và phát triển các sản phẩm sinh học ứng dụng trong nông nghiệp.

Nội dung chính

Bối cảnh và vấn đề nghiên cứu

Canh tác cây ăn quả nhiệt đới, đặc biệt là xoài và sầu riêng, đóng vai trò quan trọng trong cơ cấu kinh tế nông nghiệp tại khu vực Đồng bằng sông Cửu Long. Tuy nhiên, tình trạng "được mùa mất giá" do thu hoạch rộ chính vụ thường xuyên gây bấp bênh cho nguồn thu nhập của nhà vườn. Theo số liệu của tác giả trích dẫn từ Nguyễn Sự (2020), việc xử lý cây trồng ra hoa nghịch vụ mang lại hiệu quả kinh tế cao gấp 1,7 lần so với sản xuất vụ chính. Để đạt được mục tiêu này, nông dân tại các vùng chuyên canh đã lạm dụng chế phẩm Paclobutrazol (PBZ) — một chất điều hòa sinh trưởng thực vật thuộc nhóm triazole có cơ chế ức chế sinh tổng hợp gibberellin thông qua việc bất hoạt enzyme ent-kaurene oxidase, từ đó kìm hãm sự kéo dài tế bào, giúp cây phân hóa mầm hoa sớm.

Trong thực tế canh tác, nông dân xử lý PBZ với nồng độ rất cao, dao động từ 1.000 đến 1.500 ppm, thậm chí tưới trực tiếp vào gốc với liều lượng lên đến 5,0 g hoạt chất trên 1 m đường kính tán cây (Trần Văn Hâu và ctv, 2005). Về mặt cấu trúc hóa học, PBZ chứa vòng chlorobenzene và vòng 1,2,4-triazole liên kết với một mạch carbon hở. Do thiếu các nhóm chức phân cực, PBZ rất khó tan trong nước nhưng liên kết chặt chẽ với các hợp chất kỵ nước trong đất. Trong khi vòng chlorobenzene có thể bị dị hóa chậm, thì vòng 1,2,4-triazole lại có tính bền vững cao trước tác động phân giải của hệ vi sinh vật bản địa. Đồng thời, độ bay hơi của PBZ cực thấp (khoảng 1 µPa), khiến quá trình tiêu tán phi sinh học diễn ra không đáng kể.

Trong điều kiện đất hiếu khí, PBZ có thời gian bán phân hủy ($t_{1/2}$) kéo dài từ 43 đến 618 ngày (trung bình 182 ngày) và thời gian bán hủy trong nước mặt là 164 ngày. Sự tích lũy lâu dài của chất này dẫn đến nhiều hệ lụy nghiêm trọng: làm thoái hóa đất, cây trồng bị còi cọc, giảm sức đề kháng; gây ô nhiễm tầng nước ngầm qua nước tưới và nước mưa; đồng thời ức chế nghiêm trọng quần thể sinh vật có ích trong đất. Cụ thể, nghiên cứu của Silva và ctv (2003) tại vườn xoài ở Petrolina chỉ ra rằng việc tích tụ PBZ làm sụt giảm 58,28% mật số vi khuẩn và 28% mật số nấm cũng như xạ khuẩn đất. Do đó, việc tìm kiếm và tuyển chọn các chủng vi sinh vật bản địa có hoạt tính phân giải PBZ là yêu cầu cấp thiết nhằm phục hồi môi trường đất canh tác.

Mục tiêu tổng quát của đề tài là phân lập và tuyển chọn các dòng vi khuẩn có khả năng chuyển hóa PBZ tại các vùng chuyên canh cây ăn quả ở tỉnh An Giang và tỉnh Tiền Giang. Các mục tiêu cụ thể được xác định bao gồm:

1. Mục tiêu 1: Phân lập được 2 - 3 dòng vi khuẩn có khả năng phân giải PBZ từ các mẫu đất trồng xoài và sầu riêng đã thu thập.
2. Mục tiêu 2: Xác định điều kiện môi trường tối ưu (nồng độ PBZ, nhiệt độ ủ) cho khả năng phân giải PBZ của các chủng vi khuẩn được tuyển chọn.
3. Mục tiêu 3: Đánh giá khả năng sinh trưởng và phân giải PBZ của các dòng vi khuẩn trong môi trường khoáng lỏng thông qua việc xác định mật số tế bào và đo đạc nồng độ PBZ sau 15 ngày nuôi cấy.
4. Mục tiêu 4: Định danh sinh học phân tử các dòng vi khuẩn tuyển chọn có hoạt tính phân giải PBZ.

Nghiên cứu tập trung vào đối tượng là các chủng vi khuẩn phân lập từ đất canh tác lâu năm có tiền sử xử lý PBZ. Phạm vi không gian thu mẫu bao gồm 10 điểm thuộc vùng trồng xoài tại thị xã Tân Châu, tỉnh An Giang (5 mẫu) và vùng trồng sầu riêng tại huyện Cái Bè, tỉnh Tiền Giang (5 mẫu). Toàn bộ nội dung thực nghiệm được triển khai từ tháng 03/2023 đến tháng 07/2023 tại phòng thí nghiệm RIBE 212 thuộc Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học và Môi trường, Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh.

---

Cơ sở lý thuyết và phương pháp

Đề tài được xây dựng trên cơ sở lý thuyết về sinh lý thực vật và chuyển hóa vi sinh vật học đối với hợp chất triazole. PBZ ($C_{15}H_{20}ClN_{3}O$, phân tử lượng 293,79 g/mol) can thiệp vào con đường sinh tổng hợp gibberellin bằng cách phong tỏa enzyme ent-kaurene oxidase, ngăn cản chuyển hóa ent-kaurene thành axit ent-kaurenoic. Nghiên cứu kế thừa các phát hiện quốc tế về khả năng chuyển hóa PBZ của vi khuẩn thuộc chi Pseudomonas (Vaz et al., 2011; Kumar et al., 2021) và Klebsiella pneumoniae M6 (Kumar et al., 2021). Đồng thời, tác giả tham chiếu các công bố trong nước của Đặng Phạm Thu Thảo và ctv (2014) về các chủng Burkholderia sp., nghiên cứu của Phạm Thị Thùy Dương và ctv (2022) về mức độ tồn dư PBZ trong đất sầu riêng tại Tiền Giang và Bến Tre (đạt đỉnh 1,036 mg/kg ở độ sâu 0 - 20 cm), cùng nghiên cứu của Pham và ctv (2023) về khả năng phân hủy PBZ của Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas nitroreducens, Burkholderia cepacia và Acinetobacter seifertii.

