Nghiên Cứu Thành Phần Hóa Học Cao Chloroform Của Rễ Cây Bồng Bồng (Calotropis gigantea)

Khóa luận nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn j cao chloroform từ rễ cây bồng bồng Calotropis gigantea thuộc họ thiên lý Asclepiadaceae.

• Tác giả: Doan Thị Phương
• Người hướng dẫn: PGS. Nguyễn Trung Nhân
• Trường học: Trường Đại Học Sư Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Hóa Hữu Cơ
• Đề tài: Nghiên Cứu Thành Phần Hóa Học Cao Chloroform Từ Rễ Cây Bồng Bồng (Calotropis gigantea)
• Loại tài liệu: Khóa Luận Tốt Nghiệp
• Năm xuất bản: 2014
• Địa điểm: Thành Phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Giới thiệu về họ Thiên lý Asclepiadaceae
• 1.2. Giới thiệu về cây bồng bồng (Calotropis gigantea Linn)
• 1.3. Phân bố
• 1.4. Bộ phận dùng
• 1.5. Thành phần hóa học
• 1.6. Công dụng dân gian và hoạt tính sinh học
• 2. CHƯƠNG 2: KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA CÁC HỢP CHẤT
• 2.1. Các phương pháp sử dụng trong thực nghiệm
• 2.2. Khảo sát cấu trúc hóa học của các hợp chất
• 3. CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Các phương pháp sử dụng trong thực nghiệm
• 3.2. Ly trích các loại cao: petroleum ether, chloroform, ethyl acetate
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu thành phần hóa học cao chloroform

Nghiên cứu thành phần hóa học của cao chloroform từ rễ cây bồng bồng (Calotropis gigantea) đang thu hút sự chú ý của nhiều nhà khoa học. Cây bồng bồng không chỉ nổi bật với vẻ đẹp tự nhiên mà còn chứa nhiều hợp chất có giá trị trong y học. Việc phân tích thành phần hóa học của cây này có thể mở ra hướng đi mới trong việc phát triển các loại thuốc từ thiên nhiên.

1.1. Giới thiệu về cây bồng bồng Calotropis gigantea

Cây bồng bồng, hay còn gọi là Calotropis gigantea, thuộc họ Thiên lý (Asclepiadaceae). Cây có chiều cao từ 5-7m, thường mọc ở các vùng nhiệt đới. Rễ cây chứa nhiều hợp chất hóa học có tiềm năng ứng dụng trong y học.

1.2. Tầm quan trọng của nghiên cứu thành phần hóa học

Nghiên cứu thành phần hóa học của cây bồng bồng giúp xác định các hợp chất có hoạt tính sinh học. Điều này không chỉ có ý nghĩa trong việc phát triển thuốc mà còn góp phần bảo tồn và phát huy giá trị của cây thuốc truyền thống.

II. Vấn đề và thách thức trong nghiên cứu cây bồng bồng

Mặc dù cây bồng bồng có nhiều tiềm năng, nhưng việc nghiên cứu và ứng dụng các hợp chất từ cây này vẫn gặp nhiều thách thức. Các vấn đề như thiếu tài liệu nghiên cứu, khó khăn trong việc chiết xuất và phân tích các hợp chất hóa học là những trở ngại lớn.

2.1. Thiếu tài liệu nghiên cứu về Calotropis gigantea

Số lượng tài liệu nghiên cứu về cây bồng bồng còn hạn chế, đặc biệt là trong lĩnh vực hóa học. Điều này gây khó khăn cho các nhà nghiên cứu trong việc xây dựng cơ sở dữ liệu và phát triển các nghiên cứu tiếp theo.

2.2. Khó khăn trong chiết xuất và phân tích hợp chất

Quá trình chiết xuất và phân tích các hợp chất từ rễ cây bồng bồng đòi hỏi kỹ thuật cao và thiết bị hiện đại. Việc này không chỉ tốn kém mà còn cần nhiều thời gian và công sức.

III. Phương pháp chiết xuất và phân tích hợp chất từ rễ cây bồng bồng

Để nghiên cứu thành phần hóa học của rễ cây bồng bồng, các phương pháp chiết xuất hiện đại được áp dụng. Các phương pháp này giúp cô lập và xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất có trong cây.

3.1. Phương pháp chiết xuất cao chloroform

Cao chloroform được chiết xuất từ rễ cây bồng bồng bằng phương pháp Soxhlet. Phương pháp này cho phép thu được các hợp chất có hoạt tính sinh học cao, từ đó phục vụ cho các nghiên cứu tiếp theo.

3.2. Phân tích cấu trúc hóa học bằng NMR

Phân tích cấu trúc hóa học của các hợp chất chiết xuất được thực hiện bằng phương pháp cộng hưởng từ hạt nhân (NMR). Phương pháp này giúp xác định chính xác cấu trúc của các hợp chất, từ đó đánh giá tiềm năng ứng dụng trong y học.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn

Kết quả nghiên cứu cho thấy rễ cây bồng bồng chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học, như flavonoid và steroid. Những hợp chất này có thể được ứng dụng trong việc phát triển thuốc chữa bệnh.

4.1. Các hợp chất chính được phát hiện

Nghiên cứu đã phát hiện nhiều hợp chất quan trọng như calotropin và uscharin. Những hợp chất này có khả năng chống viêm, giảm đau và có tác dụng bảo vệ gan.

4.2. Ứng dụng trong y học

Các hợp chất chiết xuất từ rễ cây bồng bồng có thể được ứng dụng trong việc phát triển các loại thuốc mới. Điều này không chỉ giúp nâng cao hiệu quả điều trị mà còn giảm thiểu tác dụng phụ so với thuốc tổng hợp.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu

Nghiên cứu thành phần hóa học cao chloroform từ rễ cây bồng bồng mở ra nhiều cơ hội mới trong lĩnh vực y học. Việc tiếp tục nghiên cứu và phát triển các hợp chất từ cây này có thể mang lại nhiều lợi ích cho sức khỏe con người.

5.1. Tương lai của nghiên cứu cây bồng bồng

Với tiềm năng lớn, cây bồng bồng cần được nghiên cứu sâu hơn để khai thác triệt để các hợp chất có giá trị. Các nghiên cứu tiếp theo có thể tập trung vào việc phát triển các sản phẩm từ thiên nhiên.

