Nghiên cứu phân hủy dầu diesel bằng màng sinh học vi khuẩn tại Quảng Ngãi

Ô nhiễm dầu diesel là một vấn đề môi trường cấp bách, gây hậu quả nghiêm trọng cho hệ sinh thái và sức khỏe con người. 68 trang · Trường Đại Học Quảng Ngãi.

• Trường học: Trường Đại Học Quảng Ngãi
• Chuyên ngành: Khoa Học Môi Trường
• Đề tài: Nghiên Cứu Khả Năng Phân Hủy Dầu Diesel Của Màng Sinh Học Do Chủng Vi Khuẩn Tạo Thành Được Phân Lập Từ Mẫu Đấu Và Mẫu Nước Ô Nhiễm Dầu Tại Tỉnh Quảng Ngãi
• Loại tài liệu: Luận Văn
• Địa điểm: Quảng Ngãi

Mục lục chi tiết

• MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1.1. Tình trạng ô nhiễm dầu và hậu quả tác động của nó
• 1.1.1. Tình trạng ô nhiễm dầu trên thế giới và ở Việt Nam
• 1.1.2. Hậu quả của ô nhiễm dầu
• 1.2. Các phương pháp xử lý ô nhiễm dầu
• 1.2.1. Phương pháp cơ học
• 1.2.2. Phương pháp hóa học
• 1.2.3. Phương pháp sinh học
• 1.3. Vai trò của vi sinh vật trong xử lý nước ô nhiễm dầu
• 1.3.1. Vi sinh vật có khả năng phân hủy dầu
• 1.3.2. Cơ chế phân hủy dầu diesel của vi sinh vật
• 1.4. Giới thiệu chung về màng sinh học (biofilm)
• 1.4.1. Khái niệm màng sinh học (biofilm)
• 1.4.2. Sự hình thành, thành phần và cấu trúc của biofilm
• 1.4.3. Ứng dụng của màng sinh học
• 1.4.4. Ảnh hưởng của một số điều kiện hóa lý đến sự hình thành và phát triển của biofilm
• 1.4.4.1. Ảnh hưởng của pH
• 1.4.4.2. Ảnh hưởng của nhiệt độ
• 1.4.4.3. Ảnh hưởng của nguồn carbon
• 1.4.4.4. Ảnh hưởng của nguồn nitrogen
• 1.5. Các phương pháp phân loại vi sinh vật
• 1.5.1. Phân loại theo phương pháp truyền thống
• 1.5.2. Phân loại theo phương pháp sinh học phân tử
• 2. CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Hóa chất và môi trường nuôi cấy
• 2.2. Máy móc và thiết bị nghiên cứu
• 2.3. Phương pháp nghiên cứu
• 2.3.1. Làm giàu vi khuẩn và phân lập các chủng vi khuẩn có khả năng sử dụng dầu diesel
• 2.3.2. Khảo sát khả năng sử dụng dầu diesel của các chủng vi khuẩn
• 2.3.3. Đánh giá khả năng tạo màng sinh học (biofilm) của các chủng vi khuẩn phân lập được
• 2.3.4. Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của vi khuẩn
• 2.3.5. Phân loại, định tên vi khuẩn dựa vào xác định trình tự đoạn gen mã hóa 16S rRNA và xây dựng cây phát sinh chủng loại
• 2.3.6. Nghiên cứu ảnh hưởng của một số điều kiện hóa lý đến sự hình thành màng sinh học của vi khuẩn
• 2.3.7. Đánh giá khả năng phân hủy dầu diesel của màng sinh học do chủng vi khuẩn tạo thành
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 3.1. Làm giàu và phân lập tuyển chọn các chủng vi khuẩn có khả năng sử dụng dầu diesel
• 3.2. Khảo sát khả năng sử dụng dầu diesel của các chủng vi khuẩn phân lập được
• 3.3. Đánh giá khả năng tạo màng sinh học (biofilm) của các chủng vi khuẩn đã phân lập được
• 3.4. Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của chủng vi khuẩn sử dụng dầu diesel và tạo màng tốt nhất từ các chủng vi khuẩn đã phân lập được
• 3.5. Định tên và xây dựng cây phát sinh chủng loại
• 3.5.1. Tách chiết DNA tổng số của chủng vi khuẩn QND10
• 3.5.2. Nhân đoạn gen mã hóa 16S rRNA bằng kỹ thuật PCR
• 3.6. Nghiên cứu ảnh hưởng của một số điều kiện hóa lý đến sự hình thành màng sinh học của chủng Acinetobacter sp.
• 3.6.1. Ảnh hưởng của pH
• 3.6.2. Ảnh hưởng của nhiệt độ
• 3.6.3. Ảnh hưởng của nguồn carbon
• 3.6.4. Ảnh hưởng của nguồn nitrogen
• 3.7. Đánh giá khả năng sử dụng dầu diesel của màng sinh học do chủng Acinetobacter sp. QND10 tạo thành
• KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHÁO

Tóm tắt

I. Giải pháp đột phá Phân hủy dầu diesel bằng màng sinh học

Ô nhiễm dầu diesel là một vấn đề môi trường cấp bách, gây hậu quả nghiêm trọng cho hệ sinh thái và sức khỏe con người. Các phương pháp xử lý truyền thống như cơ học và hóa học thường tốn kém, không triệt để và có thể gây ô nhiễm thứ cấp. Trước bối cảnh đó, công nghệ sinh học nổi lên như một giải pháp bền vững và hiệu quả. Nghiên cứu về khả năng phân hủy dầu diesel của màng sinh học (biofilm) do vi khuẩn tạo ra mở ra một hướng đi mới đầy hứa hẹn. Màng sinh học là một quần xã vi sinh vật có cấu trúc, nơi các tế bào được gắn vào một bề mặt và bao bọc trong một ma trận chất polymer ngoại bào (EPS) do chính chúng tạo ra. Cấu trúc này không chỉ bảo vệ vi khuẩn khỏi các điều kiện môi trường khắc nghiệt như pH, nhiệt độ, và các chất độc hại mà còn tăng cường hiệu quả trao đổi chất và phân hủy chất ô nhiễm. Việc ứng dụng màng sinh học để xử lý dầu diesel tận dụng chính khả năng thích nghi của các vi khuẩn phân hủy hydrocarbon bản địa, được phân lập từ những khu vực đã bị ô nhiễm. Nghiên cứu này tập trung vào việc sàng lọc và tối ưu hóa hoạt động của các chủng vi khuẩn từ mẫu đất và nước tại Quảng Ngãi, một khu vực có hoạt động công nghiệp dầu khí mạnh mẽ. Bằng cách khai thác sức mạnh của tự nhiên, phương pháp này hứa hẹn mang lại hiệu quả xử lý cao, chi phí thấp và thân thiện với môi trường, góp phần giải quyết bài toán ô nhiễm dầu một cách bền vững.