Hệ thống phương pháp thực nghiệm trong khóa luận bao gồm các công đoạn kỹ thuật sau:

• Phương pháp thu thập mẫu đất và điều tra thực địa: Mẫu đất được lấy ở tầng mặt đến độ sâu 0 - 30 cm tại 10 vườn cây ăn trái, sau khi gạt bỏ lớp thảm mục bề mặt. Khối lượng mỗi mẫu khoảng 0,5 kg, được niêm phong trong túi nhựa chuyên dụng và bảo quản ở 4°C trước khi xử lý. Đồng thời, tác giả thực hiện phỏng vấn trực tiếp nông dân về loại chế phẩm sử dụng, thời gian dùng thuốc và lịch trình xử lý ra hoa nghịch vụ.
• Phương pháp làm giàu và phân lập vi khuẩn: 1 g mẫu đất được bổ sung vào bình tam giác chứa 25 mL môi trường khoáng tối thiểu (chứa 1 g NaCl, 0,5 g $NH_{4}Cl$, 0,935 g $MgCl_{2}$, 0,015 g $CaCl_{2}$, 0,49 g $K_{2}HPO_{4}$ và 0,375 g $KH_{2}PO_{4}$ trong 1 lít nước cất theo công thức của Chen và ctv, 2010), có bổ sung 18 ppm PBZ làm nguồn carbon duy nhất. Hệ thống được nuôi lắc ở tốc độ 90 rpm trong điều kiện tối ở nhiệt độ phòng. Quy trình cấy truyền làm giàu được lặp lại 3 chu kỳ liên tiếp (mỗi chu kỳ 15 ngày, chuyển 1 mL dịch nuôi sang 24 mL môi trường mới). Dịch sau chu kỳ thứ ba được cấy ria làm thuần trên môi trường thạch Tryptone Soya Agar (TSA).
• Phương pháp định tính khả năng phân giải PBZ: Sử dụng kỹ thuật cấy chấm điểm các khuẩn lạc đã làm thuần lên đĩa petri chứa môi trường khoáng bổ sung 100 ppm PBZ. Sau 5 ngày ủ, bề mặt thạch được xử lý bằng thuốc thử Lugol. Sự xuất hiện của quầng sáng không bắt màu xung quanh khuẩn lạc chứng minh khả năng phân giải PBZ. Hoạt tính phân giải được định lượng bằng chỉ số độ lớn vòng phân giải: $$A = D - d$$ Trong đó: $A$ là độ lớn vòng phân giải (cm), $D$ là đường kính tổng của vòng sáng (cm), $d$ là đường kính của khuẩn lạc (cm).
• Khảo sát điều kiện phân giải trên đĩa thạch: Thử nghiệm cấy điểm được bố trí để khảo sát ảnh hưởng của nồng độ PBZ (100 ppm, 200 ppm, 300 ppm) và ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi ủ (30°C, 35°C, 40°C) với 3 lần lặp lại cho mỗi nghiệm thức.
• Khảo sát hình thái, sinh lý và hóa sinh: Xác định hình thái khuẩn lạc trên thạch TSA; tiến hành nhuộm Gram; nhuộm nội bào tử bằng phương pháp Schaeffer-Fulton (dùng phẩm nhuộm chính malachite green kết hợp nhuộm tương phản safranin 0,5%); kiểm tra enzyme catalase bằng dung dịch $H_{2}O_{2}$ 30%; xác định enzyme cytochrome c oxidase bằng giấy thử tẩm tetramethyl-p-phenylenediamine; kiểm tra tính di động trên môi trường thạch mềm (nồng độ agar 4 - 5 g/L). Giống thuần được bảo quản dài hạn trên thạch nghiêng ở 4°C và trong dung dịch glycerol 20% bổ sung peptone 1% ở -20°C.
• Phương pháp đánh giá sự chuyển hóa PBZ trong pha lỏng: Vi khuẩn được tăng sinh khối trong 50 mL dịch thể GYM (10 g glucose, 10 g yeast extract/L) trong 3 ngày, sau đó ly tâm 10.000 rpm trong 10 phút, rửa sạch 3 lần bằng nước khử khoáng để loại trừ hoàn toàn nguồn carbon hữu cơ tồn dư, rồi hiệu chỉnh mật độ quang học về $OD_{600} = 0,7$. Bố trí bình nuôi cấy gồm 9 mL môi trường khoáng và 1 mL dịch vi khuẩn (đảm bảo nồng độ PBZ đạt 100 ppm), lắc 130 rpm trong tối. Mật số vi khuẩn được xác định bằng phương pháp cấy gạt đếm khuẩn lạc (CFU/mL) tại các mốc 0, 3, 6, 9, 12 và 15 ngày. Hàm lượng PBZ tồn dư vào ngày 0 và ngày 15 được phân tích định lượng bằng hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép đầu dò chuỗi photodiode (HPLC-PDA) tại Công ty Vietlabs.
• Phương pháp sinh học phân tử và phân tích số liệu: DNA tổng số của vi khuẩn được tách chiết và khuếch đại gen 16S rRNA bằng kỹ thuật PCR với cặp mồi phổ biến 27-F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') và 1492-R (5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3') tại Viện Sinh học Phân tử Loci. Trình tự nucleotide được so sánh độ tương đồng bằng thuật toán BLASTn trên cơ sở dữ liệu GenBank (NCBI). Cây phát sinh chủng loại được xây dựng bằng phần mềm MEGA 11. Các số liệu thực nghiệm được xử lý thống kê, tính giá trị trung bình qua Excel 2016 và phân tích phương sai (ANOVA một nhân tố) với mức ý nghĩa $P < 0,01$ trên phần mềm Minitab 16.

