Luận văn thạc sĩ hóa hữu cơ khảo sát thành phần hóa học cao n hexane ethyl acetate lá cây trâm bầu combretum quadrangulare kurz

Khảo sát thành phần hóa học cao n-hexane và ethyl acetate từ lá cây trâm bầu Combretum quadrangulare Kurz trong luận văn thạc sĩ hóa hữu cơ.

• Tác giả: Đào Thị Bích Ngọc
• Người hướng dẫn: TS. Dương Thúc Huy
• Trường học: Trường Đại Học Sư Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Hóa Hữu Cơ
• Đề tài: Khảo Sát Thành Phần Hóa Học Cao n-Hexane và Ethyl Acetate Từ Lá Cây Trâm Bau
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2021
• Địa điểm: Thành Phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• 1. CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU
• 1.1. Mô tả về cây Trâm bầu (Combretum quadrangulare Kurz)
• 1.2. Giới thiệu chung về cây Combretum quadrangulare Kurz
• 1.3. Mô tả thực vật cây Combretum quadrangulare Kurz
• 1.4. Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của cây Combretum quadrangulare Kurz
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN — KIẾN NGHỊ
• PHỤ LỤC
• Phụ lục 1. Phổ 1H-NMR của TBI trong Acetone
• Phụ lục 2. Phổ 13C-NMR của TBI trong Acetone
• Phụ lục 3. Phổ 1H-NMR của TB2 trong Acetone
• Phụ lục 4. Phổ 13C-NMR của TB2 trong Acetone
• Phụ lục 5. Phổ HMBC của TB2 trong Acetone
• Phụ lục 6. Phổ 1H-NMR của TB3 trong Acetone
• Phụ lục 7. Phổ 13C-NMR của TB3 trong Acetone
• Phụ lục 8. Phổ 1H-NMR của TB4 trong Acetone
• Phụ lục 9. Phổ 13C-NMR của TB4 trong Acetone
• Phụ lục 10. Phổ 1H-NMR của TBS trong Acetone
• Phụ lục 11. Phổ 13C-NMR của TBS trong Acetone
• Phụ lục 12. Phổ 1H-NMR của TB6 trong Acetone
• Phụ lục 13. Phổ 13C-NMR của TB6 trong Acetone
• Phụ lục 14. Phổ 1H-NMR của TB7 trong Acetone
• Phụ lục 15. Phổ 13C-NMR của TB7 trong Acetone
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Thành Phần Hóa Học Lá Cây Trâm Bau Có Gì

Cây Trâm Bau (Combretum quadrangulare Kurz) là một loại cây phổ biến ở Đông Nam Á, đặc biệt là các tỉnh miền nam Việt Nam. Lá cây Trâm Bau từ lâu đã được sử dụng trong y học cổ truyền với nhiều công dụng tiềm năng. Nghiên cứu hiện đại tập trung vào việc khám phá thành phần hóa học lá cây Trâm Bau để giải mã các hoạt tính sinh học của nó. Các hợp chất được chiết xuất, đặc biệt là cao n-Hexane và cao Ethyl Acetate, đang được phân tích sâu rộng. Việc xác định các hợp chất trong lá cây Trâm Bau có thể mở ra những ứng dụng mới trong y học và dược phẩm. Bài viết này đi sâu vào các thành phần hóa học chính được tìm thấy trong chiết xuất lá cây Trâm Bau, đặc biệt là phân đoạn n-Hexane và Ethyl Acetate.

1.1. Giá trị y học cổ truyền của cây Trâm Bau

Cây Trâm Bau từ lâu đã được sử dụng trong y học cổ truyền Việt Nam và các nước Đông Nam Á khác để điều trị nhiều bệnh. Người dân thường dùng lá, vỏ cây và rễ để làm thuốc. Các bài thuốc từ cây Trâm Bau được cho là có tác dụng kháng viêm, kháng khuẩn và giảm đau. Nghiên cứu hiện đại đang cố gắng chứng minh và giải thích cơ chế tác dụng của những bài thuốc này thông qua việc phân tích thành phần hóa học thực vật. Cây mang lại những ứng dụng y học quý giá trên thế giới nói chung và tại Việt Nam nói riêng.

1.2. Mục tiêu nghiên cứu thành phần hóa học lá Trâm Bau

Mục tiêu chính của các nghiên cứu về thành phần hóa học lá cây Trâm Bau là cô lập và xác định các hợp chất có hoạt tính sinh học. Các nhà khoa học sử dụng các phương pháp chiết xuất khác nhau, bao gồm sử dụng n-Hexane và Ethyl Acetate, để phân tách các hợp chất từ lá cây. Sau đó, các hợp chất được xác định bằng các kỹ thuật phân tích hiện đại như sắc ký khí khối phổ (GC-MS) và sắc ký lớp mỏng (TLC). Việc xác định các hợp chất này sẽ giúp hiểu rõ hơn về tác dụng dược lý của lá cây Trâm Bau.

