Nghiên cứu tạo và phân tích biến đổi di truyền chúng vi-rút PRRS nhược độc làm vắc-xin

Chuyên ngành

Di truyền học

Người đăng

Ẩn danh

Thể loại

Luận án tiến sĩ

2024

253
2
0

Phí lưu trữ

40.000 VNĐ

Mục lục chi tiết

LỜI CAM ĐOAN

LỜI CẢM ƠN

1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1. Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở heo (PRRS)

1.2. Một số đặc điểm dịch tễ học của bệnh PRRS trên thế giới. Một số đặc điểm dịch tễ học của bệnh PRRS tại Việt Nam

1.3. Triệu chứng lâm sàng và bệnh tích

1.4. Phòng ngừa và điều trị bệnh

1.5. Vi-rút gây bệnh PRRS (PRRSV)

1.5.1. Đặc điểm hình thái

1.5.2. Cấu trúc hệ gen PRRSV

1.5.3. Đặc điểm và chức năng các protein phi cấu trúc (NSP) ở PRRSV

1.5.4. Đặc điểm và chức năng các protein cấu trúc của PRRSV

1.6. Đa dạng di truyền ở các protein của PRRSV

1.7. Đặc điểm nuôi cấy

1.8. Quá trình xâm nhập, nhân lên trong tế bào chủ

1.9. Nghiên cứu về biến đổi di truyền của PRRSV trong và ngoài nước

2. CHƯƠNG 2: NỘI DUNG - VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP

2.1. Nội dung - Sơ đồ thực hiện các nội dung nghiên cứu

2.2. Nguyên vật liệu, dụng cụ, thiết bị

2.2.1. Chủng vi-rút, dòng tế bào, động vật thí nghiệm

2.2.2. Hóa chất và các sinh phẩm

2.2.3. Dụng cụ, thiết bị

2.3. Phương pháp

2.3.1. Hoạt hóa, nuôi cấy và xác định mật độ tế bào MARC-145

2.3.2. Tiếp truyền PRRSV trên dòng tế bào MARC-145

2.3.3. Xác định hiệu giá PRRSV trên tế bào MARC-145

2.3.4. Xác định liều lượng vi-rút gây nhiễm trên tế bào. Xây dựng đường cong sinh trưởng của vi-rút theo thời gian thu hoạch

2.3.5. Thu nhận bộ gen PRRSV. Nhân bản vùng gen ORFS và gửi giải trình tự

2.3.6. Thu nhận thư viện bộ gen và gửi giải trình tự toàn bộ gen PRRSV

2.3.7. Phương pháp tiếp nhận và đánh giá chất lượng chuỗi nucleotide sau khi giải trình tự

2.3.8. Phân tích kết quả giải trình tự gen và xây dựng cây phả hệ

2.3.9. Xác định tốc độ đột biến trên chuỗi trình tự nucleotide/amino acid

2.3.10. Phương pháp chăm sóc và theo dõi heo thí nghiệm

2.3.11. Phương pháp đánh giá khả năng gây bệnh, độc lực vi-rút trên heo thí nghiệm

2.3.12. Điều chế vắc-xin thử nghiệm

2.3.13. Kiểm tra độ thuần khiết của vắc-xin

2.3.14. Đánh giá tính an toàn và hiệu lực của vắc-xin thử nghiệm trên heo thí nghiệm

2.3.15. Đánh giá tính an toàn và đặc tính sinh miễn dịch của vắc-xin thử nghiệm trên đàn heo nuôi thực địa

2.3.16. Các phương pháp huyết thanh học

2.3.17. Kỹ thuật Realtime RT-PCR phát hiện PRRSV

2.3.18. Phương pháp mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể ở heo

2.3.19. Xử lý thống kê

3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ - ĐÁNH GIÁ - BÀN LUẬN

3.1. Khảo sát đặc tính sinh học của chủng gốc PRRSV BG8 nhằm tạo chủng nhược độc bằng phương pháp tiếp truyền trên tế bào MARC-145