---

Nội dung chính theo từng chương

Chương 1. Mục tiêu đề tài

Chương mở đầu xác lập cơ sở khoa học và định hướng thực hiện của khóa luận. Tác giả nêu bật tính cấp thiết của việc xử lý ô nhiễm đất do PBZ tại các vùng chuyên canh xoài và sầu riêng thuộc tỉnh An Giang và Tiền Giang. Mục tiêu tổng quát là phân lập, tuyển chọn và định danh các dòng vi khuẩn bản địa có khả năng chuyển hóa hợp chất này. Để hiện thực hóa mục tiêu chung, tác giả phân chia nghiên cứu thành 4 mục tiêu cụ thể gắn liền với 4 nội dung thực hiện tuần tự: từ phân lập nguồn giống, tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy trên đĩa thạch, đánh giá động học sinh trưởng và khả năng phân hủy trong môi trường lỏng, đến định danh các chủng triển vọng bằng công cụ sinh học phân tử.

Chương 2. Tổng quan tài liệu

Chương này cung cấp hệ thống cơ sở lý luận toàn diện gồm 4 phần trọng tâm:

1. Tổng quan về cây xoài, sầu riêng và kỹ thuật kích thích ra hoa trái vụ: Trình bày nguồn gốc, đặc điểm thực vật học, giá trị dinh dưỡng, phân bố canh tác và các giống phổ biến tại Việt Nam (xoài Cát Hòa Lộc, Cát Chu, Xiêm, Bưởi, R2E2; sầu riêng Ri 6, Chuồng Bò, Monthong). Tác giả mô tả chi tiết quy trình 6 bước xử lý ra hoa nghịch vụ bằng PBZ trên cây xoài (tưới gốc 1 - 2 g hoạt chất/cây kết hợp bón DAP, KCl, phun MKP và $KNO_{3}$) và trên cây sầu riêng (bón phân làm già lá, phun lân/kali tạo mầm, đậy bạt mủ nylon xiết nước mương, phun PBZ vào thân cành và mặt dưới lá, sau đó dỡ mủ tưới nhử nước).
2. Tổng quan về Paclobutrazol, vai trò và tác hại: Phân tích công thức cấu tạo phân tử, vai trò ức chế hormone thực vật gibberellin thông qua việc bất hoạt ent-kaurene oxidase giúp kiểm soát chiều dài đốt cành và kích thích trổ hoa. Đồng thời, tác giả tổng hợp các tác động tiêu cực của PBZ đến môi trường đất: tính kỵ nước, độ bền cao của vòng 1,2,4-triazole, thời gian bán hủy kéo dài (43 - 618 ngày trong đất hiếu khí, 164 ngày trong nước mặt), ức chế hoạt tính các enzyme đất (catalase, phosphatase) và gây suy giảm nghiêm trọng độ phong phú của vi sinh vật vùng rễ.
3. Khái niệm về phương pháp HPLC-PDA: Trình bày nguyên lý phân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao, cấu tạo và ưu thế của đầu dò chuỗi diode quang (PDA) với dải bước sóng quét rộng (190 - 1.100 nm), cho phép nhận diện phổ hấp thụ và định lượng chính xác các hợp chất có nồng độ thấp hoặc kém bền nhiệt.
4. Tổng quan các công trình nghiên cứu trong và ngoài nước: Đánh giá kết quả của Đặng Phạm Thu Thảo và ctv (2014) khi phân lập 30 dòng vi khuẩn và chọn được 2 chủng Burkholderia phân hủy 15,53% - 16,41% PBZ (nồng độ khởi đầu 15 ppm); công trình của Phạm Thị Thùy Dương và ctv (2022) về thực trạng 65% hộ dân tại Tiền Giang bón PBZ vượt khuyến cáo; nghiên cứu của Vaz và ctv (2011) tại Brazil với Pseudomonas spp. phân hủy 43% PBZ dạng đơn và 70% khi bổ sung glycerol; nghiên cứu của Kumar và ctv (2021) về chủng Klebsiella pneumoniae M6 phân hủy 98,28% PBZ (50 mg/L) sau 15 ngày; và công trình của Pham và ctv (2023) xác định 4 chủng (P. fluorescens, P. nitroreducens, B. cepacia, A. seifertii) có khả năng phân hủy 33,56% - 36,51% PBZ (60 ppm) sau 30 ngày nuôi cấy.

Chương 3. Vật liệu và phương pháp

Chương này mô tả chi tiết điều kiện thực nghiệm, địa điểm, thiết bị và quy trình tiến hành:

• Địa điểm và thời gian: Thực hiện tại phòng thí nghiệm vi sinh RIBE 212, Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học và Môi trường, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM từ tháng 03/2023 đến 07/2023.
• Nguồn mẫu: 10 mẫu đất thu tại các vùng chuyên canh xoài (xã Vĩnh Xương, Phú Lộc thuộc thị xã Tân Châu, tỉnh An Giang, ký hiệu X1 - X5) và sầu riêng (xã Tân Thanh, huyện Cái Bè, tỉnh Tiền Giang, ký hiệu SR1 - SR5).
• Dụng cụ và hóa chất: Liệt kê hệ thống tủ cấy vô trùng, nồi hấp áp lực cao, máy đo quang phổ vi sinh, máy ly tâm, máy lắc ủ, kính hiển vi soi dầu và các môi trường nuôi cấy chuyên dụng (khoáng tối thiểu Chen et al., thạch TSA, dịch thể GYM, thạch mềm di động, hóa chất nhuộm Gram, nhuộm nội bào tử, Lugol, chất chỉ thị enzyme).
• Quy trình phân tích: Trình bày chi tiết các bước từ thu mẫu tầng đất 0 - 30 cm, tăng sinh làm giàu 3 chu kỳ trong môi trường khoáng chứa 18 ppm PBZ, sàng lọc sơ bộ bằng đĩa thạch PBZ 100 ppm bắt màu Lugol, bố trí thí nghiệm ảnh hưởng của nồng độ PBZ (100 - 300 ppm) và nhiệt độ (30 - 40°C), khảo sát đặc điểm sinh hóa, động thái sinh trưởng mật số trong 15 ngày, định lượng tồn dư PBZ qua HPLC-PDA và khuếch đại gen 16S rRNA bằng cặp mồi 27-F/1492-R.