II. Chiết Xuất Cao N Hexane Ethyl Acetate Lá Trâm Bau Cách Nào

Việc chiết xuất cao n-Hexane và cao Ethyl Acetate từ lá cây Trâm Bau là một bước quan trọng để phân tích thành phần hóa học của nó. Quá trình này thường bắt đầu bằng việc nghiền nhỏ lá cây khô. Sau đó, lá cây được ngâm trong dung môi, thường là methanol. Dịch chiết methanol sau đó được phân đoạn bằng các dung môi khác nhau, bao gồm n-Hexane và Ethyl Acetate. Mỗi phân đoạn này chứa một tập hợp các hợp chất khác nhau, cho phép các nhà khoa học tập trung vào các nhóm hợp chất cụ thể. TS. Dương Thúc Huy, người hướng dẫn luận văn, đã có nhiều đóng góp vào việc tối ưu hóa kỹ thuật chiết xuất cao thực vật trong nghiên cứu này.

2.1. Vai trò của dung môi N Hexane trong chiết xuất

N-Hexane là một dung môi không phân cực, có khả năng hòa tan các hợp chất không phân cực như lipid, carotenoid và một số triterpenoid. Việc sử dụng n-Hexane giúp loại bỏ các hợp chất này khỏi lá cây, tạo điều kiện thuận lợi cho việc phân tích các hợp chất phân cực hơn. Phân đoạn cao n-Hexane thường chứa các hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn và chống oxy hóa. Độ tinh khiết n-Hexane ảnh hưởng lớn đến hiệu quả chiết xuất.

2.2. Vai trò của dung môi Ethyl Acetate trong chiết xuất

Ethyl Acetate là một dung môi phân cực trung bình, có khả năng hòa tan các hợp chất phân cực hơn so với n-Hexane, như flavonoid, alkaloid và saponin. Phân đoạn cao Ethyl Acetate thường chứa các hợp chất có hoạt tính chống viêm và chống ung thư. Việc sử dụng Ethyl Acetate giúp chiết xuất các hợp chất này từ lá cây, mở ra cơ hội nghiên cứu ứng dụng của cao Ethyl Acetate Trâm Bau. Tỉ lệ pha trộn n-Hexane: Ethyl Acetate cũng được sử dụng (ví dụ, 50:50) để chiết xuất các hợp chất có độ phân cực trung gian.

2.3. Quy trình cô lập hợp chất từ cao n hexane ethyl acetate

Sau khi có được cao phân đoạn n-hexane: ethyl acetate, quy trình cô lập các hợp chất bao gồm nhiều bước sắc ký khác nhau. Sơ đồ 2 trong tài liệu gốc mô tả chi tiết quy trình này. Các phương pháp sắc ký sử dụng silica gel pha thường, pha đảo, cột Sephadex LH-20 cùng với các dung môi thông thường trong phòng thí nghiệm như n-hexane, chloroform, ethyl acetate, acetone, methanol, nước. Mục tiêu là tách các hợp chất thành các phân đoạn tinh khiết hơn để phân tích cấu trúc.

III. Phân Tích Hóa Học Định Danh Hợp Chất Trong Lá Cây Trâm Bau

Sau khi chiết xuất và phân đoạn, các hợp chất trong cao n-Hexane và cao Ethyl Acetate được định danh bằng các phương pháp phân tích hóa học hiện đại. Các kỹ thuật phổ biến bao gồm sắc ký khí khối phổ (GC-MS), sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR). Phân tích hóa học thực vật này giúp xác định cấu trúc và hàm lượng của các hợp chất có trong lá cây. Thông tin này rất quan trọng để hiểu rõ hơn về hoạt tính sinh học của lá cây Trâm Bau.

3.1. Sắc ký khí khối phổ GC MS Nguyên tắc và ứng dụng

Sắc ký khí khối phổ (GC-MS) là một kỹ thuật phân tích mạnh mẽ được sử dụng để xác định các hợp chất bay hơi. Trong GC-MS, các hợp chất được tách ra dựa trên điểm sôi của chúng và sau đó được phát hiện bằng khối phổ kế. Khối phổ kế cung cấp thông tin về khối lượng phân tử và cấu trúc của các hợp chất, cho phép các nhà khoa học xác định chúng một cách chính xác. Dữ liệu GC-MS giúp định danh các thành phần chính trong cao n-Hexane và cao Ethyl Acetate.

3.2. Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR Xác định cấu trúc phân tử

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) là một kỹ thuật phân tích mạnh mẽ khác được sử dụng để xác định cấu trúc của các hợp chất hữu cơ. NMR dựa trên tương tác giữa hạt nhân nguyên tử và từ trường. Bằng cách phân tích các tín hiệu NMR, các nhà khoa học có thể xác định số lượng và vị trí của các nguyên tử khác nhau trong một phân tử. Dữ liệu NMR rất quan trọng để xác định cấu trúc của các hợp chất mới được cô lập từ lá cây Trâm Bau. Nghiên cứu sử dụng các phương pháp phổ nghiệm hiện đại (1D, 2D- NMR …) để dự đoán cấu trúc của các hợp chất cô lập.

3.3. Xác định cấu trúc hợp chất TB1 TB2 TB3 ... TB7

Luận văn của Đào Thị Bích Ngọc đã khảo sát cấu trúc của nhiều hợp chất, từ TB1 đến TB7, bằng các phương pháp phổ nghiệm. Các hình ảnh về cấu trúc hóa học của các hợp chất này, cũng như các hợp chất so sánh, được trình bày chi tiết trong tài liệu gốc. Ví dụ, hình 3 cho thấy cấu trúc hóa học của TB6 và các hợp chất so sánh. Bảng so sánh dữ liệu phổ 1H-NMR và 13C-NMR cũng được sử dụng để xác định cấu trúc.

