HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGÔ THỊ ÁNH NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG NANO BẠC VÀ CÁC CHẤT ĐIỀU TIẾT SINH TRƯỞNG TRONG NUÔI CẤY IN VITRO GIỐNG MÍA ROC22 (Saccharum offcinarum L.) Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.01 Người hướng dẫn khoa học: TS. Đồng Huy Giới NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ lấy bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày 29 tháng 5 năm 2017 Tác giả luận văn Ngô Thị Ánh i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình.
Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến TS. Đồng Huy Giới, người đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài, Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo. Đặc biệt tôi xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô trong Bộ Môn sinh học – Khoa Công Nghệ Sinh Học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo – Giám đốc Trung tâm và đặc biệt là các anh chị em trong phòng khoa học và công nghệ sinh học – Trung tâm Nghiên cứu ứng dụng và phát triển công nghệ sinh học Thanh Hóa đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài.
Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên, khuyến khích tôi hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày 29 tháng 5 năm 2017 Tác giả luận văn Ngô Thị Ánh ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.
vi Danh mục bảng. vii Danh mục hình. viii Trích yếu luận văn. ix The abstract.
Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu nghiên cứu. Phạm vi nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu.
Thời gian nghiên cứu. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu. Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học. Tổng quan tài liệu.
Giới thiệu về cây mía. Nguồn gốc, phân bố, lịch sử phát hiện. Giá trị kinh tế. Đặc điểm thực vật học.
Nghiên cứu nuôi cấy In vitro cây mía. Nghiên cứu nước ngoài. Nghiên cứu trong nước. Giới thiệu về công nghệ nano và nano bạc.
Cơ sở khoa học của công nghệ nano. Nano bạc và cơ chế diệt khuẩn của ion bạc. Các nghiên cứu sử dụng nano trong nuôi cấy mô tế bào thực vật. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu .21 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.
Địa điểm nghiên cứu. Thời gian nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu.
Phương pháp nghiên cứu. Thiết kế thí nghiệm:. Các chỉ tiêu nghiên cứu và phương pháp xác định. Quy trình nghiên cứu.
Phân tích số liệu. Kết quả và thảo luận. Nội dung 1: Nghiên cứu khả năng khử trùng của nano bạc trên mẫu mía ngọn mang chồi bên và lá non. Ảnh hưởng của nồng độ và thời gian xử lí bằng nano bạc trong khử trùng mẫu ngọn mía mang chồi bên và lá non mía ROC22.
Nội dung 2: Nghiên cứu khả năng hình thành mô sẹo và tái sinh chồi từ mô sẹo của mẫu lá non. Ảnh hưởng của nồng độ 2,4-D và nano bạc đến khả năng hình thành mô sẹo từ mẫu cấy lá non mía ROC22. Ảnh hưởng của nồng độ BA, Kinetine, nano bạc đến khả năng tái sinh chồi từ mô sẹo. Nội dung 3: Nghiên cứu khả năng tái sinh chồi cấp 1 và nhân chồi cấp 1 từ ngọn mang chồi bên.
Ảnh hưởng của nồng độ BA, nano bạc đến khả năng tái sinh chồi cấp 1 từ ngọn mang chồi bên. Ảnh hưởng của nồng độ BA, kinetine kết hợp nano bạc đến khả năng nhân chồi từ chồi cấp 1. Nội dung 4: Nghiên cứu khả năng nhân nhanh chồi từ chồi cấp 2. Ảnh hưởng của nồng độ BA, Kinetine kết hợp nano bạc đến khả năng nhân nhanh chồi từ chồi cấp 2.
Ảnh hưởng của nồng độ BA, Ki kết hợp nano bạc đến khả năng nhân nhanh chồi từ chồi cấp 2. Nội dung 5: Nghiên cứu khả năng ra rễ tạo cây hoàn chỉnh từ chồi cấp .48 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Ảnh hưởng của nồng độ NAA đến khả năng ra rễ tạo cây hoàn chỉnh từ chồi cấp 2. Ảnh hưởng của nồng độ NAA kết hợp nano bạc đến khả năng ra rễ tạo cây hoàn chỉnh từ chồi cấp 2.
Kết luận và kiến nghị .52 Tài liệu tham khảo. 56 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BA Bezyl adenine CS. Cộng sự CT Công thức CV% Sai số thí nghiệm GA Gibberellin IAA Indole – 3 – acetic acid IBA Indole – 3 – butylic acid LSD0,05 Độ lệch tiêu chuẩn mức ý nghĩa 5% MS Murashige and Skoog NAA α – naphthalene acetic acid NS Siliver-Nano NXB Nhà xuất bản TB Trung bình vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 4. Ảnh hưởng của nồng độ nano bạc trong khử trùng mẫu ngọn mang chồi bên.
