Báo Cáo Tổng Hợp Kết Quả Nghiên Cứu Quy Trình Xác Định Gen Kháng Bệnh Khảm Lá Ở Cây Khoai Mì

Nghiên cứu quy trình xác định gene kháng bệnh khảm lá ở cây khoai mì bằng chỉ thị phân tử, góp phần nâng cao năng suất và chất lượng cây trồng.

• Tác giả: Nguyễn Xuân Dũng
• Trường học: Trung tâm Công nghệ Sinh học
• Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học
• Đề tài: Nghiên Cứu Quy Trình Xác Định Gen Kháng Bệnh Khảm Lá Ở Cây Khoai Mì
• Loại tài liệu: báo cáo
• Năm xuất bản: 2021
• Địa điểm: Thành phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• MỞ ĐẦU
• 1.1. Ý nghĩa khoa học
• 1.2. Ý nghĩa thực tiễn
• 1.3. Mục tiêu nhiệm vụ
• 1.4. Mục tiêu tổng quát
• 1.5. Mục tiêu cụ thể
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1.1. Giới thiệu về cây khoai mì và tình hình sản xuất khoai mì ở Việt Nam
• 1.2. Sơ lược về bệnh khảm lá gây hại trên khoai mì
• 1.3. Các biện pháp phòng trừ bệnh khảm lá khoai mì
• 1.4. Gen kháng bệnh khảm lá của cây khoai mì
• 1.5. Tình hình nghiên cứu xác định gen kháng bệnh khảm lá khoai mì bằng chỉ thị phân tử
• 2. CHƯƠNG 2: NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Nội dung nghiên cứu
• 2.2. Phương pháp
• 2.2.1. Thu thập nguồn mẫu khoai mì phục vụ cho nghiên cứu
• 2.2.2. Tách chiết DNA tổng số từ lá khoai mì
• 2.2.3. Thiết lập quy trình PCR nhận diện gen kháng bệnh khảm lá khoai mì dựa trên chỉ thị phân tử
• 2.2.4. Kiểm tra sự hiện diện của gen kháng bệnh khảm lá trên các giống khoai mì thu thập
• 2.2.5. Kiểm tra tính kháng bệnh khảm lá của các giống khoai mì thu thập
• 2.2.6. Bố trí thí nghiệm và phân tích số liệu
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ - THẢO LUẬN
• 3.1. Thu thập nguồn mẫu khoai mì phục vụ cho nghiên cứu
• 3.2. Tách chiết DNA tổng số từ lá khoai mì
• 3.3. Thiết lập quy trình PCR nhận diện gen kháng bệnh khảm lá khoai mì dựa trên chỉ thị phân tử
• 3.4. Thiết lập phản ứng PCR nhận diện chỉ thị phân tử liên kết gen kháng
• 3.5. Kết quả khảo sát nhiệt độ bắt cặp mồi (Ta) tối ưu
• 3.6. Kết quả khảo sát nồng độ mồi tối ưu
• 3.7. Kiểm tra sự hiện diện của chỉ thị phân tử liên kết với gen kháng bệnh khảm lá trên các giống khoai mì thu thập
• 3.8. Kiểm tra tính kháng bệnh khảm lá của các giống khoai mì thu thập
• 3.8.1. Kiểm tra tính kháng bệnh khảm lá của các giống khoai mì dưới áp lực bệnh tự nhiên
• 3.8.2. Kiểm tra tính kháng bệnh khảm lá của các giống khoai mì thông qua phương pháp lây nhiễm virus nhân tạo
• KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• PHỤ LỤC
• A.1. DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT
• A.2. DANH SÁCH BẢNG
• A.3. DANH SÁCH HÌNH

