Khảo sát hàm lượng Zearalenone trong bắp bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao đầu dò huỳnh quang và ...

Nghiên cứu Zearalenone trong bắp: So sánh hiệu quả phương pháp HPLC-Huỳnh quang và LC-MS. Đánh giá ưu nhược điểm từng phương pháp, đảm bảo an toàn thực phẩm.

• Tác giả: Lâm Thị Mỹ Linh
• Người hướng dẫn: PGS. TS. Nguyễn Thị Xuân Mai
• Trường học: Trường Đại học Khoa học Tự nhiên
• Chuyên ngành: Hóa Phân Tích
• Đề tài: Khảo Sát Hàm Lượng Zearalenone Trong Bắp Bằng Sắc Ký Lỏng Hiệu Năng Cao - Đầu Dò Huỳnh Quang Và Sắc Ký Lỏng - Đầu Dò Ms
• Loại tài liệu: Luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2008
• Địa điểm: Thành phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU VỀ ZEARALENONE
• 1.1. Nguồn gốc phát sinh
• 1.2. Cấu trúc phân tử Zearalenone
• 1.3. Tính chất hóa lý của Zearalenone
• 1.4. Những độc tính của Zearalenone. Giới hạn hàm lượng của Zearalenone trong thực phẩm và thức ăn gia súc. Cách phòng chống và loại bỏ nấm mốc
• 2. CHƯƠNG 2: CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ZEARALENONE
• 2.1. Phương pháp ELISA
• 2.2. Phương pháp sắc ký bản mỏng
• 2.3. Phương pháp sắc ký khí - Đầu dò khối phổ
• 2.4. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. Kỹ thuật phân tích được thực hiện
• 3. CHƯƠNG 3: NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ LỎNG
• 3.1. Khai quát về lý thuyết sắc ký lỏng
• 3.2. Các bộ phận cơ bản của một máy sắc ký
• 3.3. Các thông số cơ bản của phương pháp sắc ký. Thời gian lưu
• 3.4. Hệ số dung lượng, số đĩa lý
• 4. CHƯƠNG 4: NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO - ĐẦU DÒ HUỲNH QUANG
• 4.1. Nguyên lý hoạt động của đầu dò huỳnh quang
• 4.2. Thiết bị sắc ký lỏng hiệu năng cao — Đầu dò huỳnh quang của hãng Shimadzu
• 4.3. Thiết bị loại khí
• 5. CHƯƠNG 5: NGUYÊN LÝ CỦA PHỔ KHỐI LƯỢNG VÀ THIẾT BỊ SẮC KÝ LỎNG — ĐẦU DÒ KHỐI PHỔ
• 5.1. Khái quát về phổ khối lượng
• 5.2. Cách tạo ion. Phân tích các ion
• 5.3. Sắc ký lỏng phép khối phổ
• 5.4. Thiết bị sắc ký lỏng — Đầu dò khối phổ của Thermo
• 6. CHƯƠNG 6: HÓA CHẤT VÀ DỤNG CỤ
• 7. CHƯƠNG 7: KHẢO SÁT CÁC ĐIỀU KIỆN TỐI ƯU HÓA TRÊN MÁY SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO - ĐẦU DÒ HUỲNH QUANG
• 7.1. Khảo sát các điều kiện tối ưu hóa. Cột làm sạch. Thành phần pha động
• 7.2. Đường chuẩn của Zearalenone trên máy Sắc ký lỏng hiệu năng cao - Đầu dò Huỳnh Quang
• 7.3. Đường chuẩn của Zearalenone trên máy Sắc ký lỏng — Đầu dò khối phổ
• 7.4. Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp
• 8. CHƯƠNG 8: KHẢO SÁT CÁC QUI TRÌNH CHIẾT MẪU
• 8.1. Khảo sát qui trình chiết mẫu dựa theo Food Chemistry
• 8.2. Khảo sát qui trình chiết mẫu dựa theo Cục Dược Phẩm và Thực Phẩm Mỹ (FDA)
• 8.3. Đánh giá hiệu suất thu hồi của qui trình trên máy Sắc ký lỏng hiệu năng cao - Đầu dò huỳnh quang
• 8.4. Đánh giá hiệu suất thu hồi của qui trình trên máy Sắc ký lỏng — Đầu dò khối phổ
• 9. CHƯƠNG 9: KHẢO SÁT TRÊN MẪU THẬT
• 9.1. Hình ảnh bắp lên mốc trong một tuần
• 9.2. Mẫu hai tuần. Hình ảnh bắp lên mốc trong hai tuần
• 9.3. Mẫu ba tuần. Hình ảnh bắp lên mốc trong ba tuần
• 9.4. Mẫu một tháng. Hình ảnh bắp lên mốc trong một tháng
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Nghiên Cứu Zearalenone trong Bắp Ý Nghĩa Tác Hại

Hiện nay, vấn đề độc tố nấm mốc đang được cộng đồng quan tâm sâu sắc. Nấm mốc và các sản phẩm chuyển hóa của chúng tạo ra mycotoxin, một loại độc tố gây hại cho sức khỏe con người và vật nuôi. Mycotoxin xuất hiện trong quá trình gieo trồng, thu hoạch, sản xuất và chế biến, đặc biệt khi điều kiện ẩm độ và nhiệt độ thuận lợi. Bên cạnh việc làm giảm chất lượng dinh dưỡng, nguy cơ về độc tính là mối quan tâm hàng đầu. Các nhà khoa học đã xác định được hàng trăm mycotoxin, trong đó Aflatoxin, Deoxynivalenol, Zearalenone, Fumonisin, Ochratoxin, và độc tố T-2 là những chất gây hại đáng kể. Zearalenone do các nấm Fusarium graminearum và Fusarium culmorum sinh ra, thường xuất hiện trong các loại ngũ cốc như bắp (ngô), gạo và mạch. Tại các nước nông nghiệp, bắp được sử dụng rộng rãi làm thực phẩm và thức ăn chăn nuôi, vì vậy việc xác định độc tố nấm này trong bắp là vô cùng quan trọng. Zearalenone gây ảnh hưởng đến khả năng sinh sản và có thể gây hại cho sức khỏe người và vật nuôi ngay cả ở nồng độ thấp. Theo WHO, hàm lượng Zearalenone cho phép trong thực phẩm là 30-1000 ug/kg (1998). Do đó, cần có các phương pháp phân tích có độ nhạy và độ chính xác cao để xác định hàm lượng Zearalenone.

