Luận Văn Thạc Sĩ: Kỹ Thuật Nhân Nhanh Bình Vôi Tím Stephania Rotunda Lour Bằng Phương Pháp In Vitro

• Tác giả: Chu Quang Mạnh
• Người hướng dẫn: Th.S Nguyễn Thị Tình
• Trường học: Đại học Nông Lâm Thái Nguyên
• Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học
• Đề tài: Nghiên Cứu Kỹ Thuật Nhân Nhanh Bình Vôi Tím (Stephania Rotunda Lour) Bằng Phương Pháp In Vitro
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2014
• Địa điểm: Thái Nguyên

• LỜI CẢM ƠN
• 1. PHẦN 1: MỞ ĐẦU
• 1.1. Mục đích của đề tài
• 1.2. Yêu cầu của đề tài
• 1.3. Ý nghĩa của đề tài
• 2. PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Giới thiệu chi Bình Vôi
• 2.2. Phân loại khoa học
• 2.3. Đặc điểm chung chi Bình Vôi
• 2.4. Tổng quan về cây Bình Vôi Tím
• 2.5. Đặc điểm hình thái
• 2.6. Đặc điểm sinh thái
• 2.7. Giá trị cây Bình Vôi Tím
• 2.8. Khái quát về nuôi cấy mô tế bào thực vật
• 2.9. Cơ sở khoa học của nuôi cấy mô tế bào thực vật
• 2.10. Một số chất điều hòa sinh trưởng nuôi cấy mô tế bào thực vật
• 2.11. Các điều kiện nuôi cấy
• 2.12. Các giai đoạn trong nhân giống in vitro
• 2.13. Tình hình nghiên cứu trên thế giới và trong nước
• 2.13.1. Tình hình nghiên cứu Bình Vôi Tím trên thế giới
• 2.13.2. Tình hình nghiên cứu Bình Vôi Tím ở Việt Nam
• 3. PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu
• 3.2. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 3.3. Hóa chất và thiết bị
• 3.4. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
• 3.4.1. Nội dung nghiên cứu
• 3.4.2. Phương pháp nghiên cứu
• 4. PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Kết quả ảnh hưởng của phương pháp khử trùng đến hiệu quả tạo vật liệu sạch nấm và vi khuẩn của mẫu Bình Vôi Tím (Stephania rotunada Lour)
• 4.2. Kết quả ảnh hưởng của hàm lượng khoáng 1/2 MS, B5, MS, 2MS, đến khả năng tái sinh chồi Bình Vôi Tím (Stephania rotunada Lour)
• 4.3. Kết quả ảnh hưởng nồng độ loại cytokinin (Kinetin, BA, TDZ) đến khả năng nhân nhanh chồi Bình Vôi Tím (Stephania rotunada Lour)
• 4.4. Kết quả ảnh hưởng hàm lượng BA (0,5mg/l) kết hợp với nồng độ NAA, IBA và IAA đến khả năng nhân nhanh chồi cây Bình Vôi Tím (Stephania rotunada Lour)
• 4.5. Kết quả ảnh hưởng hàm lượng nước dừa đến khả năng nhân nhanh chồi Bình Vôi Tím (Stephania rotunada Lour)
• 4.6. Kết quả ảnh hưởng hàm lượng IAA đến khả năng ra rễ của Bình Vôi Tím (Stephania rotunada Lour)
• 5. PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Kỹ thuật nhân nhanh

Nghiên cứu tập trung vào kỹ thuật nhân nhanh cây Bình Vôi Tím (Stephania rotunda Lour) bằng phương pháp in vitro. Phương pháp này cho phép nhân giống với số lượng lớn trong thời gian ngắn, đảm bảo tính đồng nhất về di truyền và sạch bệnh. Các bước chính bao gồm khử trùng mẫu, tái sinh chồi, nhân nhanh chồi, và ra rễ. Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng việc sử dụng các chất điều hòa sinh trưởng như BA, NAA, và IAA có ảnh hưởng tích cực đến quá trình nhân giống.

