Nghiên Cứu Chế Tạo Kit Chẩn Đoán Nhanh Streptococcus Suis Type 2 Ở Lợn

Tài liệu nghiên cứu Nghiên cứu chế tạo kit chần đoán nhanh streptococcus suis type 2 ở lợn, tổng hợp lý thuyết và thực hành, cung cấp kiến thức chuyên sâu về .

• Tác giả: Lê Quốc Việt
• Người hướng dẫn: PGS. Đinh Thị Bích Lân
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Bệnh lý học và chữa bệnh vật nuôi
• Đề tài: Nghiên Cứu Chế Tạo Kit Chẩn Đoán Nhanh Streptococcus Suis Type 2 Ở Lợn
• Loại tài liệu: luận án
• Năm xuất bản: 2020
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 1.1. Lời cam đoan
• 1.2. Mục lục
• 1.3. Danh mục chữ viết tắt
• 1.4. Danh mục bảng
• 1.5. Danh mục hình
• 1.6. Trích yếu luận án
• 1.7. Thesis abstract
• 2. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 3. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
• 4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 5. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
• 6. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 7. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nghiên Cứu Chẩn Đoán Nhanh S

Bệnh liên cầu khuẩn lợn do Streptococcus suis (S. suis) gây ra là một bệnh truyền nhiễm nguy hiểm, ảnh hưởng đến cả lợn và người. S. suis type 2 là một trong những type huyết thanh phổ biến nhất gây bệnh ở người và động vật. Bệnh gây ra các triệu chứng nghiêm trọng như viêm màng não, nhiễm khuẩn huyết, và có thể dẫn đến tử vong hoặc di chứng nặng nề như điếc. Việc chẩn đoán nhanh và chính xác S. suis type 2 là vô cùng quan trọng để có thể điều trị kịp thời và ngăn chặn sự lây lan của bệnh. Các phương pháp chẩn đoán truyền thống như nhuộm Gram, phân lập vi khuẩn và PCR có những hạn chế nhất định về thời gian và độ phức tạp. Do đó, nhu cầu về một phương pháp chẩn đoán nhanh, đơn giản và hiệu quả là rất lớn. Nghiên cứu này tập trung vào việc chế tạo một kit chẩn đoán nhanh S. suis type 2 ở lợn, nhằm đáp ứng nhu cầu cấp thiết này.

1.1. Tầm Quan Trọng Của Chẩn Đoán Nhanh Liên Cầu Lợn

Chẩn đoán nhanh bệnh liên cầu lợn là yếu tố then chốt để giảm thiểu thiệt hại kinh tế và bảo vệ sức khỏe cộng đồng. Việc phát hiện sớm giúp bác sĩ thú y và các nhà chăn nuôi có thể áp dụng các biện pháp can thiệp kịp thời, như sử dụng kháng sinh hoặc cách ly lợn bệnh. Điều này giúp giảm tỷ lệ tử vong ở lợn, hạn chế sự lây lan của bệnh trong đàn và giảm nguy cơ lây nhiễm sang người. Hơn nữa, chẩn đoán nhanh còn giúp xác định chính xác nguyên nhân gây bệnh, từ đó đưa ra phác đồ điều trị phù hợp và hiệu quả nhất.

1.2. Các Phương Pháp Chẩn Đoán S. Suis Hiện Nay

Hiện nay, có nhiều phương pháp chẩn đoán S. suis, bao gồm nhuộm Gram, phân lập vi khuẩn, PCR và ELISA. Nhuộm Gram là phương pháp đơn giản và nhanh chóng, nhưng độ nhạy và độ đặc hiệu thấp. Phân lập vi khuẩn là phương pháp tiêu chuẩn vàng, nhưng tốn thời gian và đòi hỏi kỹ thuật viên có kinh nghiệm. PCR là phương pháp có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, nhưng đòi hỏi trang thiết bị hiện đại và quy trình phức tạp. ELISA là phương pháp bán định lượng, có thể phát hiện kháng thể kháng S. suis, nhưng không thể phân biệt được giữa các type huyết thanh khác nhau.