1.1. Nguồn gốc và sự hình thành Zearalenone trong tự nhiên

Zearalenone (Zon) là sản phẩm được sinh ra bởi các nấm Fusarium, chủ yếu là Fusarium graminearum và Fusarium culmorum. Sự nhiễm nấm Fusarium vào các loại ngũ cốc trong điều kiện ẩm ướt có thể dẫn đến sự hình thành Zearalenone, đặc biệt là trong bắp. Bên cạnh đó, Zearalenone cũng có thể hình thành trên đồng ruộng trong quá trình thu hoạch hoặc trong quá trình bảo quản lương thực và thức ăn chăn nuôi. Trích dẫn: 'Zearalenone (Zon) là phẩm biến chất được sinh một nắm Fusarium, mà chi yếu nam Fusarium graminearum Fusarium culmorum.

1.2. Tác động của Zearalenone đến sức khỏe và sinh sản

Zearalenone gây ra các vấn đề liên quan đến chức năng sinh sản ở heo và gia cầm, đặc biệt là heo. Các triệu chứng bao gồm tăng kích thước tử cung, sưng âm hộ, hoặc hiện tượng mang thai giả. Khi gia súc và gia cầm ăn phải thức ăn nhiễm Zearalenone, khả năng sinh sản có thể giảm, gây chết và giảm số lượng con. Zearalenone cũng được nghi ngờ là có liên quan đến bệnh ung thư ở người. *Trích dẫn: 'Zon mối bệnh tăng loạn chức năng sinh sản heo cầm, mà trong heo ảnh hưởng mạnh nhắt.Hội chứng tăng làm nở rộng cung, sưng âm tuyến âm hộ hoặc trực hoặc hiện tượng mang giả.'

II. Thách Thức Phân Tích Zearalenone Cần Độ Chính Xác Cao

Việc phân tích Zearalenone trong bắp đối mặt với nhiều thách thức. Nồng độ Zearalenone có thể rất thấp, đòi hỏi các phương pháp phân tích phải có độ nhạy cao. Ma trận nền của bắp cũng có thể gây ảnh hưởng đến kết quả phân tích, làm giảm độ chính xác và độ tin cậy. Quá trình chuẩn bị mẫu và chiết xuất Zearalenone cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo thu được kết quả chính xác nhất. Các phương pháp phân tích phải được valid hóa để đảm bảo tính tin cậy và khả năng áp dụng trong thực tế. Ngoài ra, việc lựa chọn phương pháp phân tích phù hợp cần cân nhắc đến yếu tố hiệu quả kinh tế và thời gian phân tích. Trích dẫn: 'Do đó cần phải phương pháp độ nhạy độ chính xác cao xác định hàm lượng chất này nồng'.

2.1. Ảnh hưởng của Ma trận nền bắp đến kết quả phân tích Zearalenone

Ma trận nền phức tạp của bắp có thể gây nhiễu trong quá trình phân tích Zearalenone, ảnh hưởng đến độ chính xác và độ nhạy của phương pháp. Các thành phần khác trong bắp có thể tương tác với Zearalenone hoặc với các chất phân tích, làm sai lệch kết quả. Do đó, quá trình làm sạch mẫu là vô cùng quan trọng để loại bỏ các chất gây nhiễu và đảm bảo kết quả phân tích chính xác. Việc sử dụng các phương pháp chiết xuất và làm sạch mẫu phù hợp có thể giúp giảm thiểu ảnh hưởng của ma trận nền.

2.2. Yêu cầu về độ nhạy và độ chính xác trong phân tích Zearalenone

Do Zearalenone có thể gây hại ở nồng độ rất thấp, các phương pháp phân tích cần có độ nhạy cao để phát hiện và định lượng chính xác Zearalenone. Giới hạn phát hiện (LOD) và Giới hạn định lượng (LOQ) phải đủ thấp để phát hiện Zearalenone ở mức độ có ý nghĩa về mặt an toàn thực phẩm và thức ăn chăn nuôi. Độ chính xác của phương pháp cũng rất quan trọng để đảm bảo kết quả phân tích phản ánh đúng nồng độ Zearalenone thực tế trong mẫu.

2.3. Tầm quan trọng của quy trình chuẩn bị mẫu và chiết xuất

Quá trình chuẩn bị mẫu và chiết xuất đóng vai trò then chốt trong việc đảm bảo kết quả phân tích Zearalenone chính xác. Các bước này cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo Zearalenone được chiết xuất hoàn toàn từ mẫu và không bị mất mát trong quá trình xử lý. Việc lựa chọn dung môi và phương pháp chiết xuất phù hợp là rất quan trọng để tối ưu hóa recovery và loại bỏ các chất gây nhiễu. Trích dẫn: 'Quá trình chuẩn bị mẫu và chiết xuất Zearalenone cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo thu được kết quả chính xác nhất.'

III. So Sánh HPLC Huỳnh Quang và LC MS Phương Pháp Nào Tối Ưu

Trong số các phương pháp phân tích Zearalenone, HPLC-Huỳnh quang và LC-MS là hai phương pháp phổ biến. HPLC-Huỳnh quang có ưu điểm là đơn giản, chi phí thấp và có độ nhạy tốt cho Zearalenone. Tuy nhiên, phương pháp này có thể bị ảnh hưởng bởi các chất gây nhiễu có tính chất huỳnh quang tương tự. LC-MS có độ đặc hiệu cao hơn, ít bị ảnh hưởng bởi các chất gây nhiễu và có thể phân tích đồng thời nhiều chất. Tuy nhiên, LC-MS có chi phí cao hơn và đòi hỏi kỹ thuật vận hành phức tạp hơn. Việc lựa chọn phương pháp phù hợp phụ thuộc vào mục đích phân tích, điều kiện phòng thí nghiệm và nguồn lực có sẵn. Trích dẫn: 'Để đáp ứng được những yêu cầu đó trong điều kiện cho phép, chúng chọn phương pháp Sắc lỏng hiệu năng cao Đầu huỳnh quang Sắc lỏng Đầu dò khối phổ.'

3.1. Ưu điểm và nhược điểm của phương pháp HPLC Huỳnh quang

Ưu điểm của HPLC-Huỳnh quang bao gồm chi phí đầu tư và vận hành thấp, dễ sử dụng, và có độ nhạy tốt cho Zearalenone. Nhược điểm là độ đặc hiệu thấp, dễ bị ảnh hưởng bởi các chất gây nhiễu có tính chất huỳnh quang tương tự, và khó phân tích đồng thời nhiều chất. Phương pháp này phù hợp cho các phòng thí nghiệm có nguồn lực hạn chế và yêu cầu phân tích Zearalenone đơn lẻ.

3.2. Ưu điểm và nhược điểm của phương pháp LC MS

Ưu điểm của LC-MS bao gồm độ đặc hiệu cao, ít bị ảnh hưởng bởi các chất gây nhiễu, có thể phân tích đồng thời nhiều chất, và có khả năng xác định cấu trúc của các chất chưa biết. Nhược điểm là chi phí đầu tư và vận hành cao, đòi hỏi kỹ thuật viên có trình độ cao, và quá trình chuẩn bị mẫu phức tạp hơn. Phương pháp này phù hợp cho các phòng thí nghiệm có yêu cầu phân tích phức tạp và cần độ chính xác cao.