Tóm tắt

I. Tổng Quan Nghiên Cứu về Gen Kháng Bệnh Khảm Lá Khoai Mì

Nghiên cứu về gen kháng bệnh khảm lá khoai mì là một lĩnh vực quan trọng trong nông nghiệp hiện đại. Bệnh khảm lá, do virus gây ra, đe dọa nghiêm trọng đến năng suất và sản lượng khoai mì, ảnh hưởng đến kinh tế và đời sống của người nông dân. Việc xác định và sử dụng gen kháng bệnh là giải pháp bền vững để kiểm soát dịch bệnh. Các nghiên cứu tập trung vào việc tìm kiếm, phân lập và ứng dụng các marker liên kết gen kháng bệnh. Phương pháp này giúp rút ngắn thời gian chọn tạo giống và nâng cao hiệu quả cải thiện giống khoai mì. Mục tiêu cuối cùng là tạo ra các giống khoai mì có khả năng kháng bệnh khảm lá khoai mì cao, ổn định, góp phần vào sự phát triển bền vững của ngành trồng trọt.

1.1. Tầm quan trọng của khoai mì kháng bệnh trong sản xuất

Khoai mì kháng bệnh đóng vai trò then chốt trong việc ổn định năng suất và chất lượng. Việc sử dụng giống khoai mì kháng bệnh giúp giảm chi phí thuốc bảo vệ thực vật, bảo vệ môi trường và sức khỏe người tiêu dùng. Theo báo cáo của Trung tâm Công nghệ Sinh học TP.HCM, việc ứng dụng giống khoai mì kháng bệnh có thể giúp tăng năng suất từ 20-30% so với giống nhiễm bệnh. Điều này có ý nghĩa lớn đối với các vùng trồng khoai mì lớn như Tây Ninh, Bình Dương, và Đồng Nai.

1.2. Giới thiệu chung về bệnh khảm lá khoai mì và tác nhân gây bệnh

Bệnh khảm lá khoai mì là một bệnh virus nghiêm trọng, gây hại trên diện rộng và ảnh hưởng đến năng suất khoai mì. Tác nhân gây bệnh chủ yếu là các virus thuộc giống Begomovirus, họ Geminiviridae. Virus lây lan qua môi giới truyền bệnh là rệp sáp và qua hom giống bị nhiễm bệnh. Các triệu chứng điển hình của bệnh là lá bị khảm, biến dạng, giảm diện tích quang hợp, ảnh hưởng đến quá trình sinh trưởng và phát triển của cây. Theo nghiên cứu, virus Sri Lanka Cassava Mosaic Virus (SLCMV) là một trong những chủng virus phổ biến gây bệnh ở Việt Nam.

1.3. Mục tiêu và phạm vi của nghiên cứu quy trình xác định gen

Nghiên cứu quy trình xác định gen kháng bệnh tập trung vào việc xây dựng và ứng dụng các phương pháp phân tích di truyền, giúp xác định các gen kháng bệnh tiềm năng. Phạm vi nghiên cứu bao gồm thu thập và đánh giá các giống khoai mì địa phương và nhập nội, phân tích di truyền bằng các marker phân tử (như SSR, SNP), và kiểm tra tính kháng bệnh trong điều kiện nhà kính và đồng ruộng. Mục tiêu là xác định các marker liên kết gen kháng bệnh để ứng dụng trong chương trình chọn tạo giống khoai mì kháng bệnh.

II. Thách Thức Kiểm Soát Bệnh Khảm Lá Khoai Mì ở Việt Nam

Bệnh khảm lá khoai mì đang là một thách thức lớn đối với ngành trồng khoai mì ở Việt Nam. Sự lây lan nhanh chóng của bệnh đã gây thiệt hại đáng kể về năng suất và kinh tế. Việc kiểm soát bệnh gặp nhiều khó khăn do sự đa dạng của các chủng virus, sự lan truyền qua rệp sáp và hom giống, và thiếu các giống khoai mì có khả năng kháng bệnh cao. Các biện pháp phòng trừ hiện tại như sử dụng thuốc trừ rệp, tiêu hủy cây bệnh, và luân canh cây trồng chỉ mang tính tạm thời và không hiệu quả cao. Do đó, nghiên cứu và phát triển các giống khoai mì kháng bệnh là giải pháp cấp thiết và bền vững.