Chương 4. Kết quả và thảo luận

Chương thực nghiệm cung cấp toàn bộ dữ liệu định tính và định lượng thu được:

• Điều tra nông học: Kết quả phỏng vấn 10 nhà vườn cho thấy 100% sử dụng chế phẩm Bidamin 15WP với thời gian sử dụng liên tục từ 5 đến 9 năm. Vườn xoài xử lý vào tháng 2 - 3 âm lịch, trong khi vườn sầu riêng xử lý vào tháng 8 âm lịch.
• Phân lập và tuyển chọn: Từ 10 mẫu đất đã phân lập được 20 chủng vi khuẩn thuần. Thử nghiệm cấy điểm trên thạch khoáng bổ sung 100 ppm PBZ xác định được 7 chủng tạo vòng sáng phân giải với đường kính dao động từ 0,60 cm đến 3,03 cm. Hai chủng thể hiện hoạt tính phân giải vượt trội nhất được ký hiệu là 1.3 và 2.7.
• Tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy: Thử nghiệm nồng độ PBZ (100, 200, 300 ppm) chứng minh cả hai chủng sinh trưởng và tạo vòng phân giải lớn nhất ở nồng độ 100 ppm ($3,07 \pm 0,03$ cm đối với chủng 1.3; $2,60 \pm 0,06$ cm đối với chủng 2.7). Khi tăng nồng độ lên 300 ppm, đường kính vòng phân giải giảm xuống lần lượt là 2,73 cm và 2,13 cm. Khảo sát nhiệt độ (30°C, 35°C, 40°C) cho thấy nhiệt độ 30°C là điều kiện tối ưu (đạt $3,07 \pm 0,03$ cm); ở 35°C vòng phân giải giảm mạnh còn $1,73 \pm 0,13$ cm; và ở 40°C vi khuẩn hoàn toàn mất khả năng tạo vòng phân giải ($0$ cm).
• Đặc điểm hình thái và hóa sinh: Chủng 1.3 hình thành khuẩn lạc tròn, rìa răng cưa, màu trắng đục, bề mặt khô; chủng 2.7 tạo khuẩn lạc kích thước lớn, rìa trong suốt, tâm màu trắng, bề mặt ẩm. Cả hai chủng đều là trực khuẩn Gram dương, có khả năng sinh nội bào tử chịu nhiệt, cho phản ứng catalase dương tính, oxidase dương tính và thể hiện tính di động rõ rệt trong thạch mềm.
• Khả năng chuyển hóa PBZ trong môi trường lỏng: Mật số tế bào của cả hai chủng tăng nhanh trong giai đoạn 0 - 3 ngày đầu, duy trì ổn định từ ngày 3 đến ngày 9, và suy giảm từ ngày 9 đến ngày 15 do nguồn dưỡng chất cạn kiệt. Phân tích HPLC-PDA sau 15 ngày nuôi cấy trong môi trường khoáng bổ sung 100 ppm PBZ cho thấy: chủng 1.3 làm giảm 15% nồng độ PBZ ban đầu; trong khi chủng 2.7 chưa ghi nhận sự suy giảm hàm lượng PBZ có ý nghĩa thống kê trong khung thời gian 15 ngày.
• Định danh sinh học phân tử: Phân tích BLASTn đoạn gen 16S rRNA xác định chủng 1.3 là Bacillus velezensis với độ tương đồng 99,51%, và chủng 2.7 là Bacillus stercoris với độ tương đồng 99,93%.

Chương 5. Kết luận và đề nghị

Tác giả đúc kết các phát hiện cốt lõi: phân lập thành công 20 dòng vi khuẩn, tuyển chọn được 2 chủng vi khuẩn Gram dương sinh nội bào tử (Bacillus velezensis 1.3 và Bacillus stercoris 2.7) có khả năng chống chịu và phân giải PBZ ở nồng độ 100 ppm, nhiệt độ tối ưu 30°C, trong đó chủng 1.3 đạt hiệu suất phân hủy 15% sau 15 ngày nuôi cấy. Đồng thời, tác giả đề xuất các hướng nghiên cứu mở rộng về mặt cơ chế enzyme, mở rộng dải thông số khảo sát và tiềm năng ứng dụng chế phẩm sinh học xử lý đất nông nghiệp.

---

Kết quả và đóng góp

Số liệu thực nghiệm tổng hợp

Các kết quả định lượng thu nhận từ quá trình khảo sát điều kiện sinh lý, hóa sinh và hiệu quả chuyển hóa PBZ của hai chủng vi khuẩn tuyển chọn được tổng hợp trong bảng dưới đây:

Chỉ tiêu theo dõi	Chủng vi khuẩn 1.3	Chủng vi khuẩn 2.7	Ghi chú điều kiện / Mức ý nghĩa
Đặc điểm khuẩn lạc trên TSA	Tròn, rìa răng cưa, màu trắng, khô	Lớn, rìa trong, tâm màu trắng, ẩm	Quan sát hình thái học
Nhuộm Gram & hình thái tế bào	Trực khuẩn, Gram dương (+)	Trực khuẩn, Gram dương (+)	Soi kính hiển vi vật kính dầu 100X
Khả năng tạo nội bào tử	Dương tính (+)	Dương tính (+)	Phương pháp Schaeffer-Fulton
Thử nghiệm Catalase ($H_2O_2$ 30%)	Dương tính (+) sinh bọt khí	Dương tính (+) sinh bọt khí	Thử nghiệm enzyme
Thử nghiệm Oxidase	Dương tính (+) hóa tím	Dương tính (+) hóa tím	Cơ chất tetramethyl-p-phenylenediamine
Tính di động	Dương tính (+) làm đục thạch	Dương tính (+) làm đục thạch	Thạch mềm 4 - 5 g/L agar
Đường kính vòng phân giải ở 100 ppm PBZ	$3,07 \pm 0,03$ cm	$2,60 \pm 0,06$ cm	Khảo sát nồng độ ($P < 0,01$)
Đường kính vòng phân giải ở 200 ppm PBZ	$2,77 \pm 0,03$ cm	$2,45 \pm 0,05$ cm	Khảo sát nồng độ ($P < 0,01$)
Đường kính vòng phân giải ở 300 ppm PBZ	$2,73 \pm 0,07$ cm	$2,13 \pm 0,09$ cm	Khảo sát nồng độ ($P < 0,01$)
Đường kính vòng phân giải ở nhiệt độ 30°C	$3,07 \pm 0,03$ cm	—	Nồng độ 100 ppm PBZ ($P < 0,01$)
Đường kính vòng phân giải ở nhiệt độ 35°C	$1,73 \pm 0,13$ cm	—	Nồng độ 100 ppm PBZ ($P < 0,01$)
Đường kính vòng phân giải ở nhiệt độ 40°C	0 cm	—	Không phát hiện vòng phân giải
Hiệu suất phân giải PBZ sau 15 ngày	Giảm 15% nồng độ ban đầu	Chưa phát hiện suy giảm	Đo bằng HPLC-PDA ở mức 100 ppm PBZ
Kết quả định danh gen 16S rRNA	Bacillus velezensis (99,51%)	Bacillus stercoris (99,93%)	Phân tích BLASTn trên ngân hàng gen NCBI