3.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến lựa chọn phương pháp phân tích Zearalenone

Việc lựa chọn giữa HPLC-Huỳnh quang và LC-MS phụ thuộc vào nhiều yếu tố, bao gồm mục đích phân tích, ngân sách, trình độ kỹ thuật viên, và yêu cầu về độ nhạy và độ đặc hiệu. Nếu chỉ cần phân tích Zearalenone đơn lẻ và không yêu cầu độ đặc hiệu quá cao, HPLC-Huỳnh quang có thể là lựa chọn phù hợp. Nếu cần phân tích đồng thời nhiều chất hoặc yêu cầu độ đặc hiệu cao, LC-MS là lựa chọn tốt hơn. Trích dẫn: 'Việc lựa chọn phương pháp phù hợp phụ thuộc vào mục đích phân tích, điều kiện phòng thí nghiệm và nguồn lực có sẵn.'

IV. Quy Trình Phân Tích Zearalenone Hướng Dẫn Chi Tiết HPLC LC MS

Quy trình phân tích Zearalenone bao gồm các bước chính: chuẩn bị mẫu, chiết xuất, làm sạch mẫu, phân tích và định lượng. Chuẩn bị mẫu bao gồm nghiền và đồng nhất mẫu bắp. Chiết xuất sử dụng dung môi phù hợp để tách Zearalenone khỏi ma trận nền. Làm sạch mẫu loại bỏ các chất gây nhiễu. Phân tích và định lượng được thực hiện bằng HPLC-Huỳnh quang hoặc LC-MS. Các bước này cần được thực hiện theo quy trình chuẩn để đảm bảo kết quả chính xác và tin cậy. Trích dẫn: 'Trong này, chúng hành nghiên cứu theo các bước Khảo điều kiện ưu hoá máy HPLC-DF. Áp dụng các điều kiện ưu hoá cho máy LC-MS. Khảo khả năng tách làm sạch mẫu các khác nhau.'

4.1. Chi tiết quy trình chuẩn bị và chiết xuất mẫu bắp phân tích Zearalenone

Mẫu bắp cần được nghiền mịn và đồng nhất để đảm bảo tính đại diện. Quá trình chiết xuất thường sử dụng dung môi như methanol hoặc acetonitril để hòa tan Zearalenone. Các phương pháp chiết xuất phổ biến bao gồm chiết bằng lắc, chiết bằng siêu âm, và chiết bằng cột pha rắn (SPE). Việc lựa chọn dung môi và phương pháp chiết xuất phù hợp sẽ giúp tối ưu hóa recovery và loại bỏ các chất gây nhiễu.

4.2. Các phương pháp làm sạch mẫu hiệu quả trước khi phân tích

Làm sạch mẫu là bước quan trọng để loại bỏ các chất gây nhiễu có thể ảnh hưởng đến kết quả phân tích. Các phương pháp làm sạch mẫu phổ biến bao gồm chiết lỏng-lỏng, chiết pha rắn (SPE), và sử dụng cột immunoaffinity. Việc lựa chọn phương pháp làm sạch mẫu phù hợp phụ thuộc vào ma trận nền và phương pháp phân tích được sử dụng.

4.3. Thiết lập và vận hành HPLC Huỳnh quang và LC MS cho phân tích

Việc thiết lập và vận hành HPLC-Huỳnh quang và LC-MS đòi hỏi kỹ thuật viên có trình độ chuyên môn cao. Các thông số quan trọng cần được tối ưu hóa bao gồm thành phần pha động, tốc độ dòng, nhiệt độ cột, và bước sóng kích thích và phát xạ (đối với HPLC-Huỳnh quang). Việc sử dụng các chuẩn bị chuẩn và mẫu kiểm soát chất lượng là rất quan trọng để đảm bảo tính chính xác và tin cậy của kết quả phân tích.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn Phân Tích Zearalenone trong Mẫu Bắp Bị Mốc

Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích Zearalenone trong các mẫu bắp bị mốc bằng cả hai phương pháp HPLC-Huỳnh quang và LC-MS. Kết quả cho thấy cả hai phương pháp đều có thể phát hiện và định lượng Zearalenone trong mẫu bắp bị mốc, nhưng LC-MS cho kết quả chính xác và độ tin cậy cao hơn. Nghiên cứu này cung cấp cơ sở khoa học cho việc lựa chọn phương pháp phân tích Zearalenone phù hợp trong các ứng dụng thực tế. Trích dẫn: 'Áp dụng các điều kiện khảo mẫu tạo.'

5.1. Kết quả phân tích Zearalenone bằng HPLC Huỳnh quang trên mẫu bắp mốc

Kết quả phân tích Zearalenone bằng HPLC-Huỳnh quang trên mẫu bắp mốc cho thấy sự hiện diện của Zearalenone ở nhiều mức độ khác nhau. Tuy nhiên, do độ đặc hiệu của phương pháp không cao, một số kết quả có thể bị ảnh hưởng bởi các chất gây nhiễu. Việc so sánh với kết quả LC-MS giúp đánh giá độ tin cậy của kết quả HPLC-Huỳnh quang.

5.2. Kết quả phân tích Zearalenone bằng LC MS trên mẫu bắp mốc

Kết quả phân tích Zearalenone bằng LC-MS trên mẫu bắp mốc cho thấy sự hiện diện của Zearalenone với độ chính xác và độ tin cậy cao. Phương pháp này cho phép xác định Zearalenone một cách chính xác và loại bỏ các ảnh hưởng của các chất gây nhiễu. Kết quả này có thể được sử dụng để đánh giá mức độ ô nhiễm Zearalenone trong bắp và đưa ra các biện pháp kiểm soát phù hợp.

5.3. So sánh kết quả và đánh giá độ tin cậy của hai phương pháp

Việc so sánh kết quả phân tích Zearalenone bằng HPLC-Huỳnh quang và LC-MS trên cùng một mẫu bắp mốc giúp đánh giá độ tin cậy của cả hai phương pháp. Nếu kết quả của hai phương pháp tương đồng, có thể kết luận rằng cả hai phương pháp đều cho kết quả tin cậy. Nếu kết quả khác biệt, cần xem xét các yếu tố có thể ảnh hưởng đến kết quả, chẳng hạn như sự hiện diện của các chất gây nhiễu hoặc sự khác biệt trong quy trình chuẩn bị mẫu và chiết xuất.

