Luận văn thạc sĩ: Xây dựng phương pháp ELISA gián tiếp xác định dư lượng Fluoroquinolone trong sữa

• Tác giả: Hắc Bá Thành
• Người hướng dẫn: TS. Nguyễn Thị Diệu Thúy
• Trường học: Viện Hàn Lâm Khoa Học Và Công Nghệ Việt Nam
• Chuyên ngành: Hóa sinh thực nghiệm
• Đề tài: Phương Pháp ELISA Gián Tiếp Xác Định Dư Lượng Fluoroquinolone Trong Sữa
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2015
• Địa điểm: Hà Nội

• MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG I: TỔNG QUAN VỀ TÀI LIỆU
• 1.1. Kháng sinh nhóm Fluoroquilone
• 1.2. Nguồn gốc và sự phát triển của kháng sinh nhóm Fluoroquilone
• 1.3. Phân loại và cơ chế tác dụng
• 1.4. Cấu trúc, đặc điểm một số kháng sinh thuộc họ Fluoroquinolone
• 1.5. Ngƣỡng giới hạn cho phép ở một số thƣ̣c phẩm
• 1.6. Các phƣơng pháp xác định hàm lƣợng kháng sinh nhóm Fluoroquilone
• 1.7. Phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) và sắc ký khối phổ (LC-MS)
• 1.8. Phƣơng pháp ELISA (Enzyme - Linked Immuno sorbent Assay)
• 1.9. Nguyên lý phƣơng pháp ELISA
• 1.10. Ứng dụng phƣơng pháp ELISA
• 1.11. Tình hình sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi
• 1.12. Tác hại của Fluoroquinolone tồn dƣ trong thực phẩm
• 1.13. Tác hại của Fluoroquinolone đến môi trƣờng
• 1.14. Các nghiên cứu trong và ngoài nƣớc sử dụng ELISA phát hiện dƣ lƣợng Fluoroquilone
• 1.15. Các nghiên cứu ngoài nƣớc
• 1.16. Các nghiên cứu trong nƣớc
• 2. CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP
• 2.1. Vật liệu nghiên cứu
• 2.2. Dụng cụ, thiết bị
• 2.3. Các dung dịch đệm
• 2.4. Phƣơng pháp nghiên cứu
• 2.5. Mục tiêu của nghiên cứu
• 2.6. Địa điểm và đối tƣợng nghiên cứu
• 2.7. Nội dung nghiên cứu
• 2.8. Phƣơng pháp tổng hợp hapten gắn LEV với OVA/BSA
• 2.9. Phƣơng pháp tạo kháng thể đa dòng kháng LEV trên thỏ
• 2.10. Phƣơng pháp ELISA gián tiếp xác định dƣ lƣợng LEV
• 2.11. Giới hạn phát hiện nồng độ và độ đặc hiệu của nghiên cứu
• 2.12. Đánh giá hiệu suất thu hồi của LEV khi gây nhiễm nhân tạo
• 2.13. Chuẩn bị mẫu sữa
• 3. CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 3.1. Các thông số phản ứng ELISA gián tiếp
• 3.2. Kết quả phản ứng ELISA gián tiếp
• 3.3. Đánh giá độ ổn định của phƣơng pháp
• 3.4. Phản ứng ELISA để xác định dƣ lƣợng LEV trong sữa
• KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Tổng quan về phương pháp ELISA gián tiếp xác định dư lượng Fluoroquinolone trong sữa

Phương pháp ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) là một kỹ thuật miễn dịch được sử dụng rộng rãi để phát hiện và định lượng các chất trong mẫu. Trong bối cảnh an toàn thực phẩm, việc xác định dư lượng Fluoroquinolone trong sữa là rất quan trọng. Phương pháp này không chỉ nhanh chóng mà còn có độ nhạy cao, giúp phát hiện các chất kháng sinh tồn dư trong sản phẩm sữa. Việc áp dụng phương pháp ELISA gián tiếp giúp cải thiện độ chính xác và độ tin cậy trong việc xác định dư lượng kháng sinh, từ đó bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng.

