Nghiên Cứu Thành Phần Hóa Học Cao Ethyl Acetate Từ Lá Cây Chùm Ruột (Phyllanthus acidus)

Luận văn thạc sĩ khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate từ lá cây chùm ruột Phyllanthus acidus L. Skeels, cung cấp thông tin quý giá cho nghiên cứu.

• Tác giả: Hồ Thanh Thúy
• Người hướng dẫn: TS. Bùi Xuân Hào
• Trường học: Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Hóa hữu cơ
• Đề tài: Nghiên Cứu Thành Phần Hóa Học Cao Ethyl Acetate Từ Lá Cây Chùm Ruột (Phyllanthus acidus)
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2020
• Địa điểm: Thành phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• MỞ ĐẦU. MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG 1: ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT
• 1.1. Giới thiệu sơ lược về họ Thầu dầu
• 1.2. Giới thiệu về chi Phyllanthus
• 1.3. Mô tả về cây chùm ruột
• 1.4. Công dụng theo dân gian và y học cổ truyền
• 1.5. Dược tính
• 2. CHƯƠNG 2: THÀNH PHẦN HÓA HỌC
• 2.1. Thành phần hóa học trong rễ cây Chùm ruột
• 2.2. Thành phần hóa học trong lá cây Chùm ruột
• 3. CHƯƠNG 3: HÓA CHẤT, THIẾT BỊ, PHƯƠNG PHÁP
• 3.1. Hóa chất
• 3.2. Thiết bị
• 3.3. Thực nghiệm
• 3.4. Nguyên liệu
• 4. CHƯƠNG 4: PHÂN LẬP MỘT SỐ CHẤT HỮU CƠ TRONG CAO ETHYL ACETATE
• 5. CHƯƠNG 5: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 6. CHƯƠNG 6: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• PHỤ LỤC

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nghiên Cứu Thành Phần Hóa Học Chùm Ruột

Cây Chùm Ruột (Phyllanthus acidus) từ lâu đã được sử dụng trong y học cổ truyền. Nghiên cứu về thành phần hóa học của cây, đặc biệt là lá, còn hạn chế. Mục tiêu của nghiên cứu này là khảo sát thành phần hóa học trong cao ethyl acetate của lá cây Chùm Ruột. Việc này nhằm đóng góp vào danh mục các hợp chất hiện diện, tìm kiếm thêm các hợp chất có hoạt tính sinh học. Các nghiên cứu trước đây tập trung vào rễ cây, chưa đầy đủ về lá. Nghiên cứu này hướng đến việc lấp đầy khoảng trống kiến thức, khám phá tiềm năng dược lý từ lá cây Chùm Ruột.

1.1. Giới Thiệu Chung Về Cây Chùm Ruột Phyllanthus acidus

Cây Chùm Ruột, tên khoa học Phyllanthus acidus (L.) Skeels, thuộc họ Thầu Dầu (Euphorbiaceae). Cây còn có tên gọi khác như tầm ruột, chùm guột. Nguồn gốc từ Madagasca, sau đó du nhập vào nhiều nước châu Á, châu Phi, và Việt Nam. Thân cây nhẫn, lá mỏng, mềm. Hoa nhỏ, màu đỏ, hoa đực và hoa cái trên cùng một cây. Quả mọng, màu vàng nhạt khi chín, vị chua ngọt. Nghiên cứu này tập trung vào lá, bộ phận chưa được khai thác triệt để về mặt hóa học và dược lý. Phyllanthus acidus là một nguồn tiềm năng cho các hợp chất có giá trị.

1.2. Ứng Dụng Y Học Cổ Truyền Của Cây Chùm Ruột

Trong y học cổ truyền, quả Chùm Ruột được dùng để ăn sống, nấu canh giải nhiệt, chữa nhức đầu. Lá giã với hạt tiêu đắp lên chỗ đau ở hông, háng. Rễ có độc tính, được dùng với liều lượng nhỏ để chữa hen. Quả có vị chua, tính mát, tác dụng giải nhiệt, làm se. Lá và rễ có tính nóng, làm tan ứ huyết, tiêu độc, sát trùng, chống độc đối với nọc rắn. Các bài thuốc dân gian này cho thấy tiềm năng dược lý to lớn của cây Chùm Ruột, cần được nghiên cứu sâu hơn.

II. Cách Chiết Xuất Cao Ethyl Acetate Từ Lá Chùm Ruột Hiệu Quả

Để nghiên cứu thành phần hóa học của lá cây Chùm Ruột, cần thực hiện quy trình chiết xuất. Bắt đầu bằng việc điều chế cao methanol thô bằng phương pháp ngâm dầm. Tiếp theo, sử dụng phương pháp chiết lỏng-lỏng để điều chế các phân đoạn cao khác nhau, bao gồm phân đoạn ethyl acetate. Phân đoạn này được chọn vì chứa nhiều hợp chất có khả năng hòa tan trong ethyl acetate. Việc tối ưu hóa quy trình chiết xuất là yếu tố quan trọng để thu được lượng cao ethyl acetate chất lượng, giàu hợp chất có hoạt tính sinh học.

