Phân Tích Cấu Trúc Của Hemiasterlin Có Chứa Hệ Phenyl-α,β-Cacbonyl Bằng Phương Pháp NMR Và MS

• Tác giả: Nguyễn Quang Sơn
• Người hướng dẫn: TS. Phạm Thế Chính
• Trường học: Đại học Thái Nguyên
• Chuyên ngành: Hóa phân tích
• Đề tài: Phân Tích Cấu Trúc Hemiasterlin Bằng Phương Pháp NMR Và MS
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Thái Nguyên

• LỜI CẢM ƠN
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Tổng quan về các phương pháp xác đinh ̣ cấ u trúc
• 1.1.1. Phương pháp phổ hồng ngoại (IR)
• 1.1.2. Phương pháp phổ khối lượng (MS)
• 1.1.3. Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR)
• 1.1.4. Phương pháp phổ HMQC và HMBC
• 1.2. Tách và phân tích các đồng phân đối quang
• 1.2.1. Phương pháp tách các đồng phân đối quang bằng enzym
• 1.2.2. Tách và phân tích đồng phân đối quang bằng các phương pháp hóa lý hiện đại
• 1.2.3. Phân tích các đối quang nhờ phương pháp NMR
• 1.2.4. Phương pháp sử dụng tác nhân chuyển dịch (Shift reagent) Mosher
• 1.3. Tách chiết hemiasterlin
• 1.4. Hoạt tính chống ung thư của hemiasterlin
• 1.5. Mục tiêu của nghiên cứu
• 1.6. Phương pháp nghiên cứu, nguyên liệu và thiết bị
• 1.6.1. Phương pháp nghiên cứu
• 1.6.2. Hóa chất và dung môi
• 1.6.3. Định tính phản ứng và kiểm tra độ tinh khiết của các hợp chất bằng sắc kí lớp mỏng
• 1.7. Xác nhận cấu trúc
• 1.7.1. Phân tích cấu trúc của chất trung gian 8
• 1.7.1.1. Chuẩn bị mẫu
• 1.7.1.2. Phân tích cấu trúc của 8 bằng NMR
• 1.7.2. Phân tích cấu trúc của chất trung gian 9
• 1.7.2.1. Chuẩn bị mẫu
• 1.7.2.2. Phân tích cấu trúc của 9 bằng NMR
• 1.7.3. Phân tích cấu trúc của chất 11a
• 1.7.3.1. Chuẩn bị mẫu
• 1.7.3.2. Phân tích cấu trúc của 11a bằng phổ IR
• 1.7.3.3. Phân tích cấu trúc của 11a bằng phổ NMR
• 1.7.3.4. Phân tích cấu trúc của 11a bằng phổ MS
• 1.7.4. Phân tích cấu trúc của chất 11b
• 1.7.4.1. Chuẩn bị mẫu
• 1.7.4.2. Phân tích cấu trúc của 11b bằng phổ IR
• 1.7.4.3. Phân tích cấu trúc của 11b bằng phổ NMR
• 1.7.5. Phân tích cấu trúc của chất 12a
• 1.7.5.1. Chuẩn bị mẫu
• 1.7.5.2. Phân tích cấu trúc của 12a bằng phổ IR
• 1.7.5.3. Phân tích cấu trúc của 12a bằng phổ NMR
• 1.7.6. Phân tích cấu trúc của chất 12b
• 1.7.6.1. Chuẩn bị mẫu
• 1.7.6.2. Phân tích cấu trúc của 12b bằng phổ IR
• 1.7.6.3. Phân tích cấu trúc của 12b bằng phổ NMR
• 2. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 2.1. Mục tiêu của luận văn
• 2.2. Phân tích cấu trúc của hợp chất trung gian 8 bằng phổ NMR
• 2.3. Phân tích cấu trúc của hợp chất trung gian 9 bằng phổ NMR
• 2.4. Phân tích cấu trúc của este hemiasterlin 11a,b
• 2.4.1. Phân tích cấu trúc của 11a
• 2.4.2. Phân tích cấu trúc của 11b
• 2.5. Phân tích cấu trúc của Axit Hemiasterlin 12a,b
• 2.5.1. Phân tích cấu trúc của 12a
• 2.5.2. Phân tích cấu trúc của 12b
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• PHỤ LỤC

I. Giới thiệu Phân tích cấu trúc Hemiasterlin Tổng quan

Hóa học hiện đại chứng kiến sự phát triển vượt bậc trong tổng hợp và phân lập các hợp chất mới, đòi hỏi các phương pháp phân tích cấu trúc nhanh chóng và chính xác. Trước đây, việc xác định cấu trúc một chất có thể mất nhiều năm, nhưng ngày nay, nhờ các phương pháp vật lý hiện đại, quá trình này có thể hoàn thành trong vài giờ. Trong số các phương pháp phân tích cấu trúc hợp chất hữu cơ, các phương pháp phổ như phổ hồng ngoại (IR), phổ khối lượng (MS), và phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) đóng vai trò then chốt. Mỗi phương pháp cung cấp các thông tin khác nhau về cấu trúc phân tử và hỗ trợ lẫn nhau để xác định cấu trúc các hợp chất hữu cơ. Hemiasterlin là một tripeptit có hoạt tính chống ung thư, được phân lập từ hải miên. Do hàm lượng thấp trong tự nhiên và cấu trúc độc đáo, hemiasterlin thu hút sự quan tâm nghiên cứu tổng hợp.