1.1. Nguyên lý hoạt động của phương pháp ELISA

Phương pháp ELISA hoạt động dựa trên nguyên lý phản ứng giữa kháng nguyên và kháng thể. Khi mẫu sữa chứa dư lượng Fluoroquinolone được thêm vào, kháng thể đặc hiệu sẽ liên kết với kháng nguyên. Sự hiện diện của kháng nguyên được phát hiện thông qua phản ứng enzym, tạo ra tín hiệu có thể đo được.

1.2. Lợi ích của việc sử dụng phương pháp ELISA trong phân tích thực phẩm

Phương pháp ELISA mang lại nhiều lợi ích trong phân tích thực phẩm, bao gồm độ nhạy cao, khả năng xử lý nhiều mẫu cùng lúc và chi phí thấp. Điều này giúp các nhà sản xuất thực phẩm đảm bảo rằng sản phẩm của họ an toàn cho người tiêu dùng và tuân thủ các quy định về an toàn thực phẩm.

II. Vấn đề tồn dư Fluoroquinolone trong sữa và tác động đến sức khỏe

Tồn dư Fluoroquinolone trong sữa có thể gây ra nhiều vấn đề nghiêm trọng cho sức khỏe con người. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng việc tiêu thụ sữa có chứa dư lượng kháng sinh có thể dẫn đến hiện tượng kháng thuốc, làm giảm hiệu quả của các loại thuốc kháng sinh trong điều trị bệnh. Hơn nữa, sự tồn tại của các chất này trong thực phẩm cũng có thể gây ra các phản ứng dị ứng và các vấn đề sức khỏe khác.

2.1. Nguyên nhân dẫn đến tồn dư Fluoroquinolone trong sữa

Tồn dư Fluoroquinolone trong sữa thường xảy ra do việc sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi mà không tuân thủ đúng quy định về thời gian ngừng sử dụng thuốc trước khi thu hoạch sữa. Điều này dẫn đến việc kháng sinh còn lại trong sữa, gây nguy hiểm cho sức khỏe người tiêu dùng.

2.2. Tác động của dư lượng kháng sinh đến sức khỏe cộng đồng

Việc tiêu thụ sữa có chứa dư lượng Fluoroquinolone có thể dẫn đến sự phát triển của các chủng vi khuẩn kháng thuốc, làm giảm hiệu quả điều trị các bệnh nhiễm trùng. Ngoài ra, nó cũng có thể gây ra các vấn đề về tiêu hóa và dị ứng ở một số người tiêu dùng.

III. Phương pháp ELISA gián tiếp trong xác định dư lượng Fluoroquinolone

Phương pháp ELISA gián tiếp là một trong những kỹ thuật hiệu quả nhất để xác định dư lượng Fluoroquinolone trong sữa. Kỹ thuật này cho phép phát hiện các kháng sinh với độ nhạy cao và thời gian thực hiện ngắn. Việc sử dụng ELISA giúp các nhà nghiên cứu và nhà sản xuất thực phẩm nhanh chóng phát hiện và loại bỏ các sản phẩm không đạt tiêu chuẩn.

3.1. Quy trình thực hiện phương pháp ELISA gián tiếp

Quy trình thực hiện phương pháp ELISA gián tiếp bao gồm các bước chuẩn bị mẫu, thêm kháng thể và enzyme, và cuối cùng là đo độ hấp thụ quang. Mỗi bước đều cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo độ chính xác của kết quả.

3.2. Đánh giá độ nhạy và độ đặc hiệu của phương pháp

Độ nhạy và độ đặc hiệu của phương pháp ELISA gián tiếp được đánh giá thông qua các thử nghiệm với các mẫu sữa có chứa các mức độ khác nhau của Fluoroquinolone. Kết quả cho thấy phương pháp này có khả năng phát hiện rất thấp các dư lượng kháng sinh, đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng.

IV. Ứng dụng thực tiễn của phương pháp ELISA trong ngành thực phẩm

Phương pháp ELISA không chỉ được sử dụng trong nghiên cứu mà còn có ứng dụng rộng rãi trong ngành thực phẩm. Việc áp dụng phương pháp này giúp các nhà sản xuất thực phẩm kiểm soát chất lượng sản phẩm, đảm bảo rằng các sản phẩm sữa không chứa dư lượng Fluoroquinolone vượt quá giới hạn cho phép. Điều này không chỉ bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng mà còn nâng cao uy tín của sản phẩm trên thị trường.

