NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY CÓC (LUMNITZERA LITTOREA (JACK) VOIGT)

• Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
• Đề tài: Nhân giống in vitro cây Cóc (Lumnitzera littorea): Nghiên cứu tối ưu hóa môi trường và chất điều hòa sinh trưởng
• Loại tài liệu: Nghiên cứu khoa học

• LỜI MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Đặc điểm hình thái cây Cóc đ
• 1.2. Đặc điểm sinh thái cây Cóc đ
• 1.3. Phân bố và vai trò của cây Cóc đ
• 1.4. Tình hình nghiên cứu cây Cóc đ
• 2. CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Vật liệu nghiên cứu
• 2.2. Phương pháp nghiên cứu
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 3.1. Khảo sát ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy
• 3.2. Khảo sát ảnh hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng
• 3.3. Khảo sát ảnh hưởng của các điều kiện môi trường khác
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• 4.1. Kết luận
• 4.2. Kiến nghị
• PHỤ LỤC
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Giới thiệu Nhân giống in vitro cây Cóc hiệu quả

Cây Cóc (Lumnitzera littorea) là một loài cây ngập mặn quan trọng, đóng vai trò then chốt trong việc bảo vệ bờ biển và duy trì đa dạng sinh học. Tuy nhiên, việc nhân giống theo phương pháp truyền thống gặp nhiều khó khăn. Nhân giống in vitro mở ra hướng đi mới, giúp nhân nhanh số lượng lớn cây giống chất lượng cao. Bài viết này sẽ đi sâu vào nghiên cứu tối ưu hóa môi trường và chất điều hòa sinh trưởng cho nhân giống in vitro cây Cóc, nhằm nâng cao hiệu quả và tính ứng dụng thực tiễn. Chúng ta sẽ khám phá những yếu tố quan trọng tác động đến quá trình này, từ đó đưa ra các giải pháp tối ưu hóa.

1.1. Tầm quan trọng của cây Cóc trong hệ sinh thái ngập mặn

Cây Cóc (Lumnitzera littorea) là loài cây ngập mặn có vai trò quan trọng trong việc cố định đất, ngăn ngừa xói mòn bờ biển, và là nơi sinh sống của nhiều loài sinh vật biển. Việc bảo tồn và phát triển loài cây này có ý nghĩa to lớn đối với việc bảo vệ môi trường và đa dạng sinh học. Cây Cóc còn có giá trị về mặt kinh tế, được sử dụng trong y học cổ truyền và làm vật liệu xây dựng.

1.2. Khó khăn trong nhân giống cây Cóc truyền thống

Các phương pháp nhân giống cây Cóc truyền thống thường gặp nhiều khó khăn, bao gồm tỷ lệ nảy mầm thấp, thời gian sinh trưởng chậm và phụ thuộc nhiều vào điều kiện tự nhiên. Điều này gây cản trở lớn đến việc bảo tồn và phát triển loài cây này. Do đó, cần có những giải pháp hiệu quả hơn để nhân nhanh số lượng lớn cây giống, đáp ứng nhu cầu trồng và phục hồi rừng ngập mặn.

II. Thách thức Tối ưu môi trường nuôi cấy in vitro cây Cóc

Để nhân giống in vitro cây Cóc thành công, việc tối ưu hóa môi trường nuôi cấy là yếu tố then chốt. Môi trường nuôi cấy cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết cho sự sinh trưởng và phát triển của cây. Tuy nhiên, việc lựa chọn thành phần và nồng độ các chất dinh dưỡng phù hợp không phải là điều dễ dàng. Bài viết sẽ phân tích các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng và phát triển in vitro của cây Cóc, từ đó đề xuất các giải pháp tối ưu hóa môi trường nuôi cấy MS và các thành phần bổ sung.

2.1. Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy MS đến nhân giống in vitro

Môi trường nuôi cấy MS (Murashige and Skoog) là môi trường cơ bản được sử dụng rộng rãi trong nhân giống in vitro. Tuy nhiên, để phù hợp với đặc tính sinh học của cây Cóc, cần có những điều chỉnh về thành phần và nồng độ các chất dinh dưỡng trong môi trường MS. Ví dụ, có thể cần tăng cường hàm lượng một số nguyên tố vi lượng hoặc bổ sung thêm các chất hữu cơ.

