HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC ------- ------- KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG CHỐNG HẠN MỘT SỐ GIỐNG LÚA TRIỂN VỌNG” Hà Nội - 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC ------- ------- KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG CHỐNG HẠN MỘT SỐ GIỐNG LÚA TRIỂN VỌNG” Họ và tên Phan Thị Kim Anh MSV 637207 Lớp K63CNSHC Khoa CNSH Giảng viên hƣớng dẫn GS. Phan Hữu Tôn Hà Nội - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan khóa luận này hoàn toàn là công trình nghiên cứu của tôi dƣới sự hƣớng dẫn của GS. Phan Hữu Tôn, khoa Công nghệ Sinh học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam. Tất cả các số liệu hình ảnh trong luận văn này hoàn toàn trung thực, và không sao chép kết quả của bất kỳ báo cáo tốt nghiệp nào trƣớc đây.
Khóa luận tốt nghiệp có tham khảo tài liệu, thông tin trích dẫn đƣợc ghi trong phần tài liệu tham khảo. Tôi xin chịu trách nhiệm về lời cam đoan của mình trƣớc hội đồng và học viện. Hà nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Phan Thị Kim Anh i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, cho phép tôi đƣợc bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc đến nhà trƣờng đã tạo điều kiện và hỗ trợ tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu luận văn này. Để hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp, ngoài sự cố gắng của bản thân tôi còn nhận đƣợc rất nhiều sự quan tâm, giúp đỡ của thầy cô, bạn bè cũng nhƣ những ngƣời thân trong gia đình.
Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất tới GS. Phan Hữu Tôn, ngƣời đã nhiệt tình hƣớng dẫn, chỉ bảo cho tôi những kiến thức chuyên môn và những bài học kinh nghiệm quý báu trong suốt quá trình tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Bên cạnh đó tôi cũng xin gửi lời cảm ơn đến các thạc sỹ, kỹ sƣ đang công tác và làm việc tại Trung tâm Bảo tồn và Phát triển nguồn gen cây trồng đã giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi nhất cho tôi trong quá trình học và làm luận án tại trung tâm. Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất tới các thầy cô giáo Khoa Công nghệ Sinh học - Trƣờng Đại học Nông nghiệp Việt Nam.
Với sự thấu hiểu và tận tình của các thầy cô đã truyền đạt cho tôi nhiều kiến thức quý báu trong suốt 4 năm học tập tại trƣờng để tôi trang bị cho mình những kiến thức cần thiết để có thể hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn đến bố mẹ và những ngƣời thân yêu đã ủng hộ, giúp đỡ để tôi có thể hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp này. Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Phan Thị Kim Anh ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN. ii MỤC LỤC.
iii DANH MỤC CÁC BẢNG. v DANH MỤC HÌNH ẢNH. vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT. vii TÓM TẮT KHÓA LUẬN.
Đặt vấn dề. Mục đích và yêu cầu. TỔNG QUAN TÀI LIỆU. Giới thiệu về cây lúa.
Phân loại cây lúa. Tổng quan về lúa chịu hạn. Định nghĩa về hạn hán. Căng thẳng khô hạn ở thực vật.
Ảnh hƣởng của stress do khô hạn đến các phản ứng sinh lý, sinh hóa của cây. Phƣơng pháp nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền. Dấu hiệu hình thái. Chất đánh dấu sinh hóa.
Chỉ thị phân tử DNA. Tình hình chọn tạo giống lúa chịu hạn trên thế giới và ở Việt Nam. Chọn tạo các giống lúa chịu hạn trên thế giới. Chọn tạo giống lúa chịu hạn ở Việt Nam.
VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. Địa điểm và thời gian nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu. Phƣơng pháp nghiên cứu.
Bố trí thí nghiệm trên đồng ruộng. Phƣơng pháp đánh giá một số đặc điểm tính trạng nông sinh học chính của lúa. Các phƣơng pháp sinh học phân tử. Đánh giá khả năng chịu hạn bằng phƣơng pháp sinh lý, hóa sinh.
