Luận văn thạc sĩ kỹ thuật hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính ức chế enzyme a glucosidase của lá chân chim không cuống quả

Luận văn thạc sĩ kỹ thuật hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính ức chế enzyme a glucosidase từ lá chân chim không cuống quả.

• Tác giả: Lê Thị Việt Hoa
• Người hướng dẫn: TS. Mai Đình Trị
• Trường học: Trường Đại Học Bách Khoa
• Chuyên ngành: Kỹ thuật Hóa học
• Đề tài: Nghiên cứu hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase từ lá chân chim không cuống quả
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2015
• Địa điểm: TP. Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Phân loại khoa học
• 1.2. Mô tả thực vật
• 1.3. Các nghiên cứu về thành phần hóa học
• 1.4. Các nghiên cứu về tác dụng dược lý
• 2. CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Phương pháp nghiên cứu
• 2.1.1. Phương pháp chiết cao
• 2.1.2. Phương pháp phân lập các hợp chất
• 2.1.3. Phương pháp thử nghiệm hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase
• 2.2. Phương tiện nghiên cứu
• 2.2.1. Dụng cụ và thiết bị
• 3. CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM
• 3.1. Chuẩn bị nguyên liệu
• 3.2. Quá trình trích ly các cao chiết
• 3.3. Quá trình sắc ký phân lập các hợp chất
• 3.4. Quá trình thử hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN
• 4.1. Nhận dạng cấu trúc các chất đã phân lập
• 4.2. Kết quả khảo sát hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase
• 5. CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ
• PHỤ LỤC
• Phụ lục 1. Dữ liệu phổ của chất SSL01
• Phụ lục 1.1. Phổ HR-ESI-MS của SSL01
• Phụ lục 1.2. Phổ 13C-NMR của SSL01
• Phụ lục 1.3. Phổ DEPT của SSL01
• Phụ lục 1.4. Phổ 1H-NMR của SSL01
• Phụ lục 1.5. Phổ HSQC của SSL01
• Phụ lục 1.6. Phổ HMBC của SSL01
• Phụ lục 2. Dữ liệu phổ của chất SSL02
• Phụ lục 2.1. Phổ HR-ESI-MS của SSL02
• Phụ lục 2.2. Phổ 13C-NMR của SSL02
• Phụ lục 2.3. Phổ DEPT của SSL02
• Phụ lục 2.4. Phổ 1H-NMR của SSL02
• Phụ lục 2.5. Phổ HSQC của SSL02
• Phụ lục 2.6. Phổ HMBC của SSL02
• Phụ lục 3. Dữ liệu phổ của chất SSL03
• Phụ lục 3.1. Phổ HR-ESI-MS của SSL03
• Phụ lục 3.2. Phổ 13C-NMR của SSL03
• Phụ lục 3.3. Phổ DEPT của SSL03
• Phụ lục 3.4. Phổ 1H-NMR của SSL03
• Phụ lục 3.5. Phổ HSQC của SSL03
• Phụ lục 3.6. Phổ HMBC của SSL03
• Phụ lục 3.7. Phổ COSY của SSL03
• Phụ lục 4. Dữ liệu phổ của chất SSL04
• Phụ lục 4.1. Phổ HR-ESI-MS của SSL04
• Phụ lục 4.2. Phổ 13C-NMR của SSL04
• Phụ lục 4.3. Phổ DEPT của SSL04
• Phụ lục 4.4. Phổ 1H-NMR của SSL04
• Phụ lục 4.5. Phổ HSQC của SSL04
• Phụ lục 4.6a. Phổ HMBC của SSL04
• Phụ lục 5. Dữ liệu phổ của chất SSL05
• Phụ lục 5.1. Phổ HR-ESI-MS của SSL05
• Phụ lục 5.2. Phổ 13C-NMR của SSL05
• Phụ lục 5.3. Phổ DEPT của SSL05
• Phụ lục 5.4. Phổ 1H-NMR của SSL05
• Phụ lục 5.5. Phổ HSQC của SSL05
• Phụ lục 5.6. Phổ HMBC của SSL05
• Phụ lục 5.7. Phổ COSY của SSL05
• Phụ lục 6. Dữ liệu phổ của chất SSL06
• Phụ lục 6.1. Phổ HR-ESI-MS của SSL06
• Phụ lục 6.2. Phổ 13C-NMR của SSL06
• Phụ lục 6.3. Phổ DEPT của SSL06
• Phụ lục 6.4. Phổ 1H-NMR của SSL06
• Phụ lục 6.5. Phổ HSQC của SSL06
• Phụ lục 6.6. Phổ HMBC của SSL06
• Phụ lục 7. Dữ liệu phổ của chất SSL07
• Phụ lục 7.1. Phổ UV của SSL07
• Phụ lục 7.2. Phổ IR của SSL07
• Phụ lục 7.3a. Phổ HR-ESI-MS positive của SSL07
• Phụ lục 7.3b. Phổ HR-ESI-MS negative của SSL07
• Phụ lục 7.4. Phổ 13C-NMR của SSL07
• Phụ lục 7.5. Phổ DEPT của SSL07
• Phụ lục 7.6. Phổ 1H-NMR của SSL07
• Phụ lục 7.7. Phổ HSQC của SSL07
• Phụ lục 7.8. Phổ HMBC của SSL07
• Phụ lục 7.9. Phổ COSY của SSL07
• DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC CÁC BẢNG
• DANH MỤC CÁC HÌNH
• DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ
• DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Nghiên Cứu Ức Chế Enzyme α Glucosidase

Việt Nam, với khí hậu nhiệt đới gió mùa, sở hữu nguồn tài nguyên thực vật phong phú. Từ xa xưa, kinh nghiệm dân gian đã chỉ ra hiệu quả của nhiều loại cây cỏ trong việc chữa bệnh. Ngày nay, sự phát triển của khoa học kỹ thuật, đặc biệt là ngành Hóa - Thực vật, đòi hỏi chúng ta không chỉ sử dụng hiệu quả mà còn phải nghiên cứu sâu hơn về thành phần hóa học của các cây thuốc, từ đó tìm ra những hợp chất có hoạt tính sinh học cao và khám phá những tác dụng dược lý mới. Xu hướng hiện tại, các nhà khoa học tập trung vào những cây thuốc có khả năng bồi bổ cơ thể, tăng cường sức khỏe, ngăn ngừa lão hóa tế bào và phòng chống ung thư, như các loài thuộc họ Nhân sâm (Araliaceae).

