Nghiên cứu nuôi cấy mô sẹo cây Mật Nhân (Eurycoma longifolia)

Tài liệu nghiên cứu Nghiên cứu nuôi cấy tế bào mô sẹo cây mật nhân eurycoma longifolia, tổng hợp lý thuyết và thực hành, cung cấp kiến thức chuyên sâu về .

• Tác giả: Nguyễn Thị Yến Nhi
• Người hướng dẫn: ThS. Đỗ Tiến Vinh
• Trường học: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành
• Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học
• Đề tài: Nghiên cứu nuôi cấy mô sẹo cây Mật Nhân (Eurycoma longifolia)
• Loại tài liệu: khóa luận
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Thành phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• TÓM TẮT
• MỤC LỤC
• DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT
• DANH SÁCH CÁC HÌNH
• DANH SÁCH BẢNG
• MỞ ĐẦU
• 0.1. Mục tiêu đề tài
• 0.2. Nội dung thực hiện
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Cây Mật Nhân
• 1.2. Phân loại khoa học
• 1.3. Phân bố sinh học
• 1.4. Đặc điểm sinh trưởng
• 1.5. Đặc điểm hình thái
• 1.6. Thành phần hóa học
• 1.7. Các nghiên cứu trong và ngoài nước
• 1.7.1. Các nghiên cứu trong nước
• 1.7.2. Các nghiên cứu ngoài nước
• 1.8. Nuôi cấy mô sẹo
• 1.8.1. Cảm ứng tạo mô sẹo
• 1.8.2. Nguyên tắc nuôi cây mô sẹo
• 1.8.3. Đặc điểm của quá trình nuôi cấy mô sẹo
• 1.8.4. Ưu nhược điểm của phương pháp nuôi cấy mô sẹo
• 1.8.5. Ứng dụng của mô sẹo
• 1.8.6. Quá trình nuôi cấy mô sẹo
• 1.8.7. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi cấy mô sẹo
• 1.8.7.1. Mẫu cấy - nguyên liệu ban đầu
• 1.8.7.2. Điều kiện nuôi cấy
• 1.8.7.3. Thành phần môi trường nuôi cấy mô sẹo
• 1.8.7.3.1. Các chất khoáng
• 1.8.7.3.2. Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật
• 1.8.7.3.3. Các chất bổ sung vào môi trường
• 2. CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
• 2.1. Thời gian, địa điểm và vật liệu nghiên cứu
• 2.2. Điều kiện nuôi cây
• 2.3. Môi trường nuôi cấy
• 2.4. Điều kiện nuôi cấy
• 2.5. Hóa chất, thiết bị và dụng cụ thí nghiệm
• 2.5.1. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm
• 2.6. Thiết kế thí nghiệm
• 2.7. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
• 2.7.1. Sơ đồ nghiên cứu
• 2.7.2. Nội dung nghiên cứu
• 2.7.3. Thí nghiệm 1: Khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ javel và thời gian khử trùng đến khả năng tạo mẫu cấy cây Mật Nhân
• 2.7.4. Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả năng tạo mô sẹo cây Mật Nhân
• 2.7.5. Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ 2,4-D đến khả năng tạo mô sẹo cây Mật Nhân
• 2.7.6. Thí nghiệm 4: Khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ NAA kết hợp BA đến quá trình tăng sinh khối mô sẹo cây Mật Nhân
• 2.7.7. Thí nghiệm 5: Khảo sát sự ảnh hưởng các chất bổ trợ đến quá trình tăng sinh khối mô sẹo cây Mật Nhân
• 2.8. Phương pháp thu thập và xử lý số liệu
• 2.8.1. Phương pháp thu thập
• 2.8.2. Phương pháp xử lý số liệu
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 3.1. Kết quả thí nghiệm 1: Khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ javel và thời gian khử trùng đến khả năng tạo mẫu cấy cây Mật Nhân
• 3.2. Kết quả thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả năng tạo mô sẹo cây Mật Nhân
• 3.3. Kết quả thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ 2,4-D đến khả năng tạo mô sẹo cây Mật Nhân
• 3.4. Kết quả thí nghiệm 4: Khảo sát sự ảnh hưởng của nồng độ NAA kết hợp BA đến quá trình tăng sinh khối mô sẹo cây Mật Nhân
• 3.5. Kết quả thí nghiệm 5: Khảo sát sự ảnh hưởng các chất bổ trợ đến quá trình tăng sinh khối mô sẹo cây Mật Nhân
• 4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Nghiên Cứu Nuôi Cấy Mô Sẹo Cây Mật Nhân Quý Hiếm