1.1. Vai trò của phổ NMR trong phân tích Hemiasterlin

Phổ NMR cung cấp thông tin chi tiết về khung carbon và hydrogen của phân tử. Các thí nghiệm NMR 1D (ví dụ: 1H-NMR, 13C-NMR) cho phép xác định các nhóm chức và môi trường hóa học của các nguyên tử. Các thí nghiệm NMR 2D (ví dụ: COSY, HSQC, HMBC) giúp thiết lập các mối tương quan giữa các nguyên tử, từ đó xác định cấu trúc tổng thể của hemiasterlin. Việc phân tích phổ NMR phức tạp đòi hỏi kiến thức chuyên sâu và kinh nghiệm.

1.2. Tầm quan trọng của phổ MS trong nhận diện Hemiasterlin

Phổ MS xác định khối lượng phân tử của hemiasterlin và các mảnh ion. Phân tích các mảnh ion giúp suy đoán cấu trúc và các nhóm thế trên phân tử. Các kỹ thuật MS/MS (tandem MS) có thể cung cấp thông tin chi tiết hơn về cấu trúc bằng cách phân mảnh các ion chọn lọc. Kỹ thuật ion hóa như ESI-MS (Electrospray Ionization) thường được sử dụng để phân tích các phân tử lớn và phân cực như hemiasterlin.

II. Thách thức Phân tích cấu trúc phức tạp của Hemiasterlin

Việc phân tích cấu trúc hemiasterlin gặp nhiều thách thức do cấu trúc phức tạp và hàm lượng thấp trong tự nhiên. Hemiasterlin có nhiều trung tâm bất đối, dẫn đến sự tồn tại của nhiều đồng phân quang học. Việc phân biệt và xác định cấu hình tuyệt đối của các đồng phân này đòi hỏi các phương pháp phân tích chuyên biệt. Ngoài ra, sự xuất hiện của các nhóm chức đặc biệt như hệ phenyl-α,β-cacbonyl cũng gây khó khăn trong việc giải đoán phổ.

2.1. Xác định cấu hình tuyệt đối của đồng phân quang học

Các phương pháp như sắc ký cột chiral (Chiral HPLC) có thể được sử dụng để tách các đồng phân quang học. Sau khi tách, cấu hình tuyệt đối có thể được xác định bằng các phương pháp như phân tích nhiễu xạ tia X (X-ray crystallography) hoặc bằng cách so sánh với các hợp chất đã biết cấu hình. Phương pháp Mosher ester cũng có thể được sử dụng để xác định cấu hình tuyệt đối bằng phổ NMR.

2.2. Giải đoán phổ NMR phức tạp của Hemiasterlin

Các tín hiệu trong phổ NMR của hemiasterlin có thể chồng chéo, gây khó khăn cho việc gán các tín hiệu cho các nguyên tử cụ thể. Các thí nghiệm NMR 2D như COSY, HSQC, và HMBC có thể giúp giải quyết vấn đề này bằng cách cung cấp thông tin về các mối tương quan giữa các nguyên tử. Việc sử dụng phần mềm chuyên dụng để mô phỏng và phân tích phổ cũng có thể hỗ trợ quá trình giải đoán.

III. Phương pháp Phân tích NMR đa chiều cấu trúc Hemiasterlin

Phân tích NMR đa chiều là công cụ mạnh mẽ để xác định cấu trúc các phân tử phức tạp như hemiasterlin. Các thí nghiệm NMR 2D cung cấp thông tin về các mối tương quan giữa các nguyên tử trong phân tử, giúp xác định cấu trúc tổng thể và các nhóm chức. Các thí nghiệm như COSY xác định các mối tương quan giữa các proton, HSQC xác định các mối tương quan giữa carbon và hydrogen liên kết trực tiếp, và HMBC xác định các mối tương quan giữa carbon và hydrogen cách nhau 2-3 liên kết.

3.1. Ứng dụng phổ COSY và TOCSY để phân tích Hemiasterlin

COSY (Correlation Spectroscopy) cho thấy các proton liên kết trực tiếp với nhau thông qua liên kết hóa học. Điều này rất hữu ích để xác định các đoạn mạch liên tục trong phân tử hemiasterlin. TOCSY (Total Correlation Spectroscopy) mở rộng phạm vi tương quan, cho phép xác định các proton trong cùng một hệ spin, ngay cả khi chúng không liên kết trực tiếp.