Giải pháp và kiến nghị của tác giả

Từ kết quả thực nghiệm, tác giả đề xuất một số định hướng ứng dụng và nghiên cứu tiếp theo:

• Khuyến nghị tiếp tục phân lập và sàng lọc thêm các chủng vi sinh vật mới bằng cách thay đổi phương pháp tiếp cận hoặc mở rộng địa bàn lấy mẫu nhằm tìm kiếm các chủng có hoạt lực cao hơn.
• Đề xuất mở rộng nghiên cứu sang việc làm sáng tỏ cơ chế sinh hóa và con đường phân giải, chuyển hóa trung gian của PBZ dưới tác động của các chủng vi khuẩn này.
• Kiến nghị nghiên cứu phối trộn tổ hợp các chủng vi khuẩn có khả năng phân giải PBZ để tiến tới phát triển chế phẩm sinh học xử lý triệt để lượng hóa chất tồn dư trong đất canh tác cây ăn quả.

Đóng góp mới của đề tài

Nghiên cứu đã tự phân lập và chứng minh được rằng đất chuyên canh cây ăn quả lâu năm tại An Giang và Tiền Giang chứa các chủng vi khuẩn bản địa thích nghi tốt với áp lực hóa chất. Đặc biệt, chủng Bacillus velezensis 1.3 và Bacillus stercoris 2.7 được phát hiện có khả năng sinh trưởng và tạo vòng phân giải ở nồng độ PBZ lên đến 300 ppm trên đĩa thạch. Đây là mức nồng độ khảo sát cao hơn nhiều so với nghiên cứu của Đặng Phạm Thu Thảo và ctv (2014) trên Burkholderia sp. (15 ppm PBZ) và nghiên cứu của Pham và ctv (2023) (60 ppm PBZ). Khóa luận bổ sung vào cơ sở dữ liệu vi sinh vật phân giải PBZ hai loài mới thuộc chi Bacillus, mở ra hướng tiếp cận xử lý môi trường bằng nhóm vi khuẩn Gram dương sinh nội bào tử có sức sống bền bỉ trong điều kiện tự nhiên.

---

Hạn chế và hướng nghiên cứu tiếp

Khóa luận tự chỉ ra một số hạn chế nội tại trong quá trình thực hiện:

• Chủng vi khuẩn 2.7 (Bacillus stercoris) mặc dù tạo vòng phân giải rõ rệt trên đĩa thạch ($2,60$ cm ở 100 ppm) nhưng lại chưa làm giảm hàm lượng PBZ trong môi trường nuôi cấy lỏng sau 15 ngày phân tích bằng HPLC-PDA. Tác giả nhận định thời gian khảo sát 15 ngày là chưa đủ để chủng này kích hoạt hoàn toàn hệ enzyme dị hóa trong pha lỏng.
• Các khảo sát mới dừng lại ở quy mô phòng thí nghiệm trên môi trường khoáng nhân tạo và giới hạn ở hai yếu tố môi trường đơn lẻ (nồng độ cơ chất và nhiệt độ), chưa đánh giá toàn diện các yếu tố ảnh hưởng khác.

Để hoàn thiện vấn đề nghiên cứu, tác giả định hướng các nội dung cần tiếp tục triển khai:

• Kéo dài thời gian nuôi cấy trong pha lỏng lên 30 đến 40 ngày (tương tự thiết kế của Pham và ctv, 2023) để đánh giá đầy đủ động học phân giải của chủng Bacillus stercoris 2.7.
• Khảo sát bổ sung các điều kiện môi trường đa dạng khác bao gồm dải pH, độ mặn và sự hiện diện của các nguồn carbon bổ trợ.
• Ứng dụng kỹ thuật phân tích hóa đo lường chuyên sâu nhằm xác định các sản phẩm chuyển hóa trung gian, từ đó mô hình hóa con đường thoái biến PBZ của hai chủng vi khuẩn đã định danh.

---

Giá trị tham khảo

Tài liệu khóa luận có giá trị thực tiễn và chuyên môn cao đối với sinh viên, học viên cao học và cán bộ nghiên cứu thuộc các chuyên ngành Công nghệ Sinh học, Khoa học Môi trường, Nông học và Bảo vệ Thực vật.

Các nội dung đặc biệt hữu ích để tham khảo bao gồm:

• Quy trình chuẩn bị môi trường khoáng tối thiểu bổ sung hoạt chất bảo vệ thực vật kỵ nước và kỹ thuật làm giàu mật số vi khuẩn chịu áp lực hóa chất theo chu kỳ.
• Phương pháp cấy chấm điểm kết hợp thuốc thử Lugol để định tính nhanh hoạt tính phân giải hợp chất hữu cơ vòng trên đĩa petri.
• Quy trình xử lý mẫu sinh khối vi khuẩn (ly tâm rửa nước khử khoáng để loại bỏ triệt để nguồn dinh dưỡng ngoại lai trước khi bố trí thử nghiệm chuyển hóa) và quy trình chuẩn bị mẫu phục vụ định lượng tồn dư thuốc bảo vệ thực vật qua hệ thống HPLC-PDA.
• Kỹ thuật tách chiết, khuếch đại gen 16S rRNA và xử lý phân tích phả hệ bằng phần mềm MEGA 11 kết hợp công cụ BLASTn.

---

Câu hỏi thường gặp

1. Nông dân tại các vùng thu mẫu ở An Giang và Tiền Giang sử dụng loại chế phẩm Paclobutrazol nào và thời gian sử dụng thực tế là bao lâu?
Toàn bộ 100% hộ dân tại 10 điểm khảo sát đều sử dụng chế phẩm thương mại mang tên Bidamin 15WP. Thời gian sử dụng liên tục tại các vườn dao động từ 5 đến 9 năm (vườn xoài X1, X2 dùng 5 năm; X3, X4, X5 dùng 6 năm; vườn sầu riêng SR1, SR2, SR5 dùng 6 năm; SR3 dùng 7 năm; và SR4 dùng lâu nhất với 9 năm liên tục).