2.1. Phương Pháp Chiết Xuất Cao Thô Methanol Bằng Ngâm Dầm

Phương pháp ngâm dầm là kỹ thuật chiết xuất truyền thống, đơn giản, hiệu quả. Lá cây Chùm Ruột sau khi thu hái, rửa sạch, phơi khô, xay thành bột thô được ngâm trong dung môi methanol. Methanol là dung môi phân cực, có khả năng hòa tan nhiều hợp chất khác nhau. Quá trình ngâm dầm diễn ra trong thời gian nhất định, thường xuyên khuấy trộn để tăng hiệu quả chiết xuất. Cao methanol thô thu được chứa hỗn hợp các hợp chất từ lá cây, cần được phân tách tiếp theo. Cao methanol thô là bước đệm quan trọng cho các phân đoạn sau.

2.2. Chiết Lỏng Lỏng Điều Chế Phân Đoạn Cao Ethyl Acetate

Cao methanol thô sau khi thu được, tiến hành chiết lỏng-lỏng để phân tách các hợp chất dựa trên độ phân cực khác nhau. Sử dụng các dung môi như n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol. Phân đoạn ethyl acetate được chọn vì ethyl acetate có độ phân cực trung bình, có khả năng hòa tan nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học. Quá trình chiết lỏng-lỏng được thực hiện nhiều lần để tăng hiệu quả phân tách. Phân đoạn cao ethyl acetate thu được sẽ được sử dụng cho các bước phân lập và xác định cấu trúc.

III. Phân Lập Hợp Chất Từ Cao Ethyl Acetate Lá Chùm Ruột

Sau khi thu được cao ethyl acetate, bước tiếp theo là phân lập các hợp chất riêng lẻ. Sử dụng sắc ký cột cổ điển với silica gel pha thường hoặc pha đảo, kết hợp với sắc ký lớp mỏng để theo dõi quá trình phân tách. Việc lựa chọn hệ dung môi phù hợp cho sắc ký cột là yếu tố then chốt. Các hợp chất phân lập được sẽ được kiểm tra độ tinh khiết bằng sắc ký lớp mỏng. Mục tiêu là thu được các hợp chất tinh khiết, phục vụ cho việc xác định cấu trúc. Sắc ký cột đóng vai trò quan trọng trong quá trình này.

3.1. Sắc Ký Cột Cổ Điển Với Silica Gel Pha Thường

Sắc ký cột cổ điển sử dụng silica gel làm pha tĩnh. Pha động là hỗn hợp các dung môi có độ phân cực khác nhau. Bằng cách thay đổi tỷ lệ dung môi, các hợp chất sẽ được tách ra dựa trên khả năng hấp phụ khác nhau với silica gel. Việc lựa chọn gradient dung môi phù hợp đòi hỏi kinh nghiệm và thử nghiệm. Các phân đoạn thu được từ sắc ký cột được kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng. Các phân đoạn có thành phần tương tự được gộp lại. Silica gel là vật liệu hấp phụ phổ biến trong sắc ký cột.

3.2. Sắc Ký Lớp Mỏng TLC Kiểm Tra Độ Tinh Khiết

Sắc ký lớp mỏng (TLC) là phương pháp đơn giản, nhanh chóng để kiểm tra độ tinh khiết của các phân đoạn thu được từ sắc ký cột. Các mẫu được chấm lên bản mỏng tráng silica gel và triển khai trong bình chứa dung môi. Sau khi dung môi di chuyển đến độ cao nhất định, bản mỏng được lấy ra và quan sát dưới đèn UV. Các chất tinh khiết sẽ hiển thị một vết duy nhất. TLC cũng được sử dụng để tối ưu hóa hệ dung môi cho sắc ký cột. Sắc ký lớp mỏng là công cụ hữu ích trong quá trình phân lập.

IV. Xác Định Cấu Trúc Hóa Học Bằng Phổ Nghiệm Hiện Đại NMR

Sau khi phân lập được các hợp chất tinh khiết, bước quan trọng tiếp theo là xác định cấu trúc hóa học. Phương pháp chủ yếu được sử dụng là phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR). Sử dụng các phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC, HMBC để xác định các nhóm chức, liên kết trong phân tử. Dữ liệu phổ NMR được so sánh với các dữ liệu đã công bố để xác định cấu trúc. Việc xác định cấu trúc chính xác là cơ sở để đánh giá hoạt tính sinh học của các hợp chất. Phổ NMR là công cụ mạnh mẽ để xác định cấu trúc.

4.1. Phổ 1H NMR và 13C NMR Thông Tin Về Các Nguyên Tử

Phổ 1H-NMR cung cấp thông tin về môi trường hóa học của các proton trong phân tử. Vị trí, độ bội và hằng số ghép của các tín hiệu cho biết các nhóm chức và liên kết xung quanh proton. Phổ 13C-NMR cung cấp thông tin về môi trường hóa học của các carbon. Số lượng tín hiệu cho biết số lượng carbon không tương đương trong phân tử. Kết hợp hai phổ này giúp xác định khung sườn của phân tử. Phổ 1H-NMR và Phổ 13C-NMR cung cấp những thông tin ban đầu quan trọng.

4.2. Phổ HSQC và HMBC Xác Định Liên Kết Giữa Nguyên Tử

Phổ HSQC (Heteronuclear Single-Quantum Correlation spectroscopy) cho biết liên kết trực tiếp giữa các proton và carbon. Phổ HMBC (Heteronuclear Multiple-Bond Correlation spectroscopy) cho biết liên kết xa hơn (thường là 2-3 liên kết) giữa các proton và carbon. Hai phổ này giúp xác định cấu trúc chi tiết của phân tử, bao gồm các vị trí thế và liên kết giữa các phần khác nhau của phân tử. Phổ HSQC và Phổ HMBC là công cụ không thể thiếu trong xác định cấu trúc.