1.1. Tổng quan về công nghệ màng sinh học biofilm

Màng sinh học, hay biofilm, là một cộng đồng các tế bào vi sinh vật bám dính vào nhau và vào một bề mặt, được bao bọc bởi một ma trận các chất polymer ngoại bào (EPS) do chúng tiết ra. Ma trận này, chủ yếu bao gồm polysaccharide, protein và DNA, tạo thành một cấu trúc không gian ba chiều, bảo vệ vi sinh vật khỏi các tác nhân gây hại từ môi trường bên ngoài. Theo Costerton và cộng sự (1978), trên 90% vi khuẩn trong tự nhiên tồn tại dưới dạng màng sinh học. Quá trình hình thành biofilm diễn ra qua nhiều giai đoạn: gắn kết ban đầu (có thể đảo ngược), gắn kết không thể đảo ngược, phát triển thành các vi khuẩn lạc, trưởng thành và cuối cùng là phân tán các tế bào để bắt đầu chu kỳ mới. Cấu trúc này giúp vi sinh vật tăng cường khả năng chống chịu với kháng sinh, chất khử trùng và các điều kiện khắc nghiệt, đồng thời tạo điều kiện thuận lợi cho việc trao đổi gen và hợp tác chuyển hóa, giúp phân hủy hiệu quả các hợp chất hữu cơ phức tạp như hydrocarbon có trong dầu diesel.

1.2. Vai trò của vi sinh vật trong xử lý ô nhiễm dầu

Vi sinh vật đóng vai trò trung tâm trong quá trình phân hủy sinh học dầu mỏ. Nhiều loài vi khuẩn, nấm men và xạ khuẩn có khả năng sử dụng các hợp chất hydrocarbon làm nguồn carbon và năng lượng duy nhất. Các chủng vi khuẩn tiêu biểu có khả năng này thuộc các chi như Pseudomonas, Bacillus, Achromobacter, và đặc biệt là Acinetobacter. Cơ chế phân hủy dầu diesel của vi sinh vật thường bắt đầu bằng việc oxy hóa các phân tử alkane mạch thẳng (thành phần chính của diesel) thông qua các enzyme như monooxygenase. Quá trình này chuyển hóa hydrocarbon thành rượu, aldehyde và acid béo, sau đó các hợp chất này tiếp tục được đưa vào chu trình Krebs để phân giải hoàn toàn thành CO2 và nước. Việc sử dụng các tập đoàn vi sinh vật bản địa, đã thích nghi với môi trường ô nhiễm, thường mang lại hiệu quả cao hơn do chúng đã quen với điều kiện sống và các chất độc hại tại khu vực đó. Do đó, việc phân lập và tuyển chọn các chủng vi khuẩn ưu việt từ chính các địa điểm ô nhiễm là bước đi quan trọng trong việc phát triển các giải pháp xử lý sinh học.

II. Thách thức từ ô nhiễm dầu và hạn chế của phương pháp cũ

Sự phát triển của các ngành công nghiệp khai thác, chế biến và vận chuyển dầu mỏ đã kéo theo nguy cơ ô nhiễm dầu ngày càng gia tăng. Các sự cố tràn dầu, rò rỉ từ các nhà máy và phương tiện vận tải gây ra những thảm họa môi trường nghiêm trọng, tác động trực tiếp đến hệ sinh thái biển, đất và nguồn nước. Dầu diesel, với thành phần là các hydrocarbon phức tạp, có thể tồn tại lâu dài trong môi trường, làm suy giảm lượng oxy hòa tan trong nước, phá hủy cấu trúc tế bào của sinh vật và gây chết hàng loạt các loài thủy sản. Hậu quả không chỉ dừng lại ở mặt sinh thái mà còn ảnh hưởng nặng nề đến kinh tế, đặc biệt là các ngành du lịch và nuôi trồng thủy sản. Các phương pháp xử lý truyền thống như cơ học (dùng phao quây, bơm hút) và hóa học (dùng chất phân tán) tuy có thể xử lý nhanh một phần lượng dầu tràn nhưng lại bộc lộ nhiều hạn chế. Phương pháp cơ học không thể thu hồi triệt để, trong khi các chất hóa học có thể gây độc cho sinh vật và tạo ra ô nhiễm thứ cấp. Do đó, việc tìm kiếm một giải pháp xử lý hiệu quả, an toàn và bền vững như phân hủy sinh học là một yêu cầu cấp thiết, đòi hỏi các nghiên cứu sâu hơn về vai trò của vi sinh vật và màng sinh học.

2.1. Tình trạng ô nhiễm dầu tại Việt Nam và Quảng Ngãi

Việt Nam, với đường bờ biển dài và các hoạt động kinh tế biển sôi động, đang phải đối mặt với tình trạng ô nhiễm dầu ngày càng nghiêm trọng. Theo Hội đồng nghiên cứu Quốc gia Hoa Kỳ (NRC), ước tính mỗi năm có khoảng 3,2 triệu tấn dầu làm ô nhiễm vùng biển Việt Nam từ nhiều nguồn khác nhau. Từ năm 1989 đến nay, đã có khoảng 100 vụ tràn dầu do tai nạn tàu bè được ghi nhận. Tỉnh Quảng Ngãi, với khu công nghiệp Dung Quất là trung tâm lọc hóa dầu của cả nước, là một trong những điểm nóng về nguy cơ ô nhiễm. Các hoạt động khai thác, vận chuyển và lưu trữ dầu tại đây tiềm ẩn rủi ro rò rỉ, ảnh hưởng trực tiếp đến môi trường đất và nước xung quanh. Chính vì vậy, việc nghiên cứu các giải pháp xử lý ô nhiễm tại chỗ, sử dụng chính nguồn vi sinh vật bản địa tại Quảng Ngãi, có ý nghĩa khoa học và thực tiễn to lớn.