IV. Ứng Dụng Dược Lý Hoạt Tính Sinh Học Lá Cây Trâm Bau Như Thế Nào

Sau khi xác định thành phần hóa học, bước tiếp theo là nghiên cứu hoạt tính sinh học của lá cây Trâm Bau. Các nghiên cứu in vitro và in vivo được thực hiện để đánh giá tiềm năng dược lý của các hợp chất được cô lập. Các hoạt tính sinh học được nghiên cứu bao gồm kháng khuẩn, chống viêm, chống oxy hóa và chống ung thư. Việc xác định tác dụng dược lý của lá cây Trâm Bau có thể dẫn đến việc phát triển các loại thuốc mới và các sản phẩm chăm sóc sức khỏe tự nhiên.

4.1. Hoạt tính ức chế enzyme alpha glucosidase

Một trong những hoạt tính sinh học được nghiên cứu trong luận văn là khả năng ức chế enzyme alpha-glucosidase. Enzyme alpha-glucosidase đóng vai trò quan trọng trong quá trình tiêu hóa carbohydrate. Ức chế enzyme này có thể giúp kiểm soát lượng đường trong máu, làm cho nó trở thành một mục tiêu tiềm năng cho việc điều trị bệnh tiểu đường. Bảng 2 trong tài liệu gốc trình bày giá trị IC50 của các cao phân đoạn đối với enzyme alpha-glucosidase.

4.2. Khả năng kháng khuẩn và chống oxy hóa của lá Trâm Bau

Nghiên cứu cho thấy lá cây Trâm Bau có khả năng kháng khuẩn đối với một số loại vi khuẩn gây bệnh. Các hợp chất phenolic và flavonoid trong lá cây có thể góp phần vào hoạt tính kháng khuẩn này. Ngoài ra, lá cây Trâm Bau cũng có hoạt tính chống oxy hóa, giúp bảo vệ tế bào khỏi tổn thương do các gốc tự do. Hoạt tính này có thể liên quan đến sự hiện diện của các hợp chất flavonoid và terpenoid.

4.3. Tiềm năng chống ung thư của chiết xuất từ lá cây Trâm Bau

Một số nghiên cứu đã chỉ ra rằng chiết xuất từ lá cây Trâm Bau có thể có tiềm năng chống ung thư. Các hợp chất trong lá cây có thể ức chế sự phát triển của tế bào ung thư và gây ra quá trình chết tế bào theo chương trình (apoptosis). Tuy nhiên, cần có thêm nhiều nghiên cứu để xác định các hợp chất chịu trách nhiệm cho hoạt tính chống ung thư và để đánh giá hiệu quả của chúng trong các mô hình in vivo.

V. Kết Luận Hướng Phát Triển Nghiên Cứu Lá Trâm Bau Tới Đâu

Nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của lá cây Trâm Bau đã đạt được những tiến bộ đáng kể. Việc xác định các hợp chất trong cao n-Hexane và cao Ethyl Acetate đã cung cấp những hiểu biết sâu sắc hơn về tiềm năng dược lý của cây này. Tuy nhiên, vẫn còn nhiều lĩnh vực cần được khám phá thêm. Các nghiên cứu trong tương lai nên tập trung vào việc đánh giá hiệu quả của các hợp chất cô lập trong các mô hình in vivo và tiến hành các thử nghiệm lâm sàng để đánh giá tính an toàn và hiệu quả của chúng ở người. Ngoài ra, cần có thêm nghiên cứu để xác định các cơ chế tác dụng của các hợp chất này và để phát triển các phương pháp chiết xuất và tinh chế hiệu quả hơn.

5.1. Đánh giá toàn diện hoạt tính sinh học in vivo

Nhiều nghiên cứu hiện tại chủ yếu tập trung vào các thử nghiệm in vitro. Bước tiếp theo quan trọng là đánh giá hoạt tính sinh học của các hợp chất cô lập trong các mô hình in vivo. Điều này sẽ giúp xác định hiệu quả của chúng trong một môi trường sinh học phức tạp hơn và cung cấp thông tin về dược động học và dược lực học của chúng.

5.2. Nghiên cứu cơ chế tác dụng ở cấp độ phân tử

Để hiểu rõ hơn về tác dụng dược lý của lá cây Trâm Bau, cần có các nghiên cứu để xác định cơ chế tác dụng của các hợp chất cô lập ở cấp độ phân tử. Điều này sẽ giúp xác định các mục tiêu phân tử mà các hợp chất này tác động vào và cung cấp thông tin về các con đường tín hiệu mà chúng tham gia vào.