V. Kết Quả Nghiên Cứu Phân Lập và Xác Định Cấu Trúc Hợp Chất

Luận văn đã thành công trong việc phân lập và xác định cấu trúc một số hợp chất từ cao ethyl acetate của lá cây Chùm Ruột. Các hợp chất này thuộc các nhóm hóa học khác nhau, như flavonoid, terpenoid, và các hợp chất phenol. Cấu trúc của các hợp chất này được xác định bằng phổ NMR. Kết quả nghiên cứu đóng góp thêm vào danh mục các hợp chất hiện diện trong lá cây Chùm Ruột. Nghiên cứu này mở ra hướng nghiên cứu về hoạt tính sinh học của các hợp chất này. Kết quả nghiên cứu này là tiền đề quan trọng để tiếp tục tìm hiểu về các ứng dụng của cây Chùm Ruột.

5.1. Tổng Quan Về Các Hợp Chất Đã Được Phân Lập

Nghiên cứu đã phân lập được nhiều hợp chất từ cao ethyl acetate của lá cây Chùm Ruột, bao gồm các hợp chất đã biết và một số hợp chất chưa được báo cáo trước đây. Các hợp chất thuộc các nhóm flavonoid, terpenoid, và phenol. Một số hợp chất thể hiện tiềm năng hoạt tính sinh học cao, như khả năng kháng oxy hóa, kháng viêm, và kháng khuẩn. Các hợp chất này có thể là cơ sở cho việc phát triển các loại thuốc mới. Hợp chất flavonoid và hợp chất terpenoid đóng vai trò quan trọng.

5.2. Dữ Liệu Phổ NMR Của Các Hợp Chất Phân Lập

Luận văn trình bày chi tiết dữ liệu phổ NMR của các hợp chất phân lập được, bao gồm phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC, HMBC. Dữ liệu phổ này được sử dụng để xác định cấu trúc của các hợp chất. Các tín hiệu trong phổ NMR được gán cho các proton và carbon cụ thể trong phân tử. So sánh dữ liệu phổ với các dữ liệu đã công bố giúp xác định chính xác cấu trúc của các hợp chất. Dữ liệu phổ NMR là bằng chứng quan trọng để xác định cấu trúc.

VI. Kết Luận Và Hướng Nghiên Cứu Về Lá Chùm Ruột Trong Tương Lai

Nghiên cứu đã góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học của cao ethyl acetate từ lá cây Chùm Ruột. Các hợp chất phân lập được có tiềm năng ứng dụng trong y học và dược phẩm. Hướng nghiên cứu trong tương lai là tập trung vào đánh giá hoạt tính sinh học của các hợp chất này, cũng như khảo sát thành phần hóa học của các phân đoạn cao khác. Việc khai thác tiềm năng dược lý của lá cây Chùm Ruột có thể mang lại lợi ích to lớn cho sức khỏe cộng đồng. Nghiên cứu trong tương lai sẽ tập trung vào hoạt tính sinh học.

6.1. Tổng Kết Về Các Thành Quả Đạt Được Trong Nghiên Cứu

Luận văn đã hoàn thành các mục tiêu đề ra, bao gồm chiết xuất cao ethyl acetate từ lá cây Chùm Ruột, phân lập các hợp chất từ cao ethyl acetate, và xác định cấu trúc của các hợp chất bằng phổ NMR. Nghiên cứu đã đóng góp thêm vào danh mục các hợp chất hiện diện trong lá cây Chùm Ruột. Các hợp chất phân lập được có tiềm năng hoạt tính sinh học cao. Nghiên cứu này là nền tảng cho các nghiên cứu tiếp theo về cây Chùm Ruột. Thành quả đạt được là động lực cho nghiên cứu tiếp theo.

6.2. Đề Xuất Các Hướng Nghiên Cứu Tiềm Năng Trong Tương Lai

Trong tương lai, cần tập trung vào đánh giá hoạt tính sinh học của các hợp chất phân lập được, như khả năng kháng oxy hóa, kháng viêm, kháng khuẩn, và khả năng chống ung thư. Nghiên cứu về cơ chế tác dụng của các hợp chất này cũng cần được thực hiện. Ngoài ra, cần khảo sát thành phần hóa học của các phân đoạn cao khác, như cao n-butanol và cao chloroform. Việc tối ưu hóa quy trình chiết xuất và phân lập cũng cần được quan tâm. Đánh giá hoạt tính sinh học là hướng đi quan trọng.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Cây Chùm ruột (Phyllanthus acidus (L.) Skeels) thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) là một loài thực vật có giá trị dược liệu được sử dụng rộng rãi trong y học cổ truyền và dân gian tại nhiều quốc gia nhiệt đới, trong đó có Việt Nam. Theo ước tính, họ Thầu dầu ở Việt Nam có khoảng 75 chi với hơn 450 loài, trong đó chi Phyllanthus chiếm số lượng lớn với 44 loài, bao gồm cây Chùm ruột. Lá cây Chùm ruột được biết đến với nhiều công dụng chữa bệnh như giảm đau lưng, chữa lở ngứa, sát trùng và hỗ trợ điều trị các bệnh về gan, xơ nang, viêm nhiễm. Tuy nhiên, các nghiên cứu trước đây chủ yếu tập trung vào thành phần hóa học của rễ cây, trong khi thành phần hóa học của lá cây vẫn chưa được khảo sát đầy đủ.