VI. Kết Luận và Hướng Nghiên Cứu Phát Triển Giải Pháp An Toàn

Nghiên cứu này đã so sánh hai phương pháp phân tích Zearalenone phổ biến, HPLC-Huỳnh quang và LC-MS, trong mẫu bắp bị mốc. Kết quả cho thấy cả hai phương pháp đều có ưu điểm và nhược điểm riêng. LC-MS cho kết quả chính xác và tin cậy cao hơn, nhưng HPLC-Huỳnh quang có chi phí thấp hơn và dễ sử dụng hơn. Trong tương lai, cần có thêm các nghiên cứu để phát triển các phương pháp phân tích Zearalenone nhanh chóng, chính xác và có hiệu quả kinh tế cao. Trích dẫn: 'So sénh kf thudt tren BEET DUAN secs cesses czcssssnacgncenscancsccicancs sss'.

6.1. Tóm tắt kết quả nghiên cứu và đánh giá so sánh hai phương pháp

Nghiên cứu đã so sánh HPLC-Huỳnh quang và LC-MS trong việc phân tích Zearalenone từ bắp mốc, nêu bật ưu điểm và nhược điểm của từng phương pháp, hỗ trợ lựa chọn phương pháp phù hợp với điều kiện và mục tiêu nghiên cứu cụ thể. Phương pháp HPLC có độ nhạy cao và chi phí thấp hơn. Ngược lại, LC-MS có độ chính xác và khả năng phân tích đồng thời nhiều chất cao hơn.

6.2. Hướng nghiên cứu tiếp theo nhằm cải thiện phương pháp phân tích

Để nâng cao hiệu quả và tính ứng dụng của phân tích Zearalenone, cần tập trung vào phát triển các phương pháp chiết xuất đơn giản, nhanh chóng, và thân thiện với môi trường. Hơn nữa, nghiên cứu về việc tích hợp các kỹ thuật làm sạch mẫu tiên tiến sẽ giúp tăng cường độ chính xác và độ tin cậy của kết quả phân tích. Việc phát triển các phương pháp phân tích tại chỗ (point-of-care testing) cũng là một hướng đi đầy hứa hẹn.

6.3. Ứng dụng kết quả nghiên cứu trong kiểm soát an toàn thực phẩm

Kết quả nghiên cứu này có thể được áp dụng để xây dựng các quy trình kiểm soát chất lượng bắp và các sản phẩm từ bắp, nhằm đảm bảo an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng và thức ăn chăn nuôi. Việc sử dụng các phương pháp phân tích Zearalenone chính xác và tin cậy sẽ giúp phát hiện sớm các lô bắp bị ô nhiễm và ngăn chặn chúng xâm nhập vào chuỗi cung ứng thực phẩm.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Zearalenone (ZON) là một mycotoxin độc hại được sản sinh chủ yếu bởi các loài nấm Fusarium, đặc biệt là Fusarium graminearum và Fusarium culmorum, thường xuất hiện trên các loại ngũ cốc như bắp, gạo, lúa mì. Ở Việt Nam, bắp vừa là thực phẩm vừa là thức ăn gia súc, do đó việc xác định hàm lượng Zearalenone trong bắp có ý nghĩa quan trọng đối với sức khỏe cộng đồng và ngành chăn nuôi. Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), hàm lượng cho phép của Zearalenone trong thực phẩm dùng cho con người dao động từ 30 đến 1000 µg/kg. Tuy nhiên, Zearalenone có thể gây ra các tác động nghiêm trọng như rối loạn sinh sản, ung thư tiềm tàng và các bệnh lý khác ở người và động vật.

Mục tiêu nghiên cứu là khảo sát hàm lượng Zearalenone trong bắp bằng hai phương pháp sắc ký hiện đại: sắc ký lỏng hiệu năng cao với đầu dò huỳnh quang (HPLC-FD) và sắc ký lỏng ghép phổ khối (LC-MS). Nghiên cứu được thực hiện trên mẫu bắp lên mốc trong điều kiện phòng thí nghiệm, với thời gian theo dõi từ 1 tuần đến 1 tháng, nhằm đánh giá sự phát sinh và tích tụ độc tố theo thời gian. Kết quả nghiên cứu góp phần nâng cao nhận thức về nguy cơ độc tố nấm trong nông sản, đồng thời đề xuất các biện pháp kiểm soát và phòng ngừa hiệu quả.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên các lý thuyết và mô hình sau:

• Mycotoxin và độc tính của Zearalenone: Zearalenone là một lactone có cấu trúc phân tử C18H22O5, có khả năng phát huỳnh quang tự nhiên, bền nhiệt và không bị phân hủy trong quá trình chế biến thực phẩm. Độc tính của Zearalenone liên quan đến khả năng tương tác với các thụ thể estrogen, gây rối loạn nội tiết và sinh sản ở động vật và người.

• Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC): Dựa trên nguyên lý phân tách các hợp chất dựa vào ái lực khác nhau giữa pha tĩnh (cột C-18) và pha động (hỗn hợp ACN, MeOH, H2O). Đầu dò huỳnh quang được sử dụng để phát hiện Zearalenone nhờ đặc tính phát huỳnh quang tự nhiên của nó.

• Phương pháp sắc ký lỏng ghép phổ khối (LC-MS): Kết hợp sắc ký lỏng với phổ khối để định tính và định lượng chính xác Zearalenone dựa trên khối lượng ion đặc trưng (m/z = 317, 299, 273, 175). Ion hóa phun điện tử (ESI) được áp dụng do tính chất phân cực vừa phải và khó bay hơi của Zearalenone.

• Khái niệm về giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ): LOD và LOQ là các chỉ số quan trọng đánh giá độ nhạy và khả năng định lượng của phương pháp phân tích.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Mẫu bắp được chuẩn bị trong phòng thí nghiệm bằng cách tạo điều kiện lên mốc tự nhiên (độ ẩm, nhiệt độ khoảng 35°C) trong thời gian từ 1 tuần đến 1 tháng.

• Qui trình chiết mẫu: Mẫu bắp nghiền được chiết bằng dung môi acetonitrile (ACN), sau đó làm sạch qua cột Florisil đã được hoạt hóa bằng nhiệt độ 150°C. Mẫu được xử lý với n-Hexan để loại bỏ chất béo, cô quay và định mức bằng ACN.

• Phân tích mẫu: Sử dụng hệ thống HPLC-FD của Shimadzu với cột C-18 Supelco, chế độ gradient pha động (ACN 39%, MeOH 15%, H2O 46%), tốc độ dòng 0.5 ml/phút, bước sóng kích thích 281 nm, phát xạ 421 nm. Đối với LC-MS, sử dụng thiết bị Thermo với ion hóa ESI, chế độ quét Full, dò các ion đặc trưng.