1.1. Giới Thiệu Về Enzyme α Glucosidase và Tầm Quan Trọng

Enzyme α-glucosidase đóng vai trò quan trọng trong quá trình tiêu hóa carbohydrate, xúc tác phản ứng thủy phân các liên kết α-1,4-glycosidic để giải phóng glucose. Ức chế hoạt động của enzyme này là một phương pháp hiệu quả trong việc kiểm soát đường huyết, đặc biệt ở bệnh nhân tiểu đường. Các chất ức chế enzyme α-glucosidase có thể làm chậm quá trình hấp thu glucose, giúp giảm thiểu sự tăng đột biến đường huyết sau ăn. Do đó, việc tìm kiếm các hợp chất tự nhiên có khả năng ức chế enzyme này là một hướng đi đầy tiềm năng trong điều trị tiểu đường.

1.2. Cây Chân Chim Không Cuống Quả Tiềm Năng Dược Liệu

Năm 2004, Trần Công Luận và cộng sự đã phát hiện ra một loài mới thuộc họ Nhân sâm, đó là chân chim không cuống quả (Schefflera sessiliflora De P.). Với mong muốn khám phá các hoạt chất quý và có hoạt tính sinh học cao, nghiên cứu về thành phần hóa học và khả năng ức chế enzyme α-glucosidase của lá chân chim không cuống quả được tiến hành. Nghiên cứu này có thể cung cấp cơ sở khoa học cho việc sử dụng dược liệu này, đồng thời góp phần nâng cao giá trị của các loại dược liệu bản địa Việt Nam.

II. Thách Thức Trong Nghiên Cứu Hoạt Tính Ức Chế α Glucosidase

Mặc dù tiềm năng của cây thuốc nam là rất lớn, việc nghiên cứu và phát triển các sản phẩm từ chúng vẫn đối mặt với nhiều thách thức. Một trong số đó là việc xác định chính xác các hợp chất có hoạt tính sinh học, đặc biệt là khả năng ức chế enzyme α-glucosidase. Quá trình này đòi hỏi các phương pháp phân tích hiện đại, kỹ thuật chiết xuất và phân lập phức tạp, cũng như các thử nghiệm in vitro và in vivo để đánh giá hiệu quả và độc tính tế bào.

2.1. Khó Khăn Trong Phân Lập và Định Danh Hợp Chất

Việc phân lập hợp chất từ chiết xuất thực vật là một quá trình tốn kém và đòi hỏi kỹ năng cao. Các hợp chất tự nhiên thường tồn tại với nồng độ rất thấp trong lá chân chim không cuống quả, và việc tách chúng ra khỏi hỗn hợp phức tạp các chất khác là một thách thức lớn. Sau khi phân lập, việc xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất này cũng đòi hỏi các phương pháp phổ khối lượng (MS), NMR, và so sánh với các dữ liệu tham khảo.

2.2. Đánh Giá Hoạt Tính Sinh Học và An Toàn Sinh Học

Sau khi xác định được các hợp chất có tiềm năng, việc đánh giá hoạt tính sinh học của chúng là bước quan trọng tiếp theo. Các thử nghiệm in vitro được sử dụng để đánh giá khả năng ức chế enzyme α-glucosidase của các hợp chất. Tuy nhiên, kết quả in vitro không phải lúc nào cũng phản ánh chính xác hiệu quả in vivo. Do đó, cần có các nghiên cứu trên mô hình động vật để đánh giá hiệu quả hạ đường huyết và an toàn sinh học của các hợp chất này.

III. Phương Pháp Nghiên Cứu Chiết Xuất và Phân Lập Hợp Chất

Nghiên cứu này tập trung vào việc chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất từ phân đoạn methanol của lá chân chim không cuống quả. Các phương pháp sắc ký khác nhau được sử dụng để phân tách các hợp chất, và cấu trúc của chúng được xác định bằng các phương pháp phổ nghiệm hiện đại như HR-ESI-MS, NMR, COSY, DEPT, HSQC, và HMBC. Kết quả thử nghiệm hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase cho thấy một số hợp chất có tiềm năng trong việc điều trị tiểu đường.

3.1. Quy Trình Chiết Xuất và Phân Đoạn Cao Chiết

Quá trình chiết xuất bắt đầu bằng việc sử dụng ethanol để thu được cao ethanol toàn phần từ lá chân chim không cuống quả. Sau đó, cao ethanol được phân đoạn bằng các dung môi khác nhau như n-hexane và ethyl acetate để thu được các phân đoạn có độ phân cực khác nhau. Phân đoạn methanol được chọn để nghiên cứu tiếp do có tiềm năng chứa các hợp chất có hoạt tính sinh học.

3.2. Kỹ Thuật Sắc Ký Phân Lập Hợp Chất Mục Tiêu

Các kỹ thuật sắc ký như sắc ký cột (CC) và sắc ký lớp mỏng (TLC) được sử dụng để phân lập các hợp chất từ phân đoạn methanol. Quá trình sắc ký được thực hiện bằng cách sử dụng các hệ dung môi khác nhau để tách các hợp chất dựa trên độ phân cực của chúng. Các phân đoạn chứa các hợp chất tương tự được gộp lại và tiếp tục được phân lập bằng các kỹ thuật sắc ký khác nhau cho đến khi thu được các hợp chất tinh khiết.

