Tách chiết và tinh sạch enzym cellulase từ Trichoderma viride

LỜI CẢM ƠN

1. CHƯƠNG 1: LỜI MỞ ĐẦU

2. CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1. Giới thiệu về cellulose

2.2. Cấu tạo cellulose

2.3. Đặc tính của cellulose

2.4. Giới thiệu sơ lược về enzym

2.5. Giới thiệu về enzym cellulase

2.6. Vi sinh vật tổng hợp cellulase

2.7. Vai trò của giống trong công nghệ sản xuất enzym

2.8. Yêu cầu của giống trong công nghệ sản xuất enzym

2.9. Nuôi cấy vi sinh vật tổng hợp cellulase

2.10. Sinh tổng hợp enzym cảm ứng

2.11. Ảnh hưởng của các yếu tố dinh dưỡng đến quá trình STH cellulase

2.12. Giới thiệu phương pháp lên men bề mặt

2.13. Ưu nhược điểm của phương pháp lên men bề mặt

2.14. Phương pháp lên men thu nhận enzym từ T.

2.15. Tách và tinh sạch chế phẩm enzym

2.16. Ứng dụng của cellulase

2.17. Tăng chất lượng các sản phẩm thực phẩm và thức ăn gia súc

2.18. Thủy phân gỗ và các phế liệu gỗ

2.19. Phá vỡ thành tế bào

3. CHƯƠNG 3: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1. Nguyên vật liệu

3.2. Giống vi sinh vật

3.3. Môi trường nuôi cấy

3.4. Thiết bị nghiên cứu

3.5. Các phương pháp nghiên cứu

3.6. Phương pháp phân tích hóa lý, hóa sinh

3.7. Phương pháp phân tích vi sinh

3.8. Bố trí thí nghiệm

3.9. Thí nghiệm 1- Khảo sát một số chỉ tiêu của nguyên liệu

3.10. Thí nghiệm 2- Khảo sát ảnh hưởng của độ ẩm môi trường nuôi cấy đến khả năng STH cellulase

3.11. Thí nghiệm 3- Khảo sát ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến khả năng STH cellulase

3.12. Thí nghiệm 4- Khảo sát tỷ lệ nước cất và đệm acetate tối ưu để tách chiết enzym

3.13. Thí nghiệm 5- Khảo sát tỷ lệ cồn, aceton, muối để tủa enzym

3.14. Thí nghiệm 6- Khảo sát ảnh hưởng của pH đến hoạt tính của chế phẩm enzym

3.15. Thí nghiệm 7- Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính của chế phẩm

4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

4.1. Kết quả khảo sát một số chỉ tiêu của bã khoai mì

4.2. Kết quả chọn chủng có hoạt lực cellulase mạnh

4.3. Kết quả lựa chọn sơ bộ bằng thạch đĩa

4.4. Kết quả lựa chọn bằng phương pháp lên men định lượng hoạt độ cellulase

4.5. Kết quả sát định đường cong tăng trưởng của nấm mốc T.

4.6. Kết quả ảnh hưởng của độ ẩm môi trường nuôi cấy đến khả năng sinh tổng hợp cellulase của T.

4.7. Kết quả ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến khả năng sinh tổng hợp cellulase

4.8. Kết quả nghiên cứu tỷ lệ nước cất và đệm acetate tối ưu để tách chiết enzym

4.9. Kết quả khảo sát tỷ lệ nước cất tối ưu để chiết enzym

4.10. Kết quả khảo sát tỷ lệ acetate tối ưu để chiết enzym

4.11. Kết quả hoạt tính cellulase của dịch chiết thô

4.12. Kết quả nghiên cứu quá trình tinh sạch enzym bằng phương pháp tủa

4.13. Kết quả khảo sát tỷ lệ cồn dùng để tủa enzym

4.14. Kết quả khảo sát tỷ lệ aceton dùng để tủa enzym

4.15. Kết quả khảo sát tỷ lệ muối ammonium sulfate dùng để tủa enzym

4.16. So sánh kết quả của 3 phương pháp tủa

4.17. Kết quả khảo sát ảnh hưởng của pH đến chế phẩm enzym cellulase

4.18. Kết quả khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ đến chế phẩm enzym cellulase

5. CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

Tài liệu tham khảo

I. Giới thiệu về enzym cellulase

Enzym cellulase là một trong những enzym quan trọng nhất trong quá trình phân giải cellulose, một polysaccharide chính trong thành tế bào thực vật. Cellulase có khả năng thủy phân cellulose thành glucose, cung cấp nguồn năng lượng cho nhiều sinh vật, đặc biệt là vi sinh vật và động vật nhai lại. Việc tách chiết và tinh sạch enzym cellulase từ các nguồn vi sinh vật như Trichoderma viride đã trở thành một lĩnh vực nghiên cứu được quan tâm. Cellulase được chia thành nhiều loại khác nhau, bao gồm endoglucanase, exoglucanase và β-glucosidase, mỗi loại có vai trò riêng trong quá trình phân giải cellulose. Việc hiểu rõ về cấu trúc và chức năng của các loại enzym này là cần thiết để tối ưu hóa quá trình sản xuất và ứng dụng của chúng trong công nghiệp thực phẩm và sinh học.