2.2. Hạn chế của các phương pháp xử lý cơ học và hóa học

Các phương pháp xử lý sự cố tràn dầu hiện nay chủ yếu là cơ học và hóa học. Biện pháp cơ học như sử dụng phao ngăn, máy hút, giấy thấm dầu giúp thu gom nhanh lượng dầu lớn trên bề mặt nhưng không thể xử lý lượng dầu đã hòa tan hoặc phân tán trong nước và trầm tích. Hiệu quả của phương pháp này cũng giảm mạnh trong điều kiện biển động. Trong khi đó, phương pháp hóa học sử dụng các chất phân tán để phá vỡ màng dầu thành các giọt nhỏ, đẩy nhanh quá trình hòa tan tự nhiên. Tuy nhiên, bản thân các chất phân tán này có thể gây độc cho hệ sinh vật biển, đặc biệt là các rạn san hô và sinh vật phù du. Hơn nữa, cả hai phương pháp đều không xử lý triệt để được hydrocarbon, chỉ di chuyển chất ô nhiễm từ nơi này sang nơi khác hoặc thay đổi dạng tồn tại của chúng, tiềm ẩn nguy cơ ô nhiễm thứ cấp lâu dài. Đây chính là động lực để phát triển các phương pháp sinh học an toàn hơn.

III. Phương pháp phân lập vi khuẩn phân hủy dầu diesel hiệu quả

Để tìm ra tác nhân sinh học có khả năng phân hủy dầu diesel vượt trội, nghiên cứu đã tiến hành một quy trình phân lập và sàng lọc khoa học, bắt đầu từ các mẫu đất và nước thu thập tại khu công nghiệp Dung Quất, Quảng Ngãi. Nguyên tắc cốt lõi là tạo ra một môi trường chọn lọc, mô phỏng điều kiện ô nhiễm, để làm giàu và tuyển chọn những chủng vi khuẩn phân hủy hydrocarbon đã thích nghi tự nhiên. Quá trình này bắt đầu bằng việc nuôi cấy các mẫu trong môi trường khoáng Gost có bổ sung dầu diesel là nguồn carbon duy nhất. Sau nhiều chu kỳ làm giàu, các vi sinh vật có khả năng sử dụng dầu diesel sẽ phát triển mạnh mẽ, chiếm ưu thế trong quần thể. Từ dịch làm giàu, các khuẩn lạc riêng rẽ được phân lập trên môi trường thạch. Mỗi chủng sau đó được đánh giá độc lập về hai tiêu chí quan trọng: khả năng sinh trưởng trên môi trường chứa dầu diesel và khả năng tạo màng sinh học. Thông qua các phép đo định lượng như đo mật độ quang (OD) và phương pháp nhuộm tím tinh thể, nghiên cứu đã xác định được chủng vi khuẩn ưu việt nhất cho các bước tiếp theo.

3.1. Quy trình làm giàu và tuyển chọn vi sinh vật bản địa

Mẫu đất và nước ô nhiễm được đưa vào môi trường khoáng Gost dịch có bổ sung 1% dầu diesel (DO) và được nuôi lắc ở 30°C. Thí nghiệm được thực hiện song song với hai điều kiện: có và không bổ sung glucose 0,5% để đánh giá cơ chế đồng trao đổi chất. Quá trình làm giàu được lặp lại 3 lần, mỗi lần 7 ngày, nhằm tăng sinh khối của các vi sinh vật có khả năng phân giải dầu mạnh nhất. Kết quả quan sát cho thấy, sau mỗi lần làm giàu, độ đục của môi trường tăng lên rõ rệt và lượng dầu trên bề mặt giảm đi đáng kể, chứng tỏ sự phát triển mạnh mẽ của các vi sinh vật bản địa. Dịch làm giàu sau đó được pha loãng và cấy gạt trên môi trường thạch HKTS để thu nhận các khuẩn lạc riêng rẽ. Tổng cộng, 11 chủng vi khuẩn với các đặc điểm hình thái khác nhau đã được phân lập thành công từ quy trình này.

3.2. Sàng lọc và định danh chủng vi khuẩn tiềm năng nhất

11 chủng vi khuẩn phân lập được tiếp tục được sàng lọc dựa trên hai khả năng chính. Thứ nhất là khả năng sử dụng dầu diesel, được đánh giá bằng cách theo dõi sự tăng trưởng (đo OD600) trong môi trường khoáng lỏng chứa 1% dầu diesel trong 7 ngày. Thứ hai là khả năng tạo màng sinh học, được định lượng bằng phương pháp nhuộm tím tinh thể và đo độ hấp thụ ở bước sóng OD570. Kết quả từ hai thí nghiệm này cho thấy, chủng được ký hiệu QND10 thể hiện cả hai khả năng vượt trội nhất: sinh trưởng mạnh mẽ trên môi trường dầu và tạo ra lớp biofilm dày đặc. Chủng này sau đó được lựa chọn để định danh bằng phương pháp sinh học phân tử. Bằng cách giải trình tự gen 16S rRNA, một marker phân loại phổ biến, và so sánh với ngân hàng gen quốc tế, chủng QND10 được xác định có quan hệ họ hàng gần nhất với chi Acinetobacter, một nhóm vi khuẩn nổi tiếng với khả năng phân hủy hydrocarbon.

IV. Khám phá chủng Acinetobacter sp

Chủng vi khuẩn QND10, được xác định là ngôi sao của nghiên cứu, thuộc chi Acinetobacter. Đây là một loại trực khuẩn Gram âm, không di động, và có khả năng tồn tại mạnh mẽ trong nhiều môi trường khác nhau, đặc biệt là các khu vực ô nhiễm. Về mặt hình thái, trên môi trường nuôi cấy, QND10 tạo ra khuẩn lạc tròn, màu trắng đục, hơi lồi. Dưới kính hiển vi điện tử, tế bào có dạng hình que ngắn, hai đầu tù, với kích thước khoảng (0,67-0,73) μm x (0,93-1,17) μm. Điều đặc biệt là xung quanh tế bào quan sát thấy có nhiều hợp chất ngoại bào, đây chính là vật liệu để xây dựng nên cấu trúc màng sinh học vững chắc. Việc định danh chính xác chủng vi khuẩn này thông qua phân tích gen 16S rRNA là một bước quan trọng. Kết quả phân tích trình tự và xây dựng cây phát sinh chủng loại đã khẳng định vị trí của QND10 trong nhóm Acinetobacter, củng cố thêm cơ sở khoa học về tiềm năng ứng dụng của nó trong công nghệ phân hủy sinh học dầu diesel. Sự kết hợp giữa khả năng phân hủy chất ô nhiễm mạnh mẽ và khả năng tạo biofilm bền vững làm cho Acinetobacter sp. QND10 trở thành một ứng cử viên lý tưởng.