Mục tiêu của luận văn là khảo sát thành phần hóa học trong cao ethyl acetate của lá cây Chùm ruột thu hái tại huyện Hàm Thuận Bắc, tỉnh Bình Thuận vào tháng 3 năm 2018. Nghiên cứu nhằm phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất hữu cơ có trong phân đoạn cao ethyl acetate, góp phần mở rộng danh mục các hợp chất hiện diện trong lá cây, đồng thời tạo cơ sở khoa học cho việc khai thác và ứng dụng các hoạt chất sinh học từ cây Chùm ruột trong ngành dược phẩm.

Phạm vi nghiên cứu tập trung vào phân đoạn cao ethyl acetate của lá cây, sử dụng các phương pháp chiết xuất, sắc ký và phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) để phân lập và xác định cấu trúc hợp chất. Kết quả nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng trong việc phát triển nguồn nguyên liệu dược liệu tự nhiên, đồng thời hỗ trợ các nghiên cứu tiếp theo về hoạt tính sinh học và ứng dụng y học của cây Chùm ruột.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Luận văn dựa trên các lý thuyết và mô hình nghiên cứu về hóa học tự nhiên và hóa hữu cơ, đặc biệt tập trung vào:

• Hóa học tự nhiên (Natural Products Chemistry): Nghiên cứu thành phần hóa học của thực vật, phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất hữu cơ có hoạt tính sinh học.
• Phương pháp sắc ký phân lập (Chromatographic Techniques): Sử dụng sắc ký cột silica gel pha thường và pha đảo, kết hợp sắc ký lớp mỏng (TLC) để phân tách các hợp chất trong cao ethyl acetate.
• Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR Spectroscopy): Áp dụng phổ ^1H-NMR, ^13C-NMR, HSQC, HMBC để xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất phân lập được.
• Khái niệm chính: Cao ethyl acetate, triterpenoid, phenolic, phân đoạn chiết xuất, cấu trúc hợp chất, hoạt tính sinh học.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Lá cây Chùm ruột được thu hái tại huyện Hàm Thuận Bắc, tỉnh Bình Thuận, Việt Nam, tháng 3 năm 2018. Mẫu được làm sạch, phơi khô và xay thành bột mịn (25 kg).
• Phương pháp chiết xuất: Ngâm đậm bột lá trong methanol ở nhiệt độ phòng để thu dịch chiết methanol thô (991 g). Dịch chiết được phân tách bằng phương pháp chiết lỏng-lỏng với các dung môi n-hexane, chloroform, ethyl acetate và n-butanol, thu được các phân đoạn cao tương ứng.
• Phân lập hợp chất: Sử dụng sắc ký cột silica gel với hệ dung môi tăng dần độ phân cực (H:EA, H:EA:Ac) để phân tách cao ethyl acetate thành các phân đoạn nhỏ. Theo dõi quá trình phân tách bằng sắc ký lớp mỏng.
• Xác định cấu trúc: Phổ NMR (^1H, ^13C, HSQC, HMBC) được thu tại các phòng thí nghiệm chuyên dụng để phân tích cấu trúc các hợp chất phân lập.
• Cỡ mẫu và timeline: Tổng cộng 25 gam cao ethyl acetate được phân tích, quá trình nghiên cứu thực hiện trong khoảng thời gian từ tháng 3 năm 2018 đến tháng 12 năm 2020.

Phương pháp nghiên cứu được lựa chọn nhằm đảm bảo độ chính xác cao trong việc phân lập và xác định cấu trúc hợp chất, đồng thời phù hợp với đặc điểm hóa học phức tạp của các hợp chất tự nhiên trong lá cây Chùm ruột.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Phân lập được 7 hợp chất chính từ cao ethyl acetate của lá cây Chùm ruột, bao gồm:

   • Hai hợp chất triterpenoid: Phyllanthol (TR1) và olean-12-en-3β,15α-diol (TR2).
   • Ba hợp chất flavonoid: Kumatakenin (TR3), Kaempferol (TR4), Quercetin (TR5).
   • Hai hợp chất phenolic acid: 4-hydroxybenzoic acid (TR6) và Protocatechuic acid (TR7).

2. Hợp chất TR1 (Phyllanthol) được xác định có khung sườn 13,27-cycloursane với bảy nhóm methyl đặc trưng, tan tốt trong chloroform, không hấp thụ UV, có các tín hiệu proton methine liên kết với oxygen tại δ 3.5 ppm. Phân tích phổ NMR cho thấy sự tương đồng với dữ liệu tham khảo, khẳng định cấu trúc hợp chất.

3. Hợp chất TR2 (Olean-12-en-3β,15α-diol) có 30 tín hiệu carbon, bao gồm các tín hiệu olefin và oxymethine đặc trưng cho triterpenoid olean-12-ene. Phổ NMR tương đồng với hợp chất olean-12-en-3,15α-diol đã được công bố, đây là hợp chất lần đầu tiên được phát hiện trong chi Phyllanthus.

4. Các hợp chất flavonoid TR3, TR4, TR5 có cấu trúc tương tự các flavonoid đã biết như kumatakenin, kaempferol và quercetin, với các nhóm thế methoxy và hydroxyl đặc trưng. Các hợp chất này có khả năng hấp thụ UV và cho vết sắc ký rõ ràng trên TLC.

5. Hai hợp chất phenolic acid TR6 và TR7 được xác định là 4-hydroxybenzoic acid và protocatechuic acid, có cấu trúc vòng benzene với các nhóm thế hydroxyl và carboxyl, phù hợp với dữ liệu phổ NMR tham khảo.