4.1. Kiểm soát chất lượng sản phẩm sữa

Việc sử dụng phương pháp ELISA trong kiểm soát chất lượng sản phẩm sữa giúp phát hiện nhanh chóng các dư lượng kháng sinh, từ đó đảm bảo rằng sản phẩm đến tay người tiêu dùng là an toàn và chất lượng.

4.2. Nâng cao uy tín thương hiệu trong ngành thực phẩm

Các nhà sản xuất thực phẩm áp dụng phương pháp ELISA để chứng minh rằng sản phẩm của họ không chứa dư lượng kháng sinh, từ đó nâng cao uy tín thương hiệu và tạo niềm tin cho người tiêu dùng.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của phương pháp ELISA

Phương pháp ELISA gián tiếp đã chứng minh được hiệu quả trong việc xác định dư lượng Fluoroquinolone trong sữa. Với sự phát triển không ngừng của công nghệ, phương pháp này hứa hẹn sẽ ngày càng hoàn thiện hơn, giúp nâng cao độ chính xác và độ tin cậy trong phân tích thực phẩm. Tương lai, việc áp dụng công nghệ mới trong ELISA có thể mở ra nhiều cơ hội mới trong việc đảm bảo an toàn thực phẩm.

5.1. Tiềm năng phát triển của phương pháp ELISA

Với sự phát triển của công nghệ sinh học, phương pháp ELISA có thể được cải tiến để tăng cường độ nhạy và độ đặc hiệu, từ đó mở rộng khả năng phát hiện các chất độc hại khác trong thực phẩm.

5.2. Hướng nghiên cứu trong tương lai

Các nghiên cứu trong tương lai có thể tập trung vào việc phát triển các bộ kit ELISA tự động hóa, giúp tiết kiệm thời gian và chi phí cho các phòng thí nghiệm phân tích thực phẩm.

Tổng quan nghiên cứu

Fluoroquinolone là nhóm kháng sinh tổng hợp hóa học có tác dụng diệt khuẩn rộng, được sử dụng phổ biến trong phòng và điều trị bệnh ở chăn nuôi và thủy sản. Theo báo cáo của ngành, tổng lượng kháng sinh sử dụng trong y học và chăn nuôi tại các nước châu Âu lên đến khoảng 10.500 tấn, trong đó Fluoroquinolone chiếm khoảng 1%. Việc sử dụng không hợp lý dẫn đến tồn dư kháng sinh trong thực phẩm như thịt, cá, trứng, sữa, gây nguy hiểm cho sức khỏe cộng đồng và môi trường. Tại Việt Nam, nhiều nghiên cứu đã phát hiện tồn dư Fluoroquinolone vượt mức cho phép trong các sản phẩm nông nghiệp, ảnh hưởng nghiêm trọng đến uy tín sản phẩm và sức khỏe người tiêu dùng.

Mục tiêu nghiên cứu là xây dựng phương pháp ELISA gián tiếp để xác định định lượng kháng sinh Levofloxacin (LEV) trong sữa, nhằm cung cấp công cụ kiểm tra nhanh, chính xác và tiết kiệm chi phí trong điều kiện phòng thí nghiệm. Nghiên cứu được thực hiện tại Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam và phòng thí nghiệm tại CHLB Nga, sử dụng mẫu sữa tươi thu mua tại các điểm kinh doanh quanh Hà Nội. Kết quả nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng trong việc kiểm soát an toàn thực phẩm, bảo vệ sức khỏe cộng đồng và môi trường, đồng thời hỗ trợ các cơ quan quản lý trong việc giám sát tồn dư kháng sinh trong sản phẩm sữa.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên các lý thuyết và mô hình sau:

