HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM THAVIXAY YASENG ĐÁNH GIÁ HIỆN TRẠNG Ô NHIỄM VI SINH VẬT VÀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI VÀ SALMONELLA PHÂN LẬP TỪ THỊT LỢN BÁN TẠI MỘT SỐ CHỢ THUỘC HUYỆN GIA LÂM, THÀNH PHỐ HÀ NỘI Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: 1. Phạm Hồng Ngân 2. Nguyễn Thi ̣Trang NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan bản luận văn là kết quả nghiên cứu của chính bản thân tôi. Kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực.
Các tài liệu viện dẫn trong luận văn đều đã được công bố và được trích dẫn theo đúng nguyên tắc. Tôi xin chịu trách nhiệm hoàn toàn về nội dung của luận văn. Hà Nội, ngày… tháng… năn 2018 Tác giả luận văn Thavixay YASENG i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp ngoài sự nỗ lực của bản thân tôi đã nhận được sự quan tâm giúp đỡ của rất nhiều cá nhân và tập thể. Lời đầu tiên, tôi xin trân trọng cảm ơn các thầy giáo, cô giáo trong Khoa Thú Y – Học viện Nông nghiệp Hà Nội đặc biệt là các thầy giáo, cô giáo trong bộ môn Thú Y Cộng Đồng – Khoa Thú Y đã tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn.
Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS. Phạm Hồng Ngân và TS. Nguyễn Thi ̣ Trang đã tận tình giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập và thời gian thực hiện đề tài. Tôi xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè đã động viên giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập.
Xin chân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày… tháng… năn 2018 Tác giả luận văn Thavixay YASENG ii MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng .vii Danh mục đồ thị.
viii Danh mục hình. ix Trı́ch yế u luâ ̣n văn. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu của đề tài.
Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học và thực tiễn. Tổng quan tài liệu. Tình hı̀nh ngô ̣ đô ̣c thực phẩ m. Ngộ độc thực phẩm và bệnh truyền qua thực phẩm.
Nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm. Tình hình ngộ độc thực phẩm do vi sinh vật gây ra trên thế giới và tại Việt Nam. Một số nghiên cứu về ô nhiễm thực phẩm do vi khuẩn E.coli và Salmonella gây ra trên thế giới và tại Việt Nam. Nguyên nhân nhiễm khuẩ n vào thiṭ.
Đường xâm nhập của vi khuẩn vào thịt. Các nguồn ô nhiễm vi khuẩn vào thịt. Hiể u biế t chung về vi khuẩ n E. Đặc điểm hình thái, nuôi cấy, đặc tính sinh hoá và sức đề kháng.
Cấu trúc kháng nguyên. Đặc tính gây bệnh. Ý nghĩa của việc xác định tổng số E. coli trong thịt.
Hiể u biế t về vi khuẩ n Salmonella. Đặc điểm hình thái, nuôi cấy, đặc tính sinh hoá và sức đề kháng. Cấu trúc kháng nguyên. Yếu tố bám dính.
Khả năng sản sinh độc tố. Ý nghĩa của việc xác định sự có mặt của Salmonella trong thịt. Hiê ̣n tươ ̣ng kháng kháng sinh của vi khuẩ n E. coli và Salmonella.
Tính kháng thuốc của vi khuẩn. Cơ chế gây hiện tượng kháng thuốc của vi khuẩn. Khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn E. Khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn Salmonella.
Vâ ̣t liệu và phương pháp nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu. Thời gian nghiên cứu. Đối tượng, vật liệu nghiên cứu.
Đối tượng nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu. Nô ̣i dung nghiên cứu. Phân lập xác định tình trạng ô nhiễm vi khuẩn E.
coli và Salmonella trong thịt lợn tại một số chợ trên địa bàn huyện. Xác định khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn E. coli và Salmonella phân lập được từ các mẫu thịt lợn. Phương pháp nghiên cứu.
Phương pháp thu thập mẫu. Phương pháp phân lập vi khuẩn E. Phương pháp phân lập vi khuẩn Salmonella. Phương pháp kháng sinh đồ.
Phương pháp xử lý số liệu. Kết quả thảo luận. Kế t quả xác đinh ̣ tỷ lê ̣ nhiễm E. coli và salmonella trong thiṭ lơ ̣n ta ̣i huyê ̣n Gia Lâm.