Thảo luận kết quả

Việc phân lập thành công 7 hợp chất từ cao ethyl acetate của lá cây Chùm ruột cho thấy sự đa dạng hóa học phong phú của bộ phận lá, bổ sung thêm kiến thức về thành phần hóa học ngoài rễ cây vốn đã được nghiên cứu trước đây. Hai hợp chất triterpenoid TR1 và TR2 có cấu trúc đặc trưng, trong đó TR2 là hợp chất mới lần đầu tiên được phát hiện trong chi Phyllanthus, mở ra hướng nghiên cứu mới về hoạt tính sinh học và ứng dụng dược liệu.

Các flavonoid và phenolic acid phân lập được đều là những hợp chất có hoạt tính chống oxy hóa, kháng viêm và kháng khuẩn đã được chứng minh trong nhiều nghiên cứu trước đây, phù hợp với công dụng dân gian của cây Chùm ruột trong điều trị các bệnh viêm nhiễm và tổn thương gan. So sánh với các nghiên cứu quốc tế, kết quả này tương đồng với các báo cáo về hoạt tính sinh học của dịch chiết methanol và ethyl acetate từ lá cây.

Dữ liệu phổ NMR được trình bày chi tiết qua các bảng và biểu đồ phổ giúp minh chứng rõ ràng cấu trúc các hợp chất, đồng thời làm cơ sở cho các nghiên cứu tiếp theo về hoạt tính sinh học và phát triển sản phẩm dược liệu từ cây Chùm ruột.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Tiếp tục phân lập và khảo sát các phân đoạn cao khác của lá cây Chùm ruột chưa được nghiên cứu để phát hiện thêm các hợp chất mới có hoạt tính sinh học tiềm năng. Thời gian thực hiện đề xuất trong 1-2 năm, do các phòng thí nghiệm chuyên sâu đảm nhận.

2. Khảo sát hoạt tính sinh học cụ thể của các hợp chất đã phân lập, như hoạt tính kháng khuẩn, chống oxy hóa, bảo vệ gan, chống viêm, nhằm đánh giá tiềm năng ứng dụng trong y học và dược phẩm. Nên thực hiện các thử nghiệm in vitro và in vivo trong vòng 1 năm.

3. Phát triển quy trình chiết xuất và tinh chế các hợp chất có hoạt tính sinh học cao từ lá cây Chùm ruột để ứng dụng trong sản xuất thuốc hoặc thực phẩm chức năng. Cần phối hợp với các đơn vị công nghiệp dược liệu trong 2-3 năm.

4. Xây dựng cơ sở dữ liệu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của cây Chùm ruột phục vụ nghiên cứu khoa học và phát triển sản phẩm, đồng thời góp phần bảo tồn nguồn gen và khai thác bền vững. Chủ thể thực hiện là các viện nghiên cứu và trường đại học.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Nhà nghiên cứu và sinh viên ngành Hóa học hữu cơ và Hóa dược: Luận văn cung cấp dữ liệu chi tiết về phương pháp phân lập và xác định cấu trúc hợp chất tự nhiên, giúp nâng cao kiến thức và kỹ năng thực nghiệm.

2. Chuyên gia và doanh nghiệp trong ngành dược liệu và dược phẩm: Thông tin về thành phần hóa học và tiềm năng hoạt tính sinh học của lá cây Chùm ruột hỗ trợ phát triển sản phẩm mới từ nguồn nguyên liệu tự nhiên.

3. Người làm công tác bảo tồn và phát triển nguồn gen thực vật: Nghiên cứu góp phần làm rõ giá trị dược liệu của cây Chùm ruột, từ đó xây dựng chiến lược bảo tồn và khai thác hợp lý.

4. Cán bộ quản lý và hoạch định chính sách trong lĩnh vực y học cổ truyền và dược liệu: Cung cấp cơ sở khoa học để xây dựng các chương trình phát triển dược liệu bản địa, thúc đẩy ứng dụng khoa học công nghệ trong y học truyền thống.

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao chọn cao ethyl acetate để nghiên cứu thành phần hóa học?
   Cao ethyl acetate có khả năng chiết xuất các hợp chất trung bình phân cực như triterpenoid và flavonoid, giúp phân lập được nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học quan trọng mà các dung môi khác như n-hexane hay chloroform không chiết xuất hiệu quả.

2. Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất được sử dụng là gì?
   Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) bao gồm ^1H-NMR, ^13C-NMR, HSQC và HMBC được sử dụng để xác định cấu trúc chi tiết của các hợp chất phân lập, cho phép xác định vị trí các nhóm thế và liên kết trong phân tử.

3. Có hợp chất nào mới được phát hiện trong nghiên cứu này không?
   Hai hợp chất triterpenoid olean-12-en-3β,15α-diol (TR2) và flavonoid kumatakenin (TR3) được phát hiện lần đầu tiên trong chi Phyllanthus, mở ra hướng nghiên cứu mới về hoạt tính và ứng dụng.

4. Các hợp chất phân lập có ứng dụng gì trong y học?
   Các hợp chất như flavonoid và phenolic acid có hoạt tính chống oxy hóa, kháng viêm, kháng khuẩn và bảo vệ gan, phù hợp với các công dụng dân gian của cây Chùm ruột trong điều trị các bệnh viêm nhiễm và tổn thương gan.