• Cỡ mẫu và chọn mẫu: Mỗi mẫu phân tích cân khoảng 5 gam, xử lý theo quy trình chuẩn. Các mẫu được lấy theo thời gian định kỳ để đánh giá sự phát sinh Zearalenone.

• Phân tích số liệu: Định lượng dựa trên diện tích peak (HPLC-FD) và cường độ ion (LC-MS), so sánh với đường chuẩn chuẩn bị trong khoảng nồng độ 10-400 ng/ml. Hiệu suất thu hồi và độ lặp lại được đánh giá qua các mẫu thêm chuẩn.

• Timeline nghiên cứu: Thực hiện khảo sát tối ưu điều kiện sắc ký, chiết mẫu trong vòng 3 tháng, theo dõi mẫu lên mốc trong 4 tuần.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Hiệu suất thu hồi và độ nhạy của phương pháp:

   • HPLC-FD đạt hiệu suất thu hồi từ 91% đến 93% ở các nồng độ chuẩn 50, 200, 400 ng/ml.
   • LC-MS có hiệu suất thu hồi tương tự, khoảng 92%, với độ bất ổn thấp hơn (4.37% so với 6.02% của HPLC-FD).
   • Giới hạn phát hiện (LOD) của HPLC-FD là 4.0 ng/kg, trong khi LC-MS nhạy hơn với LOD 3.0 ng/kg.

2. Sự phát sinh Zearalenone theo thời gian lên mốc của bắp:

   • Sau 1 tuần, không phát hiện Zearalenone trên cả hai thiết bị.
   • Sau 2 tuần, Zearalenone bắt đầu xuất hiện với nồng độ thấp, dao động khoảng vài ng/g, độ lặp lại kết quả chưa cao do nồng độ thấp.
   • Sau 3 tuần, nồng độ Zearalenone tăng lên đáng kể, khoảng 20-30 ng/g, với kết quả trên HPLC-FD thường cao hơn LC-MS.
   • Sau 4 tuần, nồng độ Zearalenone đạt khoảng 90 ng/g, mức có thể gây hại cho sức khỏe người và vật nuôi.

3. So sánh hai phương pháp phân tích:

   • LC-MS có độ nhạy và độ chính xác cao hơn, phù hợp với mẫu có nồng độ thấp và phức tạp.
   • HPLC-FD có ưu điểm về chi phí và thao tác đơn giản hơn, thích hợp cho phân tích số lượng mẫu lớn.

Thảo luận kết quả

Sự phát sinh Zearalenone trong bắp lên mốc là kết quả của quá trình sinh trưởng của nấm Fusarium dưới điều kiện độ ẩm và nhiệt độ thích hợp. Kết quả cho thấy thời gian lưu trữ và điều kiện bảo quản ảnh hưởng trực tiếp đến mức độ nhiễm độc tố. Việc không phát hiện Zearalenone sau 1 tuần cho thấy thời gian này chưa đủ để nấm phát triển và sản sinh độc tố. Tuy nhiên, sau 2 tuần, độc tố bắt đầu xuất hiện, tăng dần theo thời gian, phù hợp với các nghiên cứu trước đây về sự tích tụ mycotoxin trong ngũ cốc.

Phân tích bằng LC-MS cho thấy độ nhạy cao hơn, giúp phát hiện sớm và chính xác hơn các nồng độ thấp của Zearalenone, trong khi HPLC-FD vẫn là phương pháp hiệu quả với chi phí thấp hơn. Kết quả này phù hợp với báo cáo của ngành về ưu nhược điểm của hai kỹ thuật.

Việc lựa chọn cột Florisil đã hoạt hóa trong quá trình làm sạch mẫu giúp loại bỏ tạp chất hiệu quả, nâng cao độ chính xác của phân tích. Chế độ gradient pha động và tốc độ dòng 0.5 ml/phút được tối ưu để tách và phát hiện rõ ràng peak Zearalenone, tránh chồng lấn với các tạp chất nền.

Dữ liệu có thể được trình bày qua biểu đồ thể hiện sự tăng nồng độ Zearalenone theo tuần, so sánh kết quả giữa hai phương pháp phân tích, giúp minh họa rõ ràng xu hướng tích tụ độc tố trong bắp lên mốc.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Áp dụng phương pháp LC-MS cho phân tích mẫu có yêu cầu độ nhạy cao

   • Mục tiêu: Phát hiện sớm Zearalenone ở nồng độ thấp dưới 5 ng/g.
   • Thời gian: Triển khai ngay trong các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm thực phẩm.
   • Chủ thể thực hiện: Các trung tâm kiểm nghiệm, viện nghiên cứu.

2. Sử dụng HPLC-FD cho phân tích số lượng mẫu lớn với chi phí hợp lý

   • Mục tiêu: Kiểm soát chất lượng bắp và ngũ cốc trong quy mô sản xuất và lưu trữ.
   • Thời gian: Áp dụng thường xuyên trong các cơ sở chế biến và bảo quản nông sản.
   • Chủ thể thực hiện: Doanh nghiệp chế biến, cơ quan quản lý chất lượng.

3. Tăng cường kiểm soát điều kiện bảo quản bắp

   • Mục tiêu: Giảm thiểu sự phát triển của nấm Fusarium và sản sinh Zearalenone.
   • Thời gian: Thực hiện ngay trong quá trình thu hoạch và lưu trữ.
   • Chủ thể thực hiện: Nông dân, doanh nghiệp thu mua và bảo quản.

4. Nâng cao nhận thức và đào tạo về độc tố nấm trong nông sản

   • Mục tiêu: Giúp người sản xuất và tiêu dùng hiểu rõ nguy cơ và biện pháp phòng tránh.
   • Thời gian: Tổ chức định kỳ hàng năm.
   • Chủ thể thực hiện: Bộ Nông nghiệp, các tổ chức đào tạo và truyền thông.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Nhà nghiên cứu và sinh viên ngành Hóa phân tích, Hóa thực phẩm

   • Lợi ích: Hiểu rõ về kỹ thuật sắc ký lỏng và phổ khối trong phân tích mycotoxin.
   • Use case: Áp dụng phương pháp phân tích trong các đề tài nghiên cứu liên quan.

2. Cơ quan quản lý chất lượng nông sản và thực phẩm

   • Lợi ích: Cơ sở khoa học để xây dựng tiêu chuẩn kiểm soát độc tố nấm trong ngũ cốc.
   • Use case: Thiết lập quy trình kiểm nghiệm và giám sát an toàn thực phẩm.

3. Doanh nghiệp chế biến và bảo quản nông sản

   • Lợi ích: Nắm bắt các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm và biện pháp phòng ngừa.
   • Use case: Cải tiến quy trình bảo quản, giảm thiểu thiệt hại do mycotoxin.