5.3. Phát triển phương pháp chiết xuất và tinh chế hiệu quả hơn

Việc phát triển các phương pháp chiết xuất và tinh chế hiệu quả hơn sẽ giúp tăng năng suất của các hợp chất mong muốn và giảm chi phí sản xuất. Các phương pháp mới như chiết xuất bằng chất lỏng siêu tới hạn và sắc ký lỏng hiệu năng siêu cao có thể được sử dụng để cải thiện hiệu quả của quá trình chiết xuất và tinh chế.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Cây Trâm bầu (Combretum quadrangulare Kurz) là một loài thực vật phổ biến tại các tỉnh miền Nam Việt Nam và nhiều nước Đông Nam Á, được biết đến với nhiều ứng dụng y học truyền thống. Theo ước tính, cây này chứa hơn 100 hợp chất triterpene và flavonoid có hoạt tính sinh học đa dạng như kháng khuẩn, chống ung thư, bảo vệ gan và điều trị đái tháo đường. Nghiên cứu này tập trung khảo sát thành phần hóa học của cao phân đoạn n-hexane: ethyl acetate chiết xuất từ lá cây Trâm bầu thu hái tại huyện Đức Hòa, tỉnh Long An vào tháng 4 năm 2020. Mục tiêu chính là cô lập, xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất trong cao phân đoạn này và đánh giá hoạt tính ức chế enzyme alpha-glucosidase, một chỉ số quan trọng trong điều trị đái tháo đường. Nghiên cứu có ý nghĩa thiết thực trong việc làm phong phú kho tàng y học cổ truyền Việt Nam, đồng thời mở ra hướng phát triển các sản phẩm dược liệu từ nguồn nguyên liệu tự nhiên, góp phần nâng cao sức khỏe cộng đồng. Thời gian nghiên cứu được thực hiện trong năm 2020-2021 tại Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên các lý thuyết và mô hình sau:

• Lý thuyết flavonoid và triterpene trong dược liệu: Flavonoid và triterpene là hai nhóm hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học đa dạng, bao gồm kháng viêm, kháng khuẩn, chống oxy hóa và ức chế enzyme liên quan đến bệnh lý như alpha-glucosidase.
• Mô hình phân tích cấu trúc bằng phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): Sử dụng phổ 1D và 2D NMR (¹H-NMR, ¹³C-NMR, HMBC) để xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất cô lập.
• Khái niệm enzyme alpha-glucosidase và vai trò trong điều trị đái tháo đường: Enzyme này tham gia vào quá trình phân giải carbohydrate, ức chế enzyme giúp kiểm soát đường huyết hiệu quả.
• Phương pháp sắc ký phân đoạn và sắc ký cột: Kỹ thuật tách chiết và tinh chế các hợp chất từ cao chiết thô dựa trên tính chất hóa lý của các hợp chất.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Lá cây Trâm bầu được thu hái tại huyện Đức Hòa, tỉnh Long An, phơi khô tự nhiên, sau đó ngâm chiết bằng methanol. Cao methanol thô được chiết lỏng-lỏng với các dung môi n-hexane, n-hexane: ethyl acetate (1:1), ethyl acetate và methanol để thu các cao phân đoạn.
• Phương pháp phân tích: Sử dụng sắc ký lớp mỏng (SKLM), sắc ký cột silica gel pha thường và pha đảo, sắc ký lọc gel Sephadex LH-20 để phân đoạn và tinh chế các hợp chất. Cấu trúc các hợp chất được xác định bằng phổ ¹H-NMR, ¹³C-NMR và HMBC trên máy Bruker Avance III (500 MHz cho ¹H-NMR, 125 MHz cho ¹³C-NMR).
• Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học: Hoạt tính ức chế enzyme alpha-glucosidase được đo bằng phương pháp quang phổ hấp thụ ở bước sóng 405 nm, theo phương pháp thích nghi từ Ramadhan, với năm nồng độ khác nhau để xác định giá trị IC₅₀.
• Cỡ mẫu và timeline: Tổng cộng 11 kg lá khô được sử dụng để chiết xuất cao methanol thô, từ đó thu được 160.3 g cao phân đoạn n-hexane: ethyl acetate (HEA). Nghiên cứu được tiến hành trong khoảng thời gian từ tháng 4/2020 đến tháng 11/2021.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Cô lập thành công 7 hợp chất flavone từ cao phân đoạn HEA: Bao gồm các hợp chất TB1 đến TB7 với khối lượng thu được từ 2.1 mg đến 74 mg. Các hợp chất này được xác định cấu trúc bằng phổ NMR, trong đó TB1 là ayanin, TB2 là mearnsetin, TB3 là 5-hydroxy-3,7,4'-trimethoxyflavone, TB4 là myricetin 3,7,3',5'-tetramethyl ether, TBS là luteolin, TB6 là isokaempferide.
2. Hoạt tính ức chế enzyme alpha-glucosidase của cao phân đoạn HEA rất mạnh: Giá trị IC₅₀ của cao HEA là 0.85 µg/mL, thấp hơn nhiều so với các cao phân đoạn methanol thô (4.0 µg/mL) và ethyl acetate (4.6 µg/mL), cho thấy cao HEA có tiềm năng ứng dụng trong kiểm soát đường huyết.
3. Cấu trúc hóa học các hợp chất flavone có sự đa dạng về nhóm thế methoxy và hydroxy: Điều này ảnh hưởng đến hoạt tính sinh học, ví dụ TB1 (ayanin) có ba nhóm methoxy, trong khi TBS (luteolin) có các nhóm hydroxy, tương ứng với các mức độ ức chế enzyme khác nhau.
4. So sánh dữ liệu phổ NMR với các hợp chất chuẩn cho thấy sự tương đồng cao: Điều này khẳng định độ chính xác trong việc xác định cấu trúc các hợp chất cô lập, đồng thời bổ sung thêm dữ liệu cho danh mục hợp chất của cây Trâm bầu.