2. Từ 10 mẫu đất ban đầu, tác giả đã phân lập được bao nhiêu chủng vi khuẩn và có bao nhiêu chủng thể hiện khả năng phân giải PBZ?
Từ 10 mẫu đất ban đầu, tác giả đã phân lập được 20 chủng vi khuẩn thuần có hình thái khuẩn lạc khác nhau. Qua thử nghiệm định tính bằng phương pháp cấy điểm nhuộm Lugol, có 7 trong tổng số 20 chủng xuất hiện vòng sáng phân giải PBZ với đường kính dao động từ 0,60 cm đến 3,03 cm.

3. Điều kiện nồng độ PBZ và nhiệt độ nào cho hoạt tính phân giải tốt nhất của các chủng vi khuẩn được tuyển chọn?
Khảo sát thực nghiệm chứng minh nồng độ PBZ 100 ppm và nhiệt độ nuôi ủ 30°C là điều kiện tối ưu nhất cho hoạt tính phân giải của vi khuẩn (chủng 1.3 đạt đường kính vòng phân giải $3,07 \pm 0,03$ cm). Khi nâng nhiệt độ lên 35°C, đường kính vòng phân giải giảm mạnh xuống $1,73 \pm 0,13$ cm, và ở 40°C thì vi khuẩn hoàn toàn không tạo vòng phân giải (0 cm).

4. Hai chủng vi khuẩn triển vọng nhất được định danh là loài gì và có độ tương đồng sinh học phân tử bao nhiêu phần trăm?
Dựa trên kết quả giải trình tự vùng gen 16S rRNA và đối chiếu BLASTn trên ngân hàng gen NCBI, chủng 1.3 được định danh là Bacillus velezensis với độ tương đồng 99,51%, và chủng 2.7 được định danh là Bacillus stercoris với độ tương đồng 99,93%.

5. Khả năng làm giảm nồng độ PBZ của chủng vi khuẩn 1.3 và 2.7 trong môi trường khoáng lỏng sau 15 ngày đạt kết quả như thế nào qua phân tích HPLC-PDA?
Sau 15 ngày nuôi cấy trong môi trường khoáng bổ sung 100 ppm PBZ, phân tích sắc ký HPLC-PDA cho thấy chủng 1.3 (Bacillus velezensis) đã phân giải và làm giảm 15% hàm lượng PBZ so với mức ban đầu. Ngược lại, chủng 2.7 (Bacillus stercoris) chưa ghi nhận sự suy giảm nồng độ PBZ trong cùng khoảng thời gian này.

---

Kết luận

Khóa luận tốt nghiệp của sinh viên Nguyễn Thị Tường Vy đã phân lập thành công 20 dòng vi khuẩn từ đất chuyên canh xoài và sầu riêng tại An Giang và Tiền Giang, qua đó tuyển chọn được hai chủng vi khuẩn Gram dương sinh nội bào tử triển vọng là Bacillus velezensis 1.3 và Bacillus stercoris 2.7. Nghiên cứu xác lập nồng độ 100 ppm PBZ và nhiệt độ 30°C là điều kiện tối ưu cho hoạt tính phân giải trên đĩa thạch, đồng thời chứng minh chủng B. velezensis 1.3 có khả năng làm giảm 15% hàm lượng PBZ trong môi trường lỏng sau 15 ngày nuôi cấy. Đây là cơ sở khoa học thực nghiệm quan trọng, cung cấp nguồn giống vi sinh vật bản địa phục vụ định hướng nghiên cứu sản xuất chế phẩm sinh học xử lý tồn dư thuốc điều hòa sinh trưởng, góp phần cải tạo và phục hồi hệ sinh thái đất nông nghiệp.

Trích đoạn nội dung tài liệu

CHƯƠNG 1. Mục tiêu đỀ tài. Nối đúng THC: HIỂT g2 eso arnseers cere S9SEEEEXANGLSABSSUECSH043920SS038S4484i103530023024080380096:01238 2 CHƯƠNG 2. TONG QUAN TÀI LIỆU.

Tổng quan về xoài, sầu riêng và phương pháp kích thích ra hoa trái vụ. Tổng quan VỀ XOài. Tổng quan về sầu ri6ng eo. Phương pháp kích thích ra hoa trái vụ bằng Paclobutrazol ở xoài và sầu riêng.

Tổng quan về paclobutrazol, vai trò va tác hại của paclobutraZol.--- 6 DeDoles PACIOD UAL lonueuintegiisnnöigBiiIBiV3808033888100R\3G838A506149301883040100G03823303583E42180801g1830030063889880008/008004Ù 6 2.WOTGUÚN ĐBHEIGBUUEHZlispissgseissiisgessessil5ix04820Pá:300390160s05:812383651863368503003g8559:8tSSE 7 2. Tac hại của pacloDufTAZOÌ.-- --- --- + + + +* + **xE 1S vn HH HH kg 7 3:3.khái niệm HPLG-PDA cái dt ó1 0á btdkElšEkssi1uEBNEQ40518 E5216313tvS48I43i551488. NHững nghiện Cứu TONS THƯỚC wcscescecevvevressssrnssnensesssnesessesvavereovesvsvsvasuneresuaeeesueasesuesees 9 2. Những nghiên cứu HƯỚC |HOÀI-:ceccssesxss6- 668244611006 111 010148141661440356556556456/665115806801018 10 CHUONG 3.

VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP. Thời gian và địa điểm nghiên cứu .----- 2: 2¿©22+2++2E++EE+£E++EEeEE+2Exerxrrrrerxres 12 3. Mẫu thí nghiệm. Dụng cụ và thiẾt bị.Phương phap nghiÊn:GỮU-‹.

Ehương phẩy hi Bi seseenakaeinbidEk nh ghEHHà gagL42g. Phương pháp phân lập các dòng vi khuẩn có khả nang phân giải PBZ. Khảo sát các điều kiện phân giải PBZ trên thạch đĩa. Khảo sát đặc điểm hình thái chủng được chọn.