3.2. Kết hợp HSQC và HMBC trong phân tích Hemiasterlin

HSQC (Heteronuclear Single Quantum Coherence) giúp xác định các liên kết C-H trực tiếp, trong khi HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Correlation) xác định các liên kết C-H qua 2-3 liên kết. Sự kết hợp của hai thí nghiệm này cung cấp thông tin toàn diện về khung carbon và các nhóm thế trên phân tử hemiasterlin. Ví dụ, HMBC có thể giúp xác định vị trí của các nhóm phenyl và carbonyl.

IV. Kỹ thuật Phân tích MS độ phân giải cao trong xác định

Phổ MS độ phân giải cao cung cấp thông tin chính xác về khối lượng phân tử của hemiasterlin và các mảnh ion. Điều này cho phép xác định công thức phân tử và các thành phần cấu trúc. Phân tích các mảnh ion giúp suy đoán cấu trúc và các nhóm thế trên phân tử. Kỹ thuật MS/MS (tandem MS) có thể cung cấp thông tin chi tiết hơn về cấu trúc bằng cách phân mảnh các ion chọn lọc.

4.1. Sử dụng ESI MS để ion hóa Hemiasterlin

ESI-MS (Electrospray Ionization Mass Spectrometry) là một kỹ thuật ion hóa nhẹ nhàng, phù hợp cho các phân tử lớn và phân cực như hemiasterlin. ESI tạo ra các ion đa điện tích, giúp tăng độ nhạy và cho phép phân tích các phân tử có khối lượng lớn.

4.2. Giải thích phổ MS MS để xác định cấu trúc Hemiasterlin

MS/MS (tandem mass spectrometry) là một kỹ thuật trong đó các ion phân tử được chọn lọc và sau đó phân mảnh để tạo ra các ion con. Phân tích các ion con giúp xác định các thành phần cấu trúc và các liên kết trong phân tử hemiasterlin. Thông tin này rất hữu ích để xác định vị trí của các nhóm chức và các đoạn peptide.

V. Ứng dụng Phân tích Hemiasterlin trong nghiên cứu dược phẩm

Việc phân tích cấu trúc hemiasterlin bằng NMR và MS có ứng dụng quan trọng trong nghiên cứu dược phẩm. Thông tin về cấu trúc giúp hiểu rõ cơ chế tác động của hemiasterlin đối với tế bào ung thư và giúp phát triển các dẫn xuất có hoạt tính mạnh hơn và ít độc tính hơn. Ngoài ra, việc phân tích cấu trúc cũng giúp kiểm soát chất lượng và độ tinh khiết của các mẫu hemiasterlin được sử dụng trong nghiên cứu và phát triển.

5.1. Phát triển các dẫn xuất Hemiasterlin cải tiến

Dựa trên thông tin cấu trúc, các nhà khoa học có thể thiết kế và tổng hợp các dẫn xuất của hemiasterlin với hoạt tính chống ung thư được cải thiện. Các dẫn xuất này có thể có khả năng gắn kết với tubulin mạnh hơn, ít bị đề kháng bởi tế bào ung thư, hoặc có dược động học tốt hơn.

5.2. Kiểm soát chất lượng Hemiasterlin trong sản xuất

Phân tích NMR và MS có thể được sử dụng để đảm bảo chất lượng và độ tinh khiết của các lô hemiasterlin được sản xuất. Các phương pháp này có thể phát hiện các tạp chất và xác định hàm lượng của hemiasterlin trong các mẫu, đảm bảo rằng các sản phẩm đáp ứng các tiêu chuẩn chất lượng cần thiết.

VI. Kết luận Tổng quan về phân tích cấu trúc Hemiasterlin

Phân tích cấu trúc hemiasterlin bằng các phương pháp NMR và MS là một quá trình phức tạp nhưng cần thiết để hiểu rõ cấu trúc và hoạt tính sinh học của phân tử này. Sự kết hợp của các phương pháp phổ khác nhau cung cấp thông tin toàn diện về cấu trúc phân tử, giúp phát triển các ứng dụng trong nghiên cứu dược phẩm và các lĩnh vực liên quan. Nghiên cứu sâu hơn về cấu trúc và hoạt tính của hemiasterlin có thể dẫn đến các phương pháp điều trị ung thư hiệu quả hơn trong tương lai.

6.1. Hướng nghiên cứu mới về Hemiasterlin

Các hướng nghiên cứu mới có thể tập trung vào việc phát triển các phương pháp tổng hợp hemiasterlin hiệu quả hơn, khám phá các hoạt tính sinh học mới của hemiasterlin, và phát triển các hệ thống phân phối thuốc dựa trên hemiasterlin.

6.2. Tầm quan trọng của hợp tác trong nghiên cứu Hemiasterlin

Nghiên cứu về hemiasterlin đòi hỏi sự hợp tác giữa các nhà hóa học, nhà sinh học, và nhà dược học. Sự hợp tác này giúp kết hợp các kiến thức và kỹ năng khác nhau để giải quyết các thách thức phức tạp và thúc đẩy tiến bộ trong nghiên cứu và phát triển.