4.1. Đặc điểm hình thái và sinh hóa của chủng QND10

Chủng QND10 là một vi khuẩn Gram âm, được xác nhận qua phương pháp nhuộm Gram khi tế bào bắt màu hồng của safranin. Hình thái khuẩn lạc trên đĩa thạch HKTS có đặc điểm đặc trưng: tròn, trắng đục, hơi lồi, đường kính từ 0,5-1 mm. Hình ảnh từ kính hiển vi điện tử quét (SEM) cho thấy tế bào có hình que ngắn, đây là đặc điểm hình thái phổ biến của chi Acinetobacter. Sự hiện diện của một lượng lớn chất ngoại bào bao quanh tế bào là một dấu hiệu quan trọng, cho thấy tiềm năng tạo màng sinh học mạnh mẽ của chủng này. Các đặc điểm này, kết hợp với khả năng sinh trưởng tốt trên môi trường có dầu diesel, đã cung cấp những bằng chứng ban đầu vững chắc về vai trò của nó trong việc xử lý ô nhiễm.

4.2. Phân loại phân tử dựa trên trình tự gen 16S rRNA

Để định danh chính xác, DNA tổng số của chủng QND10 đã được tách chiết và sử dụng làm khuôn cho phản ứng chuỗi polymerase (PCR) để nhân đoạn gen mã hóa 16S rRNA. Sản phẩm PCR có kích thước khoảng 1500 bp, phù hợp với kích thước dự kiến của gen này ở vi khuẩn. Trình tự nucleotide của đoạn gen này sau đó được xác định và so sánh với các trình tự có sẵn trên ngân hàng dữ liệu gen quốc tế (như EMBL). Phân tích phát sinh chủng loại cho thấy trình tự gen 16S rRNA của QND10 có độ tương đồng cao với các loài thuộc chi Acinetobacter. Kết quả này không chỉ giúp đặt tên cho chủng vi khuẩn mà còn cung cấp cái nhìn sâu sắc về mối quan hệ tiến hóa của nó, khẳng định nó thuộc về một nhóm vi sinh vật đã được biết đến rộng rãi với khả năng phân hủy hydrocarbon mạnh mẽ.

V. Tối ưu hiệu suất phân hủy dầu diesel của màng sinh học QND10

Sau khi xác định được chủng vi khuẩn ưu việt Acinetobacter sp. QND10, bước tiếp theo là tối ưu hóa các điều kiện để màng sinh học phát triển mạnh nhất, từ đó nâng cao hiệu suất phân hủy dầu diesel. Sự hình thành và phát triển của màng sinh học chịu ảnh hưởng lớn bởi các yếu tố hóa lý của môi trường, bao gồm độ pH, nhiệt độ, và nguồn dinh dưỡng bổ sung như carbon và nitrogen. Nghiên cứu đã tiến hành khảo sát một cách hệ thống ảnh hưởng của từng yếu tố này. Bằng cách thay đổi lần lượt pH, nhiệt độ, loại đường (nguồn carbon) và loại muối (nguồn nitrogen) trong môi trường nuôi cấy, khả năng tạo biofilm được đánh giá định lượng sau 48 giờ. Kết quả đã chỉ ra một bộ điều kiện tối ưu, nơi chủng QND10 có thể tạo ra lớp biofilm dày và hoạt động mạnh nhất. Dưới các điều kiện này, khả năng phân hủy dầu diesel của màng sinh học được kiểm chứng ở nhiều nồng độ dầu khác nhau, cho thấy hiệu suất xử lý ấn tượng, mở ra triển vọng ứng dụng thực tế.

5.1. Ảnh hưởng của điều kiện pH và nhiệt độ đến biofilm

Độ pH và nhiệt độ là hai yếu tố môi trường quan trọng ảnh hưởng trực tiếp đến hoạt động của enzyme và sự sinh trưởng của vi khuẩn. Nghiên cứu đã khảo sát khả năng tạo màng sinh học của chủng Acinetobacter sp. QND10 trong một dải pH rộng từ 4 đến 9 và dải nhiệt độ từ 25°C đến 50°C. Kết quả đo độ hấp thụ tím tinh thể cho thấy, màng sinh học hình thành tốt nhất ở pH 7 và nhiệt độ 37°C. Ở các điều kiện quá axit, quá kiềm hoặc nhiệt độ quá cao/thấp, khả năng tạo biofilm giảm đi đáng kể. Điều này cho thấy chủng QND10 hoạt động tối ưu trong điều kiện trung tính và ấm, phù hợp với điều kiện khí hậu tại nhiều vùng của Việt Nam, tạo thuận lợi cho việc ứng dụng thực địa.

5.2. Tác động của nguồn carbon và nitrogen bổ sung

Nguồn dinh dưỡng, đặc biệt là carbon và nitrogen, đóng vai trò thiết yếu trong việc xây dựng sinh khối và các thành phần của màng sinh học. Nghiên cứu đã thử nghiệm các nguồn carbon khác nhau (glucose, saccharose, lactose, maltose) và các nguồn nitrogen khác nhau (KNO₃, (NH₄)₂SO₄, peptone, cao men). Kết quả cho thấy, chủng QND10 tạo biofilm hiệu quả nhất khi được bổ sung glucose làm nguồn carbon và peptone làm nguồn nitrogen. Glucose là một loại đường đơn dễ hấp thụ, cung cấp năng lượng nhanh chóng cho quá trình sinh trưởng ban đầu, trong khi peptone cung cấp các amino acid cần thiết để tổng hợp protein và enzyme tham gia vào quá trình phân hủy dầu. Việc xác định được nguồn dinh dưỡng tối ưu này là chìa khóa để tối đa hóa hiệu quả xử lý trong các ứng dụng thực tế.

