ĐẠI hỌc ThÁI IIGUVÊII TTGIỜNG ĐẠI hỌc KhÚA hỌc HGUYVÈH ThỊ hẢI hÒING NGhIET cU'U TAc DONG cỦA Dich chIET LA KhOI (AIDISIA GIGAIITIFOLIA STAPF.) LEM SU bIEU hIEM cUA cAc GEII KIEM SOAT chU KY TE bA0 cUA TE bÀ0 GÓc UNG Thq] DA DAY chuyên ngành: công nghệ Sinh học Mã số: 84 20 201 LUẬN VĂN Thạc SĨ SIIIh hỌc ỨTIG DỤIG Igooi hơjớng dẫn kh0a học: TS. Lê Thị Thanh hojong ThÁI IGUVÊN - 2019 Số hóa bởi Trung lâm học liệu và công nghệ thông lin— ĐhTII hifp://Irc.vn LOI cAM DOATI Tôi xin cam dOan day 1a nghién ctu cua t6i dojdi sw hojong dẫn của TS. Lê Thị Thanh hojơng. các số liệu và kết quả trình sày lr0ng luận văn là lrung thực và chơia đơjợc ai công số lr0ng sất kỳ công trình nà0.
Mọi kết quả thu dojoc không chỉnh sửa, sa0 hOặc chép từ các nghiên cứu khác. Mọi trích dẫn tr0ng luận văn đều ghi rõ nguồn gốc. Tác giả Hguyễn Thị hải hồng Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc.vn ii LOI cAM OT] Tr0ng quá lrình học lập và thực hiện đề lài luận văn lại Kh0a công nghệ Sinh học, lrojlờng Dai hoc Kh0a học, Đại học Thái IIlguyên. Em đã nhận đojợc sự giúp đỡ nhiệt tình của các Thầy, cô giá0, các anh chị kỹ thuật viên và cán bộ †r0ng khOa và nhà trojong.
Đầu liên em xin tỏ lòng siết ơn sâu sắc lới cô giá0 - TS. Lê Thị Thanh hơiơng đã định hojớng kh0a học, lận tình hơjớng dẫn, giúp đỡ và †ạ0 mọi điều kiện lốt nhất lr0ng suốt quá trình em liến hành nghiên cứu và h0àn thành luận văn này. Em xin chân thành cảm ơn các Thầy cô và cán bộ Kh0a công nghệ Sinh học, Trojong Dai hoc Kh0a hoc - Dai hoc Thai IIguyén da tan tinh dạy dỗ, chỉ sả0 và truyền ch0 em niềm đam mê nghiên cứu kh0a học. Xin chân thành cảm ơn bộ phận sau đại học của nhà trojong da ta0 điều kiện thuan loi trOng qua trinh em hoc fai trojong.
Hghién ctru nay dojgc fai iro sởi Quỹ Phát triển Kh0a học và công nghệ Quốc gia (Iaf0sled) tr0ng mã số đề lài 108. cuối còng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, ball be, đồng nghiệp đã nhiệt nh động viên ch0 em thêm động lực hOàn thành lốt quá lrình học lập và nghiên cứu kh0Oa học. Thai IIguyén, thang 11 nam 2019 Tac gia Hguyễn Thị hải hồng Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc.vn MUc LUc MO DAU aessesssssssssssssesssssssscssecsnscesseconscenscsanscenssssscssscessecensesasecanscessecanecessesssesssss 1 1. Mục liêu nghiÊN CỨU.
S2 S393 998931919191 E1 1h ng Hàn nh ri 2 3. IIội dung n1ghiÊH CỨU. 6 6 1% 9191191 111kg ng key 2 chŒ|ƠIIG 1. TỎIIG QUAII TÀI LIỆU.
Ung thoy da dày và lế sà0 gốc ung thoy da dày. Ung †hơỊ dạ đầyy. Tế sà0 gốc và lế sà0 gốc ung †hơi dạ dày. chu kỳ lế sà0 và ung †hho,.
Khái quái chung vé chu ky #6 Ba0 veces cscseesssessseesssessseessessseesseens 12 1. Tối l0ạn chu kỳ lế sà0 và ung †ho|.------ 2 ©++2se22++2sse+zsz 14 1. các gen kiểm s0ᆠchu kkỳ ‡É bàO. Giới thiệu chung về cây Lá khôi .---2--2--©5<©+2zse+cx+srxsesres 19 1.
Phân lOại và đặc điểm. 2-2 2EEE+EESEEESEEEEEEEE1EE1e2EE. Thành phần hóa học của cây Lá kkhôi. các nghiên cứu về tác dụng của cây Lá khôi lr0ng điều tri ung tha.