5.2. Khuyến nghị cho nghiên cứu tiếp theo

Cần tăng cường hợp tác giữa các nhà nghiên cứu và các tổ chức y tế để thúc đẩy nghiên cứu về cây bồng bồng. Việc này sẽ giúp nâng cao giá trị ứng dụng của cây trong y học và bảo tồn nguồn tài nguyên thiên nhiên.

Nội dung chính

Bối cảnh và vấn đề nghiên cứu

Trong xu thế phát triển của dược phẩm hiện đại, việc sử dụng các loại thuốc tổng hợp hóa học thường đi kèm chi phí điều trị cao và tiềm ẩn nhiều tác dụng phụ bất lợi. Do đó, xu hướng quay về với y học cổ truyền và khai thác nguồn dược liệu tự nhiên đang ngày càng được chú trọng. Nước ta nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, sở hữu hệ thực vật đa dạng và phong phú, tạo điều kiện thuận lợi cho các nghiên cứu hóa học về các hợp chất thiên nhiên.

Dọc theo bờ biển và các vùng cát ven biển Việt Nam, loài cây có hoa tím mọc thành cụm lớn thường được người dân địa phương gọi là bồng bồng, cây lá hen, bàng biển hay nam tỳ bà. Về mặt phân loại học, cây có tên khoa học là Calotropis gigantea Linn, thuộc họ Thiên lý (Asclepiadaceae). Trong kinh nghiệm dân gian, loài thực vật này được dùng để xua đuổi côn trùng, chữa trị hen suyễn, trừ giun sán, xử lý vết rắn cắn và hỗ trợ điều trị u bướu. Mặc dù trên thế giới đã có một số công trình nghiên cứu về loài cây này, số lượng công trình vẫn còn khiêm tốn; tại Việt Nam, các tài liệu nghiên cứu sâu về thành phần hóa học của cây bồng bồng còn rất hiếm.

Xuất phát từ thực tế đó, đề tài "Khảo sát thành phần hoá học cao chloroform của rễ cây Bồng bồng (Calotropis gigantea Linn) họ Thiên lý (Asclepiadaceae)" được thực hiện nhằm giải quyết các nhiệm vụ khoa học cụ thể sau:

1. Ly trích, phân tách và cô lập các hợp chất hóa học từ phân đoạn cao chloroform của rễ cây bồng bồng bằng các phương pháp sắc ký thích hợp.
2. Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất cô lập được thông qua các phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân hiện đại (1D-NMR và 2D-NMR).

Đối tượng nghiên cứu của khóa luận là rễ cây bồng bồng (Calotropis gigantea Linn). Mẫu rễ cây được thu hái tại thành phố Phan Thiết, tỉnh Bình Thuận vào tháng 06/2011 và được định danh thực vật bởi Tiến sĩ Võ Văn Chi. Phạm vi thực nghiệm tập trung vào 25 kg bột rễ cây khô; trong đó, mẫu được chiết tách phân đoạn và khóa luận đi sâu khảo sát thành phần hóa học của phân đoạn J (khối lượng 7,2420 g) thu được từ 180 g cao chloroform.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khóa luận dựa trên cơ sở lý thuyết về hóa học các hợp chất thiên nhiên, đặc biệt là nhóm steroid dạng cardenolide glycoside (glycoside tim) và các hợp chất chuyển hóa thứ cấp đặc trưng của chi Calotropis, họ Thiên lý (Asclepiadaceae). Khung cấu trúc cardenolide bao gồm phần aglycon mang vòng lactone năm cạnh bất bão hòa tại vị trí C-17, kết hợp với các phân tử đường đặc thù liên kết tại vị trí C-3 hoặc đồng thời tại C-2 và C-3.

Để thực hiện quá trình phân lập và làm sáng tỏ cấu trúc các hợp chất, nghiên cứu đã sử dụng phối hợp các phương pháp thực nghiệm:

• Phương pháp ly trích và phân bố lỏng - lỏng: Chiết nóng bột rễ khô bằng phương pháp đun hoàn lưu với dung môi methanol (3 lần, mỗi lần 3 giờ). Thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu cao methanol thô. Hòa tan cao thô trong nước rồi chiết phân bố lỏng - lỏng lần lượt với các đơn dung môi có độ phân cực tăng dần: petroleum ether (PE, phân đoạn 60–90 °C), chloroform (CHCl3, 61–62 °C), ethyl acetate (EA, 78 °C) và n-butanol (118 °C).
• Phương pháp sắc ký:
  • Sắc ký cột (SKC) pha thường (pha thuận) sử dụng chất hấp phụ silica gel.
  • Sắc ký điều chế phân tách các phân đoạn hẹp.
  • Sắc ký lớp mỏng (TLC) phân tích trên bản mỏng tráng sẵn silica gel loại 25DC-Alufolien 20x20 nhằm kiểm tra độ tinh khiết và xác định hệ số lưu giữ ($R_f$). Bản mỏng được soi dưới đèn tử ngoại (bước sóng 254 nm và 365 nm) và hiện màu bằng dung dịch acid sulfuric ($H_2SO_4$) 20% hoặc 25% kèm gia nhiệt.
  • Hệ dung môi giải ly gồm: petroleum ether : ethyl acetate, hexane : ethyl acetate, chloroform : methanol, ethyl acetate : methanol với tỷ lệ biến thiên từ 0% đến 100%.
• Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): Ghi phổ 1 chiều ($^1H$-NMR tần số 500 MHz, $^{13}C$-NMR tần số 125 MHz) và phổ 2 chiều (HSQC xác định tương quan trực tiếp H-C qua một liên kết; HMBC xác định tương quan tầm xa H-C qua 2–3 liên kết). Các phép đo được thực hiện trên máy BRUKER AC 500 MHz tại Phòng thí nghiệm Phân tích Trung tâm, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia TP. Hồ Chí Minh. Các dung môi đo phổ gồm $CD_3OD$, acetone-$d_6$ và DMSO-$d_6$.
• Hệ thống thiết bị thực nghiệm: Máy cô quay chân không RE-111 Rotavapor kết hợp bể điều nhiệt Buchi 46 Water Bath, bộ đun hoàn lưu, bình cầu dung tích từ 100 ml đến 1.000 ml.