Cây Mật Nhân (Eurycoma longifolia), hay còn gọi là cây Bá Bệnh, là một dược liệu quý hiếm với nhiều công dụng chữa bệnh. Do khai thác quá mức và tốc độ phát triển chậm, nguồn Mật Nhân tự nhiên ngày càng khan hiếm. Nuôi cấy mô sẹo là một giải pháp tiềm năng để bảo tồn và khai thác nguồn dược liệu này một cách bền vững. Kỹ thuật này cho phép nhân giống nhanh, tạo sinh khối lớn và thu nhận các hợp chất thứ cấp mà không ảnh hưởng đến nguồn tài nguyên rừng. Nghiên cứu in vitro Mật Nhân mở ra hướng đi mới trong việc phát triển dược liệu, giảm áp lực lên khai thác tự nhiên. Theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Yến Nhi (2017), mục tiêu là xác định thành phần chất điều hòa sinh trưởng và các chất bổ trợ để tối ưu hóa quá trình tạo mô sẹo và nhân sinh khối. Đây là bước quan trọng để ứng dụng công nghệ sinh học thực vật vào bảo tồn và phát triển Mật Nhân.

1.1. Giới thiệu chung về cây Mật Nhân Eurycoma longifolia

Cây Mật Nhân (Eurycoma longifolia) là một loại cây dược liệu quý, được biết đến với nhiều tên gọi khác nhau như Bá Bệnh, Bách Bệnh. Cây phân bố chủ yếu ở khu vực Đông Nam Á, bao gồm Indonesia, Malaysia và Việt Nam. Các bộ phận của cây, đặc biệt là rễ, chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học, được sử dụng trong y học cổ truyền để điều trị nhiều bệnh. Nghiên cứu khoa học đã chứng minh các tác dụng dược lý của Mật Nhân, bao gồm tăng cường sinh lý nam giới, giảm stress và tăng cường hệ miễn dịch. Do đó, việc bảo tồn và phát triển nguồn dược liệu này là vô cùng quan trọng.

1.2. Tầm quan trọng của nuôi cấy mô sẹo trong bảo tồn Mật Nhân

Nuôi cấy mô sẹo là một kỹ thuật quan trọng trong bảo tồn và phát triển các loài cây dược liệu quý hiếm như Mật Nhân. Kỹ thuật này cho phép nhân giống vô tính nhanh chóng, tạo ra số lượng lớn cây con từ một mẫu nhỏ. Ngoài ra, nuôi cấy mô sẹo còn giúp bảo tồn nguồn gen của các cá thể Mật Nhân quý hiếm, đặc biệt là những cây có đặc tính dược lý vượt trội. Việc ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô giúp giảm áp lực khai thác từ tự nhiên, đồng thời đảm bảo nguồn cung dược liệu ổn định và chất lượng.

II. Thách Thức Trong Nghiên Cứu Nuôi Cấy Mô Sẹo Mật Nhân Hiện Nay

Mặc dù có nhiều tiềm năng, nghiên cứu nuôi cấy mô sẹo Mật Nhân vẫn đối mặt với nhiều thách thức. Tỷ lệ thành công trong tạo mô sẹo và nhân sinh khối còn thấp, đòi hỏi phải tối ưu hóa các yếu tố môi trường và thành phần dinh dưỡng. Việc xác định các chất điều hòa sinh trưởng phù hợp và nồng độ tối ưu là rất quan trọng. Bên cạnh đó, việc kiểm soát ô nhiễm và duy trì tính ổn định di truyền của mô sẹo cũng là những vấn đề cần được giải quyết. Nghiên cứu của Nguyễn Thị Yến Nhi (2017) tập trung vào khảo sát ảnh hưởng của nồng độ javel và thời gian khử trùng để tạo mẫu cấy sạch bệnh, cũng như ảnh hưởng của NAA và 2,4-D đến khả năng tạo mô sẹo. Tối ưu hóa quy trình nuôi cấy mô sẹo là chìa khóa để ứng dụng thành công kỹ thuật này vào sản xuất dược liệu.