Phương pháp đánh giá và khảo sát khả năng chuyển hóa PBZ. Phương pháp định danh bằng sinh học phân tử.-- 2-2222 55z52zz25z+2 20 BANU NY 8. KET QUA VÀ THẢO LUẬN. Thu mau, phân lập, định tính khả năng phân giải PB/.

eC TsosengnoartatttdftiiGibcPNsttofitRGE/09/SESNnSĐ-ONHGLSL4GIGUESGDdNEVEnargsoi 21 ee, | re 21 4. Kết qua định tính khả năng phân giải PBZ.ccc ccc ccseecseeceseecseesseestesseeeeeees 22 4. Kết quả khảo sát vòng phân giải PBZ trên thạch đĩa. Kết quả khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ PBZ đến vòng phân giải.

Khảo sát sự ảnh hưởng của nhiệt độ đến vòng phân giải. Kết quả làm thuần giữ giống và các đặc điểm hình thái của chủng được chon. Kết quả đánh giá và khảo sát khả năng chuyên hóa PBZ. Sự phát triển của các chủng vi khuẩn trong môi trường khoáng.

Nồng độ PBZ trong môi trường nuôi cấy lỏng vào ngày 0 va ngày 15. 2 2-52222222122212212211221221121121121121111121121121121121121121121121 212 xe 30 CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ DE NGHỊ. 33 TÀI LIEU THAM KHẢO.34 Vil DANH SÁCH CAC CHỮ VIET TAT PBZ: Paclobutrazol Ctv: cộng tác viên Vsv: vi sinh vat vill DANH SACH CAC BANG Trang Bảng 3.

Địu điểm 18 THÔ cccsseccnctereresirrsesiarnmntnreartstucwteniuieamnmionendas 12 Bảng 4. Khảo sát nông dân ở địa điểm thu mẫu.----2- 22222222+2x+2zx+zxz+z 21 Bảng 4. Đường kính vòng phân giải PBZ (cm) của các chủng vi khuẩn sau 5 ngày 23 Bảng 4. Đường kính vòng phân giải PBZ (cm) ở các nồng độ khác nhau.

Đường kính vòng phân giải PBZ (cm) ở các nhiệt độ khác nhau. Đặc điểm khuẩn lạc của các dong vi khuẩn được chọn. Đặc điểm sinh hóa của 2 chủng vi khuẩn.---2- 2 5222222zz2zz+zxz>sz 26 IX DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2. Cau trúc của Paclobutrazol.-- -- 2-2 ©22©2++2E+E++EE2EE+EEvEE+erxerxrrrrerrree 6 Hình 3.

Sơ đồ tóm tắt quy trình thí nghiệm. 2-22 222222222z22z22zzz2zz+ 15 Hình 3. Sơ đồ tóm tắt quy trình thí nghiệm 2.---- 2 2222222222222EE22+22zzzzz+ 16 Hình 4. Một số dia cấy trang trên môi trường khoáng tối thiểu bổ sung PBZ.

Một số đĩa cấy ria trên môi trường khoáng tối thiểu bồ sung PBZ. Một số đĩa cấy ria trên môi trường TSA. Các dòng vi khuẩn có vòng phân giải tốt nhất ở nồng độ PBZ 100 ppm. Các dòng khuan được chọn trên môi trường TSA.

Kết quả nhuộm Gram của 2 dong vi khuẩn được chọn. Kết quả nhuộm bao tử của 2 dòng vi khuẩn được chọn. Sự phát triển của các chủng vi khuẩn trong môi trường khoáng. Sắc kí đồ thé hiện nồng độ PBZ của chủng 1.

Sắc ki đồ thé hiện nồng độ PBZ của chủng 2. Kết qua Blast của chủng vi khuẩn 1. Kết qua Blast của chủng vi khuẩn 2.---2©22222222222222E2222zz2ze2 29 Hình 4. Cây phát sinh chủng loại của chủng vi khuẩn 1.

Cây phát sinh chủng loại của chủng vi khuẩn 2. Dat van đề Cây ăn quả là những cây nông nghiệp được trồng khá phổ biến ở nước ta, đem lại nguồn thu nhập không nhỏ cho người dân. Van đề thị trường nông sản thường không ổn định và rat bap bênh vì nhà vườn không thé định giá cho nông sản. Do vậy, thường xuyên xảy ra hiện tượng “được mùa mất giá”.

Theo Nguyễn Sự, 2020 nếu sản xuất nghịch vụ thì lợi nhuận cao gấp 1,7 lần so với sản xuất vụ chính. Do đó, nông dân dùng nhiều biện pháp xử lý ra hoa trái vụ cho vườn của mình, trong đó có sử dụng chế pham paclobutrazol (PBZ). PBZ có chức năng ức chế kéo dai tế bao và kéo đài long, làm chậm tăng trưởng cây trồng bằng cách ức chế sinh tổng hợp giberelin. PBZ là hợp chất hóa học xử lý được đánh giá cao trong việc xử lý ra hoa cây ăn trái (Trần Văn Hâu và ctv, 2001).

Nông dân sử dụng PBZ với nồng độ rất cao 1000 - 1500 ppm. Hiện tại, nông dân còn tưới trực tiếp vào các gốc cây đề kích thích ra hoa với nồng độ lên đến 5,0 g hoạt chất cho 1 m đường kính (Tran Văn Hau va ctv, 2005). Tuy nhiên, do thiếu các nhóm chức phân cực nên PBZ rất khó tan trong nước nhưng rat dé liên kết với các vị trí ky nước trong dung môi hữu co. Vòng chlorobenzene của paclobutrazol có thé bị di hóa, nhưng vòng 1,2,4 - trizole có khả năng chống lai sự phân giải của vi sinh vật.

Việc phá hủy paclobutrazol bằng phương pháp phi sinh học diễn ra trong đất rất khó bởi vì độ bay hơi của paclobutrazol rất thấp (1 Pa) và thường lưu tồn trong đất ở thời gian rất lâu. Paclobutrazol có thời gian bán hủy từ 43 đến 618 ngày (trung bình 182 ngày) trong đất ở điều kiện hiếu khí. Thời gian bán hủy thực tế phụ thuộc vào các điều kiện vật lý và sinh học, bao gồm nhiệt độ xung quanh, độ chặt của đất và thành phần vi sinh vật đất. Vì nhu cầu tiêu thụ quanh năm các nhóm cây ăn quả như xoài, nhãn, sầu riêng.