Nội dung chính theo từng phần của khóa luận

Phần 1: Tổng quan

Chương này tổng hợp các tư liệu khoa học về phân loại thực vật, thành phần hóa học và tác dụng sinh học của cây bồng bồng:

• Khái quát thực vật: Họ Thiên lý (Asclepiadaceae) gồm khoảng 250 chi và hơn 2.000 loài, phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới. Cây bồng bồng (Calotropis gigantea Linn) là loài cây bụi nhỏ cao từ 5–7 m, cành có lông trắng; lá mọc đối dài 12–20 cm, rộng 5–11 cm, không có lá kèm; hoa lưỡng tính đối xứng tỏa tia; hạt có chùm lông ở đuôi. Bộ phận dùng bao gồm hoa, lá, vỏ rễ và mủ cây.
• Thành phần hóa học đã công bố: Các công trình trước đây chỉ ra cây bồng bồng chứa ba nhóm hợp chất chủ yếu: flavonoid (isorhamnetin glycoside, cyanidin 3-O-rutinoside), triterpenoid ($\alpha$-amyrin, $\beta$-amyrin, $\psi$-taraxasterol) và nhóm steroid cardenolide phong phú (calotropin, calotoxin, uscharin, frugoside, uzarigenin, coroglaucigenin, calatropins, calotroposide A–G). Mủ cây chứa các enzyme protease như calotropain-FI, FII và calotropin DI, DII.
• Công dụng dân gian và hoạt tính sinh học:
  • Kinh nghiệm dân gian: Lá cây được sắc uống chữa hen suyễn (sắc 10 lá đã lau sạch lông với nước, cô lại uống xa bữa ăn); hoa làm thuốc hỗ trợ tiêu hóa, giảm viêm, sốt; mủ cây dùng trị bệnh ngoài da, phong hủi, sưng khớp; vỏ rễ dùng làm thuốc toát mồ hôi, long đờm, trị kiết lỵ và tiêu chảy.
  • Hoạt tính sinh học thực nghiệm: Khóa luận dẫn chứng dịch chiết cồn - nước của lá có khả năng dập tắt gốc tự do DPPH đạt cực đại 85,17% ở nồng độ 400 $\mu$g/ml và phân hủy gốc tự do NO đạt 54,55% ở 100 $\mu$g/ml. Dịch chiết nước - cồn (50:50) có tác dụng chống tiêu chảy trên chuột thực nghiệm ở liều 200–400 mg/kg thể trọng. Mủ cây thể hiện hoạt tính đông máu thông qua quá trình thủy phân chọn lọc các tiểu đơn vị của protein fibrinogen ($A\alpha$, sau đó là $B\beta$ và $\gamma$). Dịch chiết rễ thể hiện khả năng ngừa thai 100% trên chuột ở liều 100 mg/kg và 12,5 mg/kg. Các cardenolide glycoside như calotropin và frugoside có tác dụng ức chế mạnh tế bào ung thư dòng K562 (bạch cầu mãn tính) và SGC-7901 (ung thư dạ dày người). Ngoài ra, dịch chiết vỏ rễ có tác dụng ức chế các chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa và diệt ấu trùng côn trùng Tribolium castaneum, Schistocerca gregaria.

Phần 2: Nghiên cứu

Nội dung trọng tâm của chương là quá trình phân tích và biện luận cấu trúc hóa học của 3 hợp chất tinh khiết cô lập từ phân đoạn J:

• Biện luận cấu trúc hợp chất BB2 (Calotropin):
  • BB2 thu được dưới dạng bột màu trắng, tan trong methanol, hấp thu tử ngoại; sắc ký bản mỏng với hệ chloroform : methanol (95:5) cho vết tròn màu đỏ khi hiện màu bằng $H_2SO_4$ 20% hơ nóng.
  • Phổ $^{13}C$-NMR và HSQC ghi nhận 29 tín hiệu carbon gồm khung aglycon cardenolide và 1 phân tử đường. Phần aglycon có carbon oximethylene của vòng lactone tại C-21 ($\delta_C$ 75,3 ppm), carbon olefin C-22 ($\delta_C$ 117,9 ppm), carbon olefin tứ cấp C-20 ($\delta_C$ 178,2 ppm), carbon carbonyl C-23 ($\delta_C$ 177,4 ppm), nhóm carboxyl/aldehyde C-19 ($\delta_C$ 209,x ppm) và 8 nhóm methylene ($\delta_C$ 25–45 ppm). Tương quan HMBC chỉ ra proton H-1 tương quan với carbon C-2 ($\delta_C$ 70,1 ppm) và C-19.
  • Phân tử đường có carbon anomer C-1' ($\delta_C$ 95,5 ppm) và carbon tứ cấp mang oxy C-5' ($\delta_C$ 91,8 ppm). Proton H-3 ($\delta_H$ 3,93 ppm) tương quan HMBC với C-1' ($\delta_C$ 95,5 ppm) và proton anomer H-1' tương quan ngược lại với C-3 ($\delta_C$ 73,0 ppm); đồng thời proton H-2 ($\delta_H$ 3,84 ppm) tương quan với carbon tứ cấp C-2' ($\delta_C$ 91,8 ppm). Dữ liệu này chứng minh phần đường gắn vào aglycon đồng thời tại hai vị trí C-2 và C-3 tạo cấu trúc cầu đôi. So sánh dữ liệu thực nghiệm với tài liệu tham khảo khẳng định BB2 là Calotropin ($C_{29}H_{40}O_9$).
• Biện luận cấu trúc hợp chất BB3 (19-Carboxylcalactic acid methyl ester):
  • BB3 ở dạng bột màu trắng, tan trong acetone, $R_f = 0,45$ trong hệ dung môi chloroform : acetone (95:5), hiện màu đỏ với $H_2SO_4$ 20% hơ nóng.
  • Phổ $^{13}C$-NMR và HSQC xác định 30 tín hiệu carbon. Khung aglycon chứa C-21 ($\delta_C$ 73,3 ppm), C-20 ($\delta_C$ 175,6 ppm), C-22 ($\delta_C$ 117,5 ppm), C-23 ($\delta_C$ 177,3 ppm), C-2 oximethine ($\delta_C$ 72,1 ppm) và C-19 carboxyl ($\delta_C$ 174,5 ppm). Tương quan HMBC giữa H-1 và C-2, C-19 khẳng định sự oxy hóa tại C-19 thành nhóm carboxyl.
  • Phân tử đường có carbon anomer C-1' ($\delta_C$ 109,0 ppm), C-2' tứ cấp ($\delta_C$ 85,1 ppm), carbon carboxyl ester C-6' ($\delta_C$ 171,6 ppm) và nhóm methoxyl $-OCH_3$ ($\delta_C$ 52,x ppm; $\delta_H$ 3,67 ppm, mũi đơn). Tương quan HMBC của proton $-OCH_3$ với C-6' xác định nhóm methyl ester. Proton anomer H-1' tương quan HMBC với C-3 ($\delta_C$ 86,1 ppm), chứng minh phần đường liên kết đơn vào aglycon tại C-3. Đối chiếu số liệu phổ với cấu trúc chuẩn khẳng định BB3 là 19-Carboxylcalactic acid methyl ester.
• Biện luận cấu trúc hợp chất BB4:
  • BB4 thu được ở dạng bột màu trắng, tan trong DMSO, $R_f = 0,50$ trong hệ chloroform : methanol (97:3), hiện màu đỏ đậm với $H_2SO_4$ 20% hơ nóng.
  • Phổ $^{13}C$-NMR và HSQC ghi nhận 31 tín hiệu carbon. Phần aglycon cardenolide gồm C-21 ($\delta_C$ 73,3 ppm), C-20 ($\delta_C$ 176,0 ppm), C-22 ($\delta_C$ 117,8 ppm), C-23 ($\delta_C$ 173,7 ppm), C-19 carboxyl ($\delta_C$ 174,x ppm), C-2 oximethine ($\delta_C$ 70,5 ppm) và C-3 oximethine ($\delta_C$ 69,3 ppm).
  • Phân tử đường gồm nhóm carboxyl C-8' ($\delta_C$ 173,5 ppm), C-2' tứ cấp mang oxy ($\delta_C$ 91,3 ppm), C-5' oximethine ($\delta_C$ 66,0 ppm), C-4' methylene ($\delta_C$ 41,x ppm) cùng hai nhóm methyl H-6' ($\delta_H$ 1,10 ppm, mũi đôi, $J = 6,3$ Hz) và H-7' ($\delta_H$ 1,36 ppm, mũi đôi, $J = 15,2$ Hz). Tương quan HMBC giữa proton H-3 ($\delta_H$ 3,78 ppm) với C-1' ($\delta_C$ 93,5 ppm) và H-1' với C-3 khẳng định mạch đường gắn vào aglycon qua liên kết glycoside tại C-3.

Phần 3: Thực nghiệm

Chương thực nghiệm cung cấp thông số kỹ thuật chi tiết về tiến trình xử lý mẫu và phân tách sắc ký:

• Xử lý mẫu và ly trích cao phân đoạn: 25 kg rễ bồng bồng khô sau khi rửa sạch, phơi khô và xay nhỏ được chia thành nhiều phần, mỗi mẻ 200 g trích với 1,5 lít methanol trong 3 giờ (lặp lại 3 lần). Cô quay thu hồi dung môi thu được 930 g cao methanol thô. Lượng cao thô này được hòa tan với 500 ml nước cất rồi chiết lỏng - lỏng phân đoạn để thu các loại cao tương ứng.
• Sắc ký cột cao chloroform: 180 g cao chloroform được đưa vào cột sắc ký silica gel pha thường, giải ly bằng hệ petroleum ether : ethyl acetate (0% đến 100% EA), sau đó chuyển sang hệ chloroform : methanol (5% đến 100% MeOH). Dựa vào kiểm tra sắc ký lớp mỏng, dịch giải ly được gom thành 11 phân đoạn ký hiệu từ A đến K.
• Phân tách phân đoạn J: Phân đoạn J (khối lượng 7,2420 g) được sắc ký cột silica gel giải ly bằng hệ chloroform : methanol tăng dần độ phân cực, thu được 7 phân đoạn chính ($J_1$ đến $J_7$).
  • Phân đoạn $J_4$ được tiến hành sắc ký điều chế với hệ $CHCl_3 : MeOH$ (97:3), cô lập được hợp chất BB2 (khối lượng 3,5 mg, sau tinh chế ghi nhận 4,0 mg).
  • Phân đoạn $J_3$ được sắc ký cột silica gel với hệ gradient hexane : ethyl acetate (1–100% EA) và ethyl acetate : methanol (1–100% MeOH), thu được 6 phân đoạn ($J_{3a}$ đến $J_{3f}$). Tiếp tục chọn phân đoạn $J_{3b}$ (khối lượng 3.103,5 mg) tiến hành sắc ký cột hấp phụ với hệ ethyl acetate : methanol (0–100% MeOH) thu 5 phân đoạn nhỏ ($J_{3b1}$ đến $J_{3b5}$), từ đó phân tách và cô lập được hợp chất BB3 và BB4.

Phần 4: Kết luận

Tổng kết toàn bộ kết quả đạt được của đề tài về việc khảo sát thành công phân đoạn J của cao chloroform từ rễ cây bồng bồng, khẳng định cấu trúc của 3 hợp chất cardenolide tinh khiết cô lập được.