II. Thách Thức Trong Chẩn Đoán Nhanh Liên Cầu Lợn Type 2

Mặc dù có nhiều phương pháp chẩn đoán S. suis, nhưng việc chẩn đoán nhanh và chính xác S. suis type 2 vẫn còn nhiều thách thức. Một trong những thách thức lớn nhất là sự đa dạng về mặt di truyền của S. suis, dẫn đến sự khác biệt về kháng nguyên giữa các chủng khác nhau. Điều này có thể làm giảm độ nhạy và độ đặc hiệu của các xét nghiệm chẩn đoán. Thêm vào đó, S. suis thường tồn tại cùng với các vi khuẩn khác trong đường hô hấp của lợn, gây khó khăn cho việc phân lập và xác định chính xác. Ngoài ra, các phương pháp chẩn đoán hiện có thường đòi hỏi trang thiết bị hiện đại, kỹ thuật viên có kinh nghiệm và thời gian thực hiện kéo dài, gây khó khăn cho việc ứng dụng rộng rãi trong thực tế.

2.1. Sự Đa Dạng Di Truyền Của Streptococcus Suis

Sự đa dạng di truyền của Streptococcus suis là một thách thức lớn trong việc phát triển các xét nghiệm chẩn đoán hiệu quả. Các chủng S. suis khác nhau có thể có các biến thể di truyền khác nhau, dẫn đến sự khác biệt về kháng nguyên. Điều này có thể làm giảm khả năng phát hiện của các xét nghiệm dựa trên kháng thể hoặc PCR. Do đó, cần phải lựa chọn các mục tiêu di truyền hoặc kháng nguyên bảo tồn để phát triển các xét nghiệm có thể phát hiện được nhiều chủng S. suis khác nhau.

2.2. Phân Biệt S. Suis Type 2 Với Các Type Huyết Thanh Khác

Việc phân biệt S. suis type 2 với các type huyết thanh khác là rất quan trọng, vì mỗi type huyết thanh có thể có độc lực và khả năng gây bệnh khác nhau. Các xét nghiệm chẩn đoán cần phải có độ đặc hiệu cao để tránh phản ứng chéo với các type huyết thanh khác. Điều này đòi hỏi việc sử dụng các kháng thể hoặc mồi PCR đặc hiệu cho S. suis type 2. Ngoài ra, cần phải có các quy trình kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt để đảm bảo tính chính xác của các xét nghiệm.

III. Phương Pháp Chế Tạo Kit Chẩn Đoán Nhanh S

Nghiên cứu này tập trung vào việc chế tạo kit chẩn đoán nhanh S. suis type 2 dựa trên kỹ thuật sắc ký miễn dịch (ICT). Kỹ thuật này sử dụng các kháng thể đặc hiệu để phát hiện S. suis type 2 trong mẫu bệnh phẩm. Mẫu bệnh phẩm được nhỏ lên một que thử, sau đó di chuyển dọc theo que thử và tương tác với các kháng thể đã được gắn sẵn. Nếu S. suis type 2 có mặt trong mẫu, nó sẽ tạo thành phức hợp kháng nguyên-kháng thể, tạo ra một vạch màu trên que thử. Kết quả được đọc bằng mắt thường, cho phép chẩn đoán nhanh chóng và dễ dàng ngay tại hiện trường.

3.1. Sản Xuất Kháng Thể Đặc Hiệu Kháng S. Suis Type 2

Việc sản xuất kháng thể đặc hiệu là một bước quan trọng trong việc chế tạo kit chẩn đoán nhanh. Trong nghiên cứu này, kháng thể được sản xuất bằng cách tiêm kháng nguyên S. suis type 2 vào chuột, sau đó thu thập huyết thanh chứa kháng thể. Kháng thể sau đó được tinh chế để loại bỏ các tạp chất và tăng độ đặc hiệu. Kháng thể đặc hiệu này sẽ được sử dụng để gắn lên hạt nano vàng và màng nitrocellulose trong kit chẩn đoán nhanh.

3.2. Ứng Dụng Kỹ Thuật Sắc Ký Miễn Dịch ICT Trong Kit

Kỹ thuật sắc ký miễn dịch (ICT) là một kỹ thuật đơn giản, nhanh chóng và hiệu quả để phát hiện các kháng nguyên hoặc kháng thể trong mẫu bệnh phẩm. Trong kit chẩn đoán nhanh S. suis type 2, ICT được sử dụng để phát hiện sự có mặt của S. suis type 2 trong mẫu bệnh phẩm. Mẫu bệnh phẩm được nhỏ lên que thử, sau đó di chuyển dọc theo que thử và tương tác với các kháng thể đã được gắn sẵn. Nếu S. suis type 2 có mặt trong mẫu, nó sẽ tạo thành phức hợp kháng nguyên-kháng thể, tạo ra một vạch màu trên que thử.