VẬT LIỆU VÀ Phd|ƠHG PhÁP IGHIÊNH cỨU. Vật liệu ng]hiñiÊH CỨU. hóa chất và thiết sị nghiên cứu.- 2-22 sSE2Ek2EEeEEEeEEerrkerkerrkee 25 2. Địa điểm và thời gian nghiên cứu.
PhoJơng pháp nghilÊT CỨU. 5 6 E33 913921 E1EEESkExkrkeskerkrree 25 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc. Phojong phap thu thập và xác định lên khOa học của cây Lá khôi. Phojong phap thu dich chiét cây Lá khôi.
Phojong phap mudi cay 16 BAO 2D. Phojong phap mudi cay 16 BAO 3D. Phojong phap phan lich chu ky #é 540 Bang FlOw cytOmetry. Phojong pháp phân lích miễn dịch huỳnh quang.
PhoJơng pháp lách chiết TTIA lồng số và tổng hợp cDHA. PhoJơng pháp phân tích siéu hién gen sằng Ieallime PcT. PhoJơng pháp phân tích thống kê.-- 2-2 ©++22x£22z++2zsecrez 29 chG]ONG 3. KET QUA HGhIÊH cUU VA ThẢ0 LUẬI.
Két qua thu thap va xdc dimh tén kh0a hoc va thu dich chiét ethan01 lì 99. Huôi cấy lăng sinh lế sà0 lr0ng điều kiện nuôi cây 2D. Huôi cấy tum0rsphere của các lé sà0 ung thoi dạ dày †r0ng điều kiện I0 Nì 6Ð. Anh hong cia dich chiét La khdi lén sé long va kich thoyéc cdc †umOTSp H€TC.
-Ặ- 2 E3 919909 HT TH HH HT Hà Hàn HH TH ng HH 33 3. Ảnh hơiởng của dịch chiết Lá khôi lém chu ky #6 à0. Tách chiết TTIA lông số và lồng hợp cDIIA. Anh hong cua dịch chiết Lá khôi lên các gen của lế sà0 gốc ung tho 35 3.
Ảnh hojởng của dịch chiết Lá khôi lên các gen kiểm s0ᆠchu kỳ lế sà0 38 3. Ảnh hơiởng của dịch chiết Lá khôi lên sự siêu hiện của pr0lein P21 .41 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc.vn vi KET LUẬN VÀ KIÊII IIGh][ .- 2-22 2S£+2E+2EE£+EESEEEEEEE2E2E1E21171127121111111E111 1 xe 43 2. xe 43 TÀI LIỆU ThAM IKKhẢ(.-- 5° <-s<ssEsssetvssezsserrssrrseesse 44 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc.vn vii DAITh MUc cAc TU VIET TAT ALDh : Aldehyde dehydr0genase cDK : cyclin-dependent kinases ccHE1 : cyclin El cT : crypl0lanshin0ne cDITA : COmplementary DITA DITA : De0xyrib0nucleic acid FAcS : FluOrescence-activated cell sOrting Gc: Ung tho siểu mô dạ dày mITIA :THA thông finTIST : Hhiễm sắc thé PcHA : Proliferating cell nuclear antigen Pcl’ : POlymerase chain DeachOn THA : Fib0nucleic acid SAGA : Spt-Ada-Gcn5-acetyltransferase SSE : SamsOeum TbGUT : Tế sà0 gốc ung thoỊ TbGUTDD : Té 1a0 géc ung tho da day USP22 : Ubiquitin specific peptidase 22 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc.vn viii DAITh MUc cAc BAIIG bang 1. cdc pha tng chu ky 16 BAO.
Mã số cặp mỗi của các eM oe. Iồng độ TTIIA từ mẫu đối chứng và mẫu xử lý.- 35 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc.vn DAITh MUc cAc hillh hình 1. Số ca ung thơi mắc mới năm 2018 ở nam của Việt Iam. cơ chế phân chia của lễ à0 ung †họ|.
Mẫu cây Lá lkhôi.---- 2: 2S set 2xx 2EE2ExeExerxerkerkerrrrrrrrs 30 hình 3. Huôi cấy lăng sinh lế sà0 MKI145 tr0ng điều kiện mudi cay 2D. Huôi cấy tum0rpshere hình thành từ các tế sà0 gốc. Dịch chiết Lá khôi tác động lên khả năng hình thành tum0rsphere LẠ 2121211111112.
Dịch chiết Lá khôi tác động lên chu kỳ lề à0. Phổ hấp thụ của TTIA lồng số lách chiết từ các lum0rsphere. Dịch chiết Lá khôi tác động lên sự siểu hiện các gen. Dịch chiết Lá khôi tác động lên các gen.