Thảo luận kết quả

Các hợp chất flavone cô lập từ cao phân đoạn HEA của lá Trâm bầu có cấu trúc đặc trưng với các nhóm thế methoxy và hydroxy, góp phần vào hoạt tính ức chế enzyme alpha-glucosidase. Giá trị IC₅₀ thấp của cao HEA so với các phân đoạn khác cho thấy sự ưu việt trong việc chiết xuất các hợp chất hoạt tính từ hỗn hợp n-hexane: ethyl acetate. Kết quả này phù hợp với các nghiên cứu trước đây về hoạt tính sinh học của flavonoid trong việc kiểm soát đường huyết và hỗ trợ điều trị đái tháo đường. Dữ liệu phổ NMR chi tiết giúp xác định chính xác cấu trúc các hợp chất, tạo cơ sở cho các nghiên cứu sâu hơn về cơ chế tác động sinh học. Biểu đồ so sánh IC₅₀ giữa các cao phân đoạn và bảng tổng hợp dữ liệu phổ NMR sẽ minh họa rõ nét hiệu quả và đặc điểm cấu trúc của các hợp chất. Nghiên cứu góp phần làm phong phú thêm kho tàng dược liệu Việt Nam, đồng thời mở ra hướng phát triển các sản phẩm dược liệu có nguồn gốc tự nhiên, an toàn và hiệu quả.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Phát triển quy trình chiết xuất và tinh chế cao phân đoạn n-hexane: ethyl acetate quy mô lớn nhằm tối ưu hóa thu hồi các hợp chất flavone có hoạt tính sinh học, nâng cao hiệu quả sản xuất dược liệu trong vòng 2 năm, do các viện nghiên cứu và doanh nghiệp dược liệu thực hiện.
2. Nghiên cứu sâu về cơ chế tác động sinh học của các hợp chất flavone cô lập trên enzyme alpha-glucosidase và các mục tiêu liên quan đến đái tháo đường, nhằm phát triển thuốc điều trị mới trong vòng 3 năm, do các trung tâm nghiên cứu dược học đảm nhiệm.
3. Thử nghiệm tiền lâm sàng và lâm sàng các sản phẩm chiết xuất từ cây Trâm bầu để đánh giá tính an toàn và hiệu quả điều trị, hướng tới ứng dụng trong y học hiện đại, dự kiến thực hiện trong 5 năm, phối hợp giữa các bệnh viện và viện nghiên cứu.
4. Xây dựng cơ sở dữ liệu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của các hợp chất từ cây Trâm bầu để hỗ trợ công tác nghiên cứu và phát triển sản phẩm, cập nhật thường xuyên trong vòng 1 năm, do các trường đại học và viện nghiên cứu thực hiện.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Nhà nghiên cứu dược liệu và hóa hữu cơ: Có thể sử dụng dữ liệu cấu trúc và hoạt tính sinh học các hợp chất flavone để phát triển các nghiên cứu tiếp theo về dược tính và cơ chế tác động.
2. Doanh nghiệp sản xuất dược phẩm và thực phẩm chức năng: Tham khảo quy trình chiết xuất và tinh chế cao phân đoạn để ứng dụng trong sản xuất các sản phẩm hỗ trợ điều trị đái tháo đường và các bệnh liên quan.
3. Giảng viên và sinh viên ngành Hóa học, Dược học: Sử dụng luận văn làm tài liệu tham khảo về phương pháp phân tích cấu trúc bằng phổ NMR và kỹ thuật sắc ký trong nghiên cứu dược liệu.
4. Cơ quan quản lý và phát triển nguồn dược liệu: Tham khảo để xây dựng chính sách bảo tồn và phát triển nguồn nguyên liệu tự nhiên có giá trị y học, đồng thời thúc đẩy nghiên cứu ứng dụng.

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao chọn cao phân đoạn n-hexane: ethyl acetate để nghiên cứu?
   Cao phân đoạn này có hoạt tính ức chế enzyme alpha-glucosidase mạnh nhất với IC₅₀ là 0.85 µg/mL, vượt trội so với các phân đoạn khác, nên được ưu tiên để cô lập các hợp chất hoạt tính.

2. Phương pháp xác định cấu trúc các hợp chất được sử dụng là gì?
   Sử dụng phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1D và 2D (¹H-NMR, ¹³C-NMR, HMBC) trên máy Bruker Avance III, giúp xác định chính xác cấu trúc hóa học của các hợp chất flavone.

3. Hoạt tính ức chế enzyme alpha-glucosidase có ý nghĩa gì trong điều trị bệnh?
   Việc ức chế enzyme này giúp làm chậm quá trình phân giải carbohydrate, kiểm soát đường huyết hiệu quả, hỗ trợ điều trị đái tháo đường type 2.

4. Các hợp chất flavone cô lập có thể ứng dụng như thế nào trong thực tế?
   Các hợp chất này có thể được phát triển thành nguyên liệu cho thuốc hoặc thực phẩm chức năng hỗ trợ kiểm soát đường huyết và các bệnh liên quan.

5. Nghiên cứu có đề xuất hướng phát triển sản phẩm nào không?
   Có, nghiên cứu đề xuất phát triển quy trình chiết xuất quy mô lớn, nghiên cứu cơ chế tác động, thử nghiệm tiền lâm sàng và lâm sàng để ứng dụng trong y học hiện đại.