2.1. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tạo mô sẹo Mật Nhân

Quá trình tạo mô sẹo ở cây Mật Nhân chịu ảnh hưởng của nhiều yếu tố, bao gồm thành phần môi trường nuôi cấy, chất điều hòa sinh trưởng, điều kiện ánh sáng và nhiệt độ. Việc lựa chọn môi trường nuôi cấy phù hợp, bổ sung các chất dinh dưỡng cần thiết và điều chỉnh nồng độ hormone thực vật là rất quan trọng để kích thích sự hình thành mô sẹo. Ngoài ra, các yếu tố môi trường như ánh sáng và nhiệt độ cũng cần được kiểm soát chặt chẽ để đảm bảo sự phát triển tối ưu của mô sẹo.

2.2. Khó khăn trong việc duy trì sinh khối và chất lượng mô sẹo

Việc duy trì sinh khối và chất lượng mô sẹo trong quá trình nuôi cấy mô là một thách thức lớn. Mô sẹo có thể bị thoái hóa, mất khả năng sinh trưởng hoặc tích lũy các hợp chất thứ cấp không mong muốn. Để khắc phục vấn đề này, cần phải thường xuyên cấy chuyền mô sẹo sang môi trường mới, điều chỉnh thành phần dinh dưỡng và bổ sung các chất bảo vệ. Ngoài ra, việc kiểm soát ô nhiễm và duy trì điều kiện vô trùng cũng là rất quan trọng để đảm bảo sự phát triển ổn định của mô sẹo.

III. Phương Pháp Tối Ưu Tạo Mô Sẹo Mật Nhân NAA và 2 4 D

Nghiên cứu của Nguyễn Thị Yến Nhi (2017) đã khảo sát ảnh hưởng của NAA (axit α-naphthaleneacetic) và 2,4-D (axit 2,4-dichlorophenoxyacetic) đến khả năng tạo mô sẹo của cây Mật Nhân. Kết quả cho thấy NAA ở nồng độ 1 mg/l là thích hợp để tạo mô sẹo. Việc kết hợp NAA với BA (6-benzylaminopurine) cũng cho thấy hiệu quả trong việc tăng sinh khối mô sẹo. Các chất điều hòa sinh trưởng đóng vai trò quan trọng trong việc kích thích sự phân chia và biệt hóa tế bào, từ đó thúc đẩy quá trình tạo mô sẹo. Hormone thực vật trong nuôi cấy mô cần được điều chỉnh phù hợp với từng giai đoạn phát triển của mô sẹo để đạt hiệu quả tối ưu.

3.1. Vai trò của NAA trong kích thích tạo mô sẹo Mật Nhân

NAA là một loại auxin tổng hợp, có vai trò quan trọng trong kích thích sự phân chia tế bào và hình thành rễ trong nuôi cấy mô thực vật. Trong nghiên cứu về cây Mật Nhân, NAA được sử dụng để kích thích sự hình thành mô sẹo từ các mẫu cấy lá. Nồng độ NAA tối ưu có thể khác nhau tùy thuộc vào loại mô và điều kiện nuôi cấy, nhưng thường nằm trong khoảng từ 0.5 đến 2 mg/l.

3.2. So sánh hiệu quả của 2 4 D và NAA trong tạo mô sẹo

Cả 2,4-D và NAA đều là các loại auxin được sử dụng rộng rãi trong nuôi cấy mô sẹo. Tuy nhiên, chúng có cơ chế tác động và hiệu quả khác nhau. 2,4-D thường được sử dụng để tạo mô sẹo có cấu trúc lỏng lẻo, trong khi NAA thường tạo ra mô sẹo có cấu trúc chặt chẽ hơn. Việc lựa chọn loại auxin phù hợp phụ thuộc vào mục tiêu nghiên cứu và đặc tính của loài cây. Trong trường hợp cây Mật Nhân, NAA cho thấy hiệu quả tốt hơn trong việc tạo mô sẹo.