5.3. Đánh giá hiệu suất phân hủy dầu diesel trong điều kiện tối ưu

Dưới các điều kiện tối ưu đã xác định (pH 7, nhiệt độ 37°C, bổ sung glucose và peptone), màng sinh học của chủng Acinetobacter sp. QND10 được nuôi cấy và sau đó thử thách với các nồng độ dầu diesel khác nhau, từ 1% đến 6%. Sau 5 ngày xử lý, hàm lượng dầu còn lại được xác định bằng phương pháp phân tích khối lượng. Kết quả cho thấy hiệu suất phân hủy dầu diesel rất cao. Cụ thể, màng sinh học có thể phân hủy gần như hoàn toàn dầu ở nồng độ 1% và vẫn duy trì hiệu suất tốt ở các nồng độ cao hơn. Biểu đồ hiệu suất cho thấy khả năng thích ứng và xử lý mạnh mẽ của biofilm, khẳng định tiềm năng lớn của chủng vi khuẩn này trong việc làm sạch các môi trường bị ô nhiễm dầu nặng.

VI. Tiềm năng ứng dụng màng sinh học trong xử lý ô nhiễm dầu

Kết quả từ nghiên cứu này đã chứng minh một cách thuyết phục về tiềm năng to lớn của màng sinh học do chủng Acinetobacter sp. QND10 tạo thành trong việc phân hủy dầu diesel. Việc phân lập thành công một chủng vi khuẩn bản địa từ chính khu vực ô nhiễm tại Quảng Ngãi không chỉ mang ý nghĩa khoa học mà còn mở ra hướng ứng dụng thực tiễn cao. Chủng vi khuẩn này không chỉ có khả năng sử dụng hiệu quả hydrocarbon trong dầu diesel mà còn tạo ra một lớp biofilm vững chắc, giúp nó tồn tại và hoạt động hiệu quả trong điều kiện môi trường khắc nghiệt. Việc xác định được các điều kiện tối ưu về pH, nhiệt độ và dinh dưỡng là cơ sở quan trọng để thiết kế các hệ thống xử lý sinh học quy mô lớn, chẳng hạn như các bể phản ứng sinh học hoặc áp dụng trực tiếp tại hiện trường (bioremediation in-situ). Trong tương lai, công nghệ này có thể được phát triển thành các chế phẩm sinh học, cung cấp một giải pháp xử lý ô nhiễm dầu thân thiện với môi trường, chi phí thấp và hiệu quả bền vững, góp phần bảo vệ tài nguyên biển và hệ sinh thái của Việt Nam.

6.1. Hướng phát triển thành các chế phẩm sinh học thương mại

Từ chủng vi khuẩn Acinetobacter sp. QND10 đã được tuyển chọn và tối ưu hóa, hướng đi tiếp theo là phát triển các chế phẩm sinh học. Các chế phẩm này có thể được sản xuất ở dạng lỏng hoặc dạng bột chứa vi sinh vật ở trạng thái tiềm sinh, dễ dàng vận chuyển, bảo quản và kích hoạt khi cần thiết. Chúng có thể được phun trực tiếp lên các vết dầu loang trên biển, trộn với đất bị ô nhiễm hoặc đưa vào các hệ thống xử lý nước thải công nghiệp. Ưu điểm của việc sử dụng chế phẩm là khả năng đưa một lượng lớn vi sinh vật có hoạt tính cao vào thẳng vùng ô nhiễm, đẩy nhanh đáng kể quá trình phân hủy sinh học. Để thương mại hóa, cần có các nghiên cứu sâu hơn về công nghệ sản xuất, ổn định sản phẩm và đánh giá an toàn sinh học.

6.2. Triển vọng kết hợp với các công nghệ xử lý khác

Công nghệ màng sinh học không nhất thiết phải hoạt động một mình. Để đạt hiệu quả xử lý tối đa, đặc biệt với các sự cố ô nhiễm quy mô lớn, việc kết hợp biofilm với các phương pháp khác là một chiến lược thông minh. Ví dụ, sau khi sử dụng các biện pháp cơ học để thu gom phần lớn lượng dầu tràn, chế phẩm màng sinh học có thể được áp dụng để xử lý triệt để lượng dầu còn sót lại và hòa tan trong nước. Ngoài ra, công nghệ này có thể được tích hợp vào các bể lọc sinh học hiện có, nơi các giá thể được bổ sung để vi khuẩn tạo biofilm, làm tăng bề mặt tiếp xúc và hiệu quả xử lý. Sự kết hợp này tận dụng được ưu điểm của mỗi công nghệ, tạo ra một quy trình xử lý toàn diện, nhanh chóng và bền vững hơn, mở ra một tương lai xanh cho ngành công nghiệp xử lý môi trường.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Theo báo cáo của các tổ chức nghiên cứu môi trường, hàng năm vùng biển Việt Nam tiếp nhận khoảng 3,2 triệu tấn dầu ô nhiễm từ nhiều nguồn xả thải khác nhau. Kể từ năm 1989 đến nay, bờ biển nước ta đã ghi nhận hơn 100 vụ tai nạn tràn dầu nghiêm trọng, gây tổn thất nặng nề cho các hệ sinh thái rừng ngập mặn và rạn san hô ven bờ. Trong khi đó, trữ lượng dầu mỏ toàn cầu ước tính đạt từ 1.148 đến 1.200 tỉ thùng, cung ứng tới 80% nhu cầu năng lượng phục vụ phát triển kinh tế và giao thông vận tải. Sự gia tăng mạnh mẽ của hoạt động khai thác, lọc hóa dầu và vận tải biển kéo theo nguy cơ rò rỉ hydrocarbon nghiêm trọng.

Các biện pháp xử lý cơ học và hóa học truyền thống thường bộc lộ nhiều hạn chế như không xử lý triệt để, chi phí vận hành cao hoặc gây ô nhiễm thứ cấp do hóa chất phân tán. Xuất phát từ thực tiễn đó, nghiên cứu này tập trung vào mục tiêu phân lập, tuyển chọn và đánh giá khả năng tạo màng sinh học của các chủng vi khuẩn bản địa có khả năng phân hủy dầu diesel (DO) thu thập tại Khu công nghiệp Dung Quất, tỉnh Quảng Ngãi.

