Luận Văn Thạc Sĩ: Nghiên Cứu Khả Năng Nhân Giống Cây Giảo Cổ Lam Gynostemma Pentaphyllum Bằng Phương Pháp In Vitro

• Tác giả: Phạm Thị Hiệng
• Người hướng dẫn: TS. Ngô Xuân Bình
• Trường học: Đại học Nông Lâm - Đại học Thái Nguyên
• Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
• Đề tài: Nghiên cứu khả năng nhân giống cây Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) bằng phương pháp in vitro
• Loại tài liệu: Khóa luận tốt nghiệp đại học
• Năm xuất bản: 2015
• Địa điểm: Thái Nguyên

• LỜI CẢM ƠN
• DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT
• DANH MỤC CÁC BẢNG
• DANH MỤC CÁC HÌNH
• 1. PHẦN 1: MỞ ĐẦU
• 1.1. Mục đích nghiên cứu
• 1.2. Yêu cầu của đề tài
• 1.3. Ý nghĩa của đề tài
• 2. PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Khái quát về cây Giảo cổ lam
• 2.2. Nguồn gốc phân bố của cây Giảo cổ lam
• 2.3. Phân loại
• 2.4. Đặc điểm thực vật học của cây Giảo cổ lam
• 2.5. Điều kiện sinh thái của cây Giảo cổ lam
• 2.6. Vị trí cây Giảo cổ lam trong hệ thống thực vật học và cây dược liệu
• 2.7. Nghiên cứu về giá trị y học của Giảo cổ lam
• 2.7.1. Thành phần hóa học
• 2.7.2. Tác dụng dược lý
• 2.7.2.1. Tác dụng đến chuyển hóa lipit và đường huyết
• 2.7.2.2. Tác dụng đến tim mạch
• 2.7.2.3. Tác dụng đến hệ thần kinh trung ương
• 2.7.2.4. Tác động đến chức năng miễn dịch và chống khối u
• 2.7.3. Công dụng
• 3. PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Đối tượng, vật liệu và phạm vi nghiên cứu
• 3.2. Hóa chất và thiết bị
• 3.3. Điều kiện nuôi cấy
• 3.4. Địa điểm và thời gian tiến hành nghiên cứu
• 3.5. Nội dung nghiên cứu và phương pháp nghiên cứu
• 3.5.1. Nội dung nghiên cứu
• 3.5.2. Phương pháp nghiên cứu
• 3.5.3. Thu thập số liệu
• 3.6. Các chỉ tiêu theo dõi
• 3.7. Phương pháp xử lý số liệu
• 4. PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Kết quả ảnh hưởng của thời gian khử trùng bằng HgCl2 đến khả năng tạo vật liệu sạch nấm, vi khuẩn cây Giảo cổ lam
• 4.2. Kết quả ảnh hưởng của hàm lượng môi trường MS, ½ MS đến khả năng tái sinh chồi Giảo cổ lam (sau 20 ngày nuôi cấy)
• 4.3. Kết quả ảnh hưởng của hàm lượng kinetin đến cảm ứng chồi Giảo cổ lam
• 4.4. Kết quả ảnh hưởng của hàm lượng kinetin tốt nhất kết hợp với hàm lượng BA thích hợp đến khả năng nhân nhanh chồi Giảo cổ lam
• 4.5. Kết quả ảnh hưởng của hàm lượng kinetin tốt nhất kết hợp với NAA đến khả năng nhân nhanh giống Giảo cổ lam
• 5. PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• LỜI CAM ĐOAN

I. Giới thiệu về nghiên cứu

Nghiên cứu này tập trung vào nhân giống cây Giảo cổ lam (Gynostemma Pentaphyllum) bằng phương pháp in vitro. Giảo cổ lam là một loại cây dược liệu quý, có giá trị y học cao, được sử dụng trong nhiều bài thuốc truyền thống. Tuy nhiên, do khai thác quá mức, nguồn Giảo cổ lam trong tự nhiên đang bị đe dọa. Phương pháp in vitro được lựa chọn để nhân giống cây một cách hiệu quả, đảm bảo sản xuất số lượng lớn cây giống đồng đều và sạch bệnh. Nghiên cứu này nhằm xác định các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi cấy mô, bao gồm thời gian khử trùng, hàm lượng môi trường dinh dưỡng, và các chất kích thích sinh trưởng.

1.1. Mục đích nghiên cứu

Mục đích chính của nghiên cứu là tìm ra quy trình nhân giống cây Giảo cổ lam bằng phương pháp in vitro. Quy trình này sẽ giúp tạo ra số lượng lớn cây giống đồng đều, sạch bệnh, phục vụ cho mục đích bảo tồn và sản xuất dược liệu. Nghiên cứu cũng nhằm xác định các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng tái sinh chồi, nhân nhanh chồi, và ra rễ của cây.

1.2. Ý nghĩa thực tiễn

Nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng trong việc bảo tồn và phát triển nguồn cây dược liệu Giảo cổ lam. Kết quả nghiên cứu sẽ là cơ sở cho các ứng dụng thực tiễn trong công nghệ sinh học, đặc biệt là trong lĩnh vực nuôi cấy mô thực vật. Đồng thời, nghiên cứu cũng góp phần nâng cao hiểu biết về sinh sản thực vật và các kỹ thuật nhân giống cây hiện đại.