Kết quả và đóng góp

Nghiên cứu đã hoàn thành việc điều chế các phân đoạn cao chiết từ khối lượng lớn rễ cây bồng bồng và phân lập thành công các hợp chất tinh khiết có giá trị khoa học:

Phân đoạn cao chiết	Khối lượng thu nhận (gam)	Tỷ lệ so với bột rễ khô (%)
Cao methanol thô	930,0	3,72
Cao petroleum ether	200,0	0,80
Cao chloroform	180,0	0,72
Cao ethyl acetate	120,0	0,48
Cao n-butanol	10,0	0,04

Từ 180 g cao chloroform, nghiên cứu đã phân tách thành công 11 phân đoạn sắc ký lớn (A–K) và tập trung khảo sát sâu phân đoạn J (7,2420 g). Quá trình sắc ký tinh chế nhiều cấp đã cô lập được 3 hợp chất cardenolide glycoside có độ tinh khiết cao:

Ký hiệu hợp chất	Khối lượng / Trạng thái	Dung môi đo phổ	Cấu trúc xác định	Công thức / Đặc điểm cấu trúc
BB2	3,5–4,0 mg; bột màu trắng	$CD_3OD$	Calotropin	$C_{29}H_{40}O_9$, aglycon gắn mạch đường cầu đôi tại C-2 và C-3
BB3	Bột màu trắng; $R_f = 0,45$	Acetone-$d_6$	19-Carboxylcalactic acid methyl ester	$C_{30}H_{42}O_{10}$, C-19 carboxyl, đường ester hóa tại C-6'
BB4	Bột màu trắng; $R_f = 0,50$	DMSO-$d_6$	Dẫn xuất Cardenolide glycoside	31 tín hiệu carbon, đường có carboxyl C-8' gắn vào C-3

Dưới đây là bảng tổng hợp các tín hiệu phổ $^{13}C$-NMR đặc trưng xác định khung cấu trúc aglycon và phân tử đường của các hợp chất:

Vị trí carbon	Hợp chất BB2 ($\delta_C$, ppm)	Hợp chất BB3 ($\delta_C$, ppm)	Hợp chất BB4 ($\delta_C$, ppm)
C-1	70,1	70,2	69,5
C-2	70,1	72,1	70,5
C-3	73,0	86,1	69,3
C-19	209,x	174,5	174,x
C-20	178,2	175,6	176,0
C-21	75,3	73,3	73,3
C-22	117,9	117,5	117,8
C-23	177,4	177,3	173,7
C-1' (đường)	95,5	109,0	93,5

Đóng góp của khóa luận:

• Đề tài đóng góp dữ liệu thực nghiệm quan trọng vào việc làm sáng tỏ thành phần hóa học của loài bồng bồng (Calotropis gigantea) phân bố tại vùng đất cát ven biển Phan Thiết, Bình Thuận.
• Về mặt hóa học thực vật, khóa luận chỉ ra rằng hợp chất BB2 (Calotropin) đã từng được tìm thấy trong rễ cây, nhưng hợp chất BB3 (19-Carboxylcalactic acid methyl ester) trước đây mới chỉ được công bố phân lập từ bộ phận lá cây bồng bồng; kết quả của khóa luận lần đầu tiên xác nhận sự hiện diện của hợp chất này trong bộ phận rễ.

Hạn chế và hướng nghiên cứu tiếp

Khóa luận chỉ ra một số hạn chế gắn liền với phạm vi triển khai thực tế:

• Hạn chế về phạm vi khảo sát hóa học: Trong tổng số 180 g cao chloroform, nghiên cứu mới chỉ khảo sát được phân đoạn J (7,2420 g), và từ phân đoạn J chỉ mới tập trung xử lý chi tiết hai phân đoạn phụ $J_3$ và $J_4$. Các phân đoạn lớn khác của cao chloroform (từ A đến I và phân đoạn K) cũng như toàn bộ các phân đoạn cao chiết khác (cao petroleum ether 200 g, ethyl acetate 120 g, n-butanol 10 g) đều chưa được phân lập thành phần.
• Hạn chế về thử nghiệm sinh học: Khóa luận mới dừng lại ở bước chiết tách, cô lập và xác định cấu trúc hóa học, chưa thực hiện các thử nghiệm sàng lọc hoạt tính sinh học trực tiếp trên các hợp chất tinh khiết BB2, BB3 và BB4 vừa thu nhận.

Hướng nghiên cứu tiếp được đề xuất:

• Tiếp tục phân lập và khảo sát thành phần hóa học của các phân đoạn còn lại từ cao chloroform cũng như các cao phân đoạn petroleum ether và ethyl acetate.
• Mở rộng nghiên cứu đánh giá hoạt tính sinh học (đặc biệt là hoạt tính chống oxy hóa, kháng khuẩn và độc tính tế bào ung thư) của các chất tinh khiết đã cô lập nhằm làm tăng giá trị ứng dụng thực tiễn của nguồn dược liệu này.

Giá trị tham khảo

Khóa luận là nguồn tài liệu hữu ích cho sinh viên, học viên cao học và cán bộ nghiên cứu thuộc các chuyên ngành Hóa hữu cơ, Hóa học các hợp chất thiên nhiên, Hóa dược và Dược học:

• Tham khảo quy trình chiết xuất quy mô lớn: Cung cấp thông số thực tế cho việc xử lý nguyên liệu thực vật thô khối lượng lớn (25 kg rễ khô), quy trình chiết ngấm kiệt bằng methanol và phân bố lỏng - lỏng phân đoạn có hiệu suất thu hồi rõ ràng.
• Tham khảo kỹ thuật sắc ký phân tách hợp chất phân cực: Hệ thống dung môi giải ly gradient từ không phân cực đến rất phân cực ($PE : EA$, $CHCl_3 : MeOH$, $EA : MeOH$) được mô tả cụ thể, giúp người làm đề tài tương tự có căn cứ lựa chọn hệ dung môi sắc ký cột và sắc ký bản mỏng cho nhóm cardenolide.
• Tham khảo phương pháp biện luận phổ 2D-NMR phức tạp: Phần phân tích phổ cộng hưởng từ hạt nhân ($^1H$, $^{13}C$, HSQC, HMBC) đối với các khung aglycon steroid bị thế oxy hóa nhiều vị trí và liên kết glycoside cầu đôi (C-2 và C-3) là mẫu hình thực nghiệm mẫu mực cho việc giải mã cấu trúc phân tử tự nhiên.

Câu hỏi thường gặp

1. Mẫu rễ cây bồng bồng dùng trong nghiên cứu được thu thập ở đâu và do ai định danh tên khoa học?

Mẫu rễ cây bồng bồng (Calotropis gigantea Linn, họ Asclepiadaceae) được thu hái tại thành phố Phan Thiết, tỉnh Bình Thuận vào tháng 06/2011. Tên khoa học của mẫu thực vật được giám định và xác nhận chính thức bởi Tiến sĩ Võ Văn Chi.