Được thực hiện trong năm 2015, đề tài đã xác lập các thông số động học và điều kiện hóa lý tối ưu giúp tăng cường mật độ tế bào vi khuẩn cố định. Kết quả nghiên cứu chứng minh công nghệ màng sinh học giúp nâng cao khả năng chống chịu điều kiện khắc nghiệt của vi khuẩn, duy trì hiệu suất phân hủy dầu diesel ổn định ở dải nồng độ từ 1% đến 6%, mở ra giải pháp sinh học an toàn và bền vững cho công tác làm sạch môi trường biển.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng trên nền tảng lý thuyết phân hủy sinh học hydrocarbon hiếu khí kết hợp với mô hình cấu trúc màng sinh học đa tầng. Trong dầu thô và dầu diesel thương phẩm, nhóm n-alkane mạch thẳng có chiều dài phân tử trung bình từ C10 đến C24 chiếm tỷ lệ lớn và là đối tượng dễ bị phân giải sinh học nhất. Quá trình chuyển hóa này diễn ra nhờ sự xúc tác của các hệ enzyme oxy hóa nội bào như alkane hydroxylase (Alk), methane monooxygenase (MMO) và Cytochrome P450 monooxygenase, giúp biến đổi hydrocarbon thành rượu bậc một, aldehyde, acid béo và cuối cùng đi vào chu trình Krebs dưới dạng acetyl-CoA để tạo ra năng lượng, CO2 và sinh khối vi sinh vật.

Đề tài áp dụng 3 khái niệm khoa học then chốt:

• Màng sinh học (Biofilm): Cấu trúc quần thể vi sinh vật bám dính trên bề mặt giá thể, trong đó tế bào vi khuẩn chiếm từ 2% đến 5% và được bảo vệ bởi mạng lưới chất ngoại bào.
• Chất nền polyme ngoại bào (EPS): Hợp chất do vi khuẩn tiết ra chiếm từ 3% đến 6% khối lượng ướt, chứa 40% đến 95% polysaccharide, 1% đến 60% protein, 1% đến 40% lipid và 1% đến 10% acid nucleic, có chức năng giữ ẩm và tạo rào chắn sinh học.
• Vi khuẩn Hydrocarbonoclastic: Tập hợp các chủng vi sinh vật chuyên hóa có khả năng đồng hóa hydrocarbon làm nguồn carbon và năng lượng duy nhất.

Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu tiến hành thu thập 10 mẫu đất và mẫu nước ô nhiễm dầu ngẫu nhiên có chủ đích tại các vị trí tiếp nhận nước thải thuộc Khu công nghiệp Dung Quất, tỉnh Quảng Ngãi. Mẫu được bảo quản lạnh và chuyển về phòng thí nghiệm trong vòng 24 giờ để làm giàu qua 3 chu kỳ liên tiếp trên môi trường muối khoáng Gost dịch bổ sung 1% dầu DO ở chế độ nuôi lắc 200 vòng/phút tại 30°C trong 7 ngày.

Sau quá trình làm giàu, dịch mẫu được pha loãng tới hạn ở dải nồng độ từ 10^-8 đến 10^-10 và cấy gạt trên môi trường HKTS thạch để phân lập các khuẩn lạc thuần khiết. Các phương pháp phân tích chuyên sâu được lựa chọn bao gồm:

• Đo độ đục quang phổ OD600 để theo dõi tốc độ sinh trưởng của vi khuẩn trên nguồn cơ chất dầu DO.
• Kỹ thuật nhuộm tím tinh thể 0,1% và đo mật độ quang OD570 sau khi hòa tan bằng acid acetic 33% theo phương pháp chuẩn để định lượng chính xác khả năng hình thành màng sinh học.
• Tách chiết DNA tổng số và khuếch đại đoạn gen mã hóa 16S rRNA bằng kỹ thuật PCR với cặp mồi đặc hiệu 27F/1527R tạo sản phẩm kích thước khoảng 1.500 bp, sau đó giải trình tự Sanger tự động nhằm định loại phân tử chính xác.
• Xác định lượng dầu diesel phân hủy bằng phương pháp khối lượng, chiết tách 3 lần với chloroform theo tiêu chuẩn TCVN 4582-88. Toàn bộ chuỗi thực nghiệm được tiến hành liên tục trong thời gian 6 tháng.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Quá trình nghiên cứu thực nghiệm đã ghi nhận 4 phát hiện khoa học quan trọng:

• Thứ nhất, từ các mẫu đất và nước ô nhiễm tại Quảng Ngãi, nghiên cứu đã phân lập và tuyển chọn thành công 11 chủng vi khuẩn thuần khiết (ký hiệu từ QND1 đến QND11). Trong đó, chủng QND10 thể hiện tốc độ sinh trưởng vượt bậc trên môi trường chứa 1% dầu DO và đạt chỉ số hấp thụ OD570 cao nhất sau 48 giờ nuôi cấy, chứng minh năng lực tạo màng sinh học vượt trội so với 10 chủng còn lại.
• Thứ hai, chủng QND10 được xác định là trực khuẩn Gram âm, có kích thước tế bào khoảng (0,67-0,73) x (0,93-1,17) µm khi quan sát dưới kính hiển vi điện tử quét ở độ phóng đại 15.000 lần. Kết quả phân tích trình tự đoạn gen 16S rRNA kích thước khoảng 1.500 bp và đối chiếu ngân hàng gen quốc tế khẳng định chủng này thuộc chi Acinetobacter sp.
• Thứ ba, điều kiện hóa lý tối ưu cho sự tạo màng của Acinetobacter sp. QND10 được xác lập tại mức pH 7,0 và dải nhiệt độ từ 30°C đến 37°C. Khi được cung cấp nguồn carbon thích hợp cùng muối nitơ vô cơ, khả năng bắt giữ tím tinh thể của màng sinh học tăng hơn 25% so với mẫu đối chứng.
• Thứ tư, màng sinh học do chủng Acinetobacter sp. QND10 tạo thành có khả năng xử lý hiệu quả dầu diesel ở dải nồng độ rộng từ 1% đến 6% sau 5 ngày nuôi cấy tĩnh.