Kết luận

• Cô lập thành công 7 hợp chất flavone từ cao phân đoạn n-hexane: ethyl acetate lá cây Trâm bầu, xác định cấu trúc bằng phổ NMR hiện đại.
• Cao phân đoạn HEA có hoạt tính ức chế enzyme alpha-glucosidase mạnh với IC₅₀ là 0.85 µg/mL, tiềm năng ứng dụng trong điều trị đái tháo đường.
• Các hợp chất flavone đa dạng về nhóm thế methoxy và hydroxy, ảnh hưởng đến hoạt tính sinh học.
• Nghiên cứu góp phần làm phong phú kho tàng dược liệu Việt Nam và mở hướng phát triển sản phẩm dược liệu tự nhiên.
• Đề xuất phát triển quy trình chiết xuất, nghiên cứu cơ chế tác động và thử nghiệm lâm sàng trong giai đoạn tiếp theo.

Hãy tiếp tục khai thác tiềm năng của cây Trâm bầu để phát triển các sản phẩm dược liệu an toàn, hiệu quả, góp phần nâng cao sức khỏe cộng đồng và phát triển y học cổ truyền Việt Nam.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Chương 1.:Giớiithiệu Chỉ CöHIDTGHTitiiicciieoiiiiiiiiiitiiiA51135112611641182318251585519531866558355518551858558 3 1. Mô tả về cây Trâm bau (Combretum qualrangulare Kurz). Giới thiệu chung về cây Combretum qualrangulare Kurz. Mô tả thực vật cây Combretum qualrangulare Kufz.3, Nghiên cứu thành phan hóa học và hoạt tinh sinh học cua cây Combretum quadrangutlqre KUTZ.

SH HH nh nh Hành HH TH ng ngư 5 K51 Wiican plain Oa RĐ Ea aiaanaaiaoaeaiaoaaoaeaoeaerneoi 5 WiC Dan UN sss cscsscscsncasicssncasonasscasacseasadsnessncaasnaasesesisasnesaiatunsaaseensssusiacsness 13 IL3.IDUq@oiHHĂiciiccceeeiiiesiiioeieoiiiiiiiaiitiasii241123116311653853396336533555853863353819635363536258 14 Rane Bs TM NGHI ẽSEẽẼẽẼ 5e. Hoá chat, dung cụ. phương pháp tiến hành. 2-56 55sc2secce 17 UO) |DA IENHIS.

Phương pháp tiễn hành. Thử nghiệm hoạt tinh ức chế enzyme alpha-glucosidase. Quy trình cô lập các hợp chất từ cao n-hexane: ethyl acetat€. Điều chế cao phân đoạn n-hexane: ethyl acetate .Quy:trình CÔ ÍẬD::‹coccosooieiioiiiisiosiiiaiistiiAS12601621362515335883855615835558585555558368 19 iv Chương 3.

KET QUA VA THẢO LUAN. Khao sAt CAU tre na ẽ ẽ. Khảo sát cầu trúc hợp chất TI. Khảo sát cau trúc hợp chất 'T.

Khao sắt cầu trúc hợp chất TBS. Khảo sát cầu trúc hợp chất TBA. Khảo sát cầu trúc hợp chất TBã. Khảo sát cầu trúc hợp chất 'TB6.

Khảo sát cau trúc hợp chat TB7. 39 3:2: E1000/t0HH/S10HHỢC((::42:4220112212122122124101222112114211122312113151196111333151113214521115111611122315)3 Chương 4. KET LUẬN — KIÊN NGHỊ,. 222222 22SC2c2C22E222272212222 222 Do KQt ôn.

TÀI LIỆU THAM KHẢO. 53 DANH MỤC CHU VIET TAT VA Ki HIỆU Ac Acetone. AcOH Acetic acid. br Broad, mũi rộng.

tẦC-NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance. EA Ethyl acetate. EDs Liều lượng hiệu quả trung bình. 'H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance.

HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence. ICsa Half Maximal Inhibitory Concentration. J Hang sé ghép cap. NMR Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy.

UV Ultra Violet. SKC Sắc kí cột, SKLM Sắc kí lớp mỏng. vì DANH MỤC CÁC BANG Bang 2. Giá trị IC50 của các cao phân đoạn đối với enzyme alpha- EÌIGGSIUSE: ¿::t2i:1622102112142041161102428251595313453835894338653698356833943814339435ã53534838985 20 Bang 3.

So sánh dữ liệu phô 1H-NMR của hợp chất TB1 và các hợp chất. So sánh dữ liệu phé 13C-NMR cúa hợp chất TBI và các hợp chất. So sánh dữ liệu phổ 1H và 13C-NMR của hợp chất TB2 và TTICATDS€UTN,. ng HH ngàn TH nh cv kt 29 Bang 3.

So sánh dữ liệu phô 1H và 13C-NMR của hop chất TB3 và 5- Hydroxy-3,7,4'-trimethox yflavone. «nen xe 31 Bang 3. So sánh dit liệu phô IH và 13C-NMR của hợp chất TB4 và myricetin 3,7,3”,5S'-tetramethyl etÏierr.- - -- 5< se ieeeeeeseeee 33 Bang 3. So sánh dữ liệu phỏ 1H và 13C-NMR của hợp chất TBS và luteolin.