IV. Bí Quyết Tăng Sinh Khối Mô Sẹo Mật Nhân NAA và BA

Để tăng sinh khối mô sẹo Mật Nhân, nghiên cứu của Nguyễn Thị Yến Nhi (2017) đã chỉ ra rằng việc kết hợp NAA và BA là một giải pháp hiệu quả. Nồng độ NAA 1 mg/l kết hợp với BA 1 mg/l cho kết quả tốt nhất trong việc tăng sinh khối tế bào mô sẹo. BA là một loại cytokinin, có vai trò quan trọng trong kích thích sự phân chia tế bào và hình thành chồi. Sự kết hợp giữa auxin và cytokinin giúp cân bằng sự phát triển của mô sẹo, từ đó tăng sinh khối một cách hiệu quả. Sản xuất sinh khối Mật Nhân thông qua nuôi cấy mô sẹo mở ra tiềm năng lớn trong việc cung cấp nguồn dược liệu ổn định.

4.1. Tác động hiệp đồng của NAA và BA lên sinh khối mô sẹo

NAA và BA có tác động hiệp đồng lên sinh khối mô sẹo. NAA kích thích sự phân chia tế bào và hình thành rễ, trong khi BA kích thích sự phân chia tế bào và hình thành chồi. Khi kết hợp hai loại hormone này, chúng tạo ra một sự cân bằng trong quá trình phát triển của mô sẹo, giúp tăng sinh khối một cách hiệu quả. Tỷ lệ NAA và BA cần được điều chỉnh phù hợp để đạt được hiệu quả tối ưu.

4.2. Các yếu tố khác ảnh hưởng đến tăng sinh khối mô sẹo

Ngoài NAA và BA, còn có nhiều yếu tố khác ảnh hưởng đến tăng sinh khối mô sẹo, bao gồm thành phần môi trường nuôi cấy, điều kiện ánh sáng và nhiệt độ. Môi trường nuôi cấy cần cung cấp đầy đủ các chất dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển của mô sẹo. Ánh sáng và nhiệt độ cũng cần được kiểm soát chặt chẽ để đảm bảo sự phát triển tối ưu của mô sẹo. Việc bổ sung vitamin và các chất hữu cơ khác cũng có thể giúp tăng sinh khối mô sẹo.

V. Ứng Dụng Vitamin B1 Trong Nuôi Cấy Mô Sẹo Cây Mật Nhân

Nghiên cứu của Nguyễn Thị Yến Nhi (2017) cũng đã khảo sát ảnh hưởng của các chất bổ trợ đến quá trình tăng sinh khối mô sẹo Mật Nhân. Kết quả cho thấy nồng độ vitamin B1 10 mg/l là thích hợp để tăng sinh khối tế bào mô sẹo. Vitamin B1 (thiamine) là một chất dinh dưỡng quan trọng, tham gia vào nhiều quá trình trao đổi chất trong tế bào. Việc bổ sung vitamin B1 vào môi trường nuôi cấy giúp cải thiện sự phát triển của mô sẹo, từ đó tăng sinh khối. Môi trường nuôi cấy mô sẹo cần được tối ưu hóa để đảm bảo sự phát triển tốt nhất của mô sẹo.

5.1. Vai trò của vitamin B1 trong quá trình trao đổi chất của tế bào

Vitamin B1 (thiamine) đóng vai trò quan trọng trong quá trình trao đổi chất của tế bào, đặc biệt là trong quá trình chuyển hóa carbohydrate. Thiamine pyrophosphate (TPP), một dạng hoạt động của vitamin B1, là coenzyme của nhiều enzyme quan trọng trong chu trình Krebs và con đường pentose phosphate. Việc bổ sung vitamin B1 giúp cải thiện quá trình trao đổi chất của tế bào, từ đó tăng cường sự phát triển và sinh trưởng của mô sẹo.

5.2. Các chất bổ trợ khác có tiềm năng trong nuôi cấy mô sẹo

Ngoài vitamin B1, còn có nhiều chất bổ trợ khác có tiềm năng trong nuôi cấy mô sẹo, bao gồm các vitamin khác (như vitamin B5, vitamin C), amino acid, và các chất hữu cơ khác. Các chất này có thể giúp cải thiện sự phát triển của mô sẹo, tăng cường khả năng chống chịu stress và kích thích sự tích lũy các hợp chất thứ cấp. Việc nghiên cứu và ứng dụng các chất bổ trợ này có thể giúp tối ưu hóa quy trình nuôi cấy mô sẹo và nâng cao hiệu quả sản xuất dược liệu.