Thảo luận kết quả

Khả năng phân hủy dầu diesel vượt trội của chủng Acinetobacter sp. QND10 bắt nguồn từ cơ chế tiết chất hoạt động bề mặt sinh học (biosurfactant) kết hợp với lớp màng polymer ngoại bào bao quanh. Mạng lưới này giúp nhũ hóa các hạt dầu không tan thành những giọt siêu nhỏ, làm tăng diện tích tiếp xúc trực tiếp giữa enzyme nội bào và hydrocarbon. Toàn bộ tiến trình thực nghiệm có thể được mô tả trực quan qua biểu đồ đường biểu diễn sự suy giảm nồng độ dầu DO theo thời gian và bảng so sánh mật độ quang OD570 của 11 chủng vi khuẩn khảo sát.

So với các công bố quốc tế về các chủng Pseudomonas hay Bacillus dạng tế bào tự do vốn thường bị ức chế sinh trưởng khi nồng độ dầu vượt quá 3%, cấu trúc biofilm của Acinetobacter sp. QND10 tạo ra một hàng rào vi môi trường bảo vệ vững chắc. Cấu trúc không gian xốp với các kênh vận chuyển chất dinh dưỡng giúp tế bào duy trì hoạt tính trao đổi chất ngay cả khi chịu tải lượng ô nhiễm lên tới 6% dầu DO. Kết quả này khẳng định việc ứng dụng màng sinh học vi khuẩn bản địa là hướng đi mang tính đột phá, khắc phục triệt để nhược điểm rửa trôi sinh khối và sốc tải lượng trong xử lý ô nhiễm thực địa.

Đề xuất và khuyến nghị

Dựa trên các kết quả thực nghiệm đã đạt được, đề tài đưa ra 4 giải pháp ứng dụng đồng bộ:

• Chuẩn hóa quy trình nhân sinh khối chủng Acinetobacter sp. QND10 ở quy mô pilot 500 lít/mẻ, nâng mật độ tế bào đạt trên 10^9 CFU/ml trong thời gian 3 đến 6 tháng do Viện Công nghệ Sinh học chủ trì thực hiện.
• Nghiên cứu chế tạo các giá thể mang vi sinh cố định từ vật liệu polymer sinh học xốp hoặc phụ phẩm nông nghiệp nhằm gia tăng 40% diện tích bám dính của màng sinh học trong thời gian 6 đến 9 tháng do các doanh nghiệp công nghệ môi trường phối hợp triển khai.
• Triển khai lắp đặt thử nghiệm hệ thống bể phản ứng sinh học màng cố định (BFD) xử lý nước thải nhiễm dầu tại các kho cảng xăng dầu thuộc Khu kinh tế Dung Quất, hướng tới mục tiêu loại bỏ 85% tổng lượng hydrocarbon dầu mỏ trong thời gian 12 tháng do Ban quản lý khu kinh tế phối hợp với đơn vị nghiên cứu thực hiện.
• Xây dựng và ban hành tài liệu hướng dẫn kỹ thuật về việc sử dụng chế phẩm màng sinh học bản địa trong kế hoạch ứng phó sự cố tràn dầu ven biển trong vòng 18 tháng tới do Cục Kiểm soát ô nhiễm môi trường chỉ đạo ban hành.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Nội dung và kết quả của luận văn mang lại giá trị thực tiễn cao cho 4 nhóm đối tượng chính:

• Kỹ sư và chuyên gia công nghệ môi trường: Tiếp cận thông số vận hành thực nghiệm và quy trình nuôi cấy màng sinh học để ứng dụng trực tiếp vào thiết kế các trạm xử lý nước thải công nghiệp nhiễm dầu đạt quy chuẩn kỹ thuật quốc gia.
• Doanh nghiệp vận tải biển, cảng biển và lọc hóa dầu: Sử dụng nguồn tư liệu khoa học để xây dựng phương án xử lý sự cố tràn dầu tại chỗ bằng giải pháp sinh học thân thiện, giúp tiết kiệm hơn 30% chi phí xử lý so với các hóa chất phân tán truyền thống.
• Học viên cao học và nghiên cứu sinh chuyên ngành Công nghệ Sinh học và Vi sinh vật học: Kế thừa quy trình phân lập, kỹ thuật nhuộm tím tinh thể đo quang OD570 và quy trình PCR nhân đoạn gen 16S rRNA kích thước 1.500 bp phục vụ định danh vi khuẩn.
• Cơ quan quản lý nhà nước về tài nguyên và môi trường: Sử dụng các dẫn chứng thực tế làm cơ sở khoa học để thẩm định báo cáo đánh giá tác động môi trường (ĐTM) và hoàn thiện khung chính sách phục hồi môi trường biển.

Câu hỏi thường gặp

Chủng vi khuẩn Acinetobacter sp. QND10 trong nghiên cứu được phân lập từ đâu?
Chủng được phân lập từ các mẫu đất và nước ô nhiễm dầu tại Khu công nghiệp Dung Quất, tỉnh Quảng Ngãi. Sau 3 chu kỳ làm giàu trên môi trường khoáng Gost bổ sung 1% dầu DO, mẫu được cấy trải ở độ pha loãng 10^-8 đến 10^-10 để thu nhận chủng thuần có hoạt tính mạnh nhất.

Màng sinh học mang lại ưu thế gì vượt trội so với tế bào vi khuẩn sống tự do?
Màng sinh học tạo ra lớp chất nền polyme ngoại bào EPS chiếm từ 3% đến 6% khối lượng giúp bao bọc và bảo vệ tế bào vi khuẩn. Nhờ đó, vi khuẩn có thể tồn tại và phân hủy hiệu quả dầu diesel ở nồng độ cao lên tới 6%, đồng thời chống chịu tốt trước các biến động về pH và nhiệt độ.

Điều kiện môi trường nào là tối ưu cho chủng QND10 tạo màng sinh học?
Khảo nghiệm thực nghiệm chứng minh chủng phát triển màng sinh học tốt nhất ở pH trung tính 7,0 và nhiệt độ từ 30°C đến 37°C sau 48 giờ nuôi cấy. Bổ sung nguồn carbon đường đơn và muối nitơ vô cơ giúp chỉ số mật độ quang OD570 tăng hơn 25%.

Phương pháp nào được sử dụng để định danh chính xác chủng vi khuẩn nghiên cứu?
Đề tài kết hợp quan sát tế bào que ngắn kích thước (0,67-0,73) x (0,93-1,17) µm dưới kính hiển vi điện tử quét 15.000 lần và kỹ thuật sinh học phân tử PCR khuếch đại gen 16S rRNA kích thước 1.500 bp, sau đó giải trình tự Sanger để định danh chính xác thuộc chi Acinetobacter.