II. Tổng quan về cây Giảo cổ lam

Giảo cổ lam (Gynostemma Pentaphyllum) là một loại cây dược liệu thuộc họ Cucurbitaceae, có nguồn gốc từ các vùng núi ở Trung Quốc, Nhật Bản, và Đông Nam Á. Cây được biết đến với nhiều tên gọi khác như Thất diệp đởm, cây trường sinh, và cây cỏ thần kỳ. Giảo cổ lam chứa hơn 100 loại saponin, trong đó nhiều loại có cấu trúc tương tự như saponin trong nhân sâm và tam thất. Ngoài ra, cây còn chứa flavonoid, một chất có khả năng chống lão hóa mạnh và tăng cường sức khỏe.

2.1. Đặc điểm thực vật học

Giảo cổ lam là cây thân thảo, có tua cuốn để leo. Lá cây có hình chân vịt, mỗi lá gồm từ 3-7 lá chét. Hoa nhỏ, màu trắng, hình sao, và quả khô, tròn, có màu đen khi chín. Cây sinh trưởng tốt trong điều kiện ẩm ướt và ánh sáng tán xạ, thường mọc trong rừng hoặc trên các vách đá.

2.2. Giá trị y học

Giảo cổ lam được sử dụng trong nhiều bài thuốc truyền thống với các tác dụng như hạ lipid máu, ổn định huyết áp, chống lão hóa, và ngăn ngừa ung thư. Các nghiên cứu khoa học đã chứng minh rằng saponin và flavonoid trong cây có tác dụng dược lý mạnh, giúp cải thiện sức khỏe tim mạch và hệ thần kinh.

III. Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu sử dụng phương pháp in vitro để nhân giống cây Giảo cổ lam. Các bước chính bao gồm khử trùng mẫu cây, tái sinh chồi, nhân nhanh chồi, và ra rễ. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi cấy mô được xác định thông qua các thí nghiệm với các hàm lượng môi trường dinh dưỡng khác nhau (MS, 1/2MS) và các chất kích thích sinh trưởng như kinetin, BA, và NAA.

3.1. Khử trùng mẫu cây

Mẫu cây được khử trùng bằng dung dịch HgCl2 0,1% để loại bỏ nấm và vi khuẩn. Thời gian khử trùng được điều chỉnh để đảm bảo mẫu cây sạch bệnh mà không bị tổn thương.

3.2. Tái sinh chồi

Mẫu cây sau khi khử trùng được nuôi cấy trên môi trường MS và 1/2MS để tái sinh chồi. Hàm lượng kinetin được điều chỉnh để tối ưu hóa quá trình cảm ứng chồi.

3.3. Nhân nhanh chồi

Chồi tái sinh được nhân nhanh bằng cách sử dụng kết hợp kinetin với BA hoặc NAA. Các thí nghiệm được thực hiện để xác định hàm lượng tối ưu của các chất kích thích sinh trưởng.

3.4. Ra rễ

Chồi được chuyển sang môi trường có bổ sung IBA để kích thích ra rễ. Hàm lượng IBA được điều chỉnh để đảm bảo tỷ lệ ra rễ cao và rễ phát triển khỏe mạnh.

IV. Kết quả và thảo luận

Kết quả nghiên cứu cho thấy thời gian khử trùng tối ưu là 10 phút, giúp loại bỏ hoàn toàn nấm và vi khuẩn mà không gây tổn thương mẫu cây. Môi trường MS với hàm lượng kinetin 1.0 mg/l cho tỷ lệ tái sinh chồi cao nhất. Kết hợp kinetin với BA ở hàm lượng 0.5 mg/l giúp nhân nhanh chồi hiệu quả. Hàm lượng IBA 0.1 mg/l cho tỷ lệ ra rễ cao và rễ phát triển khỏe mạnh.

4.1. Ảnh hưởng của thời gian khử trùng

Thời gian khử trùng 10 phút là tối ưu, giúp mẫu cây sạch bệnh mà không bị tổn thương. Thời gian ngắn hơn không đảm bảo loại bỏ hoàn toàn nấm và vi khuẩn, trong khi thời gian dài hơn gây tổn thương mẫu cây.

4.2. Ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng

Môi trường MS cho tỷ lệ tái sinh chồi cao hơn so với 1/2MS. Hàm lượng kinetin 1.0 mg/l là tối ưu cho quá trình cảm ứng chồi.

4.3. Ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng

Kết hợp kinetin với BA ở hàm lượng 0.5 mg/l giúp nhân nhanh chồi hiệu quả. Hàm lượng IBA 0.1 mg/l cho tỷ lệ ra rễ cao và rễ phát triển khỏe mạnh.

V. Kết luận và kiến nghị

Nghiên cứu đã xác định được quy trình nhân giống cây Giảo cổ lam bằng phương pháp in vitro hiệu quả. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi cấy mô đã được xác định, bao gồm thời gian khử trùng, hàm lượng môi trường dinh dưỡng, và các chất kích thích sinh trưởng. Kết quả nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng trong việc bảo tồn và phát triển nguồn cây dược liệu Giảo cổ lam, đồng thời góp phần nâng cao hiểu biết về sinh sản thực vật và công nghệ sinh học.

5.1. Kết luận

Nghiên cứu đã thành công trong việc xác định quy trình nhân giống cây Giảo cổ lam bằng phương pháp in vitro. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình nuôi cấy mô đã được xác định và tối ưu hóa.

5.2. Kiến nghị

Cần tiếp tục nghiên cứu để hoàn thiện quy trình nhân giống cây Giảo cổ lam, đồng thời ứng dụng các kết quả nghiên cứu vào thực tiễn sản xuất dược liệu. Ngoài ra, cần mở rộng nghiên cứu về các loại cây dược liệu khác để góp phần bảo tồn và phát triển nguồn tài nguyên thực vật quý giá.