Hiện nay, PBZ được sử dụng rộng rãi đến quá mức tại các nhà vườn, làm cho đất trồng bị tồn dư một lượng paclobutrazol khá lớn. Bên cạnh đó, việc liên tục sử dung paclobutrazol trong thời gian dài dẫn đến tình trạng cây chậm phát triển, trở nên còi cọc và sức chống chịu kém. Bên cạnh đó PBZ rất độc cho sức khỏe con người và ảnh hưởng đến môi trường sinh thái (Wastson và Jacobs, 2012). Do đó đề tài được thực hiện nhằm mục đích tuyển chọn các chủng vi khuan có khả năng phân giải PBZ.

Mục tiêu đề tài Phân lập, tuyển chọn các dòng vi khuẩn có khả năng chuyển hóa Paclobutrazol ở các vùng trồng cây ăn quả ở tỉnh An Giang và Tiền Giang. Mục tiêu 1: phân lập được 2-3 dòng vi khuẩn có khả năng phân giải PBZ trong các mẫu đất trồng xoài và sầu riêng đã thu được. Mục tiêu 2: tìm ra điều kiện phân giải PBZ tốt nhất của các chủng vi khuẩn được chọn Mục tiêu 3: đánh giá được khả năng phân giải PBZ của các dòng vi khuẩn trong môi trường khoáng, xác định được mật số vi khuẩn và nồng độ PBZ sau 15 ngày. Mục tiêu 4: định danh được dòng vi khuẩn phân giải PBZ.

Nội dung thực hiện Nội dung 1: phân lập các dòng vi khuẩn có khả năng chuyên hóa PBZ. Nội dung 2: khảo sát các điều kiện phân giải PBZ trên thạch đĩa Nội dung 3: đánh giá khả năng phân giiar PBZ của các dòng vi khuẩn trong môi trường khoáng. Nội dung 4: định danh các dòng vi khuan chuyền hóa PBZ. TONG QUAN TÀI LIEU 2.

Téng quan về xoài, sầu riêng và phương pháp kích thích ra hoa trái vụ bang Paclobutrazol ở xoài và sầu riêng 2. Tổng quan về xoài Theo Dương Minh va ctv, (1996), xoài (Mangifera indica) là cây ăn quả nhiệt đới, phần lớn các tác giả đều cho rằng nguồn gốc cây xoài ở miền Đông Ấn Độ và các vùng giáp ranh như Miến Điện, Việt Nam, Malaysia. Trên thé giới hiện nay có 87 nước trồng xoài với diện tích khoảng 1,8 - 2,2 triệu ha. Vùng Châu Á chiếm 2/3 diện tích trồng xoài trên thế giới, trong đó đứng đầu là Ấn Độ (chiếm gần 70% sản lượng xoài thế giới với 9,3 triệu tấn), Thái Lan, Pakistan, Philippin, và Miền Nam Trung Quốc, Zimbabué, Ghiné, Cônggô, Nam Phi, Keynia, Modambich, Mali, Ai Cập, Brazin, Mêhicô, Hoa kỳ.

Ngoài ra, xoài còn được trồng ở vùng ven biển nước Úc. Khoảng 3 - 4 tháng sau khi tré hoa thì trái đã đủ già và chín. Năng suất tăng dần từ năm cho trái đầu tiên đến sau 5 năm thì 6n định. Trái được hái khi đã già, da láng, lúc đó trái hơi nặng hơn nước.

Có thé quan sát bằng kinh nghiệm trên mỗi giống dé ấn định thời gian thu hoạch. Quả xoài chín có màu vàng hấp dẫn, có vị chua ngọt, mùi thơm ngon được nhiều người ưa thích và được xem là một loại quả quí. Trái xoài chứa nhiều vitamin A, C, đường (15,4%), các acid hữu cơ nên xoài được sử dụng rộng rãi cả trái chín và trái già còn xanh. Xoài chín được ăn tươi, đóng hộp, làm nước trái cây, mứt kẹo, kem, sấy khô dé tiêu thụ nội địa hay xuất khẩu.

Ở Việt Nam xoài được trồng từ Nam chí Bắc, vùng trồng xoài tập trung là từ Bình Định trở vào nhiều nhất là các tỉnh Đồng Bằng sông Cửu Long như: Tiền Giang (trên 6.000 ha, trong đó đang cho trái 4.000 ha), Đồng Tháp, Vĩnh Long, Cần Thơ, Đồng Nai. Các giống xoài hiện được trồng tại Việt Nam Xoài Cát Hòa Lộc: xuất phát từ Cái Bè (Tiền Giang), xoài có trái to, trọng lượng trái 400 - 600 g, thịt trái vàng, dé, thơm, ngọt, hat dep, được coi la giống xoai có phẩm chất ngon. Thời gian từ tré bông đến chín trung bình 3,5 - 4 tháng. Xoài Cát Chu: phẩm chất trái ngon, thịt thơm ngọt có vị hơi chua, dạng trái hơi tròn, trong lượng trái trung bình 250 - 350 g, vỏ trái mỏng.

Day là giống xoài ra hoa rat tập trung và đễ đậu trái, năng suất rất cao. Xoài Xiêm: phẩm chất tương đối ngon, cơm vàng, thịt dẽo, mịn, hạt nhỏ, vỏ trái dày. Đây là giống dễ đậu trái, năng suất cao. Xoài Bưởi: còn gọi là xoài ghép hay xoài 3 mùa mưa, trọng lượng trái trung bình 250 - 350 g, có nguồn gốc từ Cái Bè (Tiền Giang), giống xoài nay có thé trồng được trên nhiều loại đất ké cả đất nhiễm phèn, mặn.

Cây phát triển nhanh, nếu trồng từ hột cây cho trái sau 2,5 - 3 năm. Nam-dok-mai (Thái Lan): tán thưa, lá to bản, mép gợn sóng. Trái nặng trung bình 320 g, hình bầu dục, đầu trái nhọn, vỏ mỏng láng, màu vàng đẹp, ngọt, thơm, hạt nhỏ. Từ khi nở hoa đến thu hoạch 115 ngày.

Khiew-sa-woei (Thái Lan): là giống xoài ăn xanh, cây phát triển mạnh, lá thon đài, đầu hơi nhọn, trái đài hơi cong, nặng trung bình 300 g.