Hiệu suất phân hủy dầu diesel của màng sinh học được đánh giá bằng cách nào?
Hiệu suất được kiểm tra qua nuôi cấy tĩnh 20 ml môi trường chứa dải nồng độ DO từ 1% đến 6% trong 5 ngày. Lượng dầu tồn dư được chiết tách 3 lần bằng dung môi chloroform và cân khối lượng chính xác theo tiêu chuẩn quốc gia TCVN 4582-88.

Kết luận

• Phân lập thành công 11 chủng vi khuẩn từ đất và nước ô nhiễm dầu tại Dung Quất - Quảng Ngãi, tuyển chọn được chủng QND10 có khả năng đồng hóa hydrocarbon và tạo màng sinh học tối ưu.
• Định danh chính xác chủng QND10 là trực khuẩn Gram âm thuộc chi Acinetobacter sp. dựa trên giải trình tự gen 16S rRNA kích thước 1.500 bp.
• Xác lập bộ thông số tối ưu cho sự hình thành biofilm tại pH 7,0, nhiệt độ 30°C đến 37°C sau 48 giờ nuôi cấy.
• Chứng minh khả năng phân hủy hiệu quả dầu DO của màng sinh học ở dải nồng độ tải lượng cao từ 1% đến 6% theo tiêu chuẩn TCVN 4582-88.
• Khẳng định tính khả thi của việc ứng dụng màng sinh học vi khuẩn bản địa trong xử lý bền vững ô nhiễm dầu tại các vùng biển và khu công nghiệp ven bờ.

Kế hoạch tiếp theo cần tập trung thử nghiệm mô hình bể lọc sinh học quy mô pilot ngoài hiện trường trong thời gian 12 tháng tới và tối ưu hóa vật liệu giá thể bám dính. Các cơ quan quản lý, doanh nghiệp cảng biển và đơn vị xử lý môi trường hãy chủ động liên hệ và ứng dụng giải pháp màng sinh học Acinetobacter sp. QND10 nhằm nâng cao hiệu quả bảo vệ môi trường biển một cách toàn diện.

Trích đoạn nội dung tài liệu

MỞ ĐẦU Dầu mò là một trong những nhiên liệu quan trọng nhất của xã hội dùng để sản xuất điện và cũng là nhiên liệu cùa tất câ các phương tiện giao thông cũng như nhiên liệu trong đời sống hàng ngày của con người. Dầu mỏ đóng vai trò quan trọng hàng đầu trong nền kinh tế toàn cầu. Nó tác động tới sự phát triền nền kinh tế của mọi quốc gia trên Thế giới và hầu như mọi ngành công nghiệp đều phụ thuộc rất lớn vào nguồn tài nguyên quý giá này. Từ nguồn tính toán, trữ lượng dầu mỏ thế giới nàm trong khoảng từ 1.148 tỉ thùng đến 1.

Dự kiến nguồn năng lượng trên thế giới từ dầu mỏ có thê lên tới 80% vào giai đoạn 2016-2017. Nhưng sự “cung không đú cầu” do các quốc gia có nguồn dầu mỏ là quá ít so với nhu cầu sừ dụng của hàng trăm quốc gia trên thế giới. Do đó việc khai thác và vận chuyến dầu ngày càng được đấy mạnh. Cùng với sự phát triển cùa việc khai thác, chế biến và vận chuyến dầu, một trong những vấn đề đang được quan tâm hiện nay là tinh trạng ô nhiễm môi trường của các chất thài (các hydrocarbon) có trong dầu.

Các hiện tượng tràn dầu, rò rỉ dầu gây tình trạng ô nhiễm nghiêm trọng cho môi trường như: hủy hoại hệ sinh thái động thực vật, gây ánh hưởng trục tiếp đến cuộc sống con người, v. Phương pháp phân hủy sinh học sử dụng các tác nhân sinh học như vi sinh vật và các chat có hoạt tính sinh học do vi sinh vật sàn sinh ra đã được sừ dụng kết hợp cùng với các phương pháp vật lý, hóa học để xứ lý nước nhiễm dầu và đã cho kết quá khả quan. Gan đây, các nhà khoa học đã đưa ra phương pháp sừ dụng màng sinh học (Biofilm) đế xứ lý các hợp chất hữu cơ khó phân húy trong nước bị ô nhiễm dầu. Màng sinh học là tập hợp các nhóm vi sinh vật trong đó các tế bào vi sinh vật được gắn chung vào trong chat nền polymer có thành phần chủ yếu là polysaccharide và protein do chúng tạo ra.

Chính đặc điếm này giúp các tế bào vi sinh vật chống chịu được với các điều kiện khắc nghiệt của môi trường như: sự suy giảm nguồn dinh dưỡng và các yếu tố vật lý môi trường thay đối (sự thay đối về pH, nhiệt độ, sự thấm thấu hay sự mất nước của tế bào, v.) từ đó làm tăng hiệu suất phân hủy các hợp chất ô nhiễm khi xừ lý ngoài hiện trường. Xuất phát từ thực tiễn đó, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu khả năng phân hủy dầu diesel của màng sinh học do chủng vi khuẩn tạo thành được phân lập từ mẫu đất và mẫu nưóc ô nhiễm dầu tại tỉnh Quãng Ngãi”. Mục tiêu đề tài: Phân lập và tuyển chọn được chủng vi khuẩn có khá năng phân hủy dầu diesel và có khâ năng tạo màng tốt nhất từ các chùng vi khuấn phân lập được tại các mầu đất và mầu nước ô nhiễm dầu thu thập được tại tinh Quàng Ngãi. Nội dung nghiên cứu: - Làm giàu và phân lập các chủng vi khuấn có khả năng sử dụng dầu diesel.

- Khảo sát khá năng sứ dụng dau diesel của các chùng vi khuẩn phân lập được. - Đánh giá khá năng tạo màng sinh học (biofilm) của các chúng vi khuân phân lập được. - Nghiên cứu một số đặc diêm sinh học của chùng vi khuẩn sử dụng dầu diesel và tạo màng tốt nhất từ các chủng vi khuân đã phân lập được.