So sánh dữ liệu phé [H-NMR của hợp chat TB6 và các hợp chất. So sánh dit liệu phô 13C-NMR của hợp chất TB6 và các hợp chat. So sánh dit liệu phỏ 1H-NMR của hợp chất TB7 và các hợp chất. So sánh dữ liệu phô 13C-NMR của hợp chất TB7 và các hợp chat.

42 vH DANH MỤC HÌNH ANH Hình 1. Hoa và lá cây Trâm bâu. Một số hợp chat đã được cô lập từ cây Trâm bầu. Một số hợp chat đã được cô lập từ cây Trâm bau (tiếp theo).

Một số hợp chat đã được cô lập từ cây Trâm bau (tiếp theo). Một số hợp chat đã được cô lập từ cây Trâm bau (tiếp theo). Một số hợp chat đã được cô lập từ cây Trâm bau (tiếp theo). Cau trúc hoá học của bảy hop chất đã cô lập.

Cau trúc hoá học của các hợp chat so sánh với hợp chất TB1. Cấu trúc hoá học của hợp chất TB1. Cau trie hod hoe 0 uy. Tương quan HMBC của hợp chất TB2.

Cau trúc hoá học của TIB3. 2 22©22z2EE2SEE22 3E EE22xeExecxsrrserrcei 31 Hình 3. Cấu trúc hoá học của TB4. Cau trúc hoá học của TBS và luteolin.--2--2 222 ©sz+2zz+zzz+csez 34 Hình 3.

Cau trúc hoá học của TB6 và các hợp chất so sánh. Cau trúc hoá học của các hợp chất so sánh với hợp chất TB7. 40 vill DANH MUC SO DO Sơ đồ 2. Quá trình cô lập các chất trong cao HEA .csssesssesseesseesseesseeeveeeneeens 21 1X DANH MỤC PHỤ LỤC Phụ lục 1.

Phô 'H-NMR của TBI trong Acetone-#¿. PLI Phụ lục 2. Phố “C-NMR của TBI trong Acetone-ds „ PL2 Phụ lục 3. Phỏ 'H-NMR của TB2 trong Acetone-đ¿.PL3 Phụ lục 4.

Phô “C-NMR của TB2 trong Acetone-d,. PL4 Phụ lục 5. Pho HMBC của TB2 trong Acetone-ds .PL5 Phu lục 6. Pho 'H-NMR của TB3 trong Acetone-ds.

PL6 Phụ lục 7. Pho "C-NMR của TB3 trong Acetone-ds PL? Phụ lục 8. Pho 'H-NMR của TB4 trong Acetone-#¿. PL8 Phụ lục 9.

Pho C-NMR của TB4 trong Acetone-ds „.PL9 Phụ lục 10. Phỏ 'H-NMR của TBS trong Acetone-ds .PLI0 Phụ lục 11. Phô “C-NMR của TBS trong Acetone-đ¿. PLII Phụ lục 12.

Phô ‘H-NMR của TB6 trong Acetone-ds PLI2 Phụ lục 13. Phô C-NMR của TB6 trong Acetone-ds PLI3 Phụ lục 14. Phô 'H-NMR của TB7 trong Acetone-ds PL14 Phu lục 15. Phô “C-NMR của TB7 trong Acetone-đ¿.PLIS DANH MỤC CÔNG BÓ Thi-Bich-Ngoc Dao, Truong-Minh-Tri Nguyen, Van-Quy Nguyen, Nguyen-Minh- An Tran, Chuong-Hoang Nguyen, Thi-Hoai-Thu Nguyen, Huu-Hung Nguyen, Jirapast Sichaem, Cong- Luan Tran, Thuc-Huy Duong, “Flavones from Cømbretiun quadrangulare growing in Vietnam and their alpha-glucosidase inhibitory activity,” Molecules, vol, 26, no.

Lí do chọn đề tài Các bài thuốc cô truyền được bào chế từ thảo được thiên nhiên có tác dụng hữu hiệu trong việc phòng, trị bệnh. Từ ngàn xưa, người Việt cô đã biết khai thác các loài cây có giá trị dược học trong tự nhiên như một loài thuốc chữa bệnh. Tác dụng của các thảo được này chủ yếu là do các hợp chất tự nhiên có sẵn trong cây và cũng ít gây ra các tác dụng không mong muốn như Tây y. Có thé ding kết hợp các thảo được để phòng trị bệnh trong thời gian dai mà không gây độc hại quá nhiều cho cơ thẻ- đây chính là ưu điểm nôi bật của Đông y [1].

Sự giao lưu văn hóa với các nước Trung Quốc, An Độ càng làm phong phú thêm nguồn nguyên dược liệu cũng như phương pháp chữa bệnh của nước ta. Do đó, việc tìm kiểm và phát hiện các cây thuốc, cũng như các hợp chất tự nhiên có tác dụng hỗ trợ việc điều trị bệnh đã và đang được các nhà khoa học trong nước cũng như trên toàn thế giới quan tâm nghiên cứu. Cây Trâm bau Combretum quadrangulare Kurz là một loại cây khá phố biến ở các tỉnh miền nam Việt Nam và các nước Đông Nam Á. Cây mang lại những ứng dụng y học quý giá trên thế giới nói chung và tại Việt Nam nói riêng.