VI. Kết Luận và Hướng Phát Triển Nghiên Cứu Nuôi Cấy Mô Mật Nhân

Nghiên cứu của Nguyễn Thị Yến Nhi (2017) đã cung cấp những thông tin quan trọng về việc nuôi cấy mô sẹo cây Mật Nhân. Việc xác định được nồng độ NAA và BA tối ưu, cũng như vai trò của vitamin B1 trong tăng sinh khối mô sẹo, là những đóng góp quan trọng cho lĩnh vực này. Tuy nhiên, cần có thêm nhiều nghiên cứu để tối ưu hóa quy trình nuôi cấy, cải thiện chất lượng mô sẹo và tăng cường sản xuất các hợp chất thứ cấp. Nghiên cứu in vitro Mật Nhân cần tập trung vào việc ứng dụng các kỹ thuật sinh học phân tử để hiểu rõ hơn về cơ chế điều khiển quá trình tạo mô sẹo và tổng hợp các hợp chất có giá trị.

6.1. Tóm tắt kết quả nghiên cứu và ý nghĩa thực tiễn

Nghiên cứu đã xác định được các yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến quá trình tạo mô sẹo và tăng sinh khối mô sẹo cây Mật Nhân, bao gồm nồng độ NAA, BA và vitamin B1. Kết quả này có ý nghĩa thực tiễn trong việc phát triển quy trình nuôi cấy mô sẹo hiệu quả, giúp bảo tồn và khai thác nguồn dược liệu quý hiếm này một cách bền vững. Việc ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô có thể giúp giảm áp lực khai thác từ tự nhiên và đảm bảo nguồn cung dược liệu ổn định.

6.2. Hướng nghiên cứu tiếp theo và tiềm năng ứng dụng

Hướng nghiên cứu tiếp theo cần tập trung vào việc tối ưu hóa quy trình nuôi cấy mô sẹo, cải thiện chất lượng mô sẹo và tăng cường sản xuất các hợp chất thứ cấp. Việc ứng dụng các kỹ thuật sinh học phân tử có thể giúp hiểu rõ hơn về cơ chế điều khiển quá trình tạo mô sẹo và tổng hợp các hợp chất có giá trị. Ngoài ra, cần có thêm nghiên cứu về ứng dụng nuôi cấy mô sẹo Mật Nhân trong sản xuất dược liệu và các sản phẩm chăm sóc sức khỏe.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Chương 1 TONG QI AN 1. Cây Mật Nhân 1. Phân loại khoa học - Giới: Plantae - Bộ: Sapindales - Họ: Simaroubaceae - Chi: Eurycoma - Loài: E. Longifolia - Tên khoa học: Eurycoma longifloria Jack Cây Mật Nhân còn gọi là Mật Nhơn, cây Bá Bệnh, cây Bách Bệnh hay cây Hậu Phác Nam, nhân sâm Malaysia với tên nổi tiếng Hình 1.1: Cày Mật Nhàn Tongkat ali, Pasak bumi (Indonesia), Tho nan (Lào).

Antongsar, antogung sar (Campuchia), tiếng Anh gọi là longjack. Phân bố sinh học Cây Bá Bệnh phân bố chủ yểu ở vùng nhiệt đới Nam Á và Đông Nam Á. Ở Đông Nam Á cây Mật Nhân phân bố rộng khắp ờ các quốc gia như: Malaysia, Indonesia, Brunei, Thái lan, Campuchia,.ờ Indonesia cây tự nhiên mọc duy nhất ở Sumatra và Kalimantan. Ngoài ra, cây Mật Nhàn còn xuất hiện ờ Nam Trung Quốc, Ấn Độ.

Ở Việt Nam cây Mật Nhàn có mặt ở hầu hết các tinh thành chảy dài trên mảnh đất hình chữ s nhưng nhiều nhất tạp trung ở các tinh miền Trung như: Nghệ An, Thanh Hóa, Hà Tĩnh. Một sổ rừng ờ Tày Nguyên, Tây Ninh. Ngoài ra cây Mật Nhân có mặt ở vườn quốc gia Bái Tử Long, khu bào tồn thiên nhiên Đồng Sơn - Kỳ Thượng, Hoành Bồ. Quàng Ninh, đặc biệt quanh vùng Biên Hòa, Tràng Bom và Định Quán thuộc tinh Đồng Nai.