Tình hình nhiễm vi khuẩn E. coli ở thịt lợn tại các chợ. Tình hình nhiễm khuẩn Salmonella từ thịt lợn ở các chợ. Kế t quả kiể m tra tı́nh mẫn cảm với mô ̣t số kháng sinh của các chủng E.
coli và salmonella. Kết quả kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh của các chủng E. Kết quả kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn Salmonella. Kết luận và kiế n nghị.
̣ 44 Tài liệu tham khảo. 49 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BGA Brilliant Green Agar BHI Brain Heart Infusion E.coli Escherichia coli EHEC Enterohaemorrhagic E.coli EIEC Enteroinvasive E.coli EMB Eosin – Methylene Blue EPEC Enteropathogenic E.coli ETEC Enterotoxigenic E.coli FAO Food and Agriculture Organization FDA Food & Drug Administration Gr (-) Gram âm Gr (+) Gram dương IMVIC Indole, Methyl Red, Voges Proskauer và Citrat LT Heat labile enterotoxin MKTTn Muller Kauffman Tetrathionate MPN Most Probable Number MR Methyl red PBW Pepton Buffer Water RV Rappaport – Vassiliadis Soya Pepton SS Salmonella – Shigella ST Heat stable enterotoxin TCVS Tiêu chuẩn vệ sinh TSI Triple sugar iron VP Voges proskauer WHO World Health Organization XLD Xylolysin deoxychocolat XLT4 Xyloze – Lyzine – Tergitol 4 vi DANH MỤC BẢNG Bảng 4. Kết quả kiểm tra vi khuẩn E. coli trong các mẫu thịt lợn được lấy từ các chợ.
Kết quả kiểm tra tỉ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella trong các mẫu thịt lợn được lấy từ các chợ. Kết quả kiểm tra tính mẫn cảm với một số kháng sinh của các chủng E. Kết quả kiểm tra tính mẫn cảm với một số kháng sinh của các chủng Salmonella. 41 vii DANH MỤC ĐỒ THỊ Đồ thị 4.
Tỷ lệ % số mẫu dương tính với vi khuẩn E. coli và số mẫu không đạt TCVS ở các chợ. Tình hình nhiễm vi khuẩn Salmonella trong các mẫu thịt bày bán tại các chợ. So sánh kết quả phân lập vi khuẩn E.
coli và Salmonella từ các mẫu thịt được bày bán tại các chợ. Tính mẫn cảm với kháng sinh của các chủng E. Tính mẫn cảm với kháng sinh của các chủng Salmonella. So sánh tỷ lệ kháng sinh của các chủng E.
coli và Salmonella. 42 viii DANH MỤC HÌNH Hı̀nh 4.coli phát triển trên môi trường MacConkey. coli phát triển trên môi trường EMB. Khuẩn lạc Salmonella spp trên môi trường BGA.
Khuẩn lạc Salmonella spp trên môi trường XLD. Khuẩn lạc Salmonella spp trên môi trường TSI .36 ix TRÍ CH YẾU LUẬN VĂN Tên tác gı́a: Thavixay YASENG Tên luâ ̣n văn: Đánh giá hiê ̣n tra ̣ng ô nhiễm vi sinh vật và kháng kháng sinh của vi khuẩn Escherichia coli, Salmonella phân lập từ thịt lợn bán tại một số chợ thuộc huyện Gia Lâm, thành phố Hà Nội Ngành: Thú y Mã số : 8640101 Tên cơ sở đào ta ̣o: Ho ̣c Viê ̣n Nông Nghiê ̣p Viê ̣t Nam Mục tiêu nghiên cứu Xác định được tình trạng ô nhiễm và tính kháng kháng sinh của vi khuẩn E. coli, Salmonella trong thịt lợn bán tại một số chợ thuộc huyện Gia Lâm, thành phố Hà Nội từ đó cảnh báo tình trạng lan truyền các vi khuẩn kháng thuốc qua chuỗi phân phối thực phẩm. Phương pháp nghiên cứu Tiến hành điều tra hiện tượng sử dụng thuốc kháng sinh tại các trang trại chăn nuôi, hộ chăn nuôi lợn bằng hình thức phỏng vấn trực tiếp chủ chăn nuôi.