3.3. Xác Định Cấu Trúc Bằng Phương Pháp Phổ Nghiệm

Cấu trúc của các hợp chất phân lập được xác định bằng các phương pháp phổ nghiệm hiện đại như HR-ESI-MS, NMR, COSY, DEPT, HSQC, và HMBC. Các phương pháp này cung cấp thông tin chi tiết về khối lượng phân tử, các nhóm chức, và các liên kết trong phân tử, cho phép xác định chính xác cấu trúc của các hợp chất.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Hoạt Tính Ức Chế Enzyme α Glucosidase

Từ phân đoạn methanol của lá chân chim không cuống quả, đã cô lập được 7 hợp chất, bao gồm acid oleanolic (SSL01), acid 3-O-β-D-glucuronopyranosyloleanolic (SSL02), và một số dẫn xuất khác. Kết quả thử nghiệm hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase cho thấy một số hợp chất có hoạt tính mạnh hơn so với acarbose, một loại thuốc được sử dụng để điều trị tiểu đường.

4.1. Phân Lập và Xác Định Cấu Trúc Bảy Hợp Chất

Nghiên cứu đã thành công trong việc phân lập và xác định cấu trúc của bảy hợp chất từ phân đoạn methanol của lá chân chim không cuống quả. Các hợp chất này bao gồm các triterpenoid và saponin, trong đó có một hợp chất hoàn toàn mới (SSLO7). Cấu trúc của các hợp chất này được xác định bằng các phương pháp phổ HR-ESI-MS, 'H-NMR, '“C-NMR, COSY, DEPT, HSQC, HMBC và so sánh với các tài liệu tham khảo.

4.2. Đánh Giá Hoạt Tính Ức Chế Enzyme α Glucosidase In Vitro

Kết quả thử nghiệm hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase cho thấy acid 3-O-β-D-glucuronopyranosyloleanolic (SSL02), 3-O-β-D-glucuronopyranosyl oleanolic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester (SSL03), 3-Ó-[α-L-rhamnopyranosyl-(I>3)]-β-D-glucuronopyranosyl hederagenin (SSL05), 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1>3)]-β-D-glucuronopyranosyl oleanolic 28-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1>4)]-β-D-glucopyranosyl ester (SSLO7) có hoạt tính mạnh với IC50 lần lượt là 21,74; 159.1; 5,99; 40,6 uM so với acarbose IC50 = 214,51 uM. Trong khi trên các cao chiết thì không thể hiện hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn và Tiềm Năng Phát Triển Dược Phẩm

Kết quả nghiên cứu này mở ra tiềm năng ứng dụng lá chân chim không cuống quả trong việc phát triển các sản phẩm hỗ trợ điều trị tiểu đường. Các hợp chất có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase có thể được sử dụng làm thành phần trong các thực phẩm chức năng hoặc dược phẩm. Tuy nhiên, cần có thêm các nghiên cứu in vivo và thử nghiệm lâm sàng để đánh giá hiệu quả và an toàn của các sản phẩm này.

5.1. Phát Triển Thực Phẩm Chức Năng Hỗ Trợ Tiểu Đường

Các chiết xuất hoặc hợp chất từ lá chân chim không cuống quả có thể được sử dụng để phát triển các thực phẩm chức năng hỗ trợ điều trị tiểu đường. Các sản phẩm này có thể giúp kiểm soát đường huyết sau ăn, giảm nguy cơ biến chứng của bệnh tiểu đường, và cải thiện chất lượng cuộc sống của bệnh nhân.

5.2. Nghiên Cứu Phát Triển Dược Phẩm Mới

Các hợp chất có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase mạnh có thể được sử dụng làm cơ sở để phát triển các dược phẩm mới điều trị tiểu đường. Các nghiên cứu cần tập trung vào việc tối ưu hóa cấu trúc của các hợp chất này để tăng cường hoạt tính và giảm thiểu tác dụng phụ.

VI. Kết Luận và Hướng Nghiên Cứu Hoạt Tính Ức Chế α Glucosidase

Nghiên cứu này đã góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của lá chân chim không cuống quả. Việc phát hiện ra các hợp chất có khả năng ức chế enzyme α-glucosidase mở ra hướng đi mới trong việc tìm kiếm các giải pháp tự nhiên để điều trị tiểu đường. Tuy nhiên, cần có thêm các nghiên cứu sâu hơn để đánh giá đầy đủ tiềm năng của dược liệu này.

6.1. Tổng Kết Các Kết Quả Nghiên Cứu Chính

Nghiên cứu đã thành công trong việc phân lập và xác định cấu trúc của bảy hợp chất từ lá chân chim không cuống quả, trong đó có một hợp chất mới. Một số hợp chất này có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase mạnh hơn so với acarbose. Kết quả này cho thấy tiềm năng của lá chân chim không cuống quả trong việc phát triển các sản phẩm hỗ trợ điều trị tiểu đường.

6.2. Đề Xuất Hướng Nghiên Cứu Tiếp Theo

Các nghiên cứu tiếp theo nên tập trung vào việc đánh giá hiệu quả in vivo và an toàn sinh học của các hợp chất có hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase. Ngoài ra, cần có các nghiên cứu về cơ chế tác dụng của các hợp chất này để hiểu rõ hơn về cách chúng ức chế enzyme α-glucosidase. Các nghiên cứu về độc tính tế bào và an toàn sinh học cũng cần được thực hiện để đảm bảo rằng các sản phẩm từ lá chân chim không cuống quả là an toàn cho người sử dụng.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Việt Nam với khí hậu nhiệt đới gió mùa sở hữu nguồn thực vật phong phú, trong đó nhiều loài cây thuốc truyền thống được sử dụng từ lâu đời để chữa bệnh và bồi bổ sức khỏe. Tuy nhiên, việc sử dụng chủ yếu dựa trên kinh nghiệm dân gian, thiếu cơ sở khoa học về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học. Trong bối cảnh đó, nghiên cứu về các hợp chất có hoạt tính sinh học từ cây thuốc trở nên cấp thiết nhằm nâng cao giá trị dược liệu Việt Nam và phát triển các sản phẩm y dược mới.

Loài chân chim không cuống quả (Schefflera sessiliflora De P.), thuộc họ Nhân sâm (Araliaceae), được phát hiện năm 2004 và chưa có nghiên cứu chi tiết về thành phần hóa học cũng như hoạt tính sinh học. Luận văn tập trung nghiên cứu thành phần hóa học và thử hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase của lá chân chim không cuống quả, nhằm tìm kiếm các hợp chất có tiềm năng ứng dụng trong điều trị bệnh đái tháo đường loại II.