Dặc (liêm sinh trướng Cây Mật Nhân thường mọc ớ vùng dổi núi có sườn dốc cao hơn mực nước biển khoang 700 m, vùng đât cát có tính acid, nghèo chất dinh dưỡng, mọc dưới những tán cây. thích hợp sông ớ những nơi có nhiệt độ trung binh 25’C và độ ẩm khoảng 86%, mọc trong các khu rừng ven bờ biên hoặc rừng nguyên sinh, rừng tái sinh và cả các khu rừng hồn tạp, rừng thưa (Đỗ Tất Lợi, 1999/. Đặc điểm hình thái Mật nhân là loại cây trung bình, cao khoáng i 5 m. thường mọc dưới tán lá của những cây lớn.

Cây Mật Nhân là cây lá kép lòng chim le gồm 10 đến 36 đôi lá chét, hầu như không có cuống, lá hình trứng dài. mỗi cành thường có từ 13 cho đến 42 lá. mặt trên của lá có màu xanh còn mặt dưới ũ-. Cây Mật Nhản là cây đơn tính khác gốc nên mỗi cây chì trổ hoa đực hoặc hoa cái.

Hoa có màu đỏ nâu mọc thành chùm, nở vào tháng 3 - 4. Mỗi hoa có 5 - 6 cánh rất nhò. Cây kết quả vào tháng 5-6. Hình dạng quả là hình quả trứng, cỏ khía rãnh ờ giữa, quả non có màu xanh, khi chín đổi sang màu đỏ sầm, nhẵn, hơi thuôn dài.

đâu tù và cong, mặt trong có lông thưa và ngắn, dài từ 1 - 2 cm, ngang 0,5 - 1 cm. Mồi quả có một hạt. trên hạt có nhiều lông ngan. Thành phần hóa học Các công trình nghiên cứu đã xác định được 65 hợp chất các loại từ rề cày Mật Nhân (Narihiko Fukamiya, 2004), thành phần hóa học của cày phong phủ và đa dạng bao gồm nhiều hợp chất như diterpenoids, triterpen với 3 loại hợp chất cơ bản như: quassinoid, squallan và tirucallan.

Ngoài ra, còn có các alkaloid, steroid. Trong đó, alkaloid và quassinoid đóng vai trò quan trọng nhất và là thành phần hóa học chủ yếu của cây Mật Nhân. Các hợp chất quasinoid: eurycomalacton, 6a-hydroxyeurymalacton, longilacton, 5,6-dehydroeurycomalacton, 14,15-p-dihydroxykalaineanon. Các hợp chất triterpen loại tirucalan: niloticin, dihydroniloticin, piscidinol A, bourjotinolon A, espisapelin A.

melianon và hyspirdon. Các alkaloid loại canthin-6-on: 9,10-dimethoxycanthin-6-on, 10-hydroxy- 9methoxy-canthin-6-on. alkaloid carbolin, 10-hydroxy-9-methoxy-canthin-6-on, 5,9- dimethoxycanthin-6-on và 9-methoxy-3-methyl-canthin-5,6-dion. 4 I ừ rê dà phán lập dược 3 quassinoid: eurycomanol, eurycomanol 2-0-P-D glucopyanosid và 13p,18-dihydroeurycomanol.

Năm 1982, nhóm nghiên cứu thuộc trưởng đại học Y dược Hiroshima, Nhật Bản đã có lập được hai họp chât quassinoíd tư ré cá) Mật nhản có tên là eurỵcomanon và eurycomanol. Bằng phương pháp sấc kí. phương pháp nhiễu xạ tia X để xác định cấu trúc, s. Bhatnagar và ctv đã cô lập được ha: hợp chất thuộc nhóm quassinoid 20 cacbon, có tên gọi là laurylacton A và laurylacton B.

Eurycomanon Eurycomanol Laurylacton B Hình 1.2: Công thức hóa học của các hợp chẩt quassinoid K L Chan và ctv (1989). lìm thây các từ cao eter dầu tìm thấy họp chất mới thuộc nhóm quassinoid như: 3.4-dihydroeurycomalacton, 5,6-dehydroeurycomalacton, 6-hydroxy-5,6-dehydroeurỵcomalacton. Ngoài ra, còn phát hiện thèm sự hiện diện của các alkaloid như 10-hydroxycantin-6-on, là tinh thể màu vàng. Đồng thời từ cao cloroform trích lỵ từ rề cây Mật nhàn thu được một họp chất coumarin có tên gọi là scopoletin.6 -dihydroeurycomaỉacton 6-h ydrox y-5,6 -dehydroeuryco ma lacto n 10-hydroxycantin-6-on Hình 1.3: Công thức hóa học 3,4-dihydroeurycomalacton.

