Phân lập và tuyển chọn các chủng nấm Trichoderma có khả năng kháng nấm từ đất trồng cây hoa màu ở Thái Nguyên

• Tác giả: Đàm Thị Thu Giang
• Người hướng dẫn: ThS. Bùi Đình Lãm
• Trường học: Đại học Nông Lâm Thái Nguyên
• Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học
• Đề tài: Phân lập và tuyển chọn một số chủng nấm Trichoderma có hoạt tính kháng nấm từ đất trồng cây hoa màu tại tỉnh Thái Nguyên
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp đại học
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Thái Nguyên

• LỜI CẢM ƠN
• DANH MỤC CÁC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT
• 1. PHẦN I: MỞ ĐẦU
• 1.1. Đặt vấn đề
• 1.2. Mục đích của đề tài
• 1.3. Yêu cầu của đề tài
• 1.4. Ý nghĩa của đề tài
• 1.4.1. Ý nghĩa trong khoa học
• 1.4.2. Ý nghĩa thực tiễn
• 2. PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Đại cƣơng về Trichoderma
• 2.2. Đặc điểm cấu tạo, hình thái tế bào nấm
• 2.2.1. Cấu tạo
• 2.2.2. Đặc điểm hình thái
• 2.3. Đặc điểm hình thái nấm Trichoderma
• 2.4. Đặc điểm sinh lý, sinh hóa nấm Trichoderma
• 2.5. Phân loại nấm Trichoderma
• 2.6. Khả năng kiểm soát sinh học của Trichoderma
• 2.6.1. Tương tác với nấm bệnh
• 3. ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Đối tượng, vật liệu và phạm vi nghiên cứu
• 3.2. Vật liệu và hóa chất, thiết bị dụng cụ nghiên cứu
• 3.3. Môi trường cần thiết trong quá trình nghiên cứu
• 3.4. Thiết bị, máy móc, dụng cụ hóa chất dùng trong phòng thí nghiệm
• 3.5. Phạm vi nghiên cứu
• 3.6. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 3.7. Địa điểm thu thập và phân tích mẫu
• 3.8. Nội dung nghiên cứu
• 3.9. Các phương pháp tiến hành thí nghiệm
• 3.9.1. Phương pháp thu thập mẫu đất
• 3.9.2. Phương pháp phân lập nấm Trichoderma
• 3.9.3. Phương pháp xác định hình thái tế bào, hình thái khuẩn lạc
• 3.9.4. Phương pháp thử hoạt tính đối kháng của Trichoderma
• 3.9.5. Phương pháp định danh nấm Trichoderma bằng sinh học phân tử
• 3.9.6. Nhân và thu sinh khối Trichoderma
• 3.9.7. Tách chiết DNA tổng số Trichoderma
• 3.9.8. Phản ứng PCR
• 3.9.9. Điện di kiểm tra sản phẩm PCR
• 3.9.10. Phương pháp tinh sạch sản phẩm PCR
• 3.9.11. Phương pháp tạo chế phẩm nấm đối kháng
• 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Kết quả phân lập các chủng nấm Trichoderma
• 4.2. Kết quả nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của các nấm Trichoderma
• 4.3. Kết quả thử hoạt tính đối kháng của nấm Trichoderma
• 4.4. Kết quả khả năng ký sinh của nấm Trichoderma và nấm Fusarium gây bệnh vàng lá thối rễ ở cây
• 4.5. Kết quả khả năng ký sinh của nấm Trichoderma và nấm Phytophthora gấy bệnh thối gốc ở cây
• 4.6. Kết quả Định danh
• 4.7. Kết quả tách chiết DNA tổng số Trichoderma
• 4.8. Kết quả PCR
• 4.9. Kết quả giải trình tự gen
• 4.10. Bước đầu sản xuất chế phẩm nấm đối kháng
• 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Phân lập chủng nấm Trichoderma

Phân lập là bước đầu tiên trong nghiên cứu nhằm tách các chủng nấm Trichoderma từ đất trồng hoa màu tại Thái Nguyên. Quá trình này sử dụng các phương pháp vi sinh học truyền thống, bao gồm thu thập mẫu đất, nuôi cấy trên môi trường PGA và quan sát hình thái khuẩn lạc. Các chủng nấm được phân lập sẽ được đánh giá dựa trên đặc điểm hình thái và khả năng phát triển trong điều kiện phòng thí nghiệm. Vi sinh vật trong đất, đặc biệt là nấm Trichoderma, đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì sinh học đất và bảo vệ thực vật.

1.1. Thu thập mẫu đất

Mẫu đất được thu thập từ các khu vực trồng hoa màu tại Thái Nguyên, bao gồm các loại cây như rau, lạc, đậu. Đất được lấy từ độ sâu 10-15 cm để đảm bảo sự hiện diện của nấm Trichoderma. Các mẫu đất sau đó được bảo quản trong điều kiện vô trùng để tránh nhiễm khuẩn.

1.2. Nuôi cấy và phân lập

Mẫu đất được nuôi cấy trên môi trường PGA để kích thích sự phát triển của nấm Trichoderma. Sau 5-7 ngày, các khuẩn lạc được quan sát và phân lập dựa trên màu sắc và hình thái. Các chủng nấm có màu xanh lục đặc trưng được chọn để tiếp tục nghiên cứu.

II. Tuyển chọn chủng nấm kháng nấm

Tuyển chọn là quá trình đánh giá và lựa chọn các chủng nấm Trichoderma có hoạt tính kháng nấm cao. Các chủng được phân lập sẽ được thử nghiệm khả năng đối kháng với các loại nấm gây bệnh như Fusarium và Phytophthora. Kết quả tuyển chọn sẽ giúp xác định các chủng có tiềm năng ứng dụng trong nông nghiệp và phòng trừ bệnh.

2.1. Thử nghiệm đối kháng

Các chủng nấm Trichoderma được cấy chung với Fusarium và Phytophthora trên môi trường PGA. Khả năng ức chế sự phát triển của nấm bệnh được đánh giá qua kích thước vùng ức chế. Các chủng có vùng ức chế lớn được coi là có hoạt tính kháng nấm cao.

2.2. Đánh giá hoạt tính enzyme

Các chủng nấm Trichoderma được đánh giá khả năng tiết enzyme chitinase và cellulase, hai enzyme quan trọng trong việc phân hủy thành tế bào nấm bệnh. Các chủng có hoạt tính enzyme cao được ưu tiên tuyển chọn.

III. Ứng dụng trong nông nghiệp

Các chủng nấm Trichoderma được tuyển chọn có tiềm năng ứng dụng rộng rãi trong nông nghiệp, đặc biệt là trong bảo vệ thực vật và phòng trừ bệnh. Chúng có thể được sử dụng để sản xuất các chế phẩm sinh học, giúp tăng cường sức đề kháng của cây trồng và giảm thiểu sử dụng hóa chất bảo vệ thực vật.

3.1. Sản xuất chế phẩm sinh học

Các chủng nấm Trichoderma có hoạt tính kháng nấm cao được sử dụng để sản xuất chế phẩm sinh học. Chế phẩm này có thể được phối trộn với phân hữu cơ để bón cho cây trồng, vừa cung cấp dinh dưỡng vừa tăng khả năng kháng bệnh.

3.2. Hiệu quả trong phòng trừ bệnh

Các chế phẩm từ nấm Trichoderma đã được chứng minh hiệu quả trong việc phòng trừ các bệnh do Fusarium và Phytophthora gây ra. Chúng giúp giảm thiểu thiệt hại về năng suất và chất lượng cây trồng, đồng thời bảo vệ môi trường.