Nghiên cứu được thực hiện trong khoảng thời gian từ tháng 7/2014 đến tháng 5/2015 tại Viện Công nghệ Hóa học, TP. Hồ Chí Minh. Mục tiêu chính là chiết tách, phân lập và xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất từ phân đoạn methanol của lá, đồng thời đánh giá hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase của các cao chiết và hợp chất cô lập được. Kết quả nghiên cứu góp phần làm rõ cơ sở khoa học cho việc sử dụng dược liệu Schefflera sessiliflora, đồng thời mở ra hướng phát triển các sản phẩm sinh học có hoạt tính điều trị đái tháo đường.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên các lý thuyết và mô hình sau:

• Hóa học tự nhiên và phân tích hợp chất thiên nhiên: Tập trung vào việc chiết tách, phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất triterpenoid từ thực vật, đặc biệt là các saponin và acid oleanolic, hederagenin có trong họ Araliaceae.
• Mô hình enzyme a-glucosidase và cơ chế ức chế enzyme: Enzyme a-glucosidase đóng vai trò quan trọng trong quá trình thủy phân các liên kết glycosidic, giải phóng glucose. Việc ức chế enzyme này giúp kiểm soát lượng đường huyết, là cơ sở điều trị đái tháo đường loại II.
• Khái niệm chính:
  • Triterpenoid: Hợp chất tự nhiên có cấu trúc đa vòng, thường có hoạt tính sinh học đa dạng.
  • Saponin: Hợp chất glycoside có khả năng tạo bọt, thường có tác dụng dược lý như kháng viêm, chống oxy hóa.
  • IC50: Nồng độ chất ức chế làm giảm hoạt tính enzyme 50%, chỉ số quan trọng đánh giá hiệu quả ức chế enzyme.
  • Phương pháp sắc ký: Kỹ thuật phân tách hỗn hợp dựa trên tính chất hóa lý khác nhau của các thành phần.
  • Phổ NMR, HR-ESI-MS: Phương pháp xác định cấu trúc phân tử dựa trên phổ cộng hưởng từ hạt nhân và phổ khối lượng phân tử.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Lá chân chim không cuống quả được thu hái tại Đà Lạt, xử lý sơ bộ, phơi khô và bảo quản. Các cao chiết được điều chế từ ethanol 96%, sau đó phân đoạn bằng dung môi n-hexane, ethyl acetate và methanol.
• Phương pháp phân tích:
  • Chiết xuất bằng phương pháp ngâm dấm kết hợp siêu âm, cô quay áp suất thấp để thu hồi dung môi.
  • Phân đoạn cao chiết bằng sắc ký lỏng-lỏng và hấp phụ trên cột Diaion HP-20.
  • Phân lập hợp chất bằng sắc ký cột pha thường và pha đảo với các hệ dung môi tăng dần độ phân cực.
  • Xác định cấu trúc hóa học bằng phổ HR-ESI-MS, 1D và 2D NMR (¹H-NMR, ¹³C-NMR, COSY, DEPT, HSQC, HMBC).
• Phương pháp thử hoạt tính:
  • Đánh giá hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase dựa trên phản ứng thủy phân p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside, đo hấp thu quang ở bước sóng 405 nm.
  • Xác định % ức chế và IC50 của các cao chiết và hợp chất cô lập.
• Timeline nghiên cứu: Từ tháng 7/2014 đến tháng 5/2015, bao gồm thu thập mẫu, chiết tách, phân lập, xác định cấu trúc và thử nghiệm hoạt tính.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Phân lập và xác định cấu trúc 7 hợp chất triterpenoid từ phân đoạn methanol của lá chân chim không cuống quả, bao gồm acid oleanolic (SSL01), acid 3-O-β-D-glucuronopyranosyloleanolic (SSL02), 3-O-β-D-glucuronopyranosyl oleanolic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester (SSL03), và một hợp chất hoàn toàn mới là 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucuronopyranosyl oleanolic acid 28-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranosyl ester (SSL07).
2. Hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase của các hợp chất cô lập được đánh giá với IC50 lần lượt là 21,74 μM (SSL02), 159,1 μM (SSL03), 5,99 μM (SSL05), và 40,6 μM (SSL07), so với acarbose (IC50 = 214,51 μM). Điều này cho thấy một số hợp chất có hoạt tính mạnh vượt trội so với thuốc chuẩn.
3. Các cao chiết thô không thể hiện hoạt tính ức chế enzyme đáng kể, cho thấy hoạt tính sinh học tập trung chủ yếu ở các hợp chất tinh khiết.
4. Phân tích phổ NMR và HR-ESI-MS cho phép xác định chính xác cấu trúc các hợp chất, đặc biệt là các vị trí gắn glycosid và nhóm chức trên khung oleanolic, góp phần làm rõ cấu trúc hóa học của các triterpenoid trong loài này.

Thảo luận kết quả

Hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase của các hợp chất cô lập cho thấy tiềm năng ứng dụng trong điều trị đái tháo đường loại II, nhờ khả năng làm chậm hấp thu glucose từ đường tiêu hóa. Sự khác biệt về IC50 giữa các hợp chất phản ánh ảnh hưởng của cấu trúc glycosid và nhóm thế đến hiệu quả ức chế enzyme. Ví dụ, SSL05 với IC50 thấp nhất (5,99 μM) có thể do cấu trúc glycosid đặc biệt tăng cường tương tác với enzyme.

So sánh với các nghiên cứu trước đây trên các loài Schefflera khác và các hợp chất triterpenoid tương tự, kết quả này khẳng định giá trị dược liệu của Schefflera sessiliflora và mở rộng hiểu biết về thành phần hóa học của họ Araliaceae. Việc cao chiết thô không có hoạt tính rõ rệt cũng phù hợp với thực tế rằng các hợp chất hoạt tính thường tồn tại ở nồng độ thấp và cần được tinh chế để phát huy tác dụng.