2.2. Vai trò của ánh sáng nhiệt độ và pH trong nuôi cấy mô thực vật

Ngoài thành phần dinh dưỡng, các yếu tố vật lý như ánh sáng, nhiệt độ và pH cũng đóng vai trò quan trọng trong quá trình nuôi cấy mô thực vật. Ảnh hưởng của ánh sáng đến nhân giống in vitro bao gồm cường độ, thời gian chiếu sáng và phổ ánh sáng. Nhiệt độ thích hợp giúp cây sinh trưởng và phát triển tốt. pH ảnh hưởng đến khả năng hấp thụ dinh dưỡng của cây. Cần kiểm soát chặt chẽ các yếu tố này để đạt hiệu quả nhân giống cao nhất.

III. Giải pháp Chất điều hòa sinh trưởng cho cây ngập mặn

Chất điều hòa sinh trưởng (plant growth regulators) đóng vai trò quan trọng trong việc kích thích sự phát triển của cây trong môi trường in vitro. Các chất như auxin (NAA, IAA) và cytokinin (BA, Kinetin) có tác động khác nhau đến quá trình hình thành rễ, chồi và callus. Nghiên cứu sẽ tập trung vào việc đánh giá hiệu quả của các loại chất điều hòa sinh trưởng khác nhau đối với nhân giống in vitro cây Cóc, từ đó tìm ra công thức tối ưu giúp tăng tỷ lệ sống và phát triển của cây.

3.1. Tác động của BA Benzylaminopurine đến sự phát triển chồi

BA (Benzylaminopurine) là một cytokinin phổ biến, có tác dụng kích thích sự phát triển của chồi trong nhân giống in vitro. Nồng độ BA thích hợp giúp tăng số lượng chồi và chiều cao chồi. Tuy nhiên, cần sử dụng BA một cách hợp lý, tránh gây ra các tác dụng phụ như biến dạng chồi hoặc ức chế sự phát triển rễ.

3.2. Vai trò của NAA Naphthaleneacetic acid trong hình thành rễ

NAA (Naphthaleneacetic acid) là một auxin thường được sử dụng để kích thích sự hình thành rễ trong nhân giống in vitro. Nồng độ NAA tối ưu giúp cây phát triển hệ rễ khỏe mạnh, tăng khả năng sống sót khi chuyển ra môi trường tự nhiên. Dẫn chứng từ tài liệu cho thấy tỉ lệ ra rễ có thể lên tới 86% khi sử dụng NAA ở nồng độ thích hợp. (Tham khảo: 'a24DvàNAA năngn ngc6NAA xoáy qua ngc khu GÀ táisinht „làm vào 86% Nam pabi')

3.3. Kết hợp BA và NAA để cân bằng sự phát triển

Việc kết hợp BA và NAA với tỷ lệ phù hợp có thể giúp cân bằng sự phát triển của chồi và rễ trong nhân giống in vitro. Tỷ lệ BA/NAA tối ưu cần được xác định thông qua các thí nghiệm để đảm bảo cây phát triển toàn diện. Sự kết hợp này có thể tạo ra cây con khỏe mạnh, có khả năng thích nghi tốt với môi trường bên ngoài.

IV. Phương pháp Kỹ thuật nhân giống vô tính tối ưu cho cây Cóc

Kỹ thuật nhân giống vô tính, đặc biệt là nhân giống in vitro, mang lại nhiều ưu điểm vượt trội so với phương pháp truyền thống. Nó cho phép nhân nhanh số lượng lớn cây giống trong thời gian ngắn, đồng thời đảm bảo tính đồng nhất về mặt di truyền. Bài viết này sẽ trình bày chi tiết quy trình nhân giống in vitro cây Cóc, từ khâu chuẩn bị mẫu, khử trùng, tạo callus, kích thích phát triển chồi và rễ, đến giai đoạn acclimatization.

4.1. Quy trình khử trùng mẫu vật trong nhân giống in vitro

Khử trùng mẫu vật là bước quan trọng để loại bỏ các vi sinh vật gây nhiễm, đảm bảo sự thành công của quá trình nhân giống in vitro. Mẫu vật thường được khử trùng bằng các chất như sodium hypochlorite (nước javel) hoặc mercuric chloride. Thời gian và nồng độ chất khử trùng cần được điều chỉnh phù hợp để không gây hại cho mô cây.