5. Nghiên cứu này có thể hỗ trợ phát triển sản phẩm dược liệu như thế nào?
   Kết quả nghiên cứu cung cấp cơ sở khoa học để phát triển các sản phẩm chiết xuất từ lá cây Chùm ruột có hoạt tính sinh học cao, đồng thời giúp xây dựng quy trình chiết xuất và tinh chế hiệu quả, góp phần nâng cao giá trị kinh tế và y học của nguồn nguyên liệu bản địa.

Kết luận

• Phân lập thành công 7 hợp chất chính từ cao ethyl acetate của lá cây Chùm ruột, bao gồm triterpenoid, flavonoid và phenolic acid.
• Hai hợp chất triterpenoid TR1 và TR2 có cấu trúc đặc trưng, trong đó TR2 là hợp chất mới lần đầu tiên phát hiện trong chi Phyllanthus.
• Các flavonoid và phenolic acid phân lập có tiềm năng hoạt tính sinh học phù hợp với công dụng dân gian của cây.
• Phương pháp sắc ký và phổ NMR được áp dụng hiệu quả trong việc phân lập và xác định cấu trúc hợp chất.
• Đề xuất nghiên cứu tiếp tục phân lập các phân đoạn cao khác và khảo sát hoạt tính sinh học để phát triển ứng dụng dược liệu.

Tiếp theo, cần triển khai các nghiên cứu hoạt tính sinh học và phát triển quy trình chiết xuất quy mô lớn nhằm ứng dụng kết quả nghiên cứu vào thực tiễn. Các nhà nghiên cứu và doanh nghiệp trong lĩnh vực dược liệu được khuyến khích hợp tác để khai thác tiềm năng của cây Chùm ruột.

Trích đoạn nội dung tài liệu

MỞ ĐẦU.-a sẽ ẽê ẽ sẽ. Đặc điểm thực vật.---s--SS2s SE TT H1 311117111 1171111211111. Giới thiệu sơ lược về họ Thầu dau. Giới thiệu về chỉ PÏiylfawtlhiuv.

Mô tả về cây chùm ruột. Công dụng theo dân gian và y học cô truyền. Thành phẩn(HGRÌDDE:s:asssu6s:isciiiantiiiiicioctiti20002101021002101210001312213130331100210230183638245 7 1. Thanh phần hóa học trong rễ cây Chùm ruột.

Thành phan hóa học trong lá cây Chùm ruột. Hóa chat, thiết bị, phương pháp. lầ MD, IHGREHND,. TiGt Bice cece.

13 MED, MMC HEHICHS:.ÌNEHVÊHIHỆU:::::::sciiccetieiirsgiitii12111103122125251583312313533398392213825538855g335539553451553828 13 BeBe Chie CA NING Du nnu2201221003010510962030331700320033501220102100371162717231051019172118020784 14 2. Phân lập một số chat hữu cơ trong cao ethyl acetate. Phân lập một số chất hữu co trong phân đoạn EAL. Phân lập một số chất hữu cơ trong phân đoạn EA2.

Phan lập một số chất hữu cơ trong phân đoạn EA3. KET QUA VÀ THẢO LUẬN. Khảo sát cầu trúc hợp chat 'TRI.¿- 22 222222232 xzcxxrzxrzzzrrzcrsec 19 3:2, Khảo sắt cầu trite hợp bất TR sssssisesisassscssassssosisssisassssssisssinesssensasesioainsanics 22 3. Khảo sát cau trúc hợp chất TR3.- -2-©2+©s£2Cx222xEc2ExzcEEzcrrzerre 25 3.

Khảo sát cầu trúc hợp chất TR4. Khảo sát cấu trúc hợp chất TR5. Khao sat cầu trúc hợp chất TR6. Khảo sát cầu trúc hợp chất TR.----cs-cccccccsacrieerkeerrerkee 36 KET LUẬN VÀ KIEN NGHỊ,.

22222 222102111221121771227 1121112 182ecd 38 TÀI LIEU THAM KHẢO. 0 2 2 212201221221122102 1100012111 1 g0 40 PHỤ LỤC DANH MUC CAC KY HIEU VA CHU VIET TAT Ac : Acetone br : Broad (rộng) : Chloroform : Doublet (mũi đôi) dd : Doublet of doublet (mũi đôi đôi) DMSO : Dimethyl sulfoxide EA : Ethyl acetate H : n-hexane HMBC : Heteronuclear multiple-bond correlation spectroscopy (Phé tuong quan H - C qua nhiều nỗi) HSQC : Heteronuclear single-quantum correlation spectroscopy (Phỏ tương quan H - C qua một nối) Hz : Hertz ICso : Inhibitory Concentration 50% (Nông độ ức chế 50%) : Coupling constant ( Hằng số ghép) m : Multiplet (mũi đa) Me : Methanol NMR : Nuclear magnetic resonance (cộng hướng từ hat nhân) : Singlet (mũi don) SKC : Sắc ký cột SKLM : Sắc ký lớp mỏng : Triplet (mũi ba) : Chemical shift (Độ chuyên địch hoá học) DANH MỤC CÁC BÁNG Bảng 2. Kết qua sắc ký cột silica gel trên cao ethyl acetate. Kết quả sac ký cột silica gel trên phân đoạn EA I.

Kết quả sắc ký cột silica gel trên phân đoạn EA3. Dữ liệu pho "H-NMR và '°C-NMR của hợp chất TRÌ. Dữ liệu pho 'H-NMR và '3C-NMR của hợp chất TR2. Dữ liệu pho H-NMR và '$C-NMR của hợp chất TR3.