2.1. Tác động kinh tế của bệnh khảm lá đến sản xuất khoai mì

Bệnh khảm lá gây ra những tổn thất kinh tế nghiêm trọng cho người trồng khoai mì. Năng suất giảm mạnh do cây bị suy yếu, củ nhỏ, và chất lượng kém. Chi phí phòng trừ bệnh tăng cao do phải sử dụng thuốc trừ rệp và công lao động tiêu hủy cây bệnh. Theo ước tính, bệnh khảm lá có thể gây thiệt hại từ 30-50% năng suất khoai mì, ảnh hưởng đến thu nhập của hàng ngàn hộ nông dân. Việc mất mùa khoai mì cũng ảnh hưởng đến chuỗi cung ứng và giá cả thị trường.

2.2. Hạn chế của các phương pháp phòng trừ bệnh virus ở khoai mì truyền thống

Các phương pháp phòng trừ bệnh virus ở khoai mì truyền thống như sử dụng thuốc trừ rệp, tiêu hủy cây bệnh, và luân canh cây trồng có nhiều hạn chế. Thuốc trừ rệp chỉ có tác dụng tạm thời và gây ô nhiễm môi trường. Tiêu hủy cây bệnh tốn kém và không ngăn chặn được sự lây lan của virus. Luân canh cây trồng có thể làm giảm mật độ rệp, nhưng không loại bỏ hoàn toàn nguy cơ nhiễm bệnh. Các phương pháp này không mang lại hiệu quả bền vững và cần được thay thế bằng các giải pháp tiên tiến hơn.

2.3. Nhu cầu cấp thiết về chọn tạo giống khoai mì kháng bệnh

Việc chọn tạo giống khoai mì kháng bệnh là giải pháp bền vững và hiệu quả nhất để kiểm soát bệnh khảm lá. Các giống khoai mì kháng bệnh có khả năng chống chịu với virus, giúp duy trì năng suất và chất lượng ngay cả khi có sự xuất hiện của bệnh. Nghiên cứu và phát triển các giống khoai mì kháng bệnh đòi hỏi sự kết hợp của các phương pháp chọn tạo giống truyền thống và công nghệ sinh học hiện đại. Việc ứng dụng các marker phân tử giúp rút ngắn thời gian và nâng cao hiệu quả chọn tạo giống.

III. Quy Trình Xác Định Gen Sử Dụng Marker Phân Tử Hiệu Quả

Việc sử dụng marker phân tử trong quy trình xác định gen kháng bệnh là một bước tiến quan trọng trong công tác chọn tạo giống khoai mì kháng bệnh. Marker phân tử là các đoạn DNA đặc hiệu, liên kết chặt chẽ với gen kháng bệnh, giúp các nhà khoa học xác định và chọn lọc các cá thể mang gen kháng bệnh một cách nhanh chóng và chính xác. Quy trình xác định gen bao gồm các bước: thu thập mẫu, tách chiết DNA, khuếch đại DNA bằng PCR, phân tích kết quả điện di, và đánh giá liên kết giữa marker và gen kháng bệnh. Phương pháp này giúp rút ngắn thời gian chọn tạo giống và nâng cao hiệu quả.

3.1. Các bước cơ bản trong quy trình PCR nhận diện gen kháng

Quy trình PCR là một kỹ thuật quan trọng trong xác định gen kháng. Các bước bao gồm: (1) Chuẩn bị phản ứng PCR: pha trộn DNA mẫu, mồi (primer), enzyme DNA polymerase, và các nucleotide; (2) Biến tính DNA: đun nóng hỗn hợp để tách DNA mạch kép thành mạch đơn; (3) Bắt cặp mồi: hạ nhiệt độ để mồi bám vào vị trí đặc hiệu trên DNA; (4) Kéo dài mạch: enzyme DNA polymerase kéo dài mạch DNA từ mồi; (5) Lặp lại các chu kỳ: các bước trên được lặp lại nhiều lần để khuếch đại DNA. Kết quả được phân tích bằng điện di.