4.2. Tạo callus và kích thích phát triển chồi rễ

Callus là khối mô chưa phân hóa, được tạo ra từ mẫu vật sau khi nuôi cấy trên môi trường thích hợp. Việc kích thích phát triển chồi và rễ từ callus được thực hiện bằng cách điều chỉnh nồng độ các chất điều hòa sinh trưởng trong môi trường nuôi cấy. Quá trình này đòi hỏi sự tỉ mỉ và kinh nghiệm để đạt được kết quả tốt nhất.

4.3. Acclimatization cây Cóc Chuẩn bị cho môi trường tự nhiên

Acclimatization cây Cóc là giai đoạn chuyển cây từ môi trường in vitro sang môi trường tự nhiên. Trong giai đoạn này, cây cần được thích nghi dần với điều kiện ánh sáng, độ ẩm và nhiệt độ khác biệt. Việc chăm sóc và bảo vệ cây trong giai đoạn này rất quan trọng để đảm bảo tỷ lệ sống sót cao.

V. Kết quả Ứng dụng công nghệ sinh học bảo tồn cây bản địa

Nghiên cứu này đã đạt được những kết quả đáng khích lệ trong việc tối ưu hóa môi trường và chất điều hòa sinh trưởng cho nhân giống in vitro cây Cóc. Các công thức môi trường và chế độ nuôi cấy tối ưu đã được xác định, giúp tăng tỷ lệ sống và phát triển của cây. Kết quả này mở ra triển vọng lớn trong việc ứng dụng công nghệ sinh học để bảo tồn và phát triển cây bản địa Việt Nam, đặc biệt là các loài cây ngập mặn có giá trị.

5.1. Tăng tỷ lệ sống và phát triển của cây Cóc in vitro

Việc tối ưu hóa môi trường và chất điều hòa sinh trưởng đã giúp tăng đáng kể tỷ lệ sống và phát triển của cây Cóc in vitro. Cây có hệ rễ khỏe mạnh, chồi phát triển tốt và khả năng thích nghi cao với môi trường tự nhiên. Đây là một bước tiến quan trọng trong việc nhân nhanh số lượng lớn cây giống chất lượng cao.

5.2. Ứng dụng trong bảo tồn cây ngập mặn và phục hồi hệ sinh thái

Nhân giống in vitro có thể được ứng dụng rộng rãi trong các chương trình bảo tồn cây ngập mặn và phục hồi hệ sinh thái ven biển. Bằng cách nhân nhanh số lượng lớn cây giống, có thể tái tạo lại các khu rừng ngập mặn đã bị suy thoái, góp phần bảo vệ bờ biển và duy trì đa dạng sinh học.

5.3. Tiềm năng phát triển sản xuất cây giống Cóc quy mô lớn

Kết quả nghiên cứu này mở ra tiềm năng phát triển sản xuất cây giống Cóc quy mô lớn, đáp ứng nhu cầu trồng và phục hồi rừng ngập mặn. Việc thương mại hóa cây giống nhân giống in vitro có thể tạo ra nguồn thu nhập cho người dân địa phương và góp phần vào sự phát triển kinh tế - xã hội của vùng ven biển.

VI. Tương lai Nghiên cứu cây dược liệu và mở rộng ứng dụng

Hướng nghiên cứu tiếp theo có thể tập trung vào việc đánh giá các đặc tính dược lý của cây Cóc được nhân giống in vitro, từ đó khai thác tiềm năng làm cây dược liệu. Đồng thời, cần tiếp tục nghiên cứu tối ưu hóa quy trình nhân giống, giảm chi phí sản xuất và mở rộng ứng dụng cho các loài cây ngập mặn khác. Ứng dụng công nghệ sinh học trong nhân giống cây trồng sẽ đóng vai trò then chốt trong việc bảo tồn và phát triển bền vững các nguồn tài nguyên thực vật quý giá.

6.1. Đánh giá đặc tính dược lý của cây Cóc nhân giống in vitro

Cây Cóc được biết đến với nhiều công dụng trong y học cổ truyền. Việc đánh giá các đặc tính dược lý của cây nhân giống in vitro có thể giúp tìm ra các hoạt chất có giá trị, từ đó phát triển các sản phẩm chăm sóc sức khỏe. Đây là một hướng đi đầy tiềm năng, góp phần nâng cao giá trị kinh tế của loài cây này.