3.1.1. Đặc trưng di truyền của chủng gốc PRRSV BG8

3.1.2. Đặc điểm nhân lên của chủng PRRSV BG8 trên tế bào MARC-145

3.1.3. Hiệu giá vi-rút qua các đời tiếp truyền chủng PRRSV BG8

3.1.4. Đánh giá độc lực của các chủng vi-rút qua các đời nuôi tiếp truyền

3.1.5. Khả năng gây đáp ứng miễn dịch sinh kháng thể của chủng PRRSV nhược độc

3.2. Phân tích biến đổi di truyền ở chủng PRRSV qua các đời nuôi tiếp truyền

3.2.1. Thu nhận thư viện bộ gen và giải trình tự toàn bộ gen các chủng PRRSV qua quá trình nuôi tiếp truyền

3.2.2. Biến đổi nucleotide và amino acid trên toàn bộ gen của chủng PRRSV BG8 qua quá trình tiếp truyền

3.2.3. Tốc độ đột biến nucleotide và amino acid của chủng BG8-P95 so với chủng gốc BG8-P1

3.2.4. Phân tích so sánh đặc điểm đột biến amino acid ở 9 cặp chủng PRRSV cường độc/nhược độc và xác định đột biến liên quan đến tính nhược độc

3.3. Phân tích tính ổn định protein kháng nguyên GP5 của chủng nhược độc BG8-P95 và độ tương đồng với các chủng PRRSV khác dựa trên trình tự ORFS và GP5

3.3.1. Thu nhận ORFS và giải trình tự vùng gen ORFS mã hóa glycoprotein kháng nguyên GP5 của chủng PRRSV BG8 qua các đời tiếp truyền

3.3.2. Đặc trưng di truyền của chủng nhược độc qua tiếp truyền

3.3.3. Đột biến nucleotide trên ORFS và amino acid trên GP5 trong quá trình nuôi tiếp truyền

3.3.4. Độ tương đồng về trình tự ORFS và GP5 giữa các đời tiếp truyền chủng BG8-P95 với các chủng PRRSV thực địa và các chủng PRRSV vắc-xin tại Việt Nam

3.3.5. Đặc điểm biến đổi đầu C của GP5 ở chủng nhược độc BG8-P95

3.4. Đánh giá tính an toàn và đặc tính sinh miễn dịch của chủng nhược độc BG8-P95 theo tiêu chuẩn chủng giống làm vắc-xin

3.4.1. Kiểm tra cảm quan vắc-xin

3.4.2. Độ thuần khiết của chủng nhược độc BG8-P95 làm vắc-xin

3.4.3. Tính an toàn của vắc-xin chủng nhược độc BG8-P95 trên heo thí nghiệm

3.4.4. Đáp ứng miễn dịch sinh kháng thể khác nhau. Xác định hiệu giá kháng thể theo thời gian sau khi tiêm

3.4.5. Đánh giá khả năng phòng bệnh của vắc-xin bằng công cường độc với chủng PRRSV độc lực cao trong điều kiện thí nghiệm

3.4.6. Đánh giá độ an toàn của vắc-xin nhược độc từ chủng BG8-P95 trên đàn heo nuôi thực địa

3.4.7. Hiệu quả phòng bệnh của vắc-xin PRRS chủng BG8-P95 trên thực địa

4. CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN - ĐỀ NGHỊ

DANH MỤC CÔNG TRÌNH CỦA LUẬN ÁN

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

Luận án tiến sĩ sinh học nghiên cứu tạo và phân tích biến đổi di truyền chủng vi rút prrs nhược độc làm vắc xin

Bạn đang xem trước tài liệu:

Luận án tiến sĩ sinh học nghiên cứu tạo và phân tích biến đổi di truyền chủng vi rút prrs nhược độc làm vắc xin