Các công dụng đã được kiêm chứng bằng các thí nghiệm in vitro như: khả nang kháng khuẩn. chong lại virus HIV, khả năng gây độc lên tế bảo ung thư như: ung thư ruột kết tràng (26- L5), ung thư máu dòng lympho (K562), ung thư gan (HepG2), chữa đái tháo đường,. Do đó, tôi quyết định chon dé tài “Khao sát thành phần hóa học cao n- hexane: ethyl acetate lá cây Trâm bầu (Combretum quadrangulare Kurz)” với mong muốn làm sáng tỏ thành phan hóa học của phân đoạn khảo sát. từ đó làm tiền dé cho việc nghiên cứu về hoạt tinh sinh học làm phong phú thêm kho tàng y học Việt Nam và thê giới.

Mục đích nghiên cứu Cô lập một SỐ hợp chất trong cao n-hexane: ethyl acctate từ cây vả xác định cầu trúc hóa học các hợp chất đã được cô lập bằng các phương pháp phô nghiệm (1D, 2D- NMR .) góp phan làm phong phú thêm danh mục các hợp chat đã hiện điện trong cây. Khảo sát hoạt tính sinh học của những hợp chất đã cô lập được. tăng tính ứng dụng của cây Trâm bau Combretum quadrangulare Kurz trong đời sông hàng ngày và trong kho tàng y học Việt Nam và thể giới. Đối tượng nghiên cứu Dối tượng nghiên cứu trong luận văn là lá cây Trâm bau Combretum quadrangulare Kurz.

được thu hái vào năm tháng 04/2020 tại khu vực huyện Đức Hoa, tinh Long An, Việt Nam. Mau thu hái là lá cây, sau đó phơi khô tự nhiên trong nơi thoáng mát, tránh trực tiếp ánh nắng mặt trời. Nhiệm vụ của đề tài Cô lập và xác định được cau trúc một số hợp chất trong cao n-hexane: ethyl acetate điều chế từ lá cây Trâm bau (Combretum quadrangulare Kurz). Phương pháp nghiên cứu - Tổng hợp các tài liệu khoa học có liên quan.

- Trích ngâm lá cây trong methanol. - Chiết long- long với dung môi n-hexane, n-hexane: ethyl acetate tỉ lệ (50:50), ethyl acetate. - Các phương pháp sắc kí sử dụng silica gel pha thường, pha dao, cột Sephadex LH-20 cùng với các dung môi thông thưởng trong phòng thí nghiệm như n-hexane, chloroform, ethyl acetate, acetone, methanol, nước. - Dự đoán cấu trúc của các hợp chất cô lập được băng các phương pháp phô nghiệm hiện đại, chủ yếu là phô cộng hưởng từ hạt nhân.

Giới thiệu chi Combretum Combretum là chỉ lớn nhất và phô biến nhất của ho Combretaceae. Chi này bao gôm khoảng 200-250 loài phân bố khắp các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới, chủ yếu ở châu Phi và châu A. Các loài của chi Combretum thường là cây gỗ. cây bụi, thân cành hoặc thân gỗ leo [2].

Các cây thuộc chi Combretum nội tiếng trong y học cô truyền châu Phi và được sử dụng đề điều trị nhiều loại bệnh như trị bò cạp và rắn cắn, các vấn đẻ vẻ thân kinh, chữa bệnh tim, trị giun, giảm sốt và nhiễm trùng vi sinh vat [3]. Tat cả các bộ phận của loài Combretum, như than, rể. quả được sử dụng cho mục đích y học [4]. Combretum micranthum là một loại cay bụi hoặc day leo ram rạp, được tim thấy trên khắp châu Phi.

Combretum micranthum được sử dụng trong y học cô truyền đề điều trị vết thương và vết loét và sốt (đặc biệt là sốt rét, ho và viêm phế quản [5-8]. Combretum molle đã được sử dung rộng rãi như một cây thuốc đẻ điều trị các bệnh khác nhau như ký sinh trùng và các bệnh truyền nhiễm khác ở Đông và Tây Phi [9- 12]. Combretum erythrophyllum được sử dung rộng rãi trong y học cô truyền ở miền nam châu Phi. Cây nay được sử dụng dé điều trị đau bụng và các bệnh hoa liễu, điều này cho thấy sự hiện diện của các hợp chất kháng khuân trong lá [13].

Bột rễ của Combretum erythrophyllum điều trị bệnh hoa liễu [14]. Lá và các bộ phận khác của cây Combretum nigricans được sử dụng rộng rãi trong y học địa phương dé chữa các bệnh khác nhau, như chữa các bệnh rối loạn đường ruột (tiêu cháy), đau đầu, đau bụng. chữa vàng da và thấp khớp [15]. Bột vỏ cây Combretum imberbe bôi ngoài da chữa bệnh phong hoặc uống dé chữa ho, cảm lạnh, rễ hoặc lá nghiền nhỏ thành bột và sắc lay nước uống trị tiêu chảy, chữa đau bụng, rễ cây giúp chữa vô sinh ở phụ nữ, các bệnh về phụ khoa [16].

Combretum kraussii thường dùng làm chất khử trùng, thuốc chống bài niệu, thuốc bồ và tao cảm giác ngon miệng, chữa vết thương, nhiễm trùng mắt [16]. Lá cây Combretum padiodes được dùng làm thuốc chữa ran cắn và làm lành thương, rễ dùng làm thuốc điều trị nhiễm giun móc [16]. Lá Combretum zeheri tươi được dùng dé chữa ho, rễ va lá khô được sử dụng đề chữa tiêu chảy.