6.2. Tiếp tục tối ưu hóa quy trình nhân giống in vitro

Việc tiếp tục nghiên cứu tối ưu hóa quy trình nhân giống in vitro là cần thiết để giảm chi phí sản xuất và tăng hiệu quả. Các nghiên cứu có thể tập trung vào việc tìm kiếm các loại môi trường nuôi cấy rẻ tiền hơn, sử dụng các nguồn năng lượng tái tạo và áp dụng các kỹ thuật tự động hóa.

6.3. Mở rộng ứng dụng cho các loài cây ngập mặn khác

Các kỹ thuật và kinh nghiệm thu được từ nghiên cứu nhân giống in vitro cây Cóc có thể được áp dụng cho các loài cây ngập mặn khác. Điều này sẽ góp phần vào việc bảo tồn và phát triển bền vững các hệ sinh thái ngập mặn, bảo vệ bờ biển và duy trì đa dạng sinh học.

Tổng quan nghiên cứu

Rừng ngập mặn (RNM) đóng vai trò quan trọng trong bảo vệ môi trường ven biển, duy trì đa dạng sinh học và hỗ trợ sinh kế cộng đồng. Tuy nhiên, hiện nay RNM đang bị khai thác quá mức, dẫn đến suy giảm nghiêm trọng các loài cây đặc hữu, trong đó có cây Cóc đ (Lumnitzera littorea (Jack) Voigt) – một loài cây chính của RNM tại Việt Nam, phân bố tại Phú Quốc, Rạch Giá (Kiên Giang), Côn Đảo, Cam Ranh và Nha Trang. Cây Cóc đ có giá trị sinh thái và kinh tế cao, được sử dụng trong xây dựng, làm than, và có tác dụng chống xói mòn bờ biển.

Nghiên cứu này nhằm phát triển phương pháp nhân giống in vitro cây Cóc đ, xác định các điều kiện môi trường và chất điều hòa sinh trưởng thích hợp để tối ưu hóa quá trình nảy mầm và phát triển cây con. Thời gian nghiên cứu kéo dài từ tháng 9/2014 đến tháng 5/2016 tại phòng thí nghiệm Vi sinh – Sinh hóa và Sinh lý thực vật, Trường Đại học Sư phạm TP. Hồ Chí Minh. Kết quả nghiên cứu góp phần bảo tồn nguồn gen quý hiếm, hỗ trợ phục hồi RNM và phát triển bền vững sinh thái ven biển.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên các lý thuyết về sinh lý thực vật và công nghệ nuôi cấy mô thực vật in vitro, đặc biệt tập trung vào vai trò của các chất điều hòa sinh trưởng như auxin (NAA), cytokinin (BA), gibberellin (GA3) và các yếu tố môi trường như ánh sáng, nhiệt độ, pH môi trường. Mô hình nghiên cứu áp dụng các khái niệm chính:

• Nuôi cấy mô thực vật in vitro: kỹ thuật nhân giống cây trồng bằng cách nuôi mô hoặc tế bào trong môi trường vô trùng có kiểm soát.
• Chất điều hòa sinh trưởng thực vật: các hormone thực vật ảnh hưởng đến sự phân chia, kéo dài tế bào và phát triển mô.
• Môi trường nuôi cấy: thành phần dinh dưỡng, nồng độ agar, pH và điều kiện chiếu sáng ảnh hưởng đến sự phát triển của cây con.
• Khả năng vô trùng: đảm bảo môi trường nuôi cấy không bị nhiễm vi sinh vật gây hại.

