Nghiên cứu tách chiết cao actiso có hỗ trợ enzyme và thẩm định phương pháp phân tích đồng thời cynarin và acid chlorogenic từ lá cây actiso

Cây actiso (Cynara scolymus L.) là một loại cây thảo có nguồn gốc từ miền Nam châu Âu. Từ xa xưa, người La Mã và Hy Lạp cổ đại đã biết sử dụng actiso như một loại rau và dược liệu. Đến thế kỷ 15, actiso bắt đầu được trồng để làm dược liệu ở Naples. Ngày nay, actiso được trồng rộng rãi ở nhiều quốc gia trên thế giới, bao gồm Tây Ban Nha, Ý, Pháp, Mỹ và Việt Nam. Công dụng của actiso rất đa dạng, từ hỗ trợ tiêu hóa, bảo vệ gan đến chống oxy hóa.

Cynarin và acid chlorogenic là hai hoạt chất chính có trong actiso, mang lại nhiều lợi ích cho sức khỏe. Cynarin được biết đến với khả năng kích thích tiết mật, hỗ trợ tiêu hóa và giảm cholesterol. Acid chlorogenic là một chất chống oxy hóa mạnh, có tác dụng bảo vệ tế bào khỏi tổn thương do gốc tự do. Việc phân tích cynarin và phân tích acid chlorogenic là rất quan trọng để đánh giá chất lượng của cao actiso và các sản phẩm từ actiso.

Các phương pháp tách chiết actiso truyền thống như ngâm chiết hoặc chiết Soxhlet thường có hiệu suất thấp do khả năng hòa tan của dung môi hạn chế và thời gian chiết kéo dài. Ngoài ra, các phương pháp này có thể làm biến đổi các hoạt chất nhạy cảm với nhiệt độ cao. Việc sử dụng lượng lớn dung môi cũng gây ảnh hưởng đến môi trường và tăng chi phí sản xuất.

Để đảm bảo tác dụng của cao actiso, cần phải thu được cao actiso có độ tinh khiết cao và hàm lượng cynarin và acid chlorogenic đạt tiêu chuẩn. Điều này đòi hỏi quy trình tách chiết actiso phải loại bỏ được các tạp chất không mong muốn và bảo toàn được các hoạt chất có giá trị. Việc định lượng cynarin và định lượng acid chlorogenic là rất quan trọng để kiểm soát chất lượng của cao actiso.

Enzyme pectinase là một loại enzyme thủy phân pectin, một thành phần cấu trúc quan trọng của thành tế bào thực vật. Khi enzyme pectinase tác động lên thành tế bào actiso, nó sẽ phá vỡ cấu trúc pectin, làm cho thành tế bào trở nên mềm và dễ thấm hơn. Điều này giúp cho dung môi dễ dàng xâm nhập vào bên trong tế bào và hòa tan các hoạt chất như cynarin và acid chlorogenic.

Hiệu quả tách chiết actiso bằng enzyme pectinase phụ thuộc vào nhiều yếu tố, bao gồm nồng độ enzyme, pH, nhiệt độ và thời gian thủy phân. Nồng độ enzyme quá thấp có thể không đủ để phá vỡ cấu trúc tế bào, trong khi nồng độ quá cao có thể gây lãng phí. pH và nhiệt độ ảnh hưởng đến hoạt tính của enzyme, do đó cần phải điều chỉnh các yếu tố này để enzyme hoạt động tối ưu. Thời gian thủy phân cũng cần được tối ưu hóa để đảm bảo hiệu suất tách chiết actiso cao nhất.

Mô hình Box-Wilson là một phương pháp quy hoạch thực nghiệm được sử dụng để tối ưu hóa quá trình tách chiết actiso bằng cách khảo sát ảnh hưởng đồng thời của nhiều yếu tố. Mô hình này cho phép xác định các điều kiện tối ưu để đạt được hiệu suất tách chiết actiso cao nhất với lượng enzyme sử dụng ít nhất.

Để đạt được độ phân giải và độ nhạy cao, cần phải thiết lập các điều kiện phân tích HPLC tối ưu, bao gồm lựa chọn pha động, tốc độ dòng, nhiệt độ cột và bước sóng phát hiện. Pha động thường là hỗn hợp của dung môi hữu cơ (ví dụ: methanol) và dung dịch acid (ví dụ: acid acetic). Tốc độ dòng và nhiệt độ cột ảnh hưởng đến thời gian lưu và độ phân giải của các pic. Bước sóng phát hiện được chọn dựa trên phổ UV-Vis của cynarin và acid chlorogenic.

Để đảm bảo tính chính xác và tin cậy của phương pháp phân tích HPLC, cần phải thẩm định phương pháp theo hướng dẫn của ICH (International Council for Harmonisation). Các thông số thẩm định bao gồm tính đặc hiệu, tính tuyến tính, giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ), độ chụm và độ đúng. Kết quả thẩm định phải đáp ứng các tiêu chí chấp nhận để phương pháp được coi là hợp lệ.

Phương pháp DPPH là một phương pháp phổ biến để đánh giá khả năng loại gốc tự do của các chất chống oxy hóa. DPPH là một gốc tự do ổn định có màu tím. Khi chất chống oxy hóa phản ứng với DPPH, nó sẽ khử gốc tự do này, làm mất màu tím của dung dịch. Mức độ mất màu tím tỷ lệ thuận với khả năng loại gốc tự do của chất chống oxy hóa.

Phương pháp khử sắt là một phương pháp khác để đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa. Phương pháp này dựa trên khả năng của chất chống oxy hóa trong việc khử ion sắt Fe3+ thành ion sắt Fe2+. Ion sắt Fe2+ sau đó phản ứng với một chất tạo màu để tạo thành một phức chất có màu xanh lam. Cường độ màu xanh lam tỷ lệ thuận với năng lực khử sắt của chất chống oxy hóa.

Nghiên cứu đã chứng minh được tiềm năng của enzyme pectinase trong việc cải thiện hiệu suất tách chiết actiso. Phương pháp HPLC được xây dựng có độ chính xác và tin cậy cao, phù hợp cho việc định lượng cynarin và định lượng acid chlorogenic trong cao actiso. Kết quả nghiên cứu cung cấp cơ sở khoa học cho việc phát triển các sản phẩm từ actiso có giá trị gia tăng cao.

Các hướng nghiên cứu tiếp theo có thể tập trung vào việc khảo sát các ứng dụng khác của cao actiso trong lĩnh vực thực phẩm và dược phẩm, ví dụ như phát triển các sản phẩm hỗ trợ tiêu hóa, bảo vệ gan hoặc chống oxy hóa. Ngoài ra, cần nghiên cứu các phương pháp tách chiết actiso thân thiện với môi trường hơn, ví dụ như sử dụng dung môi xanh hoặc kết hợp enzyme với các phương pháp chiết xuất hiện đại.