Dữ liệu phô 'H-NMR và !3C-NMR của hợp chat TR4. Dữ liệu pho "H-NMR và C-NMR của hợp chat TRŠ. Dữ liệu phô 'H-NMR và "C-NMR của hợp chất TR6. Dữ liệu pho "H-NMR và 'C-NMR của hợp chất TR7.

37 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1. Một số loài thuộc chỉ PfayÍÍarifÍtuv3. Cây Chùm ruột Hình 1. Cau trúc của hợp chất 'TRR.-----2-©2222222222EEz£EEESEEzS2Ezcrxzcrxrcrvee 20 Hình 3.

Cate ea Gi Gat PRD ga anaaaeaaaaaaaoenene 23 Hình 3. Cau trúc của hợp chất TR3. Cấu trúc của hợp chất 'TIR4. Cau trúc của hợp chất TRRð.

Cau trúc của hợp chất 'TÍR6. Cấu trúc của hợp chất TR .ccssccssessscssscosssassvassccsassosssssnassscsssncasnessbassss 37 DANH MỤC SƠ DO Sơ 46 2. Quy trình điều chế các loại cao của lá cây chùm ruột Sơ đồ 2. Quy trình cô lập các hợp chất trong cao ethyl acetate MỞ DAU 1.

Lí do chọn đề tài Từ lâu, thảo dược và các bài thuốc dân gian đã góp phân to lớn trong sự phát triển của y học cô truyền. Đặc biệt trong cuộc sông hiện đại con người ngày càng có xu hướng sử dụng được liệu bởi nó ít có tác dụng phụ và phù hợp với qui luật sinh lý của cơ thé. Một số thực vật được coi là nguồn dinh dưỡng quan trong, do đó chúng được khuyến cáo sử dụng hỗ trợ chữa bệnh. Trong hệ thực vật ở Việt Nam, Thau dau (Euphorbiaceae) là một ho lớn.

rất đa dang, có tới 75 chi với khoảng trên 450 loài; trong đó có 1 chỉ va 131 loài được coi là đặc hữu. Hau hết các loài và chi trong họ Thau dau đều có chứa các hợp chất tự nhiên thuộc các nhóm triterpenoid, alkaloid, diterpenoid, diterpene ester, phorbol diterpene, flavonoid. Rất nhiều hợp chất mới có hoạt tính sinh học cao đã được phân lập va xác định, đó là những hợp chất có nhiều triển vọng ứng dụng trong công nghiệp dược. Nghiên cứu các cơ sở khoa học nhằm khai thác phát triển, bảo ton và sử dụng có hiệu quả nguồn hoạt chất sinh học từ các loài trong họ Thau dau (Euphorbiaceae) ở Việt Nam là van dé ngày càng được quan tâm [1].

Cùng với các cây trong chi Phyllanthus (họ Thau dầu) như Chó đẻ thân xanh (Phyllanthus niruri), Diệp hạ châu đẳng (Phyllanthus amarus schum), Chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria), Me rừng (Phyllanthus emblica),. cay Chùm ruột (Phyllanthus acidus) đã được sử dung từ lâu trong những bài thuốc y học cô truyền như lá cây chữa dau lưng, vỏ thân cây chữa suy tim, lở ngứa, ghẻ, loét, vết thương sứt đa chảy máu. bột vỏ thân ngâm giấm uống chữa bệnh tri [2],. Ngoài ra các nghiên cứu về các hoạt tính sinh học như hoạt tính kháng khuẩn [3], khả năng chữa bệnh xơ nang [4].

chữa tri ton thương gan [5],. cũng được khảo sát. Hiện nay, trên thế giới đã có nhiều nghiên cứu về cây Chùm ruột trong các lĩnh vực sinh học, hóa học. Ở Việt Nam, các nghiên cứu trước đây về cây Chùm ruột chỉ tập trung ở bộ phận rễ cây, thành phan hóa học lá cây Chùm ruột được nghiên cứu chưa day đủ.

Vì vậy tôi quyết định thực hiện đẻ tài “Khảo sát thành phần hóa học cao Ethyl Acetate lá cây Chùm ruột (PhyHanthus acidus (L.) skeels)” để tiếp tục khảo sát thành phần hóa học lá cây Chùm ruột, hy vọng nhằm tìm kiếm thêm các hợp chất có hoạt tính sinh học có ứng dụng cao. Mục đích nghiên cứu Kháo sát thành phần hóa học trong cao ethyl acetate của lá cây Chùm ruột (Phyllanthus acidus (L.) Skeels), góp phần đóng góp thêm vào danh mục các hợp chất hiện điện trong lá cây. Đối tượng và phạm ví nghiên cứu 3. Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu trong luận văn là lá cây Chùm ruột (Phyllanthus acidus (L.) Skeels), đã được thu hái vào tháng 03 năm 2018 tại huyện Hàm Thuận Bắc, tỉnh Bình Thuận.

Mẫu nguyên liệu sau khi thu hái được rửa sạch, loại bỏ phan sâu bệnh, phơi khô và xay thành bột thô. Phạm vi nghiên cứu Tập trung nghiên cứu thành phần hóa học của lá cây Chùm ruột ở phân đoạn cao ethyl acetate. Nhiệm vụ đề tài - Điều chế cao methanol thô bằng phương pháp ngâm dam. - Dùng phương pháp chiết lỏng - long dé điều chế các phân đoạn cao khác nhau.