3.3. Sử Dụng Hạt Nano Vàng Để Tăng Độ Nhạy Của Kit

Hạt nano vàng được sử dụng để tăng độ nhạy của kit chẩn đoán nhanh. Hạt nano vàng có kích thước rất nhỏ và có khả năng khuếch đại tín hiệu màu. Trong kit chẩn đoán nhanh, kháng thể đặc hiệu được gắn lên hạt nano vàng. Khi S. suis type 2 có mặt trong mẫu, nó sẽ liên kết với kháng thể trên hạt nano vàng, tạo ra một phức hợp có màu sắc rõ ràng, giúp dễ dàng phát hiện bằng mắt thường.

IV. Đánh Giá Độ Nhạy Và Độ Đặc Hiệu Của Kit Chẩn Đoán

Sau khi chế tạo kit chẩn đoán nhanh, cần phải đánh giá độ nhạy và độ đặc hiệu của kit để đảm bảo tính chính xác và tin cậy. Độ nhạy là khả năng của kit để phát hiện S. suis type 2 trong mẫu bệnh phẩm, ngay cả khi nồng độ vi khuẩn rất thấp. Độ đặc hiệu là khả năng của kit để phân biệt S. suis type 2 với các vi khuẩn khác. Việc đánh giá độ nhạy và độ đặc hiệu được thực hiện bằng cách sử dụng các mẫu bệnh phẩm đã được xác định dương tính hoặc âm tính với S. suis type 2 bằng phương pháp PCR.

4.1. So Sánh Kết Quả Kit Với Phương Pháp PCR

Để đánh giá độ nhạy và độ đặc hiệu của kit chẩn đoán nhanh, kết quả của kit được so sánh với kết quả của phương pháp PCR, phương pháp được coi là tiêu chuẩn vàng trong chẩn đoán S. suis. Các mẫu bệnh phẩm được xét nghiệm bằng cả hai phương pháp, và kết quả được so sánh để xác định tỷ lệ dương tính thật, âm tính thật, dương tính giả và âm tính giả. Từ đó, tính toán độ nhạy và độ đặc hiệu của kit.

4.2. Xác Định Ngưỡng Phát Hiện Của Kit Chẩn Đoán Nhanh

Ngưỡng phát hiện của kit chẩn đoán nhanh là nồng độ vi khuẩn tối thiểu mà kit có thể phát hiện được. Để xác định ngưỡng phát hiện, các mẫu bệnh phẩm chứa S. suis type 2 với các nồng độ khác nhau được xét nghiệm bằng kit. Nồng độ thấp nhất mà kit có thể phát hiện được được coi là ngưỡng phát hiện của kit. Ngưỡng phát hiện càng thấp, độ nhạy của kit càng cao.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn Của Kit Chẩn Đoán Nhanh S

Kit chẩn đoán nhanh S. suis type 2 có nhiều ứng dụng thực tiễn trong công tác phòng chống dịch bệnh. Kit có thể được sử dụng để chẩn đoán nhanh S. suis type 2 tại các trang trại chăn nuôi, lò mổ và phòng khám thú y. Việc chẩn đoán nhanh giúp phát hiện sớm các trường hợp nhiễm bệnh, từ đó có thể áp dụng các biện pháp can thiệp kịp thời để ngăn chặn sự lây lan của bệnh. Ngoài ra, kit còn có thể được sử dụng để giám sát dịch bệnh và đánh giá hiệu quả của các biện pháp phòng chống dịch bệnh.

5.1. Chẩn Đoán Nhanh Tại Trang Trại Chăn Nuôi Lợn

Kit chẩn đoán nhanh có thể được sử dụng trực tiếp tại trang trại chăn nuôi lợn để phát hiện sớm các trường hợp nhiễm S. suis type 2. Việc chẩn đoán nhanh giúp người chăn nuôi có thể cách ly lợn bệnh, điều trị bằng kháng sinh và áp dụng các biện pháp vệ sinh phòng bệnh để ngăn chặn sự lây lan của bệnh trong đàn. Điều này giúp giảm thiểu thiệt hại kinh tế do bệnh gây ra.