2. Khối lượng nguyên liệu bột rễ khô ban đầu và hiệu suất thu nhận các phân đoạn cao chiết là bao nhiêu?

Nghiên cứu sử dụng 25 kg bột rễ cây bồng bồng khô. Quá trình chiết nóng hoàn lưu với methanol thu được 930 g cao thô (hiệu suất 3,72%). Sau khi chiết phân bố lỏng - lỏng, lượng cao thu nhận ở các phân đoạn lần lượt là: cao petroleum ether đạt 200 g (0,80%), cao chloroform đạt 180 g (0,72%), cao ethyl acetate đạt 120 g (0,48%) và cao n-butanol đạt 10 g (0,04%).

3. Cấu trúc hóa học của hợp chất BB2 và BB3 được xác định là những chất nào?

Hợp chất BB2 (khối lượng 3,5–4,0 mg) được xác định là Calotropin ($C_{29}H_{40}O_9$), một cardenolide glycoside có mạch đường liên kết cầu đôi tại C-2 và C-3 của aglycon. Hợp chất BB3 được xác định là 19-Carboxylcalactic acid methyl ester ($C_{30}H_{42}O_{10}$), có nhóm aldehyde tại C-19 bị oxy hóa thành carboxyl và mạch đường tại C-3 bị ester hóa dạng methyl ester tại C-6'.

4. Khóa luận đã ghi nhận phát hiện mới nào về sự phân bố của hợp chất BB3 trong cây bồng bồng?

Hợp chất BB3 (19-Carboxylcalactic acid methyl ester) trước đây chỉ mới được các công trình khoa học công bố tìm thấy trong bộ phận lá của cây bồng bồng (Calotropis gigantea Linn). Kết quả nghiên cứu của khóa luận này lần đầu tiên chứng minh và ghi nhận sự tồn tại của hợp chất này trong bộ phận rễ cây.

5. Thiết bị và điều kiện quang phổ nào được sử dụng để phân tích cấu trúc các chất cô lập?

Các hợp chất được đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1 chiều và 2 chiều ($^1H$-NMR 500 MHz, $^{13}C$-NMR 125 MHz, HSQC và HMBC) trên máy quang phổ BRUKER AC 500 MHz tại Phòng thí nghiệm Phân tích Trung tâm, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia TP. Hồ Chí Minh. Các dung môi sử dụng cho đo phổ gồm $CD_3OD$ (cho BB2), acetone-$d_6$ (cho BB3) và DMSO-$d_6$ (cho BB4).

Kết luận

Khóa luận đã khảo sát thành công thành phần hóa học phân đoạn J của cao chloroform tách từ rễ cây bồng bồng (Calotropis gigantea Linn) thu hái tại Bình Thuận. Thông qua các phương pháp sắc ký hấp phụ pha thường, sắc ký điều chế và hệ thống phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1D/2D-NMR, tác giả đã cô lập và làm sáng tỏ cấu trúc hóa học của 3 hợp chất cardenolide glycoside gồm Calotropin (BB2), 19-Carboxylcalactic acid methyl ester (BB3) và dẫn xuất BB4. Kết quả này bổ sung dẫn liệu khoa học mới về sự hiện diện của 19-Carboxylcalactic acid methyl ester trong rễ cây, đồng thời tạo tiền đề cho các định hướng nghiên cứu sâu hơn về hoạt tính sinh học của nguồn dược liệu tự nhiên này.

Trích đoạn nội dung tài liệu

TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH KHOA HÓA CHUYEN NGÀNH HÓA HỮU CƠ %>»cœ8 KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP GV hướng dan: PGS. Nguyễn Trung Nhân SV thực hiện: Doan Thị Phuong ` MSSV: K36.HCM, tháng 5 năm 2014 Nghiên cứu thành phan hoá hoc cao chloroform của rễ cây Bong Bên, Với tắm lòng tran trọng và biết on sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn đến: PGS. NGUYEN TRUNG NHÂN - người đã truyền dat cho em nhiều kiến thức chuyên môn, tận tình hướng dẫn và truyền đạt nhiều kinh nghiệm nghiên cứu quý báu trong suốt thời gian em thực hiện và hoàn thành dé tai tốt nghiệp. Anh Nguyễn Hữu Duy Khang, anh Đặng Hoang Phủ, chi Võ Thúy Hang đã tận tinh truyền đạt những kinh nghiệm quý báu, quan tâm.

nhiệt tinh hưởng dẫn tạo mọi điều kiện giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện đẻ tải tốt nghiệp. Các anh chị nghiên cửu sinh, học viên cao học va các bạn sinh viên bộ môn Hóa Hữu cơ trường DH Khoa Học Tự Nhién đã động viên. giúp đỡ trong suốt quá trình thực hiện đẻ tài tốt nghiệp. Tất cá quý thầy cô Khoa Hóa, đặc biệt quý thầy cô Bộ môn Hóa hữu cơ trường ĐH Su Phạm Thành Phé Hồ Chí Minh đã giảng dạy va tạo mọi điều kiện tốt để em hoan thành đề tài tốt nghiệp.

Gia đình đã động viên và tạo điều kiện tốt về vật chất lẫn tinh than để em hoàn thành khoá luận của minh. Xin chân thành cảm on. Nghién cứu thành phân hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bing (Calotropis gigantea) DANH MUC CAC CHU VIET TAT 1D/2D-NMR : phổ cộng hưởng từ hat nhân 1 chiéu/ 2 chiều (One/Two Dimensional- Nuclear Magnetic Resonance) đ: mũi đôi (doublet) dd : mũi đôi-đôi (doublet- doublet) HMBC : tương quan H-C qua 2-3 nỗi (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) HSQC: tương quan H-C qua một nói (Heteronuclear Single Quantum Cohenrence) IF Hang số ghép (Coupling constant) m: mũi da (Multiple) ppm: Part per million Ry: Retardation factors s: mũi don (Singlet) SKC: sắc kí cột t: mũi ba (triplet) UV: Ultraviolet [œ]o : Specific rotation by Degree Celcius Nghién cứu thank phan hoá học cao chloroform của rễ cấy Bằng Bằng (Calotropis gigantea) LOI GIỚI THIEU Ngày nay, cùng với sự phát triển vượt bậc của khoa học kỹ thuật là việc phát sinh ra nhiêu bệnh tật nguy hiểm khác nhau. Việc nghiên cứu sản xuất các loại được phẩm dé phục vụ nhu cầu sức khỏe của con người là rat cần thiết, và ngành hóa học cũng đã góp một phần không nhỏ vào sự phát triển ấy.