• Cơ chế tác dụng của Fluoroquinolone: ức chế tổng hợp acid nucleic của vi khuẩn thông qua ức chế enzyme DNA gyrase và topoisomerase IV, dẫn đến tiêu diệt vi khuẩn Gram âm và Gram dương.
• Phương pháp ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay): kỹ thuật miễn dịch dựa trên phản ứng đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng thể, sử dụng enzyme để tạo tín hiệu màu đo lường định lượng.
• ELISA gián tiếp cạnh tranh: phương pháp sử dụng kháng thể đa dòng đặc hiệu, cạnh tranh giữa kháng nguyên tự do trong mẫu và kháng nguyên cố định trên bề mặt giếng để xác định nồng độ kháng sinh.
• Khái niệm hapten: các phân tử nhỏ như LEV không có khả năng kích thích miễn dịch trực tiếp, cần liên kết với protein mang trọng lượng phân tử lớn (OVA/BSA) để tạo phức hợp hapten giúp tạo kháng thể.
• Phản ứng miễn dịch cạnh tranh: LEV tự do trong mẫu cạnh tranh với LEV gắn trên giếng ELISA để liên kết với kháng thể, từ đó xác định nồng độ LEV dựa trên cường độ tín hiệu màu.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Mẫu sữa tươi thu mua tại các điểm kinh doanh quanh Hà Nội (Ba Vì, Sơn Tây).
• Thiết bị và hóa chất: Máy đọc ELISA Bio Rad 550, đĩa ELISA MaxiSorp, các hóa chất chuẩn LEV, OVA, BSA, kháng thể đa dòng kháng LEV, dung dịch đệm PBS, PBST, TMB, dung dịch (NH4)2SO4 bão hòa.
• Phương pháp tổng hợp hapten: LEV được hoạt hóa bằng EDC và NHS trong DMF, sau đó gắn với protein OVA hoặc BSA trong đệm carbonate pH 9,5, thẩm tích loại bỏ tạp chất, bảo quản ở -20°C.
• Tạo kháng thể đa dòng: Tiêm chủng thỏ bằng phức hợp LEV-BSA với chất bổ trợ Freund’s, lấy huyết thanh, tinh chế IgG bằng ammonium sulfate, bảo quản ở -20°C.
• Phương pháp ELISA gián tiếp cạnh tranh: phủ LEV-OVA lên giếng ELISA, ủ với kháng thể đa dòng kháng LEV và mẫu sữa pha loãng, thêm kháng thể thứ hai gắn enzyme HRP, phát hiện màu bằng TMB, đọc OD ở bước sóng 450 nm.
• Chuẩn bị mẫu sữa: ly tâm loại bỏ chất béo, pha loãng 10 lần, xử lý bằng dung dịch (NH4)2SO4 bão hòa để loại bỏ protein và lipid gây nhiễu.
• Phân tích dữ liệu: sử dụng phần mềm Origin 8.5 để xây dựng đường chuẩn, xác định giới hạn phát hiện (LOD), tính hiệu suất thu hồi và phản ứng chéo với các kháng sinh cùng nhóm.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Xây dựng thành công phức hợp hapten LEV-OVA/BSA: Phức hợp được tổng hợp hiệu quả, đảm bảo khả năng gắn lên bề mặt giếng ELISA và kích thích miễn dịch tạo kháng thể đa dòng trên thỏ.

2. Tối ưu điều kiện phản ứng ELISA: Nồng độ LEV-OVA phủ giếng là 0,5 µg/ml; độ pha loãng kháng thể đa dòng kháng LEV là 1:5.000; độ pha loãng kháng thể thứ hai gắn HRP là 1:10.000. Các điều kiện này cho tín hiệu ổn định và độ nhạy cao.

3. Giới hạn phát hiện (LOD) của phương pháp là 0,2 ng/ml: Phạm vi phát hiện tuyến tính từ 0,2 đến 50 ng/ml, phù hợp với yêu cầu kiểm soát tồn dư LEV trong thực phẩm. So với các nghiên cứu quốc tế, LOD của nghiên cứu này tương đương hoặc thấp hơn, đảm bảo độ nhạy cao.

4. Hiệu suất thu hồi LEV trong mẫu sữa đạt 91-115%: Qua thử nghiệm gây nhiễm nhân tạo, phương pháp cho hiệu suất thu hồi cao, chứng tỏ khả năng loại bỏ ảnh hưởng của chất nền và độ chính xác trong định lượng.

5. Phản ứng chéo với các kháng sinh cùng nhóm Fluoroquinolone thấp (<10%): Đảm bảo tính đặc hiệu của phương pháp, giảm thiểu sai số do các kháng sinh khác có mặt trong mẫu.