5.2. Giám Sát Dịch Bệnh Liên Cầu Lợn Tại Lò Mổ

Kit chẩn đoán nhanh có thể được sử dụng tại các lò mổ để giám sát tình hình nhiễm S. suis type 2 ở lợn. Việc giám sát giúp phát hiện các lô lợn bị nhiễm bệnh, từ đó có thể áp dụng các biện pháp kiểm soát chất lượng thịt và đảm bảo an toàn thực phẩm. Ngoài ra, giám sát dịch bệnh còn giúp theo dõi sự biến đổi của vi khuẩn và đánh giá hiệu quả của các biện pháp phòng chống dịch bệnh.

VI. Kết Luận Và Hướng Phát Triển Kit Chẩn Đoán S

Nghiên cứu này đã thành công trong việc chế tạo kit chẩn đoán nhanh S. suis type 2 dựa trên kỹ thuật sắc ký miễn dịch. Kit có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, dễ sử dụng và cho kết quả nhanh chóng. Kit có nhiều ứng dụng thực tiễn trong công tác phòng chống dịch bệnh. Trong tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu để cải tiến kit, tăng độ nhạy và độ đặc hiệu, giảm giá thành và mở rộng phạm vi ứng dụng. Ngoài ra, cần nghiên cứu để phát triển các kit chẩn đoán nhanh cho các bệnh khác ở lợn, góp phần nâng cao hiệu quả sản xuất và bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

6.1. Đánh Giá Ưu Điểm Của Kit Chẩn Đoán Nhanh

Kit chẩn đoán nhanh S. suis type 2 có nhiều ưu điểm so với các phương pháp chẩn đoán truyền thống. Kit cho kết quả nhanh chóng, dễ sử dụng, không đòi hỏi trang thiết bị hiện đại và kỹ thuật viên có kinh nghiệm. Kit có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, giúp phát hiện chính xác các trường hợp nhiễm bệnh. Kit có giá thành hợp lý, phù hợp với điều kiện kinh tế của nhiều trang trại chăn nuôi.

6.2. Hướng Nghiên Cứu Phát Triển Kit Trong Tương Lai

Trong tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu để cải tiến kit chẩn đoán nhanh S. suis type 2. Cần nghiên cứu để tăng độ nhạy và độ đặc hiệu của kit, giảm giá thành và mở rộng phạm vi ứng dụng. Ngoài ra, cần nghiên cứu để phát triển các kit chẩn đoán nhanh cho các bệnh khác ở lợn, góp phần nâng cao hiệu quả sản xuất và bảo vệ sức khỏe cộng đồng. Cần tập trung vào việc sử dụng các công nghệ mới như công nghệ nano, công nghệ sinh học phân tử để phát triển các kit chẩn đoán có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ QUỐC VIỆT NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO KIT CHẨN ĐOÁN NHANH STREPTOCOCCUS SUIS TYPE 2 Ở LỢN Ngành: Bệnh lý học và chữa bệnh vật nuôi Mã số: 9 64 01 02 Người hướng dẫn: PGS. Đinh Thị Bích Lân PGS. Bùi Trần Anh Đào NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận án là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ lấy bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận án đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận án này đều được chỉ rõ nguồn gốc.

Hà Nội, ngày… tháng… năm 2020 Tác giả luận án Lê Quốc Việt i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận án, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Nhân dịp hoàn thành luận án, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc PGS. Đinh Thị Bích Lân và PGS. Bùi Trần Anh Đào đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài.

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Bệnh lý thú y, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam và Viện Công nghệ Sinh học – Đại học Huế đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận án. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán bộ viên chức Viện Công nghệ Sinh học – Đại học Huế đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Đặc biệt, tôi xin chân thành cám ơn tác giả Hoàng Thị Thùy Nhung, Đinh Thị Bích Lân, Đặng Thanh Long, Huỳnh Văn Chương, Lê Công Thịnh, Phùng Thăng Long, Nguyễn Xuân Hòa, Lê Đức Thạo và Bùi Trần Anh Đào đã cho phép tôi sử dụng kết quả nghiên cứu đã công bố vào một phần nội dung của luận án. Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận án.

Hà Nội, ngày. năm 2020 Tác giả luận án Lê Quốc Việt ii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan. ii Mục lục .iii Danh mục chữ viết tắt. v Danh mục bảng.

vi Danh mục hình. vii Trích yếu luận án. ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài.

Mục tiêu nghiên cứu của đề tài. Phạm vi nghiên cứu. Những đóng góp mới của đề tài. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài.

Ý nghĩa khoa học. Ý nghĩa thực tiễn. Tổng quan tài liệu. Tổng quan tình hình nghiên cứu.