Ảnh hưởng của nồng độ nano bạc trong khử trùng mẫu ngọn mang lá non. Ảnh hưởng của thời gian xử lí bằng nano bạc (NS) trong khử trùng mẫu ngọn mang chồi bên. Ảnh hưởng của thời gian xử lí nano bạc (NS) trong khử mẫu ngọn mang lá non. Ảnh hưởng của 2,4-D đến khả năng hình thành mô sẹo từ mẫu cấy lá non.
Ảnh hưởng của nồng độ 2,4-D kết hợp với nano bạc đến khả năng hình thành mô sẹo từ mẫu cấy lá non. Ảnh hưởng của nồng độ BA kết hợp kinetine đến khả năng tái sinh chồi từ mô sẹo. Ảnh hưởng của nồng độ BA, kinetine kết hợp nano bạc đến khả năng tái sinh chồi từ mô sẹo. Ảnh hưởng của nồng độ BA đến khả năng tái sinh chồi cấp 1 từ ngọn mang chồi bên.
Ảnh hưởng của nồng độ BA, nano bạc đến khả năng tái sinh chồi cấp 1 từ ngọn mang chồi bên. Ảnh hưởng của nồng độ BA kết hợp kinetine đến khả năng nhân chồi từ chồi cấp 1. Ảnh hưởng của nồng độ BA, kinetine kết hợp với nano bạc đến khả năng nhân chồi từ chồi cấp 1. Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BA kết hợp 0,2mg/l Kinetine đến khả năng nhân nhanh chồi từ chồi cấp 2.
Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BA, Kinetine kêt hợp với nano bạc đến khả năng nhân nhanh chồi từ chồi cấp 2. Ảnh hưởng của nồng độ NAA đến khả năng ra rễ tạo cây hoàn chỉnh từ chồi cấp 2. Ảnh hưởng của nồng độ NAA kết hợp với nano bạc đến khả năng ra rễ tạo cây hoàn chỉnh từ chồi cấp 2. 50 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 2.
Hình thái cây mía. Ảnh hưởng của 2,4-D đến khả năng hình thành mô sẹo từ mẫu cấy lá non mía Roc22. Ảnh hưởng của nano bạc (NS) đến khả năng hình thành mô sẹo từ mẫu cấy lá non mía Roc22. Ảnh hưởng của BA kết hợp kinetine đến khả năng tái sinh chồi từ mô sẹo.
Ảnh hưởng của BA, kinetine kết hợp nano bạc đến khả năng tái sinh chồi từ mô sẹo. Ảnh hưởng của BA, Kinetine, nano bạc (NS) đến khả năng tái sinh chồi từ chồi cấp 1. Ảnh hưởng của BA kết hợp 0,2 mg/l Ki đến khả năng nhân chồi từ chồi cấp 1 (sau 3 tuần theo dõi) .b Ảnh hưởng của BA, 0,2 mg/l Ki kết hợp nano bạc (NS) đến khả năng nhân chồi từ chồi cấp 1 (sau 3 tuần theo dõi). Ảnh hưởng của nồng độ BA, Ki kêt hợp với nano bạc đến khả năng nhân nhanh chồi từ chồi cấp 2.
Ảnh hưởng của NAA kết hợp nano bạc đến khả năng ra rễ của chồi in vitro. 51 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Ngô Thị Ánh Tên luận văn: Nghiên cứu sử dụng nano bạc và các chất điều tiết sinh trưởng trong nuôi cấy in vitro giống mía ROC22 (Saccharum offcinarum L.) Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: Xác định được nồng độ và thời gian xử lý nano bạc thích hợp nhất cho việc khử trùng mẫu mía ROC22. Xác định được nồng độ nano bạc và các chất điều tiết sinh trưởng thích hợp nhất cho nuôi cấy in vitro mía ROC22. Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu được thực hiện theo phương pháp nuôi cấy mô hiện hành, mỗi thí nghiệm được bố trí 5 công thức với 3 lần lặp lại, số mẫu/công thức là 20 mẫu đối với các thí nghiệm.
Số liệu được xử lý bằng phần mềm Microsoft Excel 2007, IRRISTAT 5. Kết quả chính và kết luận: Bố trí các thí nghiệm theo mục đích đề ra và đã xác định được: i) Nồng độ nano bạc thích hợp nhất cho khử trùng mẫu mía là 150 ppm. Trong đó, đối với mẫu ngọn mía mang chồi bên, thời gian tiếp xúc là 60 phút (tỉ lệ mẫu sống sạch 76,70 %), còn đối với mẫu ngọn mía mang lá non thì thời gian tiếp xúc là 45 phút (85 %). Iii) Môi trường thích hợp nhất để tạo mô sẹo từ mẫu cấy lá non là 2,5 mg/l 2,4-D+ 6 ppm nano bạc cho tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo là 96,70 %.
iv) Môi trường bổ sung 1,5 mg/l BA + 0,2 mg/l kinetine + 4 ppm nano bạc cho tỉ lệ mẫu bật chồi, số lượng chồi cũng như chất lượng chồi tái sinh từ mô sẹo mẫu lá non là tốt nhất với tỉ lệ mẫu bật chồi là 96,67 % và số chồi/mẫu 161,33 (chồi).