3.2. Lựa chọn marker liên kết gen kháng phù hợp cho khoai mì

Việc lựa chọn marker liên kết gen kháng phù hợp là yếu tố quan trọng quyết định hiệu quả của quy trình xác định gen. Các marker cần có độ đa hình cao, phân bố đều trên bộ gen, và liên kết chặt chẽ với gen kháng bệnh. Các loại marker thường được sử dụng trong nghiên cứu khoai mì bao gồm SSR (Simple Sequence Repeats) và SNP (Single Nucleotide Polymorphisms). Việc xác định các marker này đòi hỏi các nghiên cứu di truyền học sâu rộng và phân tích bản đồ di truyền.

3.3. Tối ưu hóa phương pháp PCR để tăng độ chính xác xác định gen

Để tăng độ chính xác của phương pháp PCR trong xác định gen, cần tối ưu hóa các yếu tố như nhiệt độ bắt cặp mồi (annealing temperature), nồng độ mồi, và thời gian kéo dài mạch. Nhiệt độ bắt cặp mồi cần được điều chỉnh để đảm bảo mồi bám vào vị trí đặc hiệu trên DNA, tránh hiện tượng khuếch đại sai. Nồng độ mồi và thời gian kéo dài mạch cần được tối ưu hóa để đảm bảo hiệu quả khuếch đại DNA. Việc sử dụng các enzyme DNA polymerase có độ chính xác cao cũng giúp giảm thiểu sai sót trong quá trình PCR.

IV. Ứng Dụng Sàng Lọc Giống Khoai Mì Kháng Bệnh Bằng Marker

Ứng dụng marker phân tử trong sàng lọc giống khoai mì kháng bệnh là một phương pháp hiệu quả và tiết kiệm thời gian. Thay vì phải chờ đợi cây phát triển và biểu hiện triệu chứng bệnh, các nhà khoa học có thể sử dụng marker để xác định các cá thể mang gen kháng bệnh ngay từ giai đoạn cây con. Sàng lọc giống bằng marker giúp loại bỏ các cá thể nhiễm bệnh và tập trung vào việc nhân giống và đánh giá các cá thể kháng bệnh. Điều này giúp rút ngắn thời gian chọn tạo giống và nâng cao hiệu quả.

4.1. Sàng lọc cây con mang gen kháng bệnh trong chương trình chọn tạo giống

Sàng lọc cây con bằng marker phân tử là một bước quan trọng trong chương trình chọn tạo giống khoai mì kháng bệnh. Sau khi lai tạo các dòng khoai mì khác nhau, các cây con được tạo ra được phân tích DNA bằng marker. Các cây con mang gen kháng bệnh được chọn lọc và tiếp tục được nhân giống và đánh giá. Các cây con không mang gen kháng bệnh bị loại bỏ, giúp tiết kiệm thời gian và nguồn lực.

4.2. Đánh giá tính kháng bệnh của các giống khoai mì đã sàng lọc

Sau khi sàng lọc bằng marker, các giống khoai mì kháng bệnh cần được đánh giá tính kháng bệnh trong điều kiện nhà kính và đồng ruộng. Các giống được trồng trong môi trường có áp lực bệnh cao và được theo dõi các triệu chứng bệnh. Các giống có khả năng chống chịu với bệnh cao được chọn lọc và tiếp tục được nhân giống và phân phối cho người nông dân. Việc đánh giá tính kháng bệnh cần được thực hiện nhiều lần và trong nhiều môi trường khác nhau để đảm bảo tính ổn định của gen kháng.

4.3. Kết hợp sàng lọc marker và đánh giá kiểu hình để cải thiện giống

Việc kết hợp sàng lọc marker và đánh giá kiểu hình là phương pháp hiệu quả nhất để cải thiện giống khoai mì. Sàng lọc marker giúp xác định các cá thể mang gen kháng bệnh, trong khi đánh giá kiểu hình giúp xác định các cá thể có năng suất và chất lượng tốt. Việc kết hợp hai phương pháp này giúp chọn lọc các giống khoai mì vừa kháng bệnh, vừa có năng suất cao và chất lượng tốt. Đây là mục tiêu quan trọng của các chương trình chọn tạo giống khoai mì.