Tình hình nghiên cứu vi khuẩn Streptococcus suis trên thế giới. Tình hình nghiên cứu vi khuẩn Streptococcus suis trong nước. Một số đặc tính của liên cầu khuẩn lợn. Đặc điểm hình thái.

Đặc tính nuôi cấy và sinh hóa. Sức đề kháng. Cấu trúc kháng nguyên. Khả năng gây bệnh.

Triệu chứng và bệnh tích của bệnh do vi khuẩn S. suis gây ra. Triệu chứng và bệnh tích do vi khuẩn S. suis gây ra ở lợn.

Triệu chứng và bệnh tích do vi khuẩn S. suis gây ra ở người. Chẩn đoán bằng phương pháp PCR. Chẩn đoán bằng phương pháp ELISA.

Điều trị bằng thuốc kháng sinh. Điều trị bệnh bằng huyết thanh. Giới thiệu về hạt nano vàng và kỹ thuật sắc ký miễn dịch. Tổng quan về hạt nano vàng.

Kỹ thuật sắc ký miễn dịch. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu.

Nghiên cứu sản xuất kháng nguyên của Streptococcus suis type 2. Nghiên cứu chế tạo kháng thể đặc hiệu kháng Streptococcus suis type 2. Nghiên cứu chế tạo conjugate-kháng thể kháng Streptococcus suistype 2. Đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu của KIT chẩn đoán nhanh Streptococcus suis type 2.

Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp sản xuất kháng nguyên của Streptococcus suis type 2. Phương pháp chế tạo kháng thể đặc hiệu kháng S. Phương pháp nghiên cứu chế tạo conjugate - kháng thể kháng Streptococcus suis type 2.

Phương pháp đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu của KIT chẩn đoán nhanh Streptococcus suis type 2. Phương pháp phân tích số liệu. Kết quả và thảo luận. Nghiên cứu sản xuất kháng nguyên Streptococcus suis type 2.

Tình hình nhiễm Streptococcus suis type 2 ở lợn giết mổ. Phân lập và xác định đặc tính sinh học phân tử của vi khuẩn S. Chế tạo kháng nguyên thô từ vi khuẩn S. Kết quả nghiên cứu sản xuất kháng thể đa dòng kháng S.

Kết quả xác định tính sinh miễn dịch của kháng nguyên. Kết quả xác định lượng kháng nguyên thích hợp cho khả năng đáp ứng miễn dịch ở chuột SA. Kết quả xác định chất bổ trợ thích hợp cho khả năng sinh miễn dịch của chuột SA. Chế tạo, tách chiết và định lượng kháng thể IgG kháng S.

Xác định hiệu giá kháng thể sau tinh chế. Kết quả nghiên cứu chế tạo conjugate – kháng thể kháng S. Xác định pH của dung dịch gold colloid thích hợp để gắn kháng thể với hạt vàng nano. Xác định nồng độ kháng thể kháng S.

suis type 2 tối ưu để gắn với hạt vàng nano. Kết quả chế tạo kháng thể cộng hợp. Kết quả đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu của KIT chẩn đoán nhanh Streptococcus suis type 2. Kết quả xác định nồng độ kháng thể bắt vi khuẩn thích hợp.

Kết quả xác định độ nhạy và độ đặc hiệu của KIT. Kết luận và kiến nghị. 86 Danh mục các công trình đã công bố liên quan đến luận án. 88 Tài liệu tham khảo.

100 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Diễn giải 6PGD 6-phosphogluconate-dehydrogenase ADN Acid deoxyribo nucleic ARN Axit ribonucleic Bp Base pair dNTP deoxyribonucleotide triphosphate E. coli Escherichia coli ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay/ xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme ICT Immunochromatographic test/ Kỹ thuật sắc ký miễn dịch IPTG Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside kb Kilobase kDa Kilodalton NC Nitrocellulose PBS Phosphat Buffer Saline PCR Polymerase Chain Reaction/ phản ứng khuếch đại gene S. suis Streptococcus suis SDS Sodium dodecyl sulfate X-gal 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-galacto- pyranoside v DANH MỤC BẢNG TT Tên bảng Trang 3. Thành phần phản ứng PCR phát hiện S.

Chu trình nhiệt cho PCR phát hiện mẫu dương tính. Thành phần PCR nhân đoạn gene 6PGD. Chu trình nhiệt cho phản ứng nhân gene 6PGD. Thành phần phản ứng nối sản phẩm PCR vào vector tạo dòng.