Dữ liệu có thể được trình bày qua biểu đồ so sánh IC50 của các hợp chất và acarbose, cũng như bảng tổng hợp dữ liệu phổ NMR để minh họa sự khác biệt cấu trúc. Kết quả này góp phần làm rõ cơ chế tác động và hỗ trợ phát triển các sản phẩm dược liệu từ Schefflera sessiliflora.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Phát triển quy trình chiết tách và tinh chế các hợp chất triterpenoid có hoạt tính cao nhằm tạo nguyên liệu chuẩn cho nghiên cứu sâu hơn và ứng dụng dược phẩm. Thời gian thực hiện: 1-2 năm; chủ thể: Viện nghiên cứu và doanh nghiệp dược liệu.
2. Nghiên cứu mở rộng về cơ chế ức chế enzyme a-glucosidase và đánh giá độc tính, dược động học của các hợp chất cô lập để đảm bảo an toàn và hiệu quả khi ứng dụng lâm sàng. Thời gian: 2-3 năm; chủ thể: các trung tâm nghiên cứu y dược.
3. Khuyến cáo sử dụng dược liệu Schefflera sessiliflora trong y học cổ truyền với liều lượng và cách dùng dựa trên kết quả khoa học, nhằm nâng cao hiệu quả và giảm thiểu rủi ro. Chủ thể: Bộ Y tế, các cơ sở y học cổ truyền; thời gian: 1 năm.
4. Xây dựng mô hình sản xuất sản phẩm chức năng hoặc thuốc từ các hợp chất có hoạt tính ức chế a-glucosidase, góp phần đa dạng hóa sản phẩm dược liệu Việt Nam. Thời gian: 3-5 năm; chủ thể: doanh nghiệp dược phẩm, viện nghiên cứu.
5. Tăng cường hợp tác nghiên cứu quốc tế để trao đổi kỹ thuật và mở rộng phạm vi nghiên cứu các loài Schefflera khác, nhằm khai thác tối đa tiềm năng dược liệu họ Araliaceae. Chủ thể: các trường đại học, viện nghiên cứu; thời gian: liên tục.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Nhà nghiên cứu và sinh viên ngành Hóa học và Công nghệ Hóa học: Nghiên cứu chi tiết về phương pháp chiết tách, phân lập và xác định cấu trúc hợp chất thiên nhiên, đặc biệt là triterpenoid.
2. Chuyên gia dược học và y học cổ truyền: Tham khảo cơ sở khoa học về hoạt tính sinh học của dược liệu Schefflera sessiliflora, hỗ trợ phát triển các sản phẩm điều trị đái tháo đường.
3. Doanh nghiệp dược liệu và sản xuất thuốc: Tìm hiểu quy trình chiết xuất và tiềm năng ứng dụng các hợp chất ức chế enzyme a-glucosidase để phát triển sản phẩm mới.
4. Cơ quan quản lý và hoạch định chính sách y tế: Căn cứ khoa học để xây dựng hướng dẫn sử dụng dược liệu an toàn, hiệu quả và thúc đẩy phát triển ngành dược liệu Việt Nam.

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao nghiên cứu tập trung vào enzyme a-glucosidase?
   Enzyme a-glucosidase đóng vai trò quan trọng trong quá trình tiêu hóa carbohydrate, thủy phân liên kết glycosidic để giải phóng glucose. Ức chế enzyme này giúp kiểm soát lượng đường huyết, là mục tiêu điều trị đái tháo đường loại II hiệu quả.

2. Các hợp chất cô lập có hoạt tính mạnh hơn thuốc chuẩn acarbose không?
   Một số hợp chất như SSL05 có IC50 là 5,99 μM, mạnh hơn nhiều so với acarbose (214,51 μM), cho thấy tiềm năng phát triển thành thuốc hoặc sản phẩm chức năng.

3. Tại sao cao chiết thô không có hoạt tính ức chế enzyme rõ rệt?
   Cao chiết thô chứa nhiều thành phần hỗn hợp, trong đó các hợp chất hoạt tính có thể tồn tại ở nồng độ thấp hoặc bị ức chế bởi các thành phần khác. Do đó, cần tinh chế để tập trung các hợp chất có hoạt tính.

4. Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất được sử dụng là gì?
   Sử dụng phổ HR-ESI-MS để xác định khối lượng phân tử chính xác, kết hợp phổ NMR 1D và 2D (¹H-NMR, ¹³C-NMR, COSY, DEPT, HSQC, HMBC) để xác định cấu trúc chi tiết và vị trí các nhóm chức.

5. Nghiên cứu này có thể ứng dụng thực tiễn như thế nào?
   Kết quả cung cấp cơ sở khoa học để phát triển các sản phẩm dược liệu hoặc thuốc điều trị đái tháo đường từ Schefflera sessiliflora, đồng thời hướng dẫn sử dụng dược liệu an toàn và hiệu quả trong y học cổ truyền.

Kết luận

• Đã phân lập và xác định cấu trúc 7 hợp chất triterpenoid từ lá Schefflera sessiliflora, trong đó có một hợp chất mới hoàn toàn.
• Một số hợp chất cô lập có hoạt tính ức chế enzyme a-glucosidase mạnh vượt trội so với thuốc chuẩn acarbose.
• Cao chiết thô không thể hiện hoạt tính ức chế enzyme rõ rệt, khẳng định vai trò của việc tinh chế hợp chất.
• Phương pháp sắc ký và phổ phân tích hiện đại được áp dụng thành công trong nghiên cứu thành phần hóa học.
• Đề xuất phát triển quy trình chiết tách, nghiên cứu cơ chế và ứng dụng dược liệu trong điều trị đái tháo đường.

Next steps: Tiếp tục nghiên cứu cơ chế tác động, đánh giá độc tính và dược động học, đồng thời phát triển sản phẩm ứng dụng.

Call-to-action: Các nhà nghiên cứu và doanh nghiệp dược liệu nên hợp tác để khai thác tiềm năng của Schefflera sessiliflora, góp phần nâng cao giá trị dược liệu Việt Nam.

