Luận văn thạc sĩ: Phân lập và nghiên cứu vi sinh vật sinh enzyme nattokinase từ boza

• Tác giả: Bế Thị Đài
• Người hướng dẫn: TS. Dương Văn Cường
• Trường học: Đại học Nông Lâm Thái Nguyên
• Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
• Đề tài: Phân lập và nghiên cứu chủng vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp enzyme nattokinase từ boza
• Loại tài liệu: Khóa luận tốt nghiệp đại học
• Năm xuất bản: 2014
• Địa điểm: Thái Nguyên

• LỜI CẢM ƠN
• 1. PHẦN 1: MỞ ĐẦU
• 1.1. Mục đích nghiên cứu
• 1.2. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài
• 1.2.1. Ý nghĩa khoa học
• 1.2.2. Ý nghĩa thực tiễn
• 2. PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Natto và Nattokinase
• 2.1.1. Nguồn gốc của Natto và Nattokinase
• 2.1.2. Cơ chế tác động của Nattokinase
• 2.1.3. Các tác dụng của Nattokinase
• 2.1.4. Nghiên cứu lâm sàng - Hoạt động tiêu huyết khối
• 2.2. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước
• 2.2.1. Tình hình nghiên cứu trong nước
• 2.2.2. Tình hình nghiên cứu ngoài nước
• 3. PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu
• 3.1.1. Đối tượng nghiên cứu
• 3.1.2. Vật liệu nghiên cứu
• 3.1.3. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 3.1.4. Hóa chất và thiết bị sử dụng
• 3.1.4.1. Thiết bị sử dụng
• 3.1.4.2. Các môi trường sử dụng (Sambrook và Russel, 2006)
• 3.2. Nội dung nghiên cứu
• 3.3. Phương pháp nghiên cứu
• 3.3.1. Phương pháp phân lập
• 3.3.2. Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái của vi khuẩn
• 3.3.3. Phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh hóa của vi khuẩn
• 3.3.4. Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy tới khả năng sinh tổng hợp nattokinase của vi khuẩn
• 3.3.5. Phương pháp bảo quản giống vi sinh vật
• 3.3.6. Phương pháp nhân giống vi khuẩn
• 3.3.7. Phương pháp sử lý số liệu
• 4. PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Kết quả phân lập vi khuẩn có hoạt tính sinh Nattokinase từ mẫu đồ uống lên men Boza
• 4.2. Kết quả nghiên cứu đặc điểm vi khuẩn sinh Nattokinase từ mẫu đồ uống lên men Boza
• 4.3. Kết quả nghiên cứu hình thái của vi khuẩn BL4
• 4.4. Kết quả nghiên cứu đặc tính sinh hóa của vi khuẩn BL4
• 4.5. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố lên quá trình tổng hợp Nattokinase của vi khuẩn BL4
• 4.6. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy tới quá trình sinh tổng hợp Nattokinase của vi khuẩn BL4
• 4.7. Ảnh hưởng của pH ban đầu của môi trường tới khả năng tổng hợp Nattokinase của vi khuẩn BL4
• 4.8. Ảnh hưởng của nguồn cacbon tới sinh tổng hợp Nattokinase của vi khuẩn BL4
• 5. PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Giới thiệu về nghiên cứu vi sinh vật sản sinh enzyme nattokinase từ boza

Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và nghiên cứu các chủng vi sinh vật có khả năng sản xuất enzyme nattokinase từ boza, một loại đồ uống lên men truyền thống. Nattokinase là một enzyme có khả năng phân hủy fibrin, giúp ngăn ngừa các bệnh liên quan đến cục máu đông như nhồi máu cơ tim và đột quỵ. Boza được chọn làm nguồn nghiên cứu do sự đa dạng của hệ vi sinh vật trong đó, bao gồm các chủng Bacillus subtilis có tiềm năng sản xuất nattokinase.

1.1. Mục đích nghiên cứu

Mục đích chính của nghiên cứu là phân lập các chủng vi khuẩn từ boza có khả năng sản xuất enzyme nattokinase. Nghiên cứu cũng nhằm xác định các điều kiện tối ưu để sản xuất enzyme, bao gồm thời gian nuôi cấy, pH, và nguồn cacbon. Kết quả nghiên cứu sẽ góp phần vào việc phát triển các chế phẩm y tế hỗ trợ điều trị bệnh tim mạch.

1.2. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn

Nghiên cứu có ý nghĩa khoa học lớn khi cung cấp dữ liệu về các chủng vi sinh vật mới có khả năng sản xuất nattokinase. Về mặt thực tiễn, nghiên cứu mở ra tiềm năng ứng dụng trong sản xuất các chế phẩm phân hủy huyết khối, góp phần vào việc phòng và điều trị các bệnh tim mạch.

II. Tổng quan về nattokinase và boza

Nattokinase là một enzyme được chiết xuất từ natto, một món ăn truyền thống của Nhật Bản. Enzyme này có khả năng phân hủy fibrin, giúp ngăn ngừa sự hình thành cục máu đông. Boza là một loại đồ uống lên men từ lúa mạch, phổ biến ở Đông Âu và Thổ Nhĩ Kỳ. Trong boza, hệ vi sinh vật đa dạng bao gồm các chủng Bacillus subtilis có tiềm năng sản xuất nattokinase.

2.1. Nguồn gốc và cơ chế hoạt động của nattokinase

Nattokinase được phát hiện vào năm 1980 bởi Tiến sĩ Hiroyuki Sumi. Enzyme này có cấu trúc tương tự subtilisin và hoạt động mạnh gấp 4 lần plasmin, enzyme nội sinh phân hủy fibrin. Nattokinase không chỉ trực tiếp phân hủy fibrin mà còn kích thích sản xuất urokinase và plasmin, giúp tăng cường lưu thông máu.

2.2. Hệ vi sinh vật trong boza

Boza chứa một hệ vi sinh vật đa dạng, bao gồm các chủng Lactobacillus và Bacillus subtilis. Các chủng này không chỉ tham gia vào quá trình lên men mà còn có khả năng sản xuất các enzyme có lợi, trong đó có nattokinase. Điều này làm cho boza trở thành một nguồn tiềm năng để nghiên cứu và sản xuất enzyme.

III. Phương pháp nghiên cứu và kết quả

Nghiên cứu sử dụng các phương pháp phân lập và nuôi cấy để xác định các chủng vi khuẩn có khả năng sản xuất nattokinase. Các yếu tố như thời gian nuôi cấy, pH, và nguồn cacbon được tối ưu hóa để đạt hiệu suất cao nhất. Kết quả cho thấy chủng BL4 có khả năng sản xuất nattokinase hiệu quả nhất.

3.1. Phương pháp phân lập và nuôi cấy

Các mẫu boza được thu thập và phân lập trên môi trường chọn lọc. Các chủng vi khuẩn được nuôi cấy trong điều kiện tối ưu để đánh giá khả năng sản xuất nattokinase. Phương pháp sinh hóa và hình thái được sử dụng để xác định đặc điểm của các chủng.

3.2. Kết quả và thảo luận

Chủng BL4 được xác định là có khả năng sản xuất nattokinase cao nhất. Các yếu tố như thời gian nuôi cấy 48 giờ, pH 7, và nguồn cacbon từ glucose được tối ưu hóa. Kết quả này mở ra tiềm năng ứng dụng trong sản xuất các chế phẩm y tế từ nattokinase.