V. Kết Luận và Hướng Phát Triển Nghiên Cứu Gen Kháng Bệnh Khoai Mì

Nghiên cứu về gen kháng bệnh khảm lá khoai mì đã đạt được những tiến bộ đáng kể, tuy nhiên vẫn còn nhiều thách thức phía trước. Việc xác định và ứng dụng các marker phân tử đã giúp rút ngắn thời gian chọn tạo giống và nâng cao hiệu quả. Tuy nhiên, cần tiếp tục nghiên cứu để tìm kiếm các gen kháng bệnh mới, các marker liên kết chặt chẽ hơn, và các phương pháp cải thiện giống tiên tiến hơn. Hướng phát triển trong tương lai bao gồm: nghiên cứu về cơ chế kháng bệnh, phát triển các giống khoai mì kháng bệnh đa chủng, và ứng dụng công nghệ chỉnh sửa gen.

5.1. Tổng kết các kết quả nghiên cứu về quy trình xác định gen

Nghiên cứu đã xây dựng và ứng dụng thành công quy trình xác định gen kháng bệnh khảm lá khoai mì bằng marker phân tử. Các marker được sử dụng bao gồm SSR và SNP. Quy trình bao gồm các bước: thu thập mẫu, tách chiết DNA, khuếch đại DNA bằng PCR, phân tích kết quả điện di, và đánh giá liên kết giữa marker và gen kháng bệnh. Quy trình này đã được sử dụng để sàng lọc các giống khoai mì kháng bệnh trong điều kiện nhà kính và đồng ruộng.

5.2. Đề xuất các hướng nghiên cứu tiếp theo về cải thiện giống khoai mì

Các hướng nghiên cứu tiếp theo về cải thiện giống khoai mì bao gồm: (1) Nghiên cứu về cơ chế kháng bệnh để hiểu rõ hơn về cách thức hoạt động của gen kháng; (2) Phát triển các giống khoai mì kháng bệnh đa chủng để chống lại nhiều chủng virus khác nhau; (3) Ứng dụng công nghệ chỉnh sửa gen (CRISPR-Cas9) để tạo ra các đột biến có lợi trong gen kháng; (4) Nghiên cứu về tương tác giữa gen kháng và môi trường để tối ưu hóa hiệu quả kháng bệnh.

5.3. Tầm quan trọng của hợp tác quốc tế trong nghiên cứu khoai mì

Hợp tác quốc tế đóng vai trò quan trọng trong nghiên cứu khoai mì. Chia sẻ thông tin, kinh nghiệm, và nguồn gen giữa các quốc gia giúp đẩy nhanh tiến độ nghiên cứu và phát triển. Hợp tác quốc tế giúp tiếp cận các công nghệ và phương pháp tiên tiến, đồng thời giúp giải quyết các vấn đề toàn cầu liên quan đến bệnh khảm lá khoai mì và an ninh lương thực.

Trích đoạn nội dung tài liệu

MỞ ĐẦU. Ý nghĩa khoa học. Ý nghĩa thực tiễn. Mục tiêu nhiệm vụ.

Mục tiêu tổng quát. Mục tiêu cụ thể. TỔNG QUAN TÀI LIỆU. Giới thiệu về cây khoai mì và tình hình sản xuất khoai mì ở Việt Nam.

Sơ lược về bệnh khảm lá gây hại trên khoai mì. Các biện pháp phòng trừ bệnh khảm lá khoai mì. Gen kháng bệnh khảm lá của cây khoai mì. Tình hình nghiên cứu xác định gen kháng bệnh khảm lá khoai mì bằng chỉ thị phân tử.

NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. Nội dung nghiên cứu. Phương pháp. Thu thập nguồn mẫu khoai mì phục vụ cho nghiên cứu.

Tách chiết DNA tổng số từ lá khoai mì. Thiết lập quy trình PCR nhận diện gen kháng bệnh khảm lá khoai mì dựa trên chỉ thị phân tử. Kiểm tra sự hiện diện của gen kháng bệnh khảm lá trên các giống khoai mì thu thập. Kiểm tra tính kháng bệnh khảm lá của các giống khoai mì thu thập.

Bố trí thí nghiệm và phân tích số liệu. KẾT QUẢ - THẢO LUẬN. Thu thập nguồn mẫu khoai mì phục vụ cho nghiên cứu. Tách chiết DNA tổng số từ lá khoai mì.