4. Người tiêu dùng và các tổ chức bảo vệ sức khỏe cộng đồng

   • Lợi ích: Nâng cao nhận thức về nguy cơ độc tố nấm và cách lựa chọn thực phẩm an toàn.
   • Use case: Tuyên truyền, giáo dục cộng đồng về an toàn thực phẩm.

Câu hỏi thường gặp

1. Zearalenone là gì và tại sao nó nguy hiểm?
   Zearalenone là một mycotoxin do nấm Fusarium sản sinh trên ngũ cốc, có khả năng gây rối loạn nội tiết, ảnh hưởng đến sinh sản và tiềm ẩn nguy cơ ung thư. Ví dụ, ở heo, Zearalenone gây hội chứng tăng nội tiết tố, làm giảm năng suất chăn nuôi.

2. Phương pháp nào hiệu quả nhất để phát hiện Zearalenone trong bắp?
   LC-MS có độ nhạy và độ chính xác cao nhất, phù hợp với mẫu có nồng độ thấp. HPLC-FD cũng là phương pháp tin cậy với chi phí thấp hơn, thích hợp cho phân tích số lượng mẫu lớn.

3. Làm thế nào để phòng ngừa sự phát sinh Zearalenone trong bắp?
   Bảo quản bắp ở độ ẩm thấp (<15%) và nhiệt độ thích hợp, thu hoạch đúng thời điểm, sử dụng các biện pháp sinh học như Microbond để hấp thụ độc tố nấm.

4. Giới hạn an toàn của Zearalenone trong thực phẩm là bao nhiêu?
   WHO quy định hàm lượng cho phép trong thực phẩm từ 30 đến 1000 µg/kg. Việc vượt quá giới hạn này có thể gây hại cho sức khỏe người tiêu dùng.

5. Tại sao cần làm sạch mẫu bằng cột Florisil trước khi phân tích?
   Florisil giúp loại bỏ tạp chất phân cực và chất béo trong mẫu bắp, nâng cao độ chính xác và độ nhạy của phương pháp phân tích, đặc biệt khi mẫu nền phức tạp.

Kết luận

• Đã tối ưu hóa thành công phương pháp phân tích Zearalenone trong bắp bằng HPLC-FD và LC-MS với hiệu suất thu hồi trên 90% và giới hạn phát hiện thấp (LOD HPLC-FD = 4 ng/kg, LC-MS = 3 ng/kg).
• Zearalenone không xuất hiện sau 1 tuần lên mốc, nhưng bắt đầu phát sinh sau 2 tuần và tăng nhanh đến mức nguy hiểm sau 4 tuần.
• LC-MS cho độ nhạy và độ chính xác cao hơn, trong khi HPLC-FD là lựa chọn kinh tế cho phân tích số lượng mẫu lớn.
• Bắp bảo quản không đúng điều kiện có nguy cơ cao nhiễm độc tố Zearalenone, ảnh hưởng đến sức khỏe người và vật nuôi.
• Đề xuất áp dụng các biện pháp kiểm soát bảo quản, nâng cao nhận thức và sử dụng kỹ thuật phân tích hiện đại để đảm bảo an toàn thực phẩm.

Khuyến khích các cơ quan quản lý và doanh nghiệp áp dụng phương pháp phân tích này để giám sát độc tố nấm trong nông sản, đồng thời nghiên cứu mở rộng về các dẫn xuất Zearalenone và các loại mẫu nền khác nhằm bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