Trích đoạn nội dung tài liệu

CHƯƠNG 1: TONG QUAN 1.1 Phan loai khoa hoc Chân chim không cuống quả (Schefflera sessiliflora) Năm 2004, Trần Công Luận và cộng sự đã phát hiện Schefflera sp3 là một loài mới và được đặt tên là Schefflera sessiljfloral'1. Chân chim không cuống quả có tên khoa hoc là Schefflera sessiliflora, thuộc họ Nhân sâm (Araliaceae).2 Mô tả thực vật Đặc điểm của cây là không cuồng, thường mọc chùm 3-7 quả hay riêng lẻ, hình cầu (5 x 4mm), khi chín màu cam có 5 cạnh!”.3 Các nghiên cứu về thành phân hóa học Hiện chưa có bat kỳ nghiên cứu nào về thành phần hóa học của loài Schefflera sessiliflora trên thé giới. Ở Việt Nam, loài Schefflera sessiliflora cũng có 2 công trình nghiên cứu, tuy nhiên cũng chỉ dừng lại là khảo sát sơ bộ về thành phân hóa học, định lượng saponin tong va cô lập 2 sapogenin là acid oleanolic và hederagenin từ saponin tổng”. Do đó, chúng tôi đã tìm hiểu thành phân hóa hoc của một vài loài khác thuộc chi Schefflera.1 Schefflera abyssinica Năm 2006, Léon Azefack Tapondjou và các cộng sự đã cô lập 13 hop chất từ lá: acid oleanolic (1), hederagenin (2), caulosid A (3), copterosid B (4), fatsiasid C¡ (5), guaianin N (6), collinsonidin (7), ciwujianosid Ca (8), caulosid D (9), chikusetsusaponin V (10), ciwujianosid A, (11), caulosid G (12) va hederagenin 3-O- [2-D-glucopyranosyl-(1 >3)|-a-L-arabinopyranosid 28-O-[a-L-rhamnopyranosyl- (1>4)-B-D-glucopyranosyl-(1 >6)|-8-D-glucopyranosid (13).2 Schefflera arboricola Năm 2003, Meleka F.

và các cộng sự đã cô lập 9 triterpenoid từ than va lá: acid oleanolic 3-O-[a-L-rhamnopyranosyl-(14)]--D-glucuronopyranosid (14), acid echinocystic 3-O-[a-L-rhamnopyranosyl-(14)]-6-D-glucuronopyranosid (15), acid oleanolic 3-O-[$-D-apiofuranosyl-(1 >4)]-6-D-glucuronopyranosid 28-O-$-D- glucopyranosid (16), acid oleanolic 3-O-[a-L-arabinopyranosyl-(1>2), ø-L- ramnopyranosyl-(1 >4)]-6-D-glucuronopyranosid (17), acid oleanolic 3-O-[a-L- arabinopyranosyl-(1>2), a-L-rhamnopyranosyl-(14)]-6-D-glucuronopyranosid 28- Trang 4 @Ó-Ø-D-glucopyranosid (18), acid oleanolic 3-Ø-[Ø-D-galactopyranosyl-(I^2), a-L- rhamnopyranosyl-(14)]-6-D-glucuronopyranosid (19), acid oleanolic 3-Ó-|Ø-D- galactopyranosyl-(I^2), a-l-rhamnopyranosyl-(I14)]-6-D-glucuronopyranosid 28- O-Ø-D-glucopyranosid (20), acid oleanolic 3-O-[a-l-arabinopyranosyl-(1>2), Ø-D- apiofuranosyl-(I>4)]-Ø-D-glucuronopyranosd (21), acid oleanolic 3-O-[a-L- arabinopyranosyl-(1 2), 6-D-apiofuranosyl-(1 >4)]-8-D-glucuronopyranosid 28-O-f- D-glucopyranosid (22)1. Năm 2006, Guo Fu-Jiang va cộng sự đã cô lập 4 triterpenoid từ than: scheffarbosid A (23), scheffarbosid B (24), scheffarbosid C (25), scheffarbosid D (26)”!.3 Schefflera bodinieri Năm 1996, Zhu Min và các cộng sự đã cô lập 4 triterpenoid từ rễ: 28-O-[a-L- rhamopyranosyl-(l>4)-O-f-glucopyranosyl-(16)]-6-D-glucopyranosid 3/-hydroxy- isopolygalic-13(14)-en-28-acid (27), 28-O-[a-L-rhamopyranosyl-(1 >4)-£-D- glucopyranosyl-(1 6) |-8-D-glucopyranosid 3-oxo-isopolygalic-13(14)-en-28-acid (28), 28-O-[6-glucopyranosyl-(1>6)]-$-D-glucopyranosid 3$-hydroxy-isopol ygalic- 13(14)-en-28-acid (29), 28-O-[a-L-rhamopyranosyl-(1>4)-O-$-D-glucopyranosyl- (146)]-6-D-glucopyranosid 36-hydroxy-18-methyl-polygalic-13(14)-en-28-acid (30)'”. Năm 1996, Zhu Min và các cộng sự đã cô lập 3 triterpenoid từ lá: acid 3-oxo-20- demethylisoaleuritolic-14(15)-en-28 ,29-dioic (31), acid 3-oxo-20- demethylisoaleuritic-14(15)-en-28,29-dioic 28-Ø-[ø-L-rhamnopyranosyl-(I4)-Ó-Ø- D-glucopyranosyl-(1 6) |-Ó-/6-D-glucopyranosid (32). acid 3a-hydroxyl-20- demethylisoaleuritolic-14(15)-en-28 ,30-dioic (33)”Ì.