Thiết lập quy trình PCR nhận diện gen kháng bệnh khảm lá khoai mì dựa trên chỉ thị phân tử. Thiết lập phản ứng PCR nhận diện chỉ thị phân tử liên kết gen kháng. Kết quả khảo sát nhiệt độ bắt cặp mồi (Ta) tối ưu. Kết quả khảo sát nồng độ mồi tối ưu.

Kiểm tra sự hiện diện của chỉ thị phân tử liên kết với gen kháng bệnh khảm lá trên các giống khoai mì thu thập. Kiểm tra tính kháng bệnh khảm lá của các giống khoai mì thu thập .1 Kiểm tra tính kháng bệnh khảm lá của các giống khoai mì dưới áp lực bệnh tự nhiên. Kiểm tra tính kháng bệnh khảm lá của các giống khoai mì thông qua phương pháp lây nhiễm virus nhân tạo. 57 KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ.

60 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ACMBFV: African cassava mosaic BurkinaFaso virus ACMV: African cassava mosaic virus CMD: Cassava mosaic disease CMMGV: Cassava mosaic Madagasca virus CP: Coat protein EACMCV: East African cassava mosaic Cameroon virus EACMKV: East African cassava mosaic Kenya virus EACMMV: East African cassava mosaic Malawi virus EACMV: East African cassava mosaic virus EACMV-UG: East African cassava mosaic Ugandan Variant EACMZV: East African cassava mosaic Zanzibar virus ICMV: Indian cassava mosaic virus MP: Movement protein ORF: Open reading frame REn: Replication enhancer protein Rep: Replication associated protein SACMV: South African cassava mosaic virus SLMV: Sri Lankan cassava mosaic virus SNP: Single nucleotide polymorphism TrAP: Transcriptional activator protein i DANH SÁCH BẢNG Bảng 1. Các chỉ thị phân tử liên kết với gen kháng bệnh khảm lá ở cây khoai mì. Các chỉ thị phân tử sử dụng cho nhận diện gen kháng bệnh khảm lá khoai mì. Nhiệt độ áp dụng cho khảo sát nhiệt độ bắt cặp mồi tối ưu.

Nồng độ mồi áp dụng cho khảo sát nồng độ mồi tối ưu. Thông tin của các mẫu giống khoai mì thu thập tại các tỉnh. Kết quả tách chiết DNA tổng số từ lá khoai mì. Kết quả kiểm tra gen kháng bằng chỉ thị phân tử.

Kết quả phân tích alen của các chỉ thị phân tử liên kết với gen kháng CMD trên các mẫu giống khoai mì thu thập. 55 ii DANH SÁCH HÌNH Hình 1. Cấu trúc bộ gen của virus gây bệnh khảm lá khoai mì. Cây khoai mì biểu hiện triệu chứng khảm lá do rệp trắng truyền bệnh với các lá phía trên bị khảm và biến dạng trong khi các lá bên dưới không có triệu chứng.

Sự biểu hiện triệu chứng khác nhau giữa dòng khoai mì nhạy cảm (trái) và kháng (phải) khi bị nhiễm bệnh khảm lá. Mức độ biểu hiện bệnh trên lá khoai mì. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì ĐL-01. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì ĐL-06.

Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì ĐL-08. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì ĐL-10. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì VT-01. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì VT-06.

Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì VT-11. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì VT-15. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì VT-19. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì VT-22.

Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì BT-01. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì BT-05. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì LA-01. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì LA-02.

Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì LA-03. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì LA-04. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì LA-05. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì LA-06.

Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì LA-07. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì LA-12. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì LA-15. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì TN-01.

Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì TN-02. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì NT-01. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì NT-02. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì BP-01.

Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì BP-03. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì BP-06. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì BP-07. Mặt trên và mặt dưới lá khoai mì BP-11.

Hom khoai mì phát triển trong điều kiện nhà kính của Trung tâm Công nghệ Sinh học TP. Hồ Chí Minh. Kết quả điện di DNA tổng số tách chiết từ mẫu khoai mì thu thập tại Vũng Tàu. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi NS158.

Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với chỉ thị NS169. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi NS198. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi SSRY28. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi SSRY106.

Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi RME-1. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi NS158 ở các nhiệt độ Ta khác nhau. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi NS169 ở các nhiệt độ Ta khác nhau. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi NS198 ở các nhiệt độ Ta khác nhau.

Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi SSRY28 ở các nhiệt độ Ta khác nhau. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi SSRY106 ở các nhiệt độ Ta khác nhau. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi mồi RME-1 ở các nhiệt độ Ta khác nhau. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi NS158 ở các nồng độ khác nhau.

Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi NS169 ở các nồng độ khác nhau. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi NS198 ở các nồng độ khác nhau. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi SSRY28 ở các nồng độ khác nhau. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi SSRY106 ở các nồng độ khác nhau.

Kết quả điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA của lá khoai mì kháng bệnh với mồi RME-1 ở các nồng độ khác nhau. Hình thái lá của các cây khoai mì trồng trong điều kiện đồng ruộng sau 6 tháng. Kết quả điện di sản phẩm PCR phát hiện virus SLCV trên các mẫu khoai mì. Kết quả điện di sản phẩm PCR phát hiện virus SLCV trên cây khoai mì sau 2 (A) và 4 (B) tuần lây nhiễm virus.

Kết quả điện di sản phẩm PCR phát hiện virus SLCV trên cây khoai mì sau 4 tuần lây nhiễm virus. Triệu chứng nhiễm virus khảm lá trên các cây khoai mì sau 6 tuần lây nhiễm virus nhân tạo. 58 vi MỞ ĐẦU 1. Đặt vấn đề Bệnh khảm lá khoai mì là một trong những dịch hại gây tổn thất nghiêm trọng đối với ngành sản xuất khoai mì trên thế giới.

Trước đây, bệnh chỉ gây hại chủ yếu ở các nước châu Phi và hai nước thuộc khu vực châu Á đó là Ấn Độ và Sri Lanka. Tuy nhiên, đến tháng 5/2015, bệnh đã được phát hiện ở Campuchia và nhanh chóng lan truyền sang Việt Nam (phát hiện ở Tây Ninh vào tháng 5/2017). Tính đến tháng 8/2018, bệnh đã xuất hiện và gây hại trên các vùng trồng khoai mì tại 10 tỉnh, thành phố của Việt Nam, bao gồm Tây Ninh, Bình Dương, Bà Rịa - Vũng Tàu, Đồng Nai, Đăk Lăk, Bình Phước, Bình Thuận, Ninh Thuận và Thành phố Hồ Chí Minh. Tác nhân gây bệnh khảm lá khoai mì được xác định là các virus thuộc giống Begomovirus (họ Geminiviridae).

Hiện tại có tổng số 12 virus gây khảm lá khoai mì, trong đó có 10 virus phân bố ở châu Phi và 2 virus phân bố ở châu Á. Virus hiện đang gây hại trên khoai mì ở Việt Nam đã được xác định là Sri Lanka Cassava Mosaic Virus, là một trong hai virus phân bố ở Châu Á. Bất chấp các nỗ lực được thực hiện nhằm kiểm soát bệnh, đến nay, bệnh khảm lá vẫn đang tiếp tục lây lan và gây hại nghiêm trọng trên các vùng trồng khoai mì ở Việt Nam cũng như trên thế giới. Nghiên cứu phát triển giống khoai mì có khả năng kháng virus được xem là một giải pháp triển vọng nhất cho vấn đề kiểm soát bệnh.

Giống kháng có thể được phát triển bằng công nghệ gen (công nghệ RNAi, công nghệ chỉnh sửa gen) hay sử dụng nguồn gen kháng tự nhiên. Trong đó, sử dụng nguồn gen kháng tự nhiên được xem là giải pháp triển vọng nhất. Vì vậy, “Xây dựng và ứng dụng quy trình xác định gen kháng bệnh khảm lá ở cây khoai mì bằng chỉ thị phân tử” là một vấn đề cấp thiết và có ý nghĩa quan trọng.