Trích đoạn nội dung tài liệu

AIROC OUOCGTIA THAN PHO HO CHLMINEL PERG CC, ar lên ENONE aie ne ÏN0 SẤt aeI”00/00/11110,700," CUE UE HUET i LC KY LONG - DAU DO MS lô AHOG i ĐẠI HỌC QUÓC GIA THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÂM THỊ MỸ LINH KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG ZEARALENONE Ì _ TRONG BAP BANG SAC KY LONG HIEU NANG CAO - ĐẦU DÒ HUỲNH QUANG VÀ SẮC KÝ LỎNG - DAU DO MS Chuyên ngành: HÓA PHÂN TÍCH Mã số: 60 44 29 LUẬN VĂN THẠC SĨ: HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS. NGUYEN TH] XUAN MAI THANH PHO HÒ CHÍ MINH - 09/2008 LOI CAM ON “Tôi xin chân thành cảm ơn PGS. NGUYN THỊ XUÂN MAI đã hết lòng giảng dạy và truyền đạt những kiến thức quý báo cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiên đề tài này. Tôi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Khoa Hóa và đặc biệt là Bộ môn Hóa Phân Tích Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên đã tận tình truyền đạt những kiến thức cho tôi trong suốt khóa học. Tôi cũng chân thành cảm ơn Lãnh đạo và tập thể cán bộ Sở Nông Nghiệp và Phát Triển Nông Thôn Tỉnh An Giang và đặc biệt là Phòng Chẩn Đoán Xét Nghiệm đã tạo điều kiện và nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực hiện đề tài. Và cuối cùng tôi cũng xin gởi lời cảm ơn chân thành đến gia đình, bạn bè đã luôn động viên và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài này. Thành Phố Hồ Chí Minh Lâm Thị Mỹ Linh Study zearalenone concentration in yellow corn by hight performance liquid chromatography — flourescence detector and liquid chromatography — mass spectrum detector. Abstract Zearalenone is a mycotoxin produced by several species of fungi belonging to the genus Fusarium, which is well known for colonising cereals. Zearalenone is toxic which effects to heath of human and domestic animals. So, we need to study zearalenone contamination in cereal. In this study, we analysis zearalenone concentration in yellow corn by hight performance liquid chromatography — flourescence detector (HPLC — FD) and liquid chromatography — mass spectrum detector (LC — MS). The average recovery of blank corn spiked with zearalenone at level of 50 - 400 pg/kg were 93.46% for HPLC — FD and 94.62% for LC — MS. Detection limit of zearalenone in corn samples was 4.0 ng/kg for HPLC — FD and 3.0 ng/kg for LC — MS. i MUC LUC Trang Danh muc bang M Danh mục hình vi Danh muc chit viết tắt và ký hiệu ix LOI MO DAU 1. Mực tiêu của đề TÀI a csausvasvapnvassevasssnveasssanssnsnenususnoseconnnnnennennonusneonpnananrannonnponnncunnanto 2 TONG QUAN CHUONG 1: GIOI THIEU VE ZEARALENONE 3 1.1-Ngiuồn gbe phat sinh ssisccssscsssicsscssncaimimnenianinimnmnnmnanaamaan 3 1. Cấu trúc phân tử Zearalenone wd 1. Tính chất hóa lý của Zearalenone 4 1. Những độc tính của Zearalenone. Giới hạn hàm lượng của Zearalenone trong thực phẩm và thức ăn gia súc . Cách phòng chống và loại bỏ nắm mốc.-:--v+++222vvv+ve£vvvvvvesrrrrrr 6 CHUONG 2: CAC PHUONG PHAP XAC ĐỊNH ZEARALENONE. Phương pháp ELISA.--- ¿2c vs tt 011 xe 7 2/2; Cáo phướng phap SỐG kỸ sasna n0 g_h gi sáng hà Hà La 1EGRGHãg Qi10018. Phương pháp sắc ký bản mỏng . Phương pháp sắc ký khí - Đầu dò khối phổ 2. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. Kỹ thuật phân tích được thực hiện. CHƯƠNG 3: NGUYÊN LÝ CỦA SẮC KÝ LỎNG . Khai quat vé ly thuyét sic ky 1Ong. Các bộ phận cơ bản của mOt may SAC KY .ccscccssssssssscsssssecsesssssssnescessssssccesssnseecessnneeseecsssnneecesseaneeessees 12 82 ,2:Ph8 HGHỂ cu eessesennnnerersoiseoosSEOEHOIHGISHIHGBEIEIGNHISEHANRSIEEG 13 82:3: HƠI lgeieibestiocbinebig1106134601g15419488034488801314051648u.018808u803E16G1AVEeKEuEbISEST1325306L4984026 356 13 GF BIS THIẾU AD oa, sssssesstitesosnvazeecnsocemnegrecnnseennesenenossennerennocgsangaesosneonssoananoseonssectognenysecsnnaecse 13 3. Các thông số cơ bản của phương pháp sắc ký. Thời 6lani lỮU Ẳsszsssaescofixtnlossdiigt06180811508 đit ii chiu8hiitg kg nggygg:8 nha 14 3. Hệ số dung lượng k”.33, Số đĩa lý THUYỀN sisetasodeoidtodtitttstseltfgiGdifiidftuoiSqtuiqaolggiasaansaseT5 3-8?4: ĐỘ chơi [0G 0l ynaessssvetoooiettatsGliao6qpabittt digsagisGauasagrgiissopsuil5 3. ‘i NEESfgi49988558303880460055susvsssssi TỔ CHƯƠNG 4: NGUYÊN LÝ CỦA sk Đổ FHUỲNH QUANG VÀ THIẾT BỊ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO - ĐẦU DÒ HUỲNH QUANG . Nguyên lý hoạt động của đầu đò huỳnh quang. Thiết bị Sắc ký lỏng hiệu năng cao — Đầu đò huỳnh quang của hãng Shimadzu.Thiết bị loại khí . 19 45:5: ĐẦM ổỖ nu nnnBniilbndgbibdtBGIUSUIGIGIIIAJNUHENERERISGRNGSiAAhngsa 20 CHƯƠNG 5: NGUYÊN LÝ CỦA PHỎ KHÓI LƯỢNG VÀ THIẾT BỊ SẮC KÝ LONG — DAU DO KHOI PHỎ . Khái quát về phổ khối lượng.Bay Hơ EHIẤ¿rssnsssadngtlidgosidoigtsoSttisbSGilGgiltg8sYdiisgagidtagassysb 21 5. Cách tạo Ïon.Phân tích các ion. - - - ¿5c Sscvcstvetereeeerreerrrrrrrrerrrrrrrrrrreecerereeev 2P Š 2; Sắc ký lông phép khất phổ ‹:cuesaneeenbtoittiiggliiufigiRadtgodiaauaiasasaasaso2t 5. Thiết bị Sắc ký long — Dau dò khối phổ của Thermo.B6 tim mu ter MOQ. Đầu đò khối phổ.2G1a6 diGn GHâN KhÔN guugsattstatdGRatiSgiggidivddiiggileissagisssso 1277 THỰC NGHIỆM CHƯƠNG 6: HÓA CHÁT VÀ DỤNG CỤ 6. iii CHUONG 7: KHAO SAT CAC DIEU KIEN TOI UU HOA TREN MAY SAC KY LONG HIEU NANG CAO - DAU DO HUYNH QUANG 7.Khao sat cdc diéu kién t6i wu héa.Cột làm sạch.Thành phần pha động f;1i3:Tốo độ đỒNG bo ngnnnotbggntgtttOEIGEGRENISGUSNGHNIGGQ4Q800G0 008g giang 35 lẽ HH.Đường chuẩn ciia Zearalenone .