Dịch chiết Lá khôi tác động lên sự siểu hiện của pr0lein. 42 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc. Lý d0 chọn đề lài Việt Ham là một nơjớc có sự đa dạng về các 10ai thực vật, tr0ng đó có các l0ài thực vật làm thuốc. họ Đơn nem (Myrsinaceae) gồm 50 chi va kh0ảng 1.400 l0ài dojoc phan £6 rong rai én khap thé gidi.
TrOng dé, chi com ngudi (Aedisia) c6 khOang 400 — 500 10ai trén thế giới và ở Việt Iam có kh0ảng 101 10ai [2]. cdc l0ài lr0ng chỉ này có nhiều lác dụng tr0ng điều tri bệnh, sả0 vệ sức khỏe ch0 c0n ngojời, điển hình là cây Lá khôi (Aedisia gigantifOlia Stapf). Ung thơ dạ dày là một lr0ng những dạng ung lhơi phổ biến nhất, dojoc thống kê là dạng ung thơ phô biến thứ 5 và là nguyên nhân gây †ử vũng thứ 3 lr0ng nhóm các bệnh ung thọJ. các #é sà0 géc ung thoy da day 1a nguyên nhân gây ra các khối u da day.
Té 540 géc ung thoy da day còn gọi là "tế sà0 nguồn" của ung thơi da dày, có nguồn gốc chủ yếu lừ các lế sà0 gốc hOặc các lế sà0 gốc định hong da dày. Tr0ng những năm gần đây, rất nhiều các nghiên cứu ch0 thấy ung thoi dạ dày có thê sắt nguồn từ các tế sà0 gốc bình †hơjờng h0ặc các lế sà0 trung mô có nguồn gốc Hr tủy xoJơng và các khối u dạ dày có chứa các lế sà0 gốc ung tho [71]. các khối u có thể sắt nguồn lừ một tiêu quần thể lế sà0 gốc ung thơi có khả năng duy tri sự phát triển khối u lâu dài, tái phát khối u, kháng ap0p†0sis và hóa lrị. các nghiên cứu lrojớc đây đã chỉ ra rằng, có nhiều hợp chất chiết xuất fir dịch chiết của các sộ phận cây Lá khôi ảnh hơjởng đến sự lăng sinh siêu mô luyến vú, gây độc lế sà0 đối với các dòng lế sà0 ung thơ nhơi: ung thơJ bàng quang, ung Thơi biêu mô lế sà0 gan, ung thơi cô tử cung,.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc.vn 2 Đặc siệt đối voi ung tho da dày, dịch chiết Lá khôi có khả năng siệt h0á lế bà0 gốc ung †hơi dạ dày và í† độc ch0 các lế sà0 và khả năng ức chế ca0 sự phân chia nhơIng í† gây ra ap0pl0sis [7]. Tuy nhiên, các nghiên cứu về amh hong Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc.vn 3 của Lá khôi lên sự siêu hiện của các gen kiếm s0át chu kỳ lế sà0 của các lế bà0 gốc ung tho da day con han ché. Vi vậy, chúng lôi đã tiến hành nghiên cứu đề lài “Nghiên cứu lác động của dịch chiết Lá khôi (Azdiia giganlifOlia Stapf.) lén sw viéu Bién aia cic gen kiém sOat chu ky lễ oà0 cia 1é sà0 gốc ung thơi đạ dày”. Mục liêu nghiên cứu Đánh giá tác động của dịch chiết Lá khôi lên mức độ siêu hiện của các gen điều khiển chu kỳ lế sà0 của lế sà0 gốc ung thọ dạ dày.
Hội dung nghiên cứu Hội dung 1: Thu thập mẫu Lá khôi và tách chiết dịch chiết Lá khôi. Hội dung 2: Iuôi cấy các spher0id hình thành từ lế sà0 gốc ung tho, dạ dày. Hội dung 3: Phân tích ảnh hojởng của dịch chiết Lá khôi lên sự biêu hiện của các gen kiêm s0át chu kỳ lế sà0 bằng phơ†ơng pháp Teallime Pcl. Số hóa bởi Trung tâm Học liệu và Công nghệ thông tin - ĐHTN http://Irc.vn 4 chd]OG 1.
TONG QUANH TÀI LIỆU 1. Ung thơi dạ dày và lế sà0 gốc ung lhơi da day 1. Ủng thơi dạ dày 1. Khái quát chung về dịch lễ học ung thơ da day Ung tho da dày là một lr0ng những bệnh ung thoi phô biến va gay tir v0ng hàng đầu, đặc biệt là ở đàn ông lớn luổi.
The0 nguồn dữ liệu GL0Bb0cAI 2018, ung thơi dạ dày là l0ại ung thơi phố biến thứ 5 và ung tho gay tr vOng ca0 thứ 3, với ơjớc tính 783.000 ca tr vOng †r0ng năm 2018 [1].