5,6-dihydroeurycomalacton, 6-hydroxy-5,6-dehydroeurycomalacton. 1O-hydroxycantin-6-on Hình 1.4: Còng thức hóa học của eurylene và teurylene Năm 1991, nhõm nghiên cửu thuộc trường đại học Tokyo - Nhật, phân lập được hai hợp chất mói khung squallan từ rè cây Mật nhàn 6 1. Công dụng 1 hành phân dược liệu thường được sừ dụng dùng làm thuốc của cầy Mật Nhân là rê, cu cùa cây vì ở rê vá cu có chứa ham lượng các dược chất rất cao. Theo đông y, cây có vị đăng, tính âm, dùng dể chửa nhiểu bệnh như; ãn không tiêu, tiêu chảy, nôn mừa, kiêt lỵ, có tác dụng bô dường cho người bị khí huyết hư.

gân xương đau nhức, tê chân tay, rôi loạn tiêu hóa (tiêu cháy hay kiết ly đéu dũng được), phòng ngừa tứ thời cảm mạo. Ngoài ra cây Mật Nhân còn chữa được chứng thống kinh (phụ nữ bị đau bụng lúc hành kinh), chứng ách nghịch ở ngực í đau tức ngực do khí ứ không thông), có tác dụng làm chậm quá trình biến đối cưi các lể báo gan bị tổn thương khi bị viêm gan, hô trợ gan trong công việc giái độc. lìm cho chúng ta có cảm giác ngon miệng hơn khi ăn.Lá cùa cây Mật Nhàn sẽ được sứ dụng dùng để nấu nước tắm trị ghè chôc. Theo Đô Tât Lợi (1999), trong vò cây Mặt Nhân cỏ chứa một chát đăng gọi là quassinoid, có tác dụng chừa các bệnh ăn khống tiêu, đau mỏi lưng, quà của cây Mật Nhân dùng chừa bệnh kiết lỵ.

Từ điển cây ĩhuốc Việt Nam của Võ Văn Chi (2003), cây Mật Nhân thái nhỏ, tầm rượu sao để làm thuốc, có vị đẳng, tính mát. Thường dùng chữa khí hư, huyết kém. ăn uống không tiêu, tức ngực, gân xương yếu. tay chân tê đau, tả lỵ, nôn mửa, cảm mạo.

Các quassinoid có trong rễ cây Mật Nhân có tác dụng tiêu diệt ký sinh trùng sốt rét Plasmodium Chan (1989), đã thử nghiệm dịch chiết Eurycoma longifolia chống ký sinh trùng sốt rét Phytochemistry falciparum trong điều kiện in vitro, cho thay các hợp chất 10-hydroxycanthin-6-one, eurycomalactone. eurycomanone và eurycomanol có tác dụng chổng sốt rét. Cho tới nay năm thành phan gày độc tế bào từ rễ của Eurycoma Longifolia từ Kalimantan, Indonesia. có bon alkaloid thuộc nhóm canthin-6- one (9-methoxycanthin-6-one, 9-methoxycanthin-6-one-N-oxide, 9-hydroxycanthin-6- one và 9-hydroxycanthin-6-one-N-oxide) và một quassinoid là eurycomanone có tác dụng gây độc tế bào chống một so dòng tế bào ung thư (ung thư vú, đại ưàng, phổi, da, các dòng tế bào kháng thuốc KB, KB-V1 và bệnh bạch cầu P-388).

Các quassinoid có trong cày Mặt Nhân có khả nàng tăng kích thích tố tetosterone ở cơ thể nam giới một cách tự nhiên nên cây được sử dụng như một vị thuốc bổ giúp nam giới phục hồi, cài thiện và tàng cường chức nàng sinh lý và sức khỏe sinh sản. Viện nghiên cửu rùmg Malaysia (FR1M) trong chương trình hợp tác Công nghệ Sinh học với 7 ỉẹn c ông nghẹ (Mil) Mỹ dã chứng minh được những lợi ích của cây Mật Nhân trong. lẹc chưa rôi loạn cương dương do lam tăng testosteron. Ngoài ra, quassinoid giúp bổ sung năng lượng cho cơ thé, giúp giam stress, mệt mòi, tăng cường miễn dịch, ngăn ngừa khôi u và phòng chông lão hóa.