- Dùng sắc ký cột cô điển với silica gel pha thường hoặc pha đảo, kết hợp với sắc ký lớp mỏng dé phân lập một số hợp chat. - Khảo sát và xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được bằng các phương pháp phô nghiệm hiện dai, chủ yếu là phô cộng hưởng tử hạt nhân. Phương pháp nghiên cứu - Diéu chế cao thô methanol bằng kỹ thuật ngâm dam. - Điều chế cao phân đoạn bang phương pháp chiết phân bố lỏng - lỏng.

- Phân lập các hợp chất bằng phương pháp sắc ký cột. - Xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được bằng các phương pháp pho nghiệm hiện dai, chủ yêu là phd cộng hưởng từ hat nhân. Đặc điểm thực vật 1. Giới thiệu sơ lược về họ Thầu dầu Trong hệ thực vật Việt Nam, Thau dầu (Euphorbiaceae) được coi là họ lớn, giàu loài thứ tư (sau các họ Lan - Orchidaceae, Đậu - Leguminosac, Lúa - Graminae) trong số 305 họ.

Ở Việt Nam, họ Thau dau hiện đã biết có 75 chi cùng khoảng trên 450 loài và 16 thứ, trong số đó có I chỉ (Noi - Oligoceras). cùng 131 loài (chiếm 31,58% số loài của cả họ) và 9 thứ (khoảng 56,25%) được coi là đặc hừu. Phần lớn các loài và thứ đặc hữu đều chỉ gặp phân bố rat hạn chế ở một vài địa phương trong cả nước. Sách Đỏ Việt Nam (1996, 2007) đã ghi nhận có 5 loài của họ Thau dau thuộc loại quý hiểm và bị de doa tuyệt chủng.

Các chỉ có số loài phong phú va đa dạng nhất trong họ Thau dau lần lượt là Me (Phyllanthus), Ba đậu (Croton), Ba bét (Mallotus), Choi modi (Antidesma), Co sữa (Euphorbia), Bot ếch (Glochidion), Mong lông (Trigonostemon), Rau ngót (Sauropus), Bỏ cu vẽ (Breynia), Ba soi (Macaranga), Cách hoa (Cleistanthus), Thau tau (Aporosa), Thé mật (Bridelia), Da gà (Actephila), Tai tượng (Acalypha) và các chi khác. Các chỉ có số loài được coi là đặc hữu phong phú lần lượt là: Chi Sô loài Chi Số loài Me (Phyllanthus) 26 Cách hoa (Cleistanthus) 7 Ba dau (Croton) 19 Ba bét (Mallotus) 6 Mong lông (Trigonostemon) 10 Da ga (Actephila) 6 Rau ngót (Sauropus) 9 Bot éch (Glochidion) 5 Bo cu vé (Breynia) 8 Vong do (Alchornea) + Các dạng sông gặp ở họ Thau dau có thẻ là cỏ hàng năm, co nhiều năm, bụi, bụi trườn, đây leo, gỗ nhỏ hoặc gỗ lớn. Chúng phân bố khá rộng rãi ở các hệ sinh thái khác nhau từ các vùng ven biên, ruộng vườn, đồng cỏ đến các thảm cây bụi và các loại hình rừng thứ sinh hoặc nguyên sinh trên núi cao []]. Giới thiệu về chỉ Phyllanthus Các loài thực vật thuộc chỉ Phylianthus, họ Thau Dau phân bố chủ yếu hau hết ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới.

Ở Việt Nam có 44 loài, các loài được chú ý hơn cả là Chó đẻ thân xanh (Phyllanthus niruri), Diệp ha châu trang (Phyllanthus amarus schum), Chỗ đẻ rang cưa (Phyllanthus urinaria), Chùm ruột (Phyllanthus acidus), Me rừng (Phyllanthus emblica). Các cây thuộc chi Phyllanthus là loại cây đơn tính; lá kép, kiều mọc so le hoặc mọc đối; hoa nhỏ, mọc tập trung dạng hình cốc, có màu trắng, màu xanh lục hoặc trắng xanh. Quả có dạng thay nang, thường có cuồng đài [6]. Mô tả về cây chùm ruột 1.

Giới thiệu chung [7] Tên khoa học: Phyllanthus acidus (L.) Skeels Tên khác: Cicca acida (L.) Merr Phyllanthus distichus Muell-Arg. Tén thudng goi: cay tam ruột, chùm ruột, chùm guột, tầm ruộc, mak nhôm. Tên nước ngoài: Stargoose-berry, country gooseberry (Anh), phyllanthe bifaríe (Pháp). Hệ thống phân loại: Bộ (Ordor): Thầu dầu (Euphorbiaceae).

Mô tả thực vật lục nhạt, cành già có vỏ màu xám mang nhiều sẹo đo lá cũ dé lại, thân nhẫn. Lá mềm, mong, mặt trên màu xanh nhạt, mặt dưới màu nhạt hơn, dài 4-5 cm, rộng 18- 20 mm, phía cuồng tủ hay hơi tròn, đầu phiến nhọn. Lá kép mọc so le, có cuống đài, lá chét mỏng, gốc tron, đầu nhọn, gân lá rõ ở cả hai mặt, lá kèm có răng. Hoa mọc thành xim dom nhị lệ trên những cành gây nhỏ, đài 6-15 cm, tụ thành từng cụm 4-7 hoa trên những mau tròn, ở kẽ những lá đã rụng.

Hoa nhỏ màu đỏ, hoa cai và hoa đực ở cùng một cây, hoa đực có dai 4 răng, 4 nhị, rời.