Thảo luận kết quả

Phương pháp ELISA gián tiếp cạnh tranh được xây dựng dựa trên nguyên lý miễn dịch đặc hiệu, tận dụng khả năng tạo kháng thể đa dòng kháng LEV từ phức hợp hapten LEV-BSA. Việc tối ưu hóa các điều kiện phản ứng giúp tăng độ nhạy và giảm nhiễu nền, phù hợp với mẫu sữa có thành phần phức tạp. Giới hạn phát hiện 0,2 ng/ml đáp ứng tốt yêu cầu kiểm soát tồn dư kháng sinh theo tiêu chuẩn quốc tế.

So sánh với các phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) và sắc ký khối phổ (LC-MS), ELISA có ưu điểm về chi phí thấp, thao tác đơn giản, thời gian phân tích nhanh (khoảng 30 phút), phù hợp cho kiểm tra định lượng hàng loạt mẫu trong phòng thí nghiệm. Tuy nhiên, ELISA có thể bị ảnh hưởng bởi ma trận mẫu nên bước chuẩn bị mẫu và xử lý chất nền rất quan trọng.

Kết quả nghiên cứu cũng phù hợp với các báo cáo trong và ngoài nước về việc sử dụng ELISA để phát hiện tồn dư Fluoroquinolone trong thực phẩm và môi trường. Phương pháp này có thể được ứng dụng rộng rãi trong giám sát an toàn thực phẩm, góp phần giảm thiểu nguy cơ kháng thuốc và bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Triển khai áp dụng phương pháp ELISA gián tiếp trong các phòng kiểm nghiệm an toàn thực phẩm: Đào tạo nhân viên kỹ thuật, trang bị thiết bị cần thiết để thực hiện phân tích định lượng LEV trong sữa và các sản phẩm động vật khác, nhằm nâng cao năng lực giám sát tồn dư kháng sinh.

2. Xây dựng quy trình chuẩn và bộ kit ELISA thương mại hóa: Phát triển bộ kit chuẩn hóa, dễ sử dụng, có độ nhạy và đặc hiệu cao để phục vụ kiểm tra nhanh tại các cơ sở sản xuất, kinh doanh sữa, giảm thiểu chi phí và thời gian phân tích.

3. Tăng cường kiểm soát và quản lý việc sử dụng kháng sinh Fluoroquinolone trong chăn nuôi: Ban hành các quy định nghiêm ngặt về liều lượng, thời gian ngưng sử dụng trước thu hoạch, nhằm giảm thiểu tồn dư kháng sinh trong sản phẩm, bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng.

4. Nâng cao nhận thức và đào tạo cho người chăn nuôi, cán bộ quản lý: Tổ chức các chương trình tập huấn về tác hại của tồn dư kháng sinh, cách sử dụng kháng sinh hợp lý và an toàn, góp phần giảm thiểu tình trạng kháng thuốc và ô nhiễm môi trường.

5. Mở rộng nghiên cứu ứng dụng phương pháp ELISA cho các loại kháng sinh khác và mẫu thực phẩm đa dạng: Phát triển các phương pháp tương tự để kiểm soát tồn dư kháng sinh trong thịt, trứng, thủy sản, nhằm đảm bảo an toàn thực phẩm toàn diện.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Các nhà khoa học và nghiên cứu sinh trong lĩnh vực Hóa sinh, Công nghệ sinh học và An toàn thực phẩm: Nghiên cứu cung cấp phương pháp phân tích định lượng kháng sinh hiện đại, có thể áp dụng và phát triển thêm trong các đề tài liên quan.

2. Cơ quan quản lý nhà nước về an toàn thực phẩm và thú y: Tham khảo để xây dựng quy trình kiểm tra, giám sát tồn dư kháng sinh trong sản phẩm sữa và thực phẩm động vật, phục vụ công tác quản lý và thanh tra.

3. Doanh nghiệp sản xuất, chế biến và kinh doanh sữa, thực phẩm động vật: Áp dụng phương pháp kiểm tra nhanh tồn dư kháng sinh nhằm đảm bảo chất lượng sản phẩm, nâng cao uy tín và đáp ứng yêu cầu thị trường trong nước và xuất khẩu.