Phương pháp nghiên cứu

Nguồn dữ liệu thu thập từ các mẫu cây Cóc đ lấy tại các khu vực RNM ở Kiên Giang và Côn Đảo. Phương pháp nghiên cứu bao gồm:

• Chuẩn bị mẫu: xử lý mẫu bằng dung dịch HgCl2 1% trong 40 giây và Javen 60% trong 15 phút để khử trùng.
• Môi trường nuôi cấy: sử dụng môi trường Murashige và Skoog (MS) với các biến thể nồng độ agar (7.5 g/l, 8 g/l), bổ sung các nồng độ khác nhau của NAA, BA, GA3.
• Thiết kế thí nghiệm: 23 thí nghiệm với các nồng độ và phối hợp chất điều hòa sinh trưởng khác nhau, theo dõi trong 14-15 ngày.
• Phân tích số liệu: sử dụng phần mềm Excel 2007 và Statgraphics Plus 3.0 để xử lý thống kê, kiểm định ý nghĩa với mức tin cậy 95%.
• Quan sát hình thái: đánh giá sự phát triển mô, hình thành chồi, sinh khối và sinh trưởng cây con qua kính hiển vi và quan sát trực tiếp.

Cỡ mẫu trung bình mỗi thí nghiệm gồm 31 mẫu, được nuôi cấy trong bình tam giác 100 ml, theo dõi trong 3 tuần.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Khả năng vô trùng mẫu cây Cóc đ: Xử lý bằng dung dịch HgCl2 1% trong 40 giây và Javen 60% trong 15 phút đạt hiệu quả vô trùng cao, tỷ lệ mẫu không nhiễm khuẩn đạt trên 80%. Thời gian xử lý quá dài làm giảm khả năng sống sót của mẫu.

2. Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy: Môi trường MS bổ sung agar 7.5 g/l cho tỷ lệ nảy mầm cao nhất (83,33%), thời gian nảy mầm trung bình khoảng 14,6 ngày. Môi trường WPM và các biến thể MS khác có tỷ lệ thấp hơn khoảng 33%.

3. Tác động của chất điều hòa sinh trưởng:

   • NAA ở nồng độ 0,1 mg/l kết hợp với BA 2 mg/l cho tỷ lệ nảy mầm nhanh nhất (5,67 ngày) và sinh trưởng cây con tốt nhất.
   • Nồng độ NAA cao (4 mg/l) làm giảm sinh trưởng và tăng tỷ lệ chết cây con (50%).
   • BA ở nồng độ 0,5 mg/l kích thích sinh trưởng tốt, nhưng nồng độ cao hơn gây ức chế phát triển.
   • GA3 thúc đẩy quá trình nảy mầm nhanh hơn so với đối chứng, thời gian trung bình 8,3 ngày.

4. Ảnh hưởng của điều kiện chiếu sáng: Chiếu sáng 8 giờ/ngày thúc đẩy nảy mầm và phát triển cây con tốt hơn so với 16 hoặc 24 giờ, tỷ lệ nảy mầm đạt 86,67%.

Thảo luận kết quả

Kết quả cho thấy môi trường MS với agar 7.5 g/l là điều kiện tối ưu cho nuôi cấy mô cây Cóc đ, phù hợp với các nghiên cứu về nuôi cấy mô thực vật khác. Việc sử dụng phối hợp NAA và BA ở nồng độ thích hợp kích thích sự phân chia tế bào và hình thành chồi, đồng thời giảm thiểu hiện tượng chết mô do quá liều hormone.

Ánh sáng đóng vai trò quan trọng trong quá trình sinh trưởng, chiếu sáng 8 giờ/ngày tạo điều kiện cân bằng giữa quang hợp và nghỉ ngơi của mô, phù hợp với sinh lý cây Cóc đ. So sánh với các nghiên cứu về nuôi cấy mô cây rừng ngập mặn khác, kết quả này tương đồng về vai trò của auxin và cytokinin trong điều hòa sinh trưởng.

Biểu đồ thể hiện tỷ lệ nảy mầm theo thời gian và nồng độ hormone sẽ minh họa rõ ràng sự khác biệt giữa các nhóm thí nghiệm, giúp xác định điều kiện tối ưu.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Áp dụng môi trường MS với agar 7.5 g/l trong quy trình nuôi cấy mô cây Cóc đ để đạt tỷ lệ nảy mầm và sinh trưởng cao, thời gian thực hiện 14-15 ngày, do các phòng thí nghiệm sinh học thực vật thực hiện.

2. Sử dụng phối hợp NAA 0,1 mg/l và BA 2 mg/l làm chất điều hòa sinh trưởng chính trong môi trường nuôi cấy, nhằm tối ưu hóa tốc độ nảy mầm và phát triển cây con, áp dụng trong giai đoạn nhân giống in vitro.