1.1. Cấu tạo và đặc tính của cellulase

Cellulase là một hệ enzym phức tạp, thường được tổng hợp từ các vi sinh vật như nấm mốc và vi khuẩn. Cấu trúc của cellulase bao gồm nhiều tiểu đơn vị protein, giúp enzym có khả năng hoạt động hiệu quả trong môi trường có pH và nhiệt độ khác nhau. Tính chất cellulase rất đa dạng, ảnh hưởng bởi nguồn gốc vi sinh vật và điều kiện nuôi cấy. Các yếu tố như độ ẩm, nhiệt độ và pH đều có thể ảnh hưởng đến hoạt tính của enzym. Đặc biệt, cellulase có khả năng hoạt động tốt trong môi trường kiềm và ở nhiệt độ cao, điều này làm cho chúng trở thành lựa chọn lý tưởng cho nhiều quy trình công nghiệp.

II. Quá trình tách chiết enzym

Quá trình tách chiết enzym cellulase từ Trichoderma viride bao gồm nhiều bước quan trọng. Đầu tiên, nấm mốc được nuôi cấy trong môi trường giàu cellulose, thường là bã khoai mì, để kích thích sự sinh tổng hợp enzym. Sau khi thu hoạch, dịch chiết thô được thu được bằng cách sử dụng các phương pháp tách chiết như chiết bằng nước cất hoặc dung môi hữu cơ. Các yếu tố như tỷ lệ nước cất và đệm acetate tối ưu cần được khảo sát để đạt được hiệu suất tách chiết cao nhất. Sau đó, enzym thô cần được tinh sạch để loại bỏ các tạp chất không cần thiết, thường thực hiện qua các bước tủa bằng cồn hoặc muối ammonium sulfate. Quá trình này không chỉ giúp tăng độ tinh khiết của enzym mà còn nâng cao hoạt tính của nó.

2.1. Phương pháp tách chiết

Các phương pháp tách chiết enzym cellulase từ Trichoderma viride có thể được phân loại thành hai nhóm chính: phương pháp vật lý và phương pháp hóa học. Phương pháp vật lý bao gồm việc sử dụng áp suất hoặc nhiệt độ để tách chiết enzym, trong khi phương pháp hóa học thường sử dụng dung môi hoặc hóa chất để hòa tan và tách enzym. Nghiên cứu cho thấy rằng việc sử dụng dung môi như ethanol hoặc aceton có thể tạo ra enzym có hoạt tính cao hơn so với phương pháp tách chiết bằng nước. Điều này mở ra hướng đi mới trong việc tối ưu hóa quy trình sản xuất enzym cho các ứng dụng công nghiệp.

III. Tinh sạch enzym

Tinh sạch enzym là một bước quan trọng trong quy trình sản xuất enzym cellulase. Sau khi tách chiết, enzym thô thường chứa nhiều tạp chất, ảnh hưởng đến hoạt tính và độ ổn định của enzym. Các phương pháp tinh sạch phổ biến bao gồm tủa bằng ammonium sulfate, sắc ký trao đổi ion và sắc ký gel. Tủa bằng ammonium sulfate là phương pháp đơn giản và hiệu quả, giúp loại bỏ nhiều tạp chất trong dịch chiết. Sau khi tủa, enzym cần được rửa và hòa tan lại trong dung dịch đệm để đạt được hoạt tính tối ưu. Việc kiểm tra hoạt tính enzym sau khi tinh sạch là cần thiết để đảm bảo rằng enzym vẫn giữ được khả năng xúc tác của mình.

3.1. Ứng dụng của cellulase

Cellulase có nhiều ứng dụng trong các lĩnh vực khác nhau, bao gồm công nghiệp thực phẩm, sản xuất năng lượng sinh học và xử lý chất thải. Trong công nghiệp thực phẩm, cellulase được sử dụng để cải thiện chất lượng sản phẩm, tăng cường khả năng tiêu hóa và thu hồi đường từ các nguyên liệu giàu cellulose. Ngoài ra, cellulase cũng được ứng dụng trong quá trình sản xuất ethanol từ nguồn nguyên liệu thực vật, giúp tối ưu hóa quy trình chuyển hóa sinh học. Từ đó, việc nghiên cứu và phát triển quy trình tách chiết và tinh sạch enzym cellulase từ Trichoderma viride không chỉ có giá trị về mặt khoa học mà còn mang lại lợi ích kinh tế lớn cho ngành công nghiệp.

Nghiên cứu tách chiết và tinh sạch enzym cellulase từ Trichoderma viride