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN. Kết quả nghiên cứu. Đánh giá một số tính trạng đặc điểm nông sinh học. Kết quả đánh giá khả năng chịu hạn của 16 giống lúa bằng dung dịch KCIO 3%.
Tỷ lệ nảy mầm của 16 giống lúa sau khi xử lý hạt qua PEG 6000. Kết quả đánh giá tỷ lệ nảy mầm (GR) và tỷ lệ nảy mầm tƣơng đối (RGR) của 16 giống lúa. Kết quả tách chiết DNA tổng số. Kết quả điện di sản phẩm PCR của 16 giống lúa nghiên cứu.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ. 46 TÀI LIỆU THAM KHÁO. 47 iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Danh sách 16 mẫu giống nghiên cứu. Thang điểm đánh giá các chỉ tiêu tính trạng nông sinh học.
23 Bảng 3: Kí hiệu và trình tự các nucleotide của 3 mồi SSR sử dụng trong nghiên cứu. Một số chỉ tiêu hình thái của các giống lúa nghiên cứu. Một số chỉ tiêu hình thái của các giống lúa nghiên cứu(Tiếp). Một số yếu tố cấu thành năng suất của 16 giống lúa nghiên cứu.
Kết quả đánh giá khả năng chịu hạn của 16 giống lúa bằng dung dịch KCIO 3%. Tỷ lệ nảy mầm của 16 giống lúa sau khi xử lý hạt qua PEG 6000. Kết quả đánh giá tỷ lệ nảy mầm (GR) và tỷ lệ nảy mầm tƣơng đối (RGR) của 16 giống lúa. Kết quả đánh giá khả năng mang gen trên 16 mẫu giống.
45 v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1. Lịch sử tiến hóa của các loài lúa trồng. Hình ảnh lúa cạn và lúa nƣớc. Lúa bị khô hạn vì thiếu nƣớc.
Hình ảnh cac giai đoạn bón phân cho lúa. Hình ảnh khi ngâm hạt lúa trong dung dịch KCLO3 và PEG6000. Hình ảnh khi chuyển hạt lúa ra giấy lót lọc ẩm sau khi ngâm trong dung dịch KCLO3 và PEG6000. Một số hình ảnh về bông của các mẫu giống nghiên cứu.
DNA tổng số của 16 giống lúa nghiên cứu. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR của các giống lúa nghiên cứu với cặp mồi RM5461. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR của các giống lúa nghiên cứu với cặp mồi RM5964. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR của các giống lúa nghiên cứu với cặp mồi RM212.
44 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ABA : Axit abscisic ROS: Loại oxy phản ứng AFLP : Độ dài đoạn khuếch đại Đa hình CTAB : Cetyltrimethyl bromua: DTD : Mức độ chịu hạn Pas : Polyamines PEG : Polyethylene glycogen RAPD : DNA Plymorphic khuếch đại ngẫu nhiên RFLD : Độ dài đoạn giới hạn Đa hình SSR : Trình tự lặp lại đơn giản TE : Tris - EDTA vii TÓM TẮT KHÓA LUẬN Lúa đặc biệt dễ bị ảnh hƣởng bởi những thay đổi này. Lúa thƣờng mọc trong các hệ sinh thái đồng bằng và dễ bị ảnh hƣởng bởi nƣớc biển dâng. Nó cũng phát triển ở những khu vực đang phải trải qua điều kiện thời tiết khắc nghiệt, và bất kỳ mức tăng nhiệt độ nào thêm nữa cũng có thể đẩy nhiệt độ vƣợt qua ngƣỡng cho phép cây lúa phát triển khỏe mạnh. Chính vì vậy để chống chịu hạn cây lúa phải có những đặc điểm nhất định giúp cây có thể sinh trƣởng và phát triển tốt ở môi trƣờng hạn.