Năm 1996, Zhu Min và các cộng sự đã cô lập 4 triterpenoid từ rễ: bodinitins A (34), bodinitins B (35), bodinitins C (36), bodinitins D (37)? ”.4 Schefflera impressa Nam 1989, Santosh K. Srivastava đã cô lập 1 saponin từ vỏ va thân: hederagenin- 3-O-Ø-D-6°-acetylglucopyranosid (38)1"”. Jain đã cô lập 2 triterpenoid từ vỏ và thân: acid 3/,23-dihydrours-[2-en-28-oIc 3-Ó-Ø-]D-glucuronopyranosid 6’-O-methyl ester (39), 4-epihederahenin-3-O-$-D- glucuronopyranosid 6’-O-methyl ester (40), Trang 5 1.5 Schefflera kwangsiensis Năm 2012, Zhang Qiao và cộng sự đã cô lập 10 hop chất từ thân: staunosid C (41), taurosid St-H, (42), saponin HCS-B (43), kalopanaxsaponin B (44), hederagenin 3-O- [6-D-xylopyranosyl-(1—3)-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1—2) |-O-a-L-arabinopyranosid 28-O-[a-L-rhamnopyranosyl-(1—4)-$-D-glucopyranosyl-(1—6) |-O-6-D- glucopyranosid (45), scheffarbosid D (26), kalopanaxsaponin G (46), scheffarbosid C (25), acid oleanolic 3-O-[f-D-glucopyranosyl-(1—4)-O-6-D-xylopyranosyl-(1—3)-O- a-L-rhamnopyranosy-(1—2)|-O-a-L-arabinopyranosid 28-O-[a-L-rhamnopyranosy]l- (1—4)-O-$-D-glucopyranosyl-(1—6)|-O-f-D-glucopyranosid (47), acid oleanolic 3- O-[6-D-glucopyranosyl-(1—4)-O-6-D-xylopyranosyl-(1—3)-O-a-L- rhamnopyranosyl-(1—2)|-O-a-L-arabinopyranosid 28-O-[a-L-rhamnopyrnosyl- (1—>4)-O-6-O-acetyl-Ø-D-glucopyranosyl-(1—>6)]-O-Ø-D-glucopyranosid (48)!'°'!. Năm 2013, Wang Ying và các cộng sự đã cô lập 8 triterpenoid từ phần trên mặt đất: schefflesid A (49), schefflesid B (50), schefflesid C (51), schefflesid D (52), schefflesid E (53), schefflesid F (54), schefflesid G (55), schefflesid H (56)! !.6 Schefflera leucantha Năm 1996, Orasa Pancharoen và cộng sự đã cô lập 3 chất từ lá: acid betulinic 3-O- [œ-L-rhamnopyranosyl-(I2)-Ø-D-glucopyranosyl-(I>2)]--D-glucuronopyranosid (57), acid betulinic 3-Ó-[a-L-rhamnopyranosyl-(I^>2)-6-D-xylopyranosyl-(I2)]-/6- D-glucuronopyranosid (58), acid oleanolic 3-O-[a-L-rhamnopyranosyl-(12)--D- glucopyranosyl-(1>2)]-6-D-glucuronopyranosid (59)!!! 1.7 Chan chim (Schefflera octophylla (Lour.

và cộng sự đã cô lập từ lá acid 3a-hydroxylup-20(29)-en- 23. Sung, Peter-Katalinic J., đã cô lập từ lá cây chân chim acid oleanonic (61), acid 3-epi-betulinic 3-Ó-Ø-D-glucopyranosid 28-O-[a-L- rhamnopyranosyl-(1->4)-Ó-Ø-D-glucopyranosyl-(I6)|-ø-D-glucopyranosid (62) va 1 trisaccharid là a-L-rhamnopyranosyl-(1>4)-O-6-D-glucopyranosyl-(1>6)-6-D- glucopyranosid (63)!'°), Năm 1992, T. Sung va Adam G. đã cô lập từ lá | triterpenoid: acid 3-epi- betulinic 3-O-$-D-6’-acetylglucopyranosid 28-O-[a-L-rhamnopyranosyl-(1>4)-O-/- D-glucopyranosyl-(1>6)|-8-D-glucopyranosid (64)!"”.

Sung và cộng su đã cô lập từ vỏ cây chân chim 2 triterpenoid: asiaticosid (65), acid 3a-hydroxyurs-12-en-23 ,28-dioic (60), acid 3a-hydroxyurs-12- en-23 ,28-dioic 28-O-[a-L-rhamnopyranosyl (1>4)-O-6-D-glucopyranosyl (1>6)]-/- D-glucopyranosid (66)!'*), Nam 1994, Chizuko Maeda, Kazuhiro Ohtani, Ryoji Kasai, Kazuo Yamasaki, Nguyễn Minh Đức, Nguyễn Thời Nhâm, Nguyễn Khắc Quynh Cứ, đã cô lập 12 triterpenoid từ vỏ cây là asiaticosid (65), scheffoleosid A (67), cheffursosid B (68), scheffoleosid B (69), scheffursosid C (70), caulosid D (9), scheffursosid D (71), scheffoleosid D (72), scheffursosid E (73), scheffoleosid E (74), scheffursosid F (75), scheffoleosid F (76)!”1. Trang 7 Lạ Bang 1.1 C ông thức hóa học của các c hât đ a cô lập từ c hi Schefflera 2 4 29 30 = > = OH HO RSN “ny, 24 an (1) a, 24 CH,OH 23 (2) 29 8 C HO. OH OH nN lo] (4) Trang 8 HOỌC 1" (10) HOOC, (14) HOOC —0 lạ OH HO OH Trang 9 So HOOC ES HO H OH (17) (18) (19) (20) HO. 0 oO HƠ HO OH (21) (22) OH ậm OH (23) (24) Trang 10 29 8 Mn, OH nN nN OH HO: OH (25) (26) (27) (28) HO (29) (30) Trang 11 (31) (32) (33) (34) 8m, 30 ai (35) (36) 30 Na OH (38) (37) Trang 12 fo) Oo _—0 Ƒ_0 HO x CÍ HO: x HO %CHaOH HO: , OH a 23 OH om OH O, antl om HlIinn: HHO HO ° HO Z HO: HO’ Trang 13 HOOG (54) Trang 14 a ws HO: (55) = (56) COT OH HOỌC OH và HO: (357) (58) OH (60) (59) HO.