1.1. Khử trùng mẫu

Khử trùng là bước quan trọng để đảm bảo mẫu sạch nấm và vi khuẩn. Nghiên cứu sử dụng các phương pháp khử trùng khác nhau, bao gồm sử dụng cồn và chất khử trùng hóa học. Kết quả cho thấy phương pháp khử trùng bằng cồn 70% kết hợp với chất khử trùng hóa học đạt hiệu quả cao nhất, với tỷ lệ mẫu sạch đạt trên 90%.

1.2. Tái sinh chồi

Tái sinh chồi được thực hiện trên các môi trường dinh dưỡng khác nhau như 1/2 MS, B5, MS, và 2MS. Môi trường MS cho kết quả tái sinh chồi tốt nhất, với tỷ lệ chồi tái sinh đạt 85%. Ngoài ra, việc bổ sung cytokinin như BA và Kinetin cũng có tác động tích cực đến quá trình này.

II. Phương pháp in vitro

Phương pháp in vitro được áp dụng để nhân giống Bình Vôi Tím với mục đích bảo tồn và phát triển loài cây dược liệu quý này. Nghiên cứu đã xác định các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nhân giống, bao gồm môi trường dinh dưỡng, chất điều hòa sinh trưởng, và điều kiện nuôi cấy. Kết quả cho thấy môi trường MS bổ sung BA 0.5 mg/l và NAA 0.1 mg/l là tối ưu cho quá trình nhân nhanh chồi.

2.1. Nhân nhanh chồi

Nhân nhanh chồi được thực hiện bằng cách sử dụng các chất điều hòa sinh trưởng như BA, Kinetin, và TDZ. Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng BA ở nồng độ 0.5 mg/l kết hợp với NAA 0.1 mg/l cho hiệu quả nhân nhanh chồi cao nhất, với hệ số nhân đạt 5.2 chồi/mẫu sau 4 tuần nuôi cấy.

2.2. Ra rễ

Quá trình ra rễ được thực hiện bằng cách sử dụng IAA ở các nồng độ khác nhau. Kết quả cho thấy IAA ở nồng độ 1.0 mg/l là tối ưu, với tỷ lệ ra rễ đạt 90% sau 5 tuần nuôi cấy. Rễ phát triển khỏe mạnh và có khả năng thích nghi tốt khi chuyển ra môi trường đất.

III. Bảo tồn thực vật quý hiếm

Nghiên cứu này có ý nghĩa quan trọng trong việc bảo tồn thực vật quý hiếm như Bình Vôi Tím. Phương pháp in vitro không chỉ giúp nhân giống với số lượng lớn mà còn đảm bảo tính đồng nhất về di truyền, giảm thiểu nguy cơ thoái hóa giống. Điều này đặc biệt quan trọng trong bối cảnh nguồn cây tự nhiên đang bị suy giảm nghiêm trọng do khai thác quá mức.

3.1. Giá trị dược liệu

Bình Vôi Tím là một loại thực vật dược liệu quý, chứa nhiều hoạt chất có giá trị trong y học như L-tetrahydropalmatin và roemerin. Các hoạt chất này có tác dụng an thần, gây ngủ, và điều trị các bệnh về thần kinh. Việc nhân giống thành công bằng phương pháp in vitro sẽ góp phần đảm bảo nguồn cung cấp dược liệu ổn định cho ngành y tế.

3.2. Ứng dụng thực tiễn

Nghiên cứu này có tiềm năng ứng dụng cao trong thực tiễn, đặc biệt là trong lĩnh vực công nghệ sinh học và nhân giống thực vật. Quy trình nhân giống in vitro có thể được áp dụng rộng rãi để sản xuất cây giống chất lượng cao, phục vụ cho các dự án trồng và bảo tồn dược liệu quý.