Các nhà hóa học đã tổng hợp được nhiều loại hợp chất chữa trị nhiều loại bệnh khác nhau. Tuy nhiên, những loại thuốc này thường rất dat và một số có tác dụng phy, chính vì thể. con người có khuynh hướng quay về với nền y học cổ truyền, sử dụng được thao làm thuốc trị bệnh. Nước ta thuộc vùng nhiệt đới gió mùa, có nguồn thực vật đa dang vả phong phú là một ưu thể rat lớn đối với các nhà nghiên cứu hóa học các hợp chất thiên nhiên.

Người dân trên các vùng gần bờ biển đọc theo đất nước Việt Nam đều rất quen thuộc với loại cây có hoa màu tím mọc thành cụm lớn đọc theo bờ biển, một vài người chí biết nó cỏ tác dụng xua đuổi mạt gà, các côn trùng nhỏ nhưng ít ai biết tới công dụng chữa bệnh thực sự của nó. Loài cây nảy dân gian thường gọi bổng bồng, cây lá hen, bàng bién,.Tén khoa học /a Calotropis gigantea Linn thuộc họ Thiên Ly. Nó có công dụng chữa hen suyén, trị giun s4n, rắn cắn, và cả bệnh ung thư. Ở trên thé giới đã có ngươi nghiên cứu về cây này nhưng số lượng không nhiều, ở Việt Nam thì số bài viết vẻ cây nay rất hiếm.

Với ly do đó, chúng tôi tiễn hành thực hiện đề tài:“Khảo sát thành phần hoá học cao chloroform của rễ cây Bang bồng (Calotropis gigantea Linn) họ Thiên lý (Asclepiadaceae)”. Mục tiêu của dé tai này là cô lập, xác định cấu trúc hóa học các hợp chat da cô lập từ cao chloroform của rễ cây bồng bồng. Hy vọng kết quả nghiên cứu sẽ mang lại những hiểu biết mới vé mặt hóa học của cây. từ đó làm tăng giá tri ứng dụng của cây vao thực tế cuộc sống.

Nghién cứu thank phan hod học cao chloroform của récấy Bong Bong (Calotropis gigantea) Nghiên cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cay Bằng (Calotropis gigantea MUC LUC TL REELFG | |? ho ae 1 1.1 Giới thiệu về họ Thiên lý Asclepiadaceae®.cco:sserssessssseessnesessnereneennnnseeses 1 DTS N đều setntcGceviaaG00A0/G0001610029G16010050011690000101ã46)101026300010686 1 O15 Bean GO sssececzscses sce ac an i ia 1 1.2 Giới thiệu về cây bỏng bồng (Calotropis gigantea Linn):. 3 RE aT Ta IT 3 DES Thân ĐỄhseeoskekoeeeobiobgebbeicdieiptotGSniiitGaEsxcistieGsgirndessisre 5 R24 Bộ plidn dling ESSE 5 EO a5 1.6 Công dụng dân gian và hoạt tính sinh học:.---- ------>+ 14 vớ 12h, fC | 1 oo ceo a ra 19 2.) đi HINH seseseeoseensesoeotddeeeSeoti02244241xe460542262agi2-63-xukkax8msaaeev 19 2.2 Khao sát cấu trúc hóa học của các hợp chất:.-- ---- 5s +vssccsercrree 19 DSi HạnclhftHÑlaacci6ceocoiscsonocickiuoessadisassexisessseeil 19 222 Honchit BB3sscsitisccsiees eee eens 25 CĐ. AMNnnlaninnwbadftitstiainstwninnfoilyBinniengiaieangl: 31 BGT 1, ||| re 37 3.1 Các phương pháp sử dụng trong thực nghiệm.2 Điều kiện thí nghiệm:. 2-22 +2©CECE229Z2E2SEcEDEEASereEEEvrccrverrrrre 37 Ti (DI sstcusnndtEoaeeeoGae0866010655010028910900006s.t0asoed 37 355:TNIÊN ĐẦU: 2.202cGG0202221100201G2106006015600SG`00G862800)/0Sc0420)y8ãcs6kbi 38 3/3 “Tiên trinh thal ngÌ ÌÏ À2 i00 12 205462 Gcco 2c dAx66aSAS0iÁ666eaii 38 33:! IyttilcaothôMSORHG/((22 512 64202222066GLc66666k6ccgd6 38 3.2 Ly trích các loại cao: petroleum ether, chloroform, ethyÌ acetate.4 Khảo sát trên cao ChlorofOorm.1: Ko 4l Rahs Goma l2„exsuoskeskseeieeekdtaobeoioa2kesoueeoncd 40 PHNG:.

KẾT LUẬN:::c¡cc sec cGec2ESc02124602462Cn0260502EcSGiA 44 PRAN:H-HT LUỆ ác ssssc cai OE eae 46 Tải liệu tham khảo Nghiên cứu thành phan hodhọc cao chloroform của rễ cây Bon, Calotropis gigantea, PHAN 1: TONG QUAN 1.1 Giới thiệu về họ Thiên lý Asclepiadaceae: 1.1 Mô az!!! Hau hết đều là cây thân có hoặc cây bụi. cây có mủ trắng. Một số là thân leo, một số lại lả thân mọng nước vả có sự hạn chế mọc lá. thường mọc đổi xứng hoặc xoắn lại, đôi khi có lá kèm.

Hoa lưỡng tỉnh. hầu như đều có dạng tỏa xứng tia, thường bao gồm một cụm phức tạp hoặc có vành dia mật giữa trang hoa và cơ quan sinh sản của cây. Dai hoa chia 5 phan khác biệt hoặc kết hợp lại với nhau ở phan đáy. Bên trong bao hoa là tràng hoa có 5 thay có cánh trang liền hoặc có cánh trang hợp.