Hiện ngƣời ta đã có một số những phƣơng pháp: sử dụng các chất gây hạn nhân tạo nhƣ: KCLO3 (Tạ Hồng Lĩnh và cộng sự, 2019), PEG6000 (E. Purbajant et al., 2019)bố trí thí nghiệm chậu (Gomez, K. and Gomez, A, 1984),… Trung Tâm Bảo Tồn và Phát Triển Nguồn Gen Cây Trồng thời gian vừa qua đã thu thập đƣợc các nguồn gen lúa tốt có khả năng chống hạn trong đó có một số giống lúa tẻ cẩm địa phƣơng , trƣớc khi tiến hành đƣa đi khảo nghiệm cần đánh giá rất nhiều tính trạng có khả năng chịu hạn với mục đích bảo tồn nguồn gen, sử dụng bố mẹ để lai tạo giống có nhiều đặc điểm hơn và tiến hành sản xuất trồng ở vùng đất khô hạn. Xuất phát từ những lí do trên, chúng tôi tiến hành đề tài: “Khảo sát khả năng chống hạn một số giống lúa tẻ cẩm địa phƣơng triển vọng và mới chọn tạo”.
Đặt vấn dề Đối với ngƣời Việt Nam, lúa gạo là lƣơng thực thiết yếu, không thể thiếu cho cuộc sống hàng ngày. Nếu nhƣ với ngƣời phƣơng Tây, lƣơng thực chính là lúa mì thì đối với ngƣời Việt Nam, lúa gạo là thứ không thể thiếu trong mâm cơm hàng ngày. Cây lúa đóng vai trò rất quan trọng trong cuộc sống của chúng ta. Đến nay, Việt Nam đã trở thành quốc gia có nhiều mặt hàng nông sản đứng vị trí hàng đầu về xuất khẩu trên thế giới.
Trong số đó, lúa gạo là mặt hàng thiết yếu và có ý nghĩa chiến lƣợc đảm bảo an ninh lƣơng thực và có thế mạnh xuất khẩu của Việt Nam. Lúa gạo đóng vai trò rất quan trọng trong sự phát triển kinh tế và xã hội của Việt Nam. Bên cạnh đó ảnh hƣởng của lƣợng mƣa thất thƣờng biến đổi khí hậu đối với ngƣời nông trồng lúa ngày càng tăng. Tiêu biểu là vấn đề đất khô hạn, dân số tăng dẫn đến nhu cầu lƣơng thực ngày càng nhiều.
Chính vì vậy để chống chịu hạn cây lúa phải có những đặc điểm nhất định giúp cây có thể sinh trƣởng và phát triển tốt ở môi trƣờng hạn. Hiện ngƣời ta đã có một số những phƣơng pháp: sử dụng các chất gây hạn nhân tạo nhƣ: KCLO3 (Tạ Hồng Lĩnh và cộng sự, 2019), PEG6000 (E. Purbajant et al., 2019), bố trí thí nghiệm chậu (Gomez, K. and Gomez, A, 1984),… Trung Tâm Bảo Tồn và Phát Triển Nguồn Gen Cây Trồng thời gian vừa qua đã thu thập đƣợc các nguồn gen lúa tốt có khả năng chống hạn trong đó có một số giống lúa tẻ cẩm địa phƣơng, trƣớc khi tiến hành đƣa đi khảo nghiệm cần đánh giá rất nhiều tính trạng có khả năng chịu hạn với mục đích bảo tồn nguồn gen, sử dụng bố mẹ để lai tạo giống có nhiều đặc điểm hơn và tiến hành sản xuất trồng ở vùng đất khô hạn.
Xuất phát từ những lí do trên, chúng tôi tiến hành đề tài: “Khảo sát khả năng chống hạn một số giống lúa triển vọng”. Mục đích và yêu cầu Mục đích Mục đích: khảo sát đánh giá đƣợc một số đặc điểm tính trạng nông sinh học cấu thành năng suất và khả năng chống chịu hạn của một số giống lúa triển vọng bằng các phƣơng pháp xử lý KClO3, PEG6000, đồng thời sử dụng chỉ thị phân tử SSR đánh giá khả năng mang một số gen ảnh hƣởng dến tính chịu hạn của các giống lúa nghiên cứu. Yêu cầu - Đánh giá đặc điểm nông sinh học cấu thành năng xuất của một số giống triển vọng.