HO HO: (61) (62) Trang 15 Trang 16 (71) (75) (76) Trang 17 1.4 Các nghiên cứu về tác dụng dược lý Năm 2001, Trần Công Luận và cộng sự đã thử tác dụng tăng lực trên cả 3 bộ phận lá, thân, vỏ thân. Đối với lá và vỏ thân liều 1 g/kg cho tác dụng rõ, đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cây 99%; đã thử khả năng chịu đựng stress nóng mạnh ở liều 200 mg/kg đối với mẫu thân!” Năm 2004, Trần Công Luận và công sự đã thử khả năng tăng lực khi phối hợp cao thân với cao hồng sâm tỉ lệ 1 : 1 ở liều 400 mg/kg thời gian sống trung bình của chuột dài hơn cả lô sử dụng hồng sâm!”'””Ì: đã thử độ độc tính cấp đường uống cao thân với LDso = 1255 g/kg (đối với dược liệu) và LD5, = 277. Năm 2012, Trần Mỹ Tiên, Đặng Thị Thanh Nhàn, Trần Công Luận, Nguyễn Thị Thu Hương đã thử tác dụng kiểu androgen trên chuột đực giảm năng sinh dục của cao lá và cao than!*"!. Trang 18 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU, HÓA CHÁT VÀ THIẾT BỊ 2.1 Phương pháp nghiên cứu 2.1 Phương pháp chiết cao + Phương pháp cô quay áp suất thấp!” Nham loại dung môi ra khỏi dung dịch, dung dịch được chứa trong bình thủy tinh ở điều kiện áp suất thấp.

Dun nóng dung dịch dé thúc day quá trình bay hơi. Hơi dung môi trong điều kiện áp suất thấp sẽ đi qua hệ thống làm lạnh, ngưng tụ. Kết quả loại được dung môi ra khỏi dung dịch. Nhờ tiễn hành quá trình bay hơi ở áp suất thấp nên nhiệt độ bay hơi của dung môi giảm, là một ưu điểm đối với các mẫu kém bên nhiệt.

+ Phương pháp chiết siêu 4m! Là phương pháp chiết ngâm dâm cổ điển kết hợp với phương pháp siêu âm. Mẫu được ngâm trong một bình chứa bang thủy tinh hoặc bang thép không rỉ, bình có nắp đậy. Tránh sử dụng bình bằng nhựa vì dung môi hữu cơ có thể hòa tan một ít nhựa, gây nhằm lẫn là hợp chất đó có chứa trong cây. Rót dung môi tinh khiết vào bình cho đến xấp xấp bề mặt của mẫu.

Đặt bình chứa vào máy siêu âm, giữ ở nhiệt độ 60° trong 30 phút để dung môi xuyên thắm vào cau trúc tế bào thực vật và hòa tan các hợp chat tự nhiên. Sau đó, dung dịch chiết được lọc ngang qua giấy lọc va được cô quay áp suất thấp dé thu hồi dung môi. Tiếp tục rót dung môi mới vào phan căn còn lại trong bình chứa và tiếp tục quá trình chiết thêm một số lần nữa cho đến khi chiết kiệt mẫu. Dung môi thu hồi có thể được tiếp tục sử dụng cho các lần chiết sau.

+ Phương pháp trích ly!” Sử dụng phương pháp trích ly rắn — lỏng và lỏng — lỏng để phân chia cao alcol thô ban đầu thành những phân đoạn có tính phân cực khác nhau để phân nhóm tương đối các hợp chất. Theo do, dung môi không phân cực sẽ hòa tan tốt các hợp chất có tính không phân cực, dung môi phân cực trung bình hòa tan tốt các hợp chất có tính phân cực trung bình và dung môi phân cực mạnh hòa tan tốt các hợp chất có tính phân cực mạnh. Phương pháp này giúp cho quá trình cô lập các chất được dễ dàng hơn.2 Phương pháp phân lập các hợp chất Sắc ký là phương pháp vật lý dùng để tách một hỗn hợp gồm nhiều loại hợp chất ra riêng thành từng loại đơn chất, dựa vào tính ái lực khác nhau của những loại chất đối Trang 19 với một hệ thống (hệ thống gồm hai pha: một pha động và một pha tĩnh). Phương pháp này được sử dụng để phân lập các hợp chất từ hỗn hợp nhiều chất.

Có nhiều loại sắc ký: - Sắc ký lớp mỏng (TLC) !°Ì Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60 Fys4 (Merck 1,05715), độ dày lớp hap phụ 0,2 mm Pha động là dung môi hoặc hỗn hợp các dung môi di chuyển cham chậm dọc theo tam bản mỏng và lôi kéo mẫu chất đi theo nó. Dung môi di chuyển lên cao nhờ vào tính mao quản. Mỗi thành phan của mẫu chất sẽ di chuyển với vận tốc khác nhau, đi phía sau mức dung môi. Vận tốc di chuyển này tùy thuộc vào hiện tượng hấp thu của pha tĩnh và tùy vào độ hòa tan của mẫu chất trong dung môi.

Mau cần phân tích thường là hỗn hop gồm nhiều hợp chất với độ phân cực khác nhau. Sử dụng khoảng 1uL dung dịch mẫu với nồng độ loãng 2-5%, nhờ một vi quản để cham mẫu thành một điểm gọn trên pha tinh, ở vị trí phía trên cao hơn một chút so với mặt thoáng của chất lỏng đang chứa trong bình. Phát hiện chất bằng thuốc thử là dung dịch H»SO, 10% (pha trong EtOH 50%) ho nóng hiện hình bản mỏng. - Sắc ký cột (CC)?! Sắc ký cột hở cô điển gồm một ống hình trụ đặt dựng đứng với đầu trên hở va đầu dưới có gan một khóa.

Pha tinh ran được nhồi vào ống trụ. Mẫu cần tách được đặt lên trên bé mặt của pha tĩnh. Pha động là dung môi được rót liên tục vào đầu cột. nhờ trọng lực, dung môi di chuyển từ trên đầu cột xuống dưới cột, xuyên ngang qua pha tĩnh, rồi ra khỏi cột và được hứng trong ống nghiệm, mỗi ông nghiệm với một thể tích như nhau.

Sac ký cột được tiễn hành với chất hap phụ là Silica gel pha thường, pha đảo và hạt nhựa hấp phụ Diaion HP-20.