giúp tổng cương năng lượng hoạt động và sức bền, cho cơ thể hoạt động. Các nghiên cứu trong nưó’c và ngoài nước 1. Các nghiên cứu trong nước Phạm Thị Như Hồng và ctv (2006) cùa minh đã nghiên cứu và phân lập được 3 hợp chât triterpen là 25-0- methylpiscidinol A. úrucallan-7,24-diene-3-one và epi-sapeline cùng với hai hợp chất quassinoid là quassir, vã 18-hydroxyquassin.

Bùi Minh Nhuệ (2012), đã nghiên cửu ‘hãnh phẩn hóa học cây Khổ Sâm mềm (Brucea mollis wall. Xác định cẩu trúc hóa học các hợp chất và thử hoạt tính ức chê tế bào ung thư in vitro. Ket qua đã phán lập được 5 hợp chất từ lá cây bao gồm: octatriacontan-l-ol (BM.01), tetratriacontan-ỉ-ol (BM.04, MC220), a-tocopherol (BM. Trong đó, các họp chất BM.05 lần đầu tiên được phân lập từ chi Brucea, họ thanh thất.

Võ Châu Tuấn và Trần Quang Dần (2013) đã nghiên cứu khả năng tái sinh chồi in vitro cây Mật Nhân (Eurycoma longifoliaJack). Tác giã tái sinh cày từ hạt giống nảy mầm trên môi trường cơ bản MS, WPM.Tỳ lệ này mầm đạt lớn nhất ưên môi trường. Đoạn chồi sau khi nảy mầm (khoảng 0,5 cm) được cấy trên môi trường cơ bản MS bổ sung kinetin (1,0 - 5,0 mg/1) để cảm ứng nhân nhanh chồi. Qua kết quả cho thấy số chồi in vitro đạt lớn nhất trên môi trường cơ bàn MS bồ sung 5,0 mg/1 kinetin với 3,6 (chồi/mẫu cấy), chồi cao 2 cm và hình thành rề tốt trên mòi trường cơ bản MS bổ sung 0,5 mg/1 IBA.

Các nghiên cứu ngoài nưóc Sobri Hussein (2006) đà nghiên cửu tạo chồi bất định từ rề và thân cây Eurycoma longifolia Jack. Ket quá trong nghiên cứu tạo chồi bất định cho tỷ lệ mẫu phát sinh chồi cao nhất đạt 70%. với 18,2 lá/chồi, 2,5 cuống lá; 7,2 lá/cuống và chiều dài thân đạt 2,7 cm. 8 Luthíi Aziz Mahmud Siregar (2009) đã nghiên cứu tác động cùa các thành phần môi trương dinh dưỡng dén sự táng trướng và tích lũy canthinone trong nuôi cấy tế bào Eurycoma longifolia Jack.

Két qua cho thấy hám lượng cao nhất của alkaloid, 9- hydroxycanthin-6-one và 9-methoxycanthin-6-one. có thề thu được từ tế bào Eurycoma longifolia Jack băng cách nuôi cây dịch huyên phù trong môi trường MS có chứa chất dinh dưỡng: 21,50 mM NH4NO3, 14,25 m.7H2O; 1,45 mM KH2PO4và hàm ỉượng cua các muối vi lượng lả 0,233 mM Fe- Na2EDTA; 0,215 mM MnSO4.4H2O và không có CuSƠ4. (2010) đã nghiên cứu sự tăng trường của tongkat ali (Eurycoma longi':-.c' trẽn một dải đất cát biển ở Malaysia. Đất cát biển có năng suất thấp do nhiều hạn chế về tính vật lý và hóa học.

Ba hàm lượng khác nhau của nitơ (N), phốt pho í?> vả Kali (K) đã được thử nghiệm và không có lớp phủ hừu cơ. Kết quà cho thay lác động tích cực đáng kể cùa phàn bón lên chiều cao cây và năng suất sinh khối rễ. Tỳ lệ thích hợp cùa phân bón trên đất này theo yêu cầu của tongkat ali là 75 kg/ha urê. Sobri Hussein và ctv (2012) đã nghiên cứu tạo rễ bất định Eurycoma longifolia để tăng cường sinh lực cho phái mạnh.