4. Người chăn nuôi và cán bộ kỹ thuật thú y: Hiểu rõ tác hại của tồn dư kháng sinh, áp dụng các biện pháp sử dụng thuốc hợp lý, giảm thiểu tồn dư trong sản phẩm, bảo vệ sức khỏe cộng đồng và môi trường.

Câu hỏi thường gặp

1. Phương pháp ELISA gián tiếp cạnh tranh có ưu điểm gì so với các phương pháp khác?
   Phương pháp ELISA gián tiếp cạnh tranh có ưu điểm là chi phí thấp, thao tác đơn giản, thời gian phân tích nhanh (khoảng 30 phút), độ nhạy cao với giới hạn phát hiện 0,2 ng/ml, phù hợp cho kiểm tra định lượng hàng loạt mẫu trong phòng thí nghiệm mà không cần thiết bị phức tạp như HPLC hay LC-MS.

2. Giới hạn phát hiện của phương pháp này có đáp ứng được tiêu chuẩn an toàn thực phẩm không?
   Có. Giới hạn phát hiện 0,2 ng/ml của phương pháp ELISA này nằm trong phạm vi yêu cầu kiểm soát tồn dư kháng sinh theo các tiêu chuẩn quốc tế và quy định của EU, FDA, phù hợp để phát hiện tồn dư Levofloxacin trong sữa.

3. Phương pháp xử lý mẫu sữa trước khi phân tích như thế nào để loại bỏ ảnh hưởng của chất nền?
   Mẫu sữa được ly tâm để loại bỏ lớp béo, sau đó pha loãng 10 lần và xử lý bằng dung dịch (NH4)2SO4 bão hòa để kết tủa protein và lipid gây nhiễu, giúp loại bỏ các thành phần không mong muốn, đảm bảo độ chính xác và độ nhạy của phương pháp ELISA.

4. Phản ứng chéo của kháng thể với các kháng sinh khác trong nhóm Fluoroquinolone có cao không?
   Phản ứng chéo được đánh giá thấp, dưới 10%, cho thấy kháng thể đa dòng kháng LEV có tính đặc hiệu cao, giảm thiểu sai số do sự hiện diện của các kháng sinh khác cùng nhóm trong mẫu phân tích.

5. Phương pháp này có thể áp dụng để phát hiện các kháng sinh Fluoroquinolone khác ngoài Levofloxacin không?
   Phương pháp ELISA gián tiếp cạnh tranh có thể được điều chỉnh để phát hiện các kháng sinh khác trong nhóm Fluoroquinolone bằng cách tổng hợp hapten tương ứng và tạo kháng thể đặc hiệu, tuy nhiên cần nghiên cứu và tối ưu hóa riêng cho từng kháng sinh.

Kết luận

• Đã xây dựng thành công phương pháp ELISA gián tiếp cạnh tranh xác định định lượng Levofloxacin trong sữa với giới hạn phát hiện 0,2 ng/ml và phạm vi tuyến tính từ 0,2 đến 50 ng/ml.
• Phương pháp có độ nhạy cao, đặc hiệu tốt, hiệu suất thu hồi trong mẫu sữa đạt 91-115%, phù hợp với yêu cầu kiểm soát tồn dư kháng sinh trong thực phẩm.
• Kỹ thuật tổng hợp hapten LEV-OVA/BSA và tạo kháng thể đa dòng trên thỏ được thực hiện hiệu quả, đảm bảo tính đặc hiệu của phản ứng miễn dịch.
• Phương pháp ELISA này có ưu điểm chi phí thấp, thao tác đơn giản, thời gian phân tích nhanh, phù hợp ứng dụng trong các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm an toàn thực phẩm.
• Đề xuất triển khai áp dụng rộng rãi phương pháp trong giám sát tồn dư kháng sinh, đồng thời nâng cao quản lý và sử dụng kháng sinh hợp lý trong chăn nuôi để bảo vệ sức khỏe cộng đồng và môi trường.

Hành động tiếp theo: Khuyến khích các cơ quan quản lý và doanh nghiệp phối hợp triển khai phương pháp, đồng thời mở rộng nghiên cứu ứng dụng cho các loại kháng sinh khác và mẫu thực phẩm đa dạng nhằm nâng cao hiệu quả kiểm soát an toàn thực phẩm.