Lấ y mẫu và chuẩn bi mẫ ̣ u theo TCVN 4833 – 1:2002, TCVN 4833–2:2002. Phân lâ ̣p, xác đinh ̣ số lươ ̣ng E.coli theo TCVN 6846 – 2007. Phương pháp phát hiện Salmonella theo TCVN 4829 : 2005 (ISO 6579 : 2002). Số liệu thu thập được xử lý bằng phần mềm Excel 2010.
Kết quả chı́nh và kế t luâ ̣n 1. Kết quả tiến hành phân lập 50 mẫu thịt lợn để xác định tỷ lệ nhiễm vi khuẩn E. coli cho thấy: trong 50 mẫu có 41 mẫu dương tính với vi khuẩn E. coli chiếm 82%, trong 50 mẫu có 30 mẫu (60%) không đạt tiêu chuẩn vệ sinh an toàn thực phẩm và 20 mẫu (40%) đạt tiêu chuẩn vệ sinh thú y.
Kết quả kiểm tra tình hình nhiễm vi khuẩn Salmonella: khi phân lập 50 mẫu thịt lợn được lấy từ các chợ thì số mẫu dương tính với vi khuẩn Salmonella (không đạt tiêu chuẩn vệ sinh) là 11, chiếm 22%, còn 39 mẫu (78%) đạt tiêu chuẩn vệ sinh an toàn thực phẩm. Tính mẫn cảm với kháng sinh của các chủng E. coli và Salmonella. Đối với các chủng E.
coli: tổng số 9 chủng với 12 loại kháng sinh, kết quả cho thấy: Các chủng E. coli này mẫn cảm tốt với kháng sinh Gentamycin, Neomycin, Norfloxacin và Ofloxacin. Kháng mạnh với các kháng sinh Streptomycin, Tetracyclin. Đối với các chủng Salmonella: Tổng số 7 chủng được thử nghiệm với 12 loại x kháng sinh, kết quả cho thấy: Các chủng Salmonella mẫn cảm tốt với kháng sinh Neomycin, Gentamycin và Norfloxacin.
Kháng mạnh với kháng sinh Amoxicillin, Streptomycin và Tetracycllin. Tỷ lệ kháng kháng sinh của các chủng E. coli và Salmonella được thể hiện qua biểu đồ 4. Qua đó ta thấy các chủng E.
coli và Salmonella có tỷ lệ kháng cao (từ 55,56% đến 85,71%) với một số kháng sinh như: Streptomycin, Tetracycllin, Amoxicillin, Ampicillin và Enrofloxacin. Một số loại kháng sinh có tỷ lệ mẫn cảm tốt với các chủng E. coli và Salmonella như: Neomycin, Norfloxacin, Gentamycin, và Ofloxacin. Mẫn cảm trung bình với các loại kháng sinh như: Colistin, Kanamycin và Pefloxacin.
xi THESIS ABSTRACT Master candidate: Thavixay Yaseng Thesis title: “Assessment of microbiological contamination and antibiotic resistance status of Escherichia coli bacteria, Salmonella isolated from pork sold in some markets in Gia Lam district, Hanoi”. Major: Veterinary Mediaine Code: 8640101 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) 1.Research Objectives Determine the contamination and antibiotic resistance of E. coli, Salmonella in pork which sold in some markets in Gia Lam district, Hanoi. Thence status warns spread of drug-resistant bacteria through the food chain.
Materials and Methods Investigate the use of antibiotics in pig farms and households in the form of direct interviews with producers. Sampling and sample preparation in accordance with TCVN 4833-1: 2002, TCVN 4833-2: 2002. Isolation and determination of E. coli numbers according to TCVN 6846-2007.
Salmonella detection method according to TCVN 4829: 2005 (ISO 6579: 2002). Collected data is processed by Excel 2010 software. Main findings and conclusions 1. The results of isolating 50 samples of pork to determine the prevalence of E.
coli infection showed that: 41 samples were positive for E. coli with 82%, 30 samples (60%) did not meet hygiene standards and 20 samples (40%) reached veterinary hygiene standards in total of 50 samples.