3. Kiểm soát điều kiện chiếu sáng 8 giờ/ngày trong phòng nuôi cấy để đảm bảo sự phát triển sinh lý bình thường của cây con, giảm thiểu stress do ánh sáng quá mức.

4. Đào tạo kỹ thuật viên và cán bộ quản lý về quy trình vô trùng mẫu và xử lý hormone để nâng cao hiệu quả nhân giống, đồng thời giảm thiểu thất thoát vật liệu.

5. Phát triển mô hình nhân giống quy mô lớn tại các trung tâm bảo tồn và phục hồi RNM, nhằm cung cấp cây giống chất lượng cho công tác trồng rừng và bảo tồn đa dạng sinh học.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Nhà nghiên cứu sinh học thực vật và công nghệ sinh học: Nghiên cứu chi tiết về kỹ thuật nuôi cấy mô, ảnh hưởng của hormone và điều kiện môi trường đến sinh trưởng cây Cóc đ.

2. Chuyên gia bảo tồn rừng ngập mặn: Áp dụng kết quả để phát triển nguồn giống cây Cóc đ, góp phần phục hồi và bảo vệ RNM tại các vùng ven biển.

3. Cán bộ quản lý dự án trồng rừng và phát triển sinh thái: Sử dụng quy trình nhân giống in vitro để cung cấp cây giống chất lượng, tăng hiệu quả trồng rừng.

4. Sinh viên và học viên cao học ngành sinh học, nông lâm nghiệp: Tham khảo phương pháp nghiên cứu, xử lý số liệu và ứng dụng công nghệ sinh học trong bảo tồn thực vật.

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao phải sử dụng môi trường MS trong nuôi cấy mô cây Cóc đ?
   Môi trường MS cung cấp đầy đủ dinh dưỡng và khoáng chất cần thiết cho sự phát triển của mô thực vật, giúp cây con phát triển nhanh và khỏe mạnh hơn so với các môi trường khác.

2. Nồng độ hormone nào là tối ưu cho quá trình nảy mầm?
   NAA 0,1 mg/l kết hợp với BA 2 mg/l được xác định là nồng độ tối ưu, giúp tăng tỷ lệ nảy mầm và sinh trưởng cây con nhanh chóng.

3. Ánh sáng ảnh hưởng như thế nào đến nuôi cấy mô?
   Chiếu sáng 8 giờ/ngày tạo điều kiện cân bằng cho quá trình quang hợp và nghỉ ngơi của mô, thúc đẩy sự phát triển sinh lý bình thường và giảm stress cho cây con.

4. Làm thế nào để đảm bảo vô trùng trong quá trình nuôi cấy?
   Sử dụng dung dịch HgCl2 1% trong 40 giây và Javen 60% trong 15 phút là phương pháp hiệu quả để khử trùng mẫu, giảm thiểu nhiễm khuẩn trong môi trường nuôi cấy.

5. Kết quả nghiên cứu có thể ứng dụng thực tiễn như thế nào?
   Quy trình nhân giống in vitro cây Cóc đ giúp cung cấp nguồn giống chất lượng, hỗ trợ phục hồi RNM, bảo tồn đa dạng sinh học và phát triển kinh tế sinh thái bền vững.

Kết luận

• Phương pháp nuôi cấy mô in vitro cây Cóc đ được tối ưu với môi trường MS, agar 7.5 g/l, phối hợp NAA 0,1 mg/l và BA 2 mg/l.
• Điều kiện chiếu sáng 8 giờ/ngày thúc đẩy sự phát triển sinh lý và tăng tỷ lệ nảy mầm.
• Xử lý vô trùng bằng HgCl2 và Javen đạt hiệu quả cao, đảm bảo mẫu sạch khuẩn.
• Kết quả nghiên cứu góp phần bảo tồn nguồn gen quý hiếm, phục hồi rừng ngập mặn và phát triển bền vững sinh thái ven biển.
• Đề xuất triển khai quy trình nhân giống quy mô lớn và đào tạo kỹ thuật viên để ứng dụng rộng rãi trong thực tiễn.

Hành động tiếp theo: Các đơn vị nghiên cứu và bảo tồn cần phối hợp triển khai nhân rộng quy trình, đồng thời tiếp tục nghiên cứu cải tiến để nâng cao hiệu quả nhân giống và thích ứng với biến đổi môi trường.