Bố trí thí nghiệm xác định lượng kháng nguyên thích hợp để gây tối miễn dịch. Bố trí thí nghiệm xác định chất bổ trợ thích hợp để gây tối miễn dịch. Xác định độ nhạy và độ đặc hiệu của KIT chẩn đoán nhanh. Tỷ lệ nhiễm liên cầu lợn type 2 ở lợn tại một số lò mổ trên địa bàn Thừa Thiên Huế.

Kết quả sinh hóa chủng vi khuẩn THHSS2. Sự sai khác của gene 6PGD của vi khuẩn S. suis type 2 chủng TTHSS2 phân lập được với gene 6PGD của vi khuẩn S. suis type 2 chủng SC 19 trên ngân hàng gene.

Kết quả đánh giá khả năng sinh miễn dịch của kháng nguyên. Ảnh hưởng của liều lượng kháng nguyên đến đáp ứng miễn dịch của chuột SA. Ảnh hưởng của chất bổ trợ đến đáp ứng miễn dịch của chuột SA. Kết quả chế tạo kháng thể kháng S.

Kết quả phát hiện vi khuẩn S. suis type 2 ở các nồng độ kháng thể bắt khác nhau. Ngưỡng phát hiện của KIT phát hiện nhanh vi khuẩn S. Đánh giá độ đặc hiệu của KIT.

Kết quả xác định độ đặc hiệu và độ nhạy của KIT. 84 vi DANH MỤC HÌNH TT Tên hình Trang 2. Hình ảnh nhuộm gram vi khuẩn S. Cấu trúc KIT chẩn đoán nhanh.

Cơ chế hoạt động của KIT chẩn đoán nhanh. Cấu trúc vector pGEM®-T Easy Vector Systems. Kết quả PCR kiểm tra mẫu dương tính với S. Kết quả phân lâp vi khuẩn Streptococcus suis trên môi trường thạch máu cừu 5%.

Kết quả nhuộm Gram vi khuẩn Streptococcus suis từ khuẩn lạc. Kết quả nhuộm Gram vi khuẩn Streptococcus suis từ canh khuẩn. Kết quả kiểm tra Streptococcus spp trên môi trường Bile Esculin agar. Kết quả lên men đường glucose và lactose của vi khuẩn S.

Kết quả kiểm tra tính di động của vi khuẩn. Kiểm tra khả năng sinh indol của vi khuẩn S. Kết quả PCR kiểm tra chủng vi khuẩn TTHSS2. Kết quả PCR nhân đoạn gen 6PGD của chủng TTHSS2.

Kết quả biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào khả biến E. Kết quả PCR nhân gen 6PGD trực tiếp từ khuẩn lạc trắng và kết quả các khuẩn lạc trắng PCR cùng cặp mồi M13. So sánh mức độ tương đồng của amino acid mã hóa từ đoạn gene 6PGD của chủng TTHSS2 và đoạn gene đã được công bố WP_012028448. Kết quả cấy vi khuẩn TTHSS2 bất hoạt cấy trên môi trường thạch máu cừu 5%.

Kết quả đánh giá tính an toàn của kháng nguyên TTHSS2. So sánh đáp ứng chuột khi được tiêm kháng nguyên S. suis type 2 với các liều khác nhau. Đáp ứng miễn dịch của chuột được tiêm kháng nguyên S.

suis type 2 phối trộn với các chất bổ trợ khác nhau. Gel nhuộm màu Coomassie Blue SDS-PAGE của các mẫu kháng thể đã tinh sạch. Kết quả xác định nồng độ protein kháng thể bằng Pierce BCA Protein Assay Kit. Đồ thị đường chuẩn BSA.

Kết quả xác định nồng độ kháng thể sau tinh sạch. Kết quả ELISA xác định hiệu giá kháng thể sau tinh sạch. Kết quả xác định pH của dung dịch gold colloid thích hợp để gắn kháng thể với hạt vàng nano. Kết quả xác định pH dung dịch gold colloid thích hợp.

Kết quả xác định nồng độ kháng thể thích hợp để gắn vào hạt vàng nano. Kết quả xác định nồng độ kháng thể thích hợp để gắn với dung dịch gold colloid. Kết quả sản xuất kháng thể cộng hợp. Kết quả chế tạo đệm conjugate kháng thể (conjugate pad).

Kết quả xác định nồng độ kháng thể bắt thích hợp. Kết quả xác định độ nhạy của Kit. Kết quả xác định độ đặc hiệu của Kit .