Bộ nhị và bộ nhụy hầu như luôn hợp lại tạo thành trục hợp nhụy với Š nhị phân ra rõ ràng và một nhụy lớn. cùng với đầu nhụy có 5 thùy. Bao phan thường có | cặp túi phấn được gọi là khối phan, được vận chuyên như một đơn vị trong suốt quá trình thụ phân. Bầu nhụy gồm một nhụy kép đơn lẻ với hai lá noãn riêng biệt và nó bị tách ra tại ống nodn và vòi nhị, bau nhị chỉ kết hợp với nhụy lớn đơn lẻ.

Bau nhụy có sự khác biệt hau như luôn có bau thượng và mỗi cái đều có một ống dẫn và ở mép có nhiều non, Quả dạng nang. Hạt thường có một chùm lông ở cuối hạt.2 Phân bé:?! Khoảng 250 chỉ và hơn 2000 loài phổ biến ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới, đặc biệt là ở Châu Phi và miền nam Nam Mỹ, với một số đại diện ớ miền Bắc và Đông Nam A, 44 chi (bốn đặc hữu) và 270 loài (153 loài đặc hữu) ở Trung Quốc. ——maaaaaaaammamaaaammmmmmmmammmmmmmammmmnmmmaanaanammmmaammmaamn SVTH: Doan Thị Phương I GVHD: PGS. Nguyen Trung Nhan Hình 1-1: Matelea denticulata Hình 1-4; Leptadenia pyrotechnica tình 1-2- Caralluma acutangula tinh 1-3: Calotropis gigantea Linn Hình 1-6: Microloma calycimum SVTH: Đoàn Thị Phương 2 GVHD: PGS.

Nguyen Trung Nhân Nghién cứu thành hod học cao chloro, của réc ing (Ci 1.2 Giới thiệu về cây bồng bồng (Calotropis gigantea Linn): 1.1 Tên gọi: « Tên khoa học Calotropis gigantea (Linn), thuộc họ thiên lý (Asclepiadaceae) © Tên thông thường: nam ti ba, cây lá hen, bảng biến, cốc may (Tay).""! « Tên nước ngoải Sanskrit (arka, alarka), Anh (Giantic swallow wort, Mudar).'”! « Hét loai khoa cho bởi bang sau''*! Giới: Plantae Nganh: Magnoliophyta Lap: Lamiidae Phan lớp: Asteridic Bộ: Gentianales Họ: Asclepiadaceac Chi: Calotropis Loài: Gigantea 1.2 Mô tả cây:!! Thân: Cây nhỏ cao 5-7 m có thể cao hơn nêu dé tự nhiên. Canh có lông trắng Lá mọc đôi dai 12-20 cm, rộng 5-11 cm không có lá kèm. Góc phiến lá có tuyến trắng SVTH: Đoàn Thị Phương 3 GVHD: PGS. Nguyễn Trung Nhân SVTH: Đoàn Thị Phương 4 GVHD: PGS.

Nguyễn Trung Nhân Nghién cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bong (Calotropis gigantea) 1.3 Phân bố:"“!“ Phân bế khắp vùng nhiệt đới và cận nhiệt đởi ở Châu Phi và Châu A. Cây mọc hoang ở Bangladesh, Trung quốc. Philippines, Thai Lan. Sri Lanka, Singapore.

đảo Timor, Cuba, New Guinea, dao Hawaii, dai đất gần day Himalayan (Kartikar va Basu), những vùng dat hoang khô ở Anh. Moc hoang va được trong khắp nơi ở nước ta, từ miễn Bắc vao mien Nam thường mọc trên đất cỏ cát ở các tinh ven biển, nhưng cũng gặp ở vùng đồng bằng va các vùng trung du, Cây cũng thường được tròng bang những đoạn cành. Có khi được trông làm cây cảnh, làm hang rao.4 Bộ phận dùng:PÌ Bao gồm: hoa. lá, mủ cây, rễ.5 Thanh phần hóa học: Hiện nay đã có nhiều công trình nghiên cứu về cây Bồng bồng (Calorropis gigantea Linn) về thành phần hóa học cũng như vẻ hoạt tính sinh học của nó.

Theo những nghiên cứu nay thi cây có các nhóm hợp chất chính sau: flavonoid, steroid, terpenoid.1 3Ì _—__`_- Isorhamnetin -3-O- Glu —O-tha — rutinoside O-Gal Isorhamnetin 3-O- glucoside Isorhamnetin Glucose-O- rhamnoglucoside Rhamnose SVTH: Doan Thị Phương s GVHD: PGS. Nguyen Trung Nhân Cyanidin 3-O-rutinoside (5) 1.2 S t e r o i d : ? * " * " " - " 1 a cây Ba ng bồ ng công thức C; yH ;/ O là đồ ng ph ân Calosterol có trong mủ qu của Ergosterol. Í'°! Syriogenin (1) Proceroside (2) EE SVTH: Doan Thị Phương 6 GVHD: PGS. Nguyen Trung Nhân Nghiên cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bằng (Cal.

is ea Calatropins (3) Benzoylineolone (4) \ I 19-Nor-cardenolide (5) 18,20-Epoxy cardenolide (6) ° cm ° on o. _ PA ˆ { L Galactinic acid (7) Calotoxin (8) SVTH: Đoàn Thị Phương GVHD: PGS. Nguyễn Trung Nhân Voruscharin (9) ° 9 Za ° |CH HO HO H Calotropoginin (11) Coroglaucigenin (12) HỘ J ] N © Ng bú OH VY 0 ‘s o on Gofruside (13) Uscharin (14) a rel SVTH: Doan Thị Phương 8 GVHD: PGS. Nguyen Trung Nhan Nehién cứu thành phan hoá học cao chloroform của rễ cây Bong Bằng (Ci tea, Calotropone (16) Cr, om ” on Gì Frugoside (17) Uzarigenin (18) ws Stigmasterol (19) 6'-O-E-4-Hydroxycinnamoy!)desglucouzarin (20) ES “See SVTH: Doan Thị Phương 9 GVHD: PGS.

Nguyen Trung Nhan 2a, 158-Dihydroxycardenolide (23) 19-Nor-10-hydroxyperoxy-2a, 1 5f- dihydroxyuzarigenin (24) RE ere SVTH: Doan Thi Phuong 10 GVHD: PGS.