Đường chuẩn của Zearalenone trên máy Sắc ký lỏng hiệu năng cao- Đầu đò Huỳnh QUAHEssosseesoeeinisnikSDASi0E01161606501201611161606116000110515518856100031488000088pg1088 058 030G 39 7. Đường chuẩn của Zearalenone trên máy Sắc ký long — Dau do khối phé.Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương PUDAD aveasexvsrsasswevssvaavsssecayseausnsnceanaiaaiassaisiasaneecnonneneoanereaneonsennesnnensnsnssessonesonvoonssenceracensvonne 40 CHUONG 8: KHAO SÁT CAC QUI TRÌNH CHIẾT MẪU.Khảo sát qui trình chiết mẫu dya theo Food Chemistry (Hod học thực phẩm). Khảo sát qui trình chiết mẫu dựa theo Cục Dược Phẩm và Thực Phẩm Mỹ (FDA) wl 8. Qui trinh chiét mau được thực hiện . Đánh giá hiệu suất thu hồi của qui trình. Đánh giá hiệu suất thu hồi của qui trình trên máy Sắc ký lỏng hiệu năng cao- Đầu: dỗ huỳnh dU4ĐẾ sa non nho hn G8 1GG8001088610xrrrrdeieraiie 44 8. Đánh giá hiệu suất thu hồi của qui trình trên máy Sắc ký lỏng — Đầu dò khối phổ.0yee 46 CHƯƠNG 9: KHẢO SÁT TRÊN MẪU THẬTT. Mau Mt ta oe eccccsssssssssssessnseesessssvsssesessssessssssssssssssssssssssssssssessessssseseeceeeeeeeee 51 9. Hinh anh bap lén méc trong mOt tudn. ẻẽ cố cố 52 9. Mẫu hai tuần . Hình ảnh bắp lên mốc trong hai tuần.soeenisaeardeo Š'33, HA: coannnctinnnnticisliseotrtsntdicitesS08018S0,E88888888suoloEniclirgAGHN/T04000.500100143 54 9/2: Kế RUBI s66 1á G2 tac ghyid e46414801ÐỀGISG3xt4t|2180G3G181631085808300016303.QgUànggiapdsee 56 9:3, IMiIbIEDẢHbobsisonsuidgesgt3008 000202800300 tLA88)008ã208880. Hình ảnh bắp lên mốc trong ba tuầNn.--+£-©+v2vz+ecCE2222zrrrrrrre 56 9. Mẫu một tháng 9.Hình ảnh bắp lên mốc trong một tháng. Thí nghiệm CS đợi n "Ỷớớ “TỶ. So sénh hai kf thudt tren .sscccsssssssessecsssssecsessssueeeecessssssessssssssssnesesssssssneeeseesse 61 BEET DUAN secs sce cesses czcssssnacgncenscancsccicancs sss sassnasbasbcnussssousesssanssssosasnesh 62 TAI LIEU THAM KHAO. v DANH MỤC BẢNG Bảng Trang 1.1 Khả năng hấp thụ độc tố nắm của Microbond 6 3.1 Cách chọn đầu dò 14 5.1 _ So sánh sự không tương thích cơ bản giữa hai loại máy LC và MS 24 5.2 _ So sánh giữa ESI và APCI 28 7.1 So sánh các loại cội làm sạch 32 7.2 _ Thành phần pha động lần thứ nhất 34 7.3 Thành phần pha động lần thứ hai 34 7.4 Thanh phần pha động lần thứ ba 35 8. Nồng độ và hiệu suất thu hồi ba điểm trên đường chuẩn của Zearalenone trên may HPLC-DF 45 8.2 Nồng độ và hiệu suất thu hồi của năm mẫu thêm chuẩn trên máy HPLC-DE 46 §.3 _ Nồng độ và hiệu suất thu hồi ba điểm trên đường chuẩn của Zearalenone trên máy LC-MS 48 8. Nồng độ và hiệu suất thu hồi của năm mẫu thêm chuẩn trén may LC-MS 49 9. Kết quả phân tích mẫu lên mốc hai tuần bằng máy HPLC-DE 55 9. Kết quả phân tích mẫu lên mốc hai tuần bằng máy LC-MS_ „ 56 9. Kết quả phân tích mẫu lên mốc ba tuần bằng máy HPLC-DE 57 9.4 Kết quả phân tích mẫu lên mốc ba tuần bằng máy LC-MS 58 9. Kết quả phân tích mẫu lên mốc bốn tuần bằng máy HPLC-DE 60 9. Kết quả phân tích mẫu lên mốc bốn tuần bằng máy LC-MS 61 vi DANH MỤC HÌNH Hình Trang 1.1 Nam Fusarium-graminearum va Fusarium — culmorum 1.2 Cấu trúc phân tử Zearalenone 1.3 Các dẫn xuất của Zearalenone 21 Bản sắc ký bản mỏng 3.1 Hệ thống sắc ký 12 3.2 Cột sắc ký 12 4i Sự phát huỳnh quang của hợp chất đa vòng antracen 42 Máy HPLC 18 43 Cấu tạo của bơm 18 4.4 Hệ thống valve 6 lỗ 19 5.2 Kỹ thuật ESI 26 5.3 Kỹ thuật APCI 27 5.4 Giao diện chân không ESI 28 7.1 Sắc ký đồ của chudn Zon 200 ng/ml 33 7.2 Sắc ký đồ của mẫu trắng thêm chuẩn ở chế độ đẳng dòng 33 1.3 Sắc ký đồ của chuẩn Zon 200 ng/ml 6 thanh phan pha động 1 34 7.4 Sắc ký đồ của mẫu trắng them chuẩn ở thành phần pha động 1 34 1ã Sắc ký đồ của chuẩn Zon 200 ng/ml ở thành phần pha động 2 34 7.6 Sắc ký đồ của mẫu thêm chuẩn ở thành phần pha động 2 34 Nội, Sắc ký đồ của chuẩn Zon 200 ng/ml ở thành phần pha động 33 78 Sắc ký đồ của mẫu thêm chuẩn ở thành phần pha động 3 35 79 Sắc ký đồ của chuẩn Zon 200 ng/mI ở tốc độ dòng 0.10 Sắc ký đồ của mẫu trắng thêm chuẩn ở tốc độ dòng 0.11 Chuẩn Zearalenone nồng độ 400 ng/ml trên máy HPLC 37 7.12 Chuẩn Zearalenone nồng độ 400 ng/ml trên máy LC-MS 38 7.13 Đường chuẩn zearalenone trên máy HPLC-ED 39 7.14 Đường chuẩn zearalenone trên máy LC-MS 39 8.1 Sắc ký đồ của mẫu trắng không thêm chuẩn trên máy HPLC-DF 44 8.2 Sắc ký đồ của mẫu trắng thêm chuẩn 50 ng/mI trên máy HPLC-DF 44 vii 8.3 Sac ky dé cla mau tring thêm chuẩn 200 ng/ml trên máy HPLC-DE 8. Sắc ký đồ của mẫu trắng thêm chudn 400 ng/ml trén HPLC-DF 8.5 Sắc ký đồ của mẫu trắng thứ nhất thêm chudn 200 ng/ml trên may HPLC-DF 8.6 Sắc ký đồ của mẫu trắng thứ hai thêm chudn 200 ng/ml trén may HPLC-DF 87 Sắc ký đồ của mẫu trắng thứ ba thêm chuẩn 200 ng/ml trén may HPLC-DF 8.8 Sắc ky đồ của mẫu trắng thứ tư thêm chuẩn 200 ng/mI trên máy HPLC-DE §.9_ Sắc ký đồ của mẫu trắng thứ năm thêm chuẩn 200 ng/ml trên máy HPLC-DF 8.10 Sắc ký đồ của mẫu trắng không thêm chuẩn trên máy LC-MS 8.11 Sắc ký đồ của mẫu trắng thêm chuẩn 50 ng/ml trên máy LC-MS 8.12 Sắc ký đồ của mẫu trắng thêm chuẩn 200 ng/ml trén may LC-MS 8.13 Sắc ký đồ của mẫu trắng thêm chuẩn 400 ng/mI trên máy LC-MS §.14 Sắc ký đồ của mẫu trắng thứ nhất thêm chudn 200 ng/ml trên máy LC-MS 8.15 Sắc ký đồ của mẫu trắng thứ hai thêm chuẩn 200 ng/ml trén may LC-MS §.16 Sắc ký đồ của mẫu trắng thứ ba thêm chuẩn 200 ng/ml trên máy LC-MS 8.17 Sắc ký đồ của mẫu trắng thứ tư thêm chuẩn 200 ng/ml trên máy LC-MS 8.18 Sắc ký đồ của mẫu trắng thứ năm thêm chuẩn 200 ng/ml trên may LC-MS 9.1 Bắp lên mốc trong một tuần 9.2 Sắc ký đồ của mẫu thứ nhất lên mốc trong một tuần trên máy HPLC-DF 9. Sắc ký đồ của mẫu thứ hai lên mốc trong một tuần trên máy HPLC-DF 9. Sắc ký đồ của mẫu thứ ba